Бактериологические исследования: БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ — это… Что такое БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ?

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ — это… Что такое БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ?



БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

исследование, применяемое для выявления патогенных бактерий в материале от больных животных или их трупов, обнаружение микробов в объектах внешней среды, кормах, мясе и т. д. Характер и методика взятия проб, способ пересылки материала при различных инфекц. болезнях неодинаковы, но существуют общие положения, к-рые необходимо учитывать независимо от объекта исследования и свойств материала. Исследуемый материал по возможности собирают в асептич. условиях в стерильную посуду и доставляют в ближайшее время с сопроводительным документом в лабораторию (в нём указаны дата взятия, характер и источник материала, осн. клинич. признаки болезни и патологоанатомич. изменения, цель исследования). Б. и. включает 3 осн. метода: микроскопию (бактериоскопию) мазков из патол. или др. исследуемого материала; выделение чистой культуры бактерий с последующим изучением морфологич., культурально-биохимич., антигенных и патогенных свойств бактерий.

Б. и. начинают с микроскопии, что позволяет обнаружить в материале микробов, изучить их морфологию (форму, размер, строение). При микроскопии патол. материала готовят мазки-отпечатки из органов, тканей или тонкие мазки из др. исследуемого материала, высушивают их на воздухе, фиксируют (чаще фламбированием) и окрашивают тем или иным методом в зависимости от направленности исследования (см. Окраска микроорганизмов). Для обнаружения нек-рых бактерий (напр., возбудителя туберкулёза) патол. материал предварительно обрабатывают одним из методов обогащения, чтобы повысить в нем концентрацию бактерий и избавиться от посторонних микробов. Для ускоренного обнаружения бактерии применяют люминесцентную микроскопию. Для изучения подвижности бактерий, обусловленной наличием жгутиков, используют микроскопию молодой (12—24 ч) живой культуры с помощью препаратов висячей капли или раздавленной капли. Подвижность бактерий может быть установлена также на основе особенностей роста культуры в полужидком МПА.

Выделение культуры бактерий проводят путём посева материала на среды питательные.

Чтобы облегчить и ускорить выделение бактерий, используют дифференциально-диагностические и элективные питат. среды (плотные и жидкие), на к-рых определенные виды бактерий дают характерный для них рост (при этом задерживается рост посторонних микробов). Посев на плотные питат. среды в бактериол. чашках проводят путём растирания шпателем нескольких капель материала по поверхности среды. При исследовании паренхиматозных органов убитых или павших животных обжигают или фламбируют кусочек органа, затем надрезают его стерильными ножницами и с помощью пинцета проводят надрезанной поверхностью по питат. среде в чашке. В жидкую среду посев материала делают пастеровской пипеткой. Чтобы получить рост изолированных колоний микробов на плотной среде и отделить исследуемые бактерии от сопутствующих микроорганизмов, проводят дробный посев по методу Дригальского. Засеянные чашки и пробирки инкубируют в термостате при оптимальной для роста каждого вида бактерий темп-ре (чаще 37 °С) в течение 1—2 сут, в нек-рых случаях (туберкулёзные бактерии) — до 3—4 нед. Наиболее длительный и сложный этап Б. и.— родовая и видовая идентификация выделенных культур. Изучают только чистые культуры, полученные после пересева из одной колонии и имеющие идентичные морфологич. и тинкториальные свойства (см. Идентификация микробов). Антигенные свойства культуры изучают в реакции агглютинации. Определение патогенных свойств бактерий проводят путём заражения лабораторных животных культурой или фильтратом культуры (при определении токсинообразования).

После изучения свойств бактерий сопоставляют полученные данные с признаками бактерий, имеющимися в классификационных схемах или определителях микробов (Д. Берджи, 1974; Н. А. Кра-силышков, 1949, и др.), и проводят их родовую и видовую дифференциацию. В сомнительных случаях проводят повторное исследование материала. Результаты Б. и. записывают в регистрационный журнал или на бланке лабораторной экспертизы, в заключении к-рой указывают, какой микроб выделен из исследуемого материала. Диагноз на инфекционную болезнь может быть поставлен только при учёте эпизоотологич., клинич. и патологоанатомич. данных.

Лит.: Лабораторные исследования в ветеринарии, под ред. В. Я. Антонова и П. Н. Блинова, М., 1971.

Ветеринарный энциклопедический словарь. — М.: «Советская Энциклопедия».
Главный редактор В.П. Шишков.
1981.

• БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ РАЗВЕДКА
• БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ОРУЖИЕ,

Смотреть что такое «БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ» в других словарях:

• копрологическое исследование — лабораторное (макро и микроскопическое, химическое, бактериологическое) исследование кала с диагностической целью …   Большой медицинский словарь

• Изоля́ция инфекцио́нных больны́х — противоэпидемическое мероприятие, направленное на разобщение с окружающими людьми больных инфекционными болезнями, а также лиц, подозрительных на эти болезни или имевших контакт с больными, для предупреждения дальнейшего распространения инфекции …   Медицинская энциклопедия

• Диагностика важнейших инфекционных болезней, общих нескольким видам животных — Название болезни Возбудитель Источник возбудителя инфекции Пути передачи возбудителя инфекции Основные поражаемые группы животных Длительность инкубационного периода Носительство возбудителя Важнейшие клинические признаки Патологоанатомические… …   Ветеринарный энциклопедический словарь

• БРЮШНОЙ ТИФ — – инфекционная болезнь из группы кишечных инфекций, характеризующаяся язвенным поражением лимфатического аппарата тонкой кишки, циклическим течением, бактериемией, симптомами интоксикации, сыпью на коже. Возбудитель – Salmonella typhi,… …   Энциклопедический словарь по психологии и педагогике

• Диагностика важнейших инфекционных болезней крупного рогатого скота, овец и коз — Название болезни Возбудитель Источник возбудителя инфекции Пути передачи возбудителя инфекции Основные поражаемые группы животных Длительность инкубационного периода Носительство возбудителя Важнейшие клинические признаки Патологоанатомические… …   Ветеринарный энциклопедический словарь

• Туберкулёз о́рганов дыха́ния — Туберкулез органов дыхания. Органы дыхания при туберкулезе (Туберкулёз органов дыхания) поражаются наиболее часто. В соответствии с принятой в нашей стране клинической классификацией туберкулеза различают следующие формы Т. о. д.: первичный… …   Медицинская энциклопедия

• Лёгкие — I Легкие (pulmones) парный орган, расположенный в грудной полости, осуществляющий газообмен между вдыхаемым воздухом и кровью. Основной функцией Л. является дыхательная (см. Дыхание). Необходимыми компонентами для ее реализации служат вентиляция… …   Медицинская энциклопедия

• Обследование больного — I Обследование больного Обследование больного комплекс исследований, направленных на выявление индивидуальных особенностей больного, установление диагноза болезни, обоснование рационального лечения, определение прогноза. Объем исследований при О …   Медицинская энциклопедия

• ГОНОРЕЯ — ГОНОРЕЯ. Содержание: Исторические данные…………..686 Биология гонококка в организме……..6 87 Клинический иммунитет и реиифекция…..689 Лабораторный диагноз Г………….690 Г. как общее заболевание…………695 Общая патология… …   Большая медицинская энциклопедия

• Туберкулёз внелёгочный — Туберкулез внелегочный условное понятие, объединяющее формы туберкулеза любой локализации, кроме легких и других органов дыхания. В соответствии с клинической классификацией туберкулеза (Туберкулёз), принятой в нашей стране, к Т. в. относят… …   Медицинская энциклопедия

Книги

• Санитарная микробиология. Учебное пособие, Госманов Рауис Госманович, Галиуллин Альберт Камилович, Волков Али Харисович. Учебное пособие состоит из двух частей. В первой части изложены предмет и задачи санитарной микробиологии, методы и способы дезинфекции, дезинсекции и дератизациина мясо- и… Подробнее  Купить за 1990 руб
• Санитарная микробиология. Учебное пособие, Госманов Р.Г., Волков А.Х., Галиуллин А.К., Ибрагимова А.И.. 240 стр. Учебное пособие написано в соответствии с Государственным образовательным стандартом высшего профессионального образования по специальностям 110501 Ветсанэкспертиза и 111201… Подробнее  Купить за 1318 грн (только Украина)
• Санитарная микробиология, Госманов Р., Волков А., Галиуллин А.. Учебное пособие написано в соответствии с Государственным образовательным стандартом высшего профессионального образования по специальностям 110501 — «Ветсанэкспертиза» и 111201… Подробнее  Купить за 1239 руб

Другие книги по запросу «БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ» >>

Бактериологические исследования – ФНКЦ ФМБА России

Бактериологическое исследование подразумевает забор биологического материала у пациента (какой именно материал – зависит от характера анализа), посев в специальную питательную среду и наблюдение за ростом возбудителей болезни. На основании такого исследования можно обнаружить болезнетворные микроорганизмы, узнать их количество в организме человека и назначить соответствующее лечение.

Посевы в медицине используются не только для того, чтобы определить, какой именно микроорганизм (или группа) вызывает болезнь, но и с целью установки его чувствительности к различным антибактериальным препаратам. Бывает так, что микроорганизмы вырабатывают резистентность к распространенным антибиотикам, поэтому лечение оказывается неэффективным. В таком случае в ходе лабораторного исследования подбирается другая группа лекарственных препаратов, оказывающая максимальное влияние на возбудителя болезни.

Показания:

Бактериологические исследования проводятся при:

1. диагностике инфекционно-воспалительных заболеваний.
2. беременности (являются обязательными, сдаются 2 раза).
3. лечении инфекционных заболеваний (для оценки эффективности).
4. определении чувствительности возбудителя к антибактериальным препаратам.

Методика:

Проводятся бактериологические исследования всех видов биоматериалов:

• крови
• мокроты
• мочи
• синовиальной, плевральной, перикардиальной, спинномозговой и др. жидкостей
• кала (в том числе и на «дисбактериоз» кишечника)
• отделяемого урогенитального тракта
• отделяемого зева, носа, уха
• отделяемого ран

Более 40 видов исследований позволяют успешно определить патогенные микроорганизмы и оперативно назначить эффективное лечение.

Почему это стоит сделать в нашей клинике:

В ФНКЦ ФМБА России имеется современная, хорошо оснащенная микробиологическая лаборатория, специалисты имеют сертификаты по специальности «Бактериология» и многолетний опыт работы в лаборатории.

Наши преимущества:

— это уникальная возможность на вторые сутки после взятия материала определить род и вид более 5 600 микроорганизмов на масс-спектрометре «Maldi Tof microflex» (Германия).

— это адекватный подбор антибиотиков на автоматическом бактериологическом анализаторе Phoenix (США), который позволяет протестировать 20 наиболее современных антибиотиков к конкретному возбудителю. Срок выдачи результатов зависит от возбудителя.

— это диагностика дисбактериоза различных биотопов в соответствии с последними инструктивно-методическими материалами МЗ.

Бактериологический метод исследования: этапы, цели, характеристика

Исследование бактерий имеет большое практическое значение для человека. На сегодняшний день открыто большое количество прокариот, которые отличаются друг от друга по патогенности, области распространения, форме, размерам, количеству жгутиков и другим параметрам. Чтобы детально изучить данный штамм, применяется бактериологический метод исследования.

Чтобы определить, являются ли бактерии патогенными, проводят исследование культуры различными способами. Среди них:

1. Бактериоскопический метод.

2. Бактериологический метод.

3. Биологический метод.

Бактериоскопический и бактериологический методы исследования основаны непосредственно на работе с клетками прокариот, когда биологический анализ требуется для изучения влияния таких клеток на живой организм подопытных животных. По степени проявления тех или иных признаков заболевания ученый может сделать вывод о наличии или отсутствии патогенных бактерий в пробе, а также естественно их размножить в организме животного для получения их культуры и использования в других работах.

Бактериологический метод исследования отличается от бактериоскопического. В первом для анализа используется специально подготовленная культура живых прокариот, когда во втором проводится работа с мертвыми или живыми клетками на предметном стекле.

Этапы бактериологического метода исследования. Микробиология

Принцип изучения свойств бактериальной культуры может пригодиться как для ученых-микробиологов, которые поставили цель исследовать прокариотические клетки, так и для лаборантов, задача которых заключается в установлении патогенности или непатогенности бактерий, а затем диагноза пациента.

Методика изучения бактерий делится на три этапа:

1. Выделение бактерий из первоначальной пробы.

2. Высевание бактерий и выращивание чистой культуры, изучение ее свойств.

3. Детальное исследование бактериальных клеток.

Первый этап

Проба, или мазок, берется со свободной поверхности среды или у пациента. Таким образом мы получаем «коктейль» из множества видов бактерий, которые должны высеять на питательную среду. Иногда появляется возможность выделить сразу необходимые бактерии, зная их очаги распространения в организме.

Через двое-трое суток отбираются нужные колонии и высеваются на твердые среды чашек Петри с помочью стерильной петли. Во множестве лабораторий работают с пробирками, где может находиться твердая или жидкая питательная среда. Так и проводится бактериологический метод исследования в микробиологии.

Второй этап

После получения отдельных колоний бактерий проводится непосредственный макро- и микроанализ. Измеряются все параметры колоний, определяется цвет и форма каждой из них. Нередко проводится подсчет колоний на чашке Петри, а затем в исходном материале. Это имеет значение при анализе патогенных бактерий, от числа которых зависит степень заболевания.

Бактериологический метод исследования, 2 этап которого заключается в изучении отдельных колоний микроорганизмов, может быть сопряжен с биологическим способом анализа бактерий. Еще одна цель работы на этом этапе – увеличить количество исходного материала. Это можно сделать на питательной среде, а можно провести эксперимент в естественных условиях на живых подопытных организмах. Патогенные бактерии будут размножаться, и в результате кровь будет содержать миллионы клеток прокариот. Из взятой крови легко приготовить необходимый рабочий материал бактерий.

Третий этап

Самая важная часть исследования – это определение морфологических, биохимических, токсигенных и антигенных свойств культуры бактерий. Работа ведется с заранее «очищенными» культурами на питательной среде, а также с препаратами (зачастую окрашенными) под микроскопом.

Установить принадлежность патогенных или условно-патогенных бактерий к той или иной систематической группе, а также определить их устойчивость к лекарствам позволяет бактериологический метод исследования. 3 этап – антибиотики, т. е. анализ поведения клеток бактерий в условиях содержания лекарственных препаратов в окружающей среде.

Исследование устойчивости культуры к антибиотику имеет важное практическое значение, когда необходимо прописать для конкретного пациента необходимые, а главное, действенные препараты. Здесь и может помочь бактериологический метод исследования.

Что такое питательная среда?

Для развития и размножения бактерии должны находиться в заранее подготовленных питательных средах. По консистенции они могут быть жидкие или твердые, а по происхождению – растительные или животные.

Основные требования к питательным средам:

1. Стерильность.

2. Максимальная прозрачность.

3. Оптимальные показатели кислотности, осмотического давления, активности воды и других биологических величин.

Получение изолированных колоний

1. Метод Дригальского. Он заключается в том, что на бактериальную петлю наносится мазок с различными видами микроорганизмов. Этой петлей проводят по первой чашке Петри с питательной средой. Далее, не меняя петлю, методом остаточного материала проводят по второй и третьей чашкам Петри. Так, на последних образцах колонии бактерии будут засеваться не слишком плотно, тем самым упрощается возможность найти необходимые для работы бактерии.

2. Метод Коха. В нем используются пробирки с расплавленной питательной средой. Туда помещается петля или пипетка с мазком бактерий, после чего содержимое пробирки выливается на специальную пластинку. Агар (или желатин) застывает через какое-то время, а в его толще легко обнаружить нужные колонии клеток. Важно перед началом работы развести смесь бактерий в пробирках, чтобы концентрация микроорганизмов не была очень большой.

Бактериологический метод исследования, этапы которого основаны на выделении нужной культуры бактерий, не обходится без этих двух способов нахождения изолированных колоний.

Антибиотикограмма

Визуально реакцию бактерий на препараты можно заметить двумя практическими способами:

1. Метод бумажных дисков.

2. Разведение бактерий и антибиотика в жидкостной среде.

Метод бумажных дисков требует наличия культуры микроорганизмов, которые были выращены на твердой питательной среде. На такую среду кладут несколько бумажек округлой формы, пропитанных антибиотиками. Если препарат успешно справляется с нейтрализацией бактериальных клеток, после такой обработки останется участок, лишенный колоний. Если же реакция на антибиотик отрицательная, бактерии выживут.

В случае использования жидкой питательной среды сперва готовят несколько пробирок с культурой бактерий разных степеней разведения. В эти пробирки добавляют антибиотики, и в течение суток наблюдают за процессом взаимодействия вещества и микроорганизмов. В конечном итоге получается качественная антибиотикограмма, по которой можно судить об эффективности препарата для данной культуры.

Основные задачи анализа

Здесь перечислены по пунктам цели и этапы бактериологического метода исследования.

1. Получить исходный материал, который будет использоваться для выделения колоний бактерий. Это может быть мазок с поверхности любого предмета, слизистой оболочки или полости органа человека, анализ крови.

2. Выращивание культуры на твердой питательной среде. Через 24-48 часов на чашке Петри можно обнаружить колонии бактерий разных видов. Отбираем по морфологическим и/или биохимическим критериям нужную и проводим уже с ней дальнейшую работу.

3. Размножение полученной культуры. Бактериологический метод исследования может опираться на механический или биологический способ увеличения численности культуры бактерии. В первом случае ведется работа с твердыми или жидкими питательными средами, на которых в термостате размножаются бактерии и образуют новые колонии. Биологический способ требует естественных условий увеличения численности бактерий, поэтому здесь микроорганизмами заражается подопытное животное. Через несколько суток в пробе крови или мазке можно обнаружить множество прокариот.

4. Работа с очищенной культурой. Чтобы определить систематическое положение бактерий, а также их принадлежность к возбудителям заболеваний, необходимо провести тщательный анализ клеток по морфологическим и биохимическим признакам. При исследовании патогенных групп микроорганизмов важно знать, насколько эффективно действие антибиотиков.

Это была общая характеристика бактериологического метода исследования.

Особенности проведения анализа

Главное правило проведения бактериологического исследования – это максимальная стерильность. Если идет работа с пробирками, посевы и пересевы бактерий должны проводиться только над нагретой спиртовкой.

Все этапы бактериологического метода исследования требуют использования специальной петли или пастеровской пипетки. Оба инструмента должны быть предварительно обработаны в пламени спиртовки. Что касается пастеровской пипетки, то тут перед термической стерилизацией необходимо отломать кончик пипетки пинцетом.

Техника посева бактерий тоже имеет свои особенности. Во-первых, при посеве на твердые среды проводят бактериальной петлей по поверхности агара. Петля, конечно же, уже должна иметь на поверхности образец микроорганизмов. Также практикуется посев внутрь питательной среды, и в этом случае петля или пипетка должны достичь дна чашки Петри.

При работе с жидкими средами используются пробирки. Здесь важно следить, чтобы жидкости не касались краев лабораторной посуды или пробки, а используемые инструменты (пипетка, петля) не дотрагивались до посторонних предметов и поверхностей.

Значение биологического метода исследования

Анализ пробы бактерий имеет свое практическое применение. Прежде всего бактериологический метод исследования может использоваться в медицине. К примеру, необходимо изучить микрофлору больного, чтобы установить правильный диагноз, а также выработать правильный ход лечения. Здесь помогает антибиотикограмма, которая покажет активность лекарственных препаратов против возбудителя заболеваний.

Анализ бактерий используется в лаборатории для определения таких опасных заболеваний, как туберкулез, возвратный тиф или гонорея. Также он применяется для изучения бактериального состава миндалин, полостей органов.

Бактериологический метод исследования можно использовать для определения загрязненности среды. По данным о количественном и качественном составе мазка с поверхности какого-либо предмета определяется степень заселенности данной среды микроорганизмами.

Бактериологические исследования

Бактериологические исследования

Бактериологическое исследование —  предназначенное для выделения бактерий и изучения их свойств с целью постановки микробиологического диагноза.
Исследуемый материал следует брать в асептических условиях в стерильную посуду и доставлять в лабораторию как можно скорее. В случае необходимости пробы следует хранить на холоде. Методика взятия проб зависит от объекта, характера заболевания и свойств микроорганизма. Одним из распространенных приемов бактериологического исследования является бактериоскопия.
Для изучения нефиксированных бактерий пользуются двумя методами: раздавленной (между предметным и покровным стеклами) капли и висячей капли. Следует помнить, что препараты нефиксированных бактерий заразны.
К числу важнейших элементов бактериологического исследования относятся посевы и пересевы бактериальных культур, производимые бактериальной петлей или пастеровской пипеткой. Петлю стерилизуют прокаливанием в пламени, затем ее остужают прикосновением к участку незасеянного агара или ополаскивая в стерильной жидкости. При использовании пастеровской пипетки ее кончик обламывают пинцетом, несколько раз проносят пипетку через пламя горелки и дают остыть. При посевах используют жидкие и твердые питательные среды. При посеве на скошенный агар культуру бактерий растирают петлей по поверхности агара. При посеве в толщу агарового или желатинового столбика питательную среду прокалывают до дна пробирки петлей или особой иглой. При посеве в жидкую среду надо следить, чтобы жидкость не выливалась и не смачивала края пробирок и пробки. Посевы и пересевы следует проводить вблизи пламени газовой горелки, пробирки не должны долго оставаться открытыми, петля или пастеровская пипетка с культурой не должна ни к чему прикасаться; перед тем как закрывать пробирку, края ее следует прожечь. Засеянные пробирки необходимо тотчас же надписать. 

Микробиологические методы исследования делятся на методы прямого обнаружения возбудителя в организме больного — бактериоскопическое и бактериологическое исследования; методы косвенного доказательства наличия возбудителя в организме больного — серологические исследования, направленные на обнаружение специфических антигенов в инфицированном материале или антител в сыворотке крови и различных секретах организма больного.
Бактериоскопическое исследование крови, мочи, спинномозговой жидкости, слизи из зева и носа, кала и различных патологических субстратов на присутствие возбудителя применяют при многих инфекционных болезнях. Этот метод имеет довольно ограниченное применение, хотя и очень важен. Он используется, в частности, для обнаружения в крови возбудителей малярии, возвратного тифа, лептоспироза. Спинномозговую жидкость исследуют при гнойном и туберкулезном менингите, слизь из зева и носа — при дифтерии, ангине Венсана, кал — при амебиазе, балантидиазе, лямблиозе; мочу — при лептоспирозе. Палочки чумы, сибирской язвы можно увидеть в пунктате чумного бубона и мазках-отпечатках, взятых из сибиреязвенного карбункула; при микроскопии мазка пунктата из костного мозга и селезенки, грануляций из язвы можно обнаружить лейшмании; в мокроте — микобактерии туберкулеза. Преимущество бактериоскопического метода заключается в его быстроте. Результаты анализа могут быть получены через несколько часов. При некоторых заболеваниях (малярия, эпидемический цереброспинальный менингит и др.) возбудители могут быть обнаружены в организме больного уже в 1-й день болезни, что очень важно для своевременной диагностики и лечения. Значительно расширились возможности, бактериоскопической диагностики благодаря обработке препаратов специфическими сыворотками, содержащими антитела к данному возбудителю, меченные флуорохромами (иммунофлуоресцентный метод) или ферментами (иммуноферментный метод). При этом меченые антитела соединяются с антигеном, который выявляется при иммунофлуоресцентном методе под люминесцентным микроскопом, а при иммуноферментном методе — по окрашиванию продукта ферментативной реакции после введения субстратно-индикаторной смеси.
Бактериологический метод диагностики основан на выделении возбудителя из крови, спинномозговой жидкости, мокроты, слизи из зева и носа, кала, мочи, желчи больного, а при летальных исходах — из кусочков органов, которые засевают на специальные питательные среды. Бактериологическая диагностика широко используется для исследования слизи из зева и носа на дифтерийные бактерии, для выделения возбудителей кишечных инфекций (например, холеры, дизентерии, сальмонеллезов, эшерихиозов) из кала больного, возбудителей пневмонии — из мокроты и в других случаях. При этом учитывают особенности предполагаемой инфекции, место избирательной локализации возбудителя и пути его выделения в окружающую среду. Исследование дает положительные результаты уже в первые часы или дни болезни. Однако окончательный ответ лаборатория при большинстве инфекционных болезней сообщает лишь через 2-4 дня, а при бруцеллезе, туберкулезе — через 3-4 недель. Это зависит от сроков, требующихся для роста микроорганизмов и их идентификации (биохимической и серологической). Каждый микроб для своего роста требует соответствующей питательной среды. В зависимости от того, какой микроб предполагают выделить (что определяется при клиническом и эпидемиологическом обследовании больного), выбирают соответствующую питательную среду. Иногда посев производят одновременно на несколько питательных сред. Ценность результатов бактериологических исследований во многом определяется тем, правильно ли взят материал у больного и правильно ли он доставлен в лабораторию. Инфекционный материал собирают в стерильную посуду, соблюдая правила асептики.

 Важнейшим этапом бактериологического исследования является идентификация — определение видовой или типовой принадлежности бактерий, полученных в виде чистой культуры. При идентификации бактерий производится изучение их физиологических и биохимических свойств, токсинообразования. Широко используют серологические методы идентификации   бактерий. Во многих случаях эффективным оказывается биологический метод идентификации микроорганизмов, основанный на заражении лабораторных животных исследуемым материалом или полученной культурой бактерий и выявлении у животных характерных патологических изменений.
Для выделения чистых культур используют механические и биологические методы. Пример механического метода: каплю исследуемого материала растирают одним и тем же стерильным шпателем или бактериальной петлей по поверхности плотной питательной среды, последовательно в первой, второй и третьей чашках Петри. Выделение чистой культуры производится из выросших отдельных колоний и заключается в их исследовании и отсеве на свежую питательную среду. Биологические методы выделения чистых культур основаны на учете того или иного свойства выделяемого микроба, отличающего его от других микробов, находящихся в исследуемом материале.
При биологическом методе используют такого рода питательные среды, в которых созданы условия, благоприятные для развития определенного вида микробов. К числу биологических методов относится также заражение лабораторных животных, чувствительных к выделяемому виду бактерий.
Бактериологическое исследование — комплекс методов для выявления патогенных микроорганизмов у больного, у носителя или на объектах внешней среды. 

Методы бактериологического исследования все шире внедряются в практику для более детального обследования больных, установления этиологического фактора воспалительного процесса, назначения рациональной терапии и определения ее эффективности. 

Разнообразие клинического материала и своеобразие микрофлоры отдельных органов определяют особенности методов бактериологического исследования, которые требуют применения специальных приемов отбора проб, посевов на питательные среды и проведения хода анализов. 

Бактериологическое исследование клинического материала состоит из нескольких этапов: 

— отбор проб на исследование; 

— посев на питательные среды; 

— выделение чистой культуры; 

— идентификация и дифференциация выделенных культур микроорганизмов; 

— анализ результатов исследования. 

Методы бактериологического исследования все шире внедряются в практику для более детального обследования больных, установления этиологического фактора воспалительного процесса, назначения рациональной терапии и определения ее эффективности. 

Разнообразие клинического материала и своеобразие микрофлоры отдельных органов определяют особенности методов бактериологического исследования, которые требуют применения специальных приемов отбора проб, посевов на питательные среды и проведения хода анализов. 

Бактериологическое исследование клинического материала состоит из нескольких этапов: 

— отбор проб на исследование; 

— посев на питательные среды; 

— выделение чистой культуры; 

— идентификация и дифференциация выделенных культур микроорганизмов; 

— анализ результатов исследования. 

При бактериологическом исследовании проводят так называемый посев собранного у больного материала на питательные среды, что способствует росту и размножению возбудителя заболевания. В ходе исследования можно выявить не только сам факт наличия, но и концентрацию патогенных микроорганизмов в том или ином биоматериале.
Методом бактериологического исследования исследуют мокроту, ликвор, кровь, а также отделяемое из половых органов, ротовой полости, зева и ран пациента. Таким образом, микроорганизмы можно высевать практически с любого участка организма человека.
Методика бактериологического посева чрезвычайно удобна и эффективна для обнаружения и определения вида бактерий и грибков. Определенную сложность представляет обнаружение вирусов в связи с особенностями их биологии.
Бактериологическое исследование (посевы) имеет огромное значение не только для определения конкретного типа микроорганизма, но и установления степени чувствительности к нему того или иного антибиотика. Таким образом, определяется максимальная эффективность того или иного вида антибиотикотерапии.
При проведении анализа важно помнить, что некоторые микроорганизмы, например пневмококки, довольно быстро погибают, поскольку имеют повышенную тенденцию к саморазрушению. Таким образом, посевы необходимо делать в короткие сроки.

Бактериологическое исследование

Бактериологическое исследование — это исследование, предназначенное для выделения бактерий и изучения их свойств с целью постановки микробиологического диагноза.

Исследуемый материал следует брать  в  асептических  условиях в стерильную посуду и доставлять в лабораторию возможно скорее. В случае необходимости пробы следует хранить на холоде. Методика взятия проб зависит от объекта, характера заболевания и свойств микроорганизма. Одним из распространенных приемов бактериологического исследования является бактериоскопия.

Для изучения нефиксированных бактерий пользуются двумя методами: раздавленной (между предметным и покровным стеклами) капли и висячей капли. Следует помнить, что препараты нефиксированных бактерий заразны.

Для бактериоскопии фиксированных препаратов используют мазки. Для их приготовления каплю исследуемой жидкости распределяют по поверхности предметного стекла, а затем высушивают. Наиболее распространенным методом фиксации препарата является пронесение его через пламя газовой горелки. В некоторых случаях используют фиксирующие составы. Фиксированные препараты, как правило, окрашивают (см. Окраска микроорганизмов). К числу важнейших элементов бактериологического исследования относятся посевы и пересевы бактериальных культур, производимые бактериальной петлей или пастеровской пипеткой. Петлю стерилизуют прокаливанием в пламени, затем ее остужают прикосновением к участку незасеянного агара или ополаскивая в стерильной жидкости. При использовании пастеровской пипетки ее кончик обламывают пинцетом, несколько раз проносят пипетку через пламя горелки и дают остыть. При посевах используют жидкие и твердые питательные среды. При посеве на скошенный агар культуру бактерий растирают петлей по поверхности агара. При посеве в толщу агарового или желатинового столбика питательную среду прокалывают до дна пробирки петлей или особой иглой. При посеве в жидкую среду надо следить, чтобы жидкость не выливалась и не смачивала края пробирок и пробки. Посевы и пересевы следует проводить вблизи пламени газовой горелки, пробирки не должны долго оставаться открытыми, петля или пастеровская пипетка с культурой не должна ни к чему прикасаться; перед тем как закрывать пробирку, края ее следует прожечь. Засеянные пробирки необходимо тотчас же надписать.

Важнейшим этапом бактериологического исследования является идентификация — определение видовой или типовой принадлежности бактерий, полученных в виде чистой культуры. При идентификации бактерий производится изучение их физиологических и биохимических свойств, токсинообразования. Широко используют серологические методы идентификации   бактерий   (реакции агглютинации и преципитации). Во многих случаях эффективным оказывается биологический метод идентификации микроорганизмов, основанный на заражении лабораторных животных исследуемым материалом или полученной культурой бактерий и выявлении у животных характерных патологических изменений.

Для выделения чистых культур используют механические и биологические методы. Пример механического метода: каплю исследуемого материала растирают одним и тем же стерильным шпателем или бактериальной петлей по поверхности плотной питательной среды, последовательно в первой, второй и третьей чашках Петри. Выделение чистой культуры производится из выросших отдельных колоний и заключается в их исследовании и отсеве на свежую питательную среду. Биологические методы выделения чистых культур основаны на учете того или иного свойства выделяемого микроба, отличающего его от других микробов, находящихся в исследуемом материале.

При биологическом методе используют такого рода питательные среды, в которых созданы условия, благоприятные для развития определенного вида микробов. К числу биологических методов относится также заражение лабораторных животных, чувствительных к выделяемому виду бактерий.

Выращивание бактерий производят в термостатах, в которых поддерживается постоянная температура, обычно 37°. В большинстве случаев выращивание продолжают около суток, но в зависимости от вида бактерий бывают необходимы и другие сроки выращивания. Разные виды бактерий нуждаются при выращивании в разных количествах кислорода. Для поддержания необходимой концентрации кислорода в среде пользуются разнообразными методами аэрации. См. также Питательные среды.

Бактериологическое исследование — комплекс методов для выявления патогенных микроорганизмов у больного, у носителя или на объектах внешней среды. Бактериологические исследования пользуются также для обнаружения условно патогенных и санитарно-показательных микробов, характеризующих степень загрязнения внешней среды, для изучения микробного пейзажа определенной среды (объекта). Бактериологическое исследование может быть использовано для диагностики, профилактики инфекционных заболеваний, для санитарно-гигиенической характеристики среды, окружающей человека, для научного исследования.

Материал и метод бактериологического исследования зависят от цели анализа, условий среды, патогенеза и течения заболевания. При наличии бактериемии микроб обнаруживают при помощи посева крови. В случаях выраженных местных поражений возбудителя следует искать в отделяемом или выделениях пораженного органа (дифтерия, дизентерия, гонорея и др.). Наконец, при заболеваниях со сложным течением, когда (как, например, при брюшном тифе) бактериемия сменяется поражениями тонких кишок, на каждом этапе применяют соответствующий метод исследования: в течение первой недели заболевания производят посев крови, на второй наиболее достоверно серологическое исследование, начиная с третьей недели положительный результат получают при посеве испражнений; последним методом пользуются и в качестве контрольного исследования для обнаружения бактерионосителей среди реконвалесцентов и для наблюдения за ними.

Выполнение любой из указанных задач осуществляют применением методов, предназначенных для выделения и определения микроорганизмов. В зависимости от
характеристики микроба используют весь комплекс методов или его части.

Бактериоскопия — наиболее достунный прием, основанный на микроскопическом изучении материала. При микроскопии свежих препаратов можно пользоваться некоторыми микрохимическими реакциями (например, окраска йодофильных бактерий раствором Люголя) или избирательной окраской разных структурных частей бактерий.

Более четко бактерии можно выявить в окрашенном препарате. Исследуемый материал наносят на предметное стекло тонким и по возможности ровным слоем. Дают препарату высохнуть на воздухе и фиксируют одним из общепринятых методов, но чаще всего фламбированием, т. е. двух-, трехкратным быстрым проведением препарата над пламенем горелки так, чтобы стекло было теплое, но не горячее. Препарат, остуженный после фиксации, окрашивают простой или дифференциальной окраской (см. Окраска микроорганизмов). При флюоресцентной микроскопии используют как нативные, так и сухие препараты. В этом случае обработка определенными красителями вызывает свечение структур микробного тела или всего микроба в ультрафиолетовых или коротких синих лучах. В другой модификации микробов обрабатывают специфическими сыворотками, меченными флюоресцентами (красителями). Бактерии, соответствующие сыворотке, будут светиться, так как на них осядет меченая сыворотка. Гетерологичные бактерии не будут светиться.

Методом бактериоскопии широко пользуются для бактериологической диагностики некоторых инфекционных заболеваний (гонорея, туберкулез, возвратный тиф), а также при изучении всего комплекса микрофлоры органа (миндалины, влагалище), продукта или другого объекта.

Метод посева, т. е. выделение чистой культуры искомого микроорганизма, является более точным и надежным способом бактериологической диагностики, чем бактериоскопия. Свежий материал размазывают по поверхности плотной питательной среды, налитой в чашки Петри. Первичный посев производят на обычные среды, благоприятные для данного микроба, на дифференциальные или на селективные среды. Выбор питательной среды (см.), как и метода предварительной обработки свежего материала для посева, зависит от степени его загрязнения сопутствующей посторонней микрофлорой. Через 24—48 час. содержания в термостате при оптимальной        для данного микроба температуре чашки рассматривают и подозрительные колонии пересевают на среды, способствующие размножению данного возбудителя. Таким образом получают культуру однородных бактерий, которые и должны быть идентифицированы.

Идентификация микроба начинается с изучения его морфологии в окрашенном препарате и в раздавленной капле (см.) для определения формы микробов и их подвижности. Следующим этапом является исследование ферментативной способности бактерий по расщеплению углеводов, аминокислот, мочевины в определенных для каждого вида сочетаниях. У бактерий наиболее изучены сахаро- и протеолитические ферменты.

Идентификация микроба должна быть дополнена изучением других свойств, характерных для каждого рода и вида микроорганизмов. К таким свойствам относится способность выборочно растворять эритроциты разных животных (гемолиз), свертывать плазму крови (плазмокоагуляция), растворять сгусток фибрина (фибринолиз) и пр. Все эти особенности бактерий могут быть использованы при их определении как дифференциальные признаки.

Окончательное определение микробов некоторых видов, в основном патогенных бактерий семейства кишечных, включает серологическую идентификацию (см. Идентификация микробов). Обычно для этого ставят реакцию агглютинации, т. е. выявляют скучивание бактерий под влиянием одноименной иммунной сыворотки. Агглютинация микробов в сыворотке против определенного вида указывает на принадлежность к этому виду. Обычно реакцию агглютинации ставят ориентировочно на стекле и для окончательного определения в пробирках с разведениями сыворотки.

Ряд микробов не удается определить до конца описанным путем. Тогда идентификацию необходимо дополнить заражением лабораторных животных, поскольку для некоторых бактерий характерна патогенность или токсигенность, выявляющаяся при заражении животных. В некоторых случаях заражение животных служит также методом накопления патогенных микробов.

Только сопоставление всех характеристик культуры, собранных при изучении морфологии, биохимических, серологических, а где нужно и биологических свойств ее, может дать основания для идентификации. Ответ при положительном результате исследования не представляет затруднений, если выделенный микроб типичен. В таком случае указывают род, вид и, если определялся, тип бактерии. При выделении микроба, отклоняющегося по каким-то свойствам от типичной характеристики, дается ответ с указанием на отклоняющийся признак. В таком случае полезно повторить исследование, если позволяет течение болезни или условия сбора материала. Полезно также подвергнуть культуру атипичных микробов дополнительному изучению другими, более сложными методами.

Отрицательные результаты бактериологического исследования имеют относительное значение и показывают лишь, что в исследованной порции материала искомые микробы не содержались или были нежизнеспособны. Однако они могут присутствовать в другой порции. По этому, например, при обследовании на бациллоносительство (брюшной тиф, дизентерия, дифтерия) требуется проводить повторные исследования.

9. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний

Основным методом микробиологической
диагностики и «золотым стандартом»
микробиологии, является бактериологический
метод.

Цель бактериологического методазаключается в выделении чистой культуры
возбудителя заболевания из исследуемого
материала, накопление чистой культуры
и идентификация данной культуры по
набору свойств: морфологических,
тинкториальных, культуральных,
биохимических, антигенных, по наличию
факторов патогенности, токсигенности
и определение его чувствительности к
антимикробным препаратам и бактериофагам.

Бактериологический метод исследования
включает:

1. посев исследуемого материала в
питательные среды

2. выделение чистой культуры

3. идентификацию микроорганизмов
(определение принадлежности к виду).

Выделение и идентификация чистых культур
аэробных и анаэробных бактерий
предусматривает проведение следующих
исследований:

I этап (работа с нативным материалом)

Цель: получение изолированных колоний

1. Предварительная микроскопия дает
ориентировочное представление о
микрофлоре

2. Подготовка материала к исследованию

3. Посев на плотные питательные среды
для получения изолированных колоний

4. Инкубация при оптимальной температуре,
чаще всего 37°С, в течение 18-24 часов

II этап

Цель: получение чистой культуры

1. Макроскопическое изучение колоний
в проходящем и отраженном свете
(характеристика величины, формы, цвета,
прозрачности, консистенции, структуры,
контура, поверхности колоний).

2. Микроскопическое изучение изолированных
колоний

3. Постановка пробы на аэротолерантность
(для подтверждения присутствия в
исследуемом материале строгих анаэробов).

4. Посев колоний, характерных для
определенного вида, на среды накопления
чистой культуры или элективные среды
и инкубация в оптимальных условиях.

III этап

Цель: идентификация выделенной чистой
культуры

1. Для идентификации выделенной культуры
по комплексу биологических свойств
изучается:

• морфология и тинкториальные свойства

• культуральные свойства (характер роста
  на питательных средах)

• биохимические свойства (ферментативная
  активность микроорганизмов)

• серологические свойства (антигенные)

• вирулентные свойства (способность к
  продукции факторов патогенности:
  токсины, ферменты, факторы защиты и
  аггресии)

• патогенность для животных

• фаголизабельность (чувствительность
  к диагностическим бактериофагам)

• чувствительность к антибиотикам

• другие индивидуальные свойства

IV этап (Заключение)

По изученным свойствам делают заключение
о выделенной культуре

Первый этап исследований.Исследование
патологического материала начинается
с микроскопии. Микроскопия окрашенного
нативного материала позволяет установить
ориентировочно состав микробного
пейзажа изучаемого объекта, некоторые
морфологические особенности
микроорганизмов. Результаты микроскопии
нативного материала, во многом определяют
ход дальнейшего исследования, впоследствии
их сопоставляют с данными, полученными
при посевах на питательные среды.

При достаточном содержании патогенных
микроорганизмов в образце проводят
посев на плотные питательные среды (для
получения изолированных колоний). Если
в исследуемом материале бактерий мало,
то посев проводят на жидкие питательные
среды обогащения. Питательные среды
выбирают соответственно требовательности
микроорганизмов.

Культивирование микроорганизмов
возможно только при создании оптимальных
условий их жизнедеятельности и соблюдении
правил, исключающих контаминацию
(случайное загрязнение посторонними
микробами) исследуемого материала.
Искусственные условия, которые исключили
бы загрязнение культуры другими видами,
можно создать в пробирке, колбе или
чашке Петри. Вся посуда и питательные
среды должны быть стерильными и после
посева микробного материала защищены
от загрязнения извне, что достигается
с помощью пробок или металлических
колпачков и крышек. Манипуляции с
исследуемым материалом должны проводится
в зоне пламени спиртовки для исключения
контаминации материала из внешней
среды, а также в целях соблюдения техники
безопасности.

Посевы материала на питательные среды
должны быть сделаны не позднее 2 часов
с момента их забора.

Второй этап исследований. Изучение
колоний и выделение чистых культур.
Через сутки инкубации на чашках
вырастают колонии, причем на первом
штрихе рост сплошной, а на следующих –
изолированными колониями. Колония –
это скопление микробов одного вида,
выросших из одной клетки. Таккак
материал представляет собой чаще всего
смесь микробов, то вырас­тает
несколько видов колоний. Карандашом
маркируют разные колонии,очерчивая
их кружком со стороны дна, и изучают их
(табл. 11). Прежде всего, изу­чают
колонии невооруженным глазом:
макроскопические признаки. Чашку
просматривают
(не открывая ее) со стороны дна в проходящем
свете, отмечают прозрачность колоний
(прозрачная, если не задерживает свет;полупрозрачная,
если частично задерживает свет;
непрозрачная, если свет через колонию
не проходит), измеряют (в мм) размер
колоний. Затем изучают колонии со стороны
крышки, отмечают форму (правильная
круглая, неправильная, плоская, выпуклая),
характер поверхности (гладкая,
блестящая, тусклая, шероховатая,
морщинистая, влажная, сухая, слизистая),
цвет (бесцветная, окрашенная).

Таблица 11. Схема
изучения колоний

Примечание: 5-7 пункты изучаются при
малом увеличении микроскопа.

Еще лучше можно увидеть
различия колоний при рассмотрении их
с увеличением. Для этого закрытую чашку
дном кверху помещают на предметный
столик, слегка опускают конденсор,
используют неболь­шое увеличение
объектива (х8), передвигая чашку, изучают
у колоний микроскопические признаки:
характер края (ровные, волнистые,
зазубренные,
фестончатые), структуру (гомогенная,
зернистая, волокнистая, однородная,
или различающаяся в
центре и по периферии).

Далее
изучают морфологию микробных клеток
из колоний. Для это­го
из части каждой из отмеченных колоний
делают мазки, окрашивают по
Граму. Во время взятия колоний обращают
внимание на консистенцию (сухая,
если колония крошится и берется с трудом;
мягкая, если берется
легко на петлю; слизистая, если колония
тянется за петлей; твердая,
если часть колонии не берется петлей,
можно снять только всю колонию).

При
просмотре мазков устанавливают, что
колония представлена одним
видом микроба, следовательно, могут
быть выделены чистые куль­туры
бактерий. Для этого из изученных колоний
делают пересев на скошенный
агар. При пересеве
из колоний нужно тщательно следить,
чтобы взять именно
намеченные колонии, не задевая петлей
близлежащих колоний. Пробирки
подписывают и инкубируют в термостате
при температуре 37°С
в течение 24 часов.

Третий
этап исследований. Идентификация
выделенной культуры. Идентификация
микробов – определение систематического
поло­жения
выделенной из материала культуры до
вида и варианта. Первым условием
надежности идентификации является
безусловная чистота культуры.
Для идентификации микробов используют
комплекс признаков: морфологические
(форма, размеры, наличие жгутиков,
капсулы, спор, взаим­ного
расположения в мазке), тинкториальные
(отношение к окраске по Граму
или другим методам), химические
(соотношение гуанина+цитозина в
молекуле ДНК),
культуральные (питательные потребности,
условия куль­тивирования,
темп и характер роста на различных
питательных средах), ферментативные
(расщепление различных веществ с
образованием про­межуточных
и конечных продуктов), серологические
(антигенная структура, специфичность),
биологические (вирулентность для
животных, токсигенность,
аллергенность, влияние антибиотиков и
др.).

Для
биохимической дифференциации изучают
способность бактерий сбраживать
углеводы с образованием промежуточных
и конечных
продуктов,
способность разлагать белки и пептоны
и изучают окислительно-восстановительные
ферменты.

Для
изучения сахаролитических ферментов
выделенные культуры засевают
в пробирки с полужидкими средами,
содержащими лактозу, глюкозу и другие
углеводы и многоатомные спирты. На
полужидкие среды посев делают уколом
в глубину среды. При посеве
уколом пробирку со средой держат под
наклоном, вынимают проб­ку, обжигают
край пробирки. Материал забирают
стерильной петлей и прокалывают
ею столбик питательной среды почти до
дна.

Для определения протеолитических
ферментов выделенную культуру
засевают на пептонную воду или МПБ. Для
этого в руку берут про­бирку
с посевом ближе к себе, а пробирку со
средой — дальше от себя. Обе
пробирки открывают одномоментно,
захватив их пробки мизинцем и
краем ладони, обжигают края пробирок,
прокаленной охлажденной петлей
захватывают немного культуры и переносят
во вторую пробирку, растирают
в жидкой среде на стенке пробирки и
смывают ее средой.

При
посевах и пересевах внимание должно
быть обращено на соблюдение
правил стерильности, для того, чтобы не
загрязнять свои посевы
посторонней микрофлорой, а также не
загрязнять окружающую среду. Пробирки
маркируют и помещают в термостат для
инкубирования при температуре 37°Сна сутки.

Заключение

Учет результатов. Заключение по
исследованию. Учитывают результаты
идентификации и по совокупности
полученных данных, опираясь на
классификацию и характеристику типовых
штаммов, описанных в руководстве
(определитель Берджи, 1994-1996 гг.), определяют
вид выделенных культур.

Бактериологическое исследование | Анализы

При бактериологическом исследовании проводят так называемый посев собранного у больного материала на питательные среды, что способствует росту и размножению возбудителя заболевания. В ходе исследования можно выявить не только сам факт наличия, но и концентрацию патогенных микроорганизмов в том или ином биоматериале.
Методом бактериологического исследования исследуют мокроту, ликвор, кровь, а также отделяемое из половых органов, ротовой полости, зева и ран пациента. Таким образом, микроорганизмы можно высевать практически с любого участка организма человека.
Методика бактериологического посева чрезвычайно удобна и эффективна для обнаружения и определения вида бактерий и грибков. Определенную сложность представляет обнаружение вирусов в связи с особенностями их биологии.
Бактериологическое исследование (посевы) имеет огромное значение не только для определения конкретного типа микроорганизма, но и установления степени чувствительности к нему того или иного антибиотика. Таким образом, определяется максимальная эффективность того или иного вида антибиотикотерапии.
При проведении анализа важно помнить, что некоторые микроорганизмы, например пневмококки, довольно быстро погибают, поскольку имеют повышенную тенденцию к саморазрушению. Таким образом, посевы необходимо делать в короткие сроки.
Назначить исследования в виде посева бактериальной культуры могут как в районной поликлинике (наиболее часто отправляют кал на наличие дисбактериоза), так и в стационаре. Чаще биологический материал отправляют именно из стационара, если исследуемая жидкость труднодоступна (например, ликвор) и ее забор проводят в ходе сложных медицинских манипуляций.
После забора исследуемого материала и помещения его в питательную среду определением вида микроорганизма занимаются уже специалисты-микробиологи.
Срок образования культуры микрофлоры составляет от 3 до 10 дней. Распознавание микроорганизмов производится путем изучения их индивидуальных биохимических и культуральных признаков, присущих определенному виду.

Рынок бактериологического тестирования — Глобальный отраслевой анализ 2026

Обзор рынка

Растущее беспокойство по поводу предотвращения патогенных инфекций среди потребителей привело к росту спроса на рынке бактериологического тестирования. Бактериологическое тестирование определяется как сервис-ориентированная фирма, в которой потребляемые продукты, такие как вода, косметика, продукты питания и напитки, перед употреблением проверяются на патогенное загрязнение.Бактериологический анализ четко определяет наличие любых вредных бактерий, таких как кишечная палочка, сальмонелла, кампилобактер и других, вызывающих инфекции мочевыводящих путей, импетиго, целлюлит, пищевое отравление и другие. Эти вредные бактерии присутствуют в органических соединениях вместе с водой в огромных колониях, что делает воду непригодной для употребления. Вследствие этого производители фасованной минеральной воды в развитых странах нанимают услуги бактериологического тестирования, чтобы обеспечить гигиеническую питьевую воду, не содержащую патогенов.Благодаря упрощению различных компонентов бактериологическое тестирование становится еще более простым и удобным, что привлекает больше конечных пользователей. В связи со всеми этими положительными факторами можно ожидать, что мировой рынок бактериологических тестов останется положительным в течение прогнозируемого периода.

Появление пузырей Требование бактериологического исследования

Поскольку гигиена часто рассматривается как проблема общественного здравоохранения в различных развивающихся странах, бактериологическое тестирование, таким образом, становится важной частью предварительного профилактического анализа, проводимого государственными органами, что вызвало большой спрос на бактериологическое тестирование в различных странах.Регулирующие органы, включая Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA), Канадское агентство по инспекции пищевых продуктов (CFIA), Европейское управление по безопасности пищевых продуктов (EFSA), Food Standards Australia New Zealand (FSANZ) и другие, ввели строгие правила в отношении бактериологического тестирования различных пищевых продуктов и продуктов питания. косметическая продукция в целях обеспечения безопасности потребителей. В соответствии с этими правилами производители косметических средств и товаров личной гигиены, продуктов питания и напитков, а также медицинские центры все чаще используют услуги бактериологического тестирования за последнее десятилетие, что увеличивает спрос и способствует прибыльному росту на мировом рынке бактериологического тестирования.

Глобальное бактериологическое тестирование: сегментация рынка

На основе типа бактерий глобальный рынок бактериологических исследований был сегментирован как

• Колиформ
• Стафилококк
• Сальмонелла
• Campylobacter
• Легионелла
• Прочие

На основе методов тестирования, глобальный рынок бактериологического тестирования был сегментирован как-

• Тесты агглютинации
• Специфические питательные среды
• Тест на чувствительность к противомикробным препаратам
• Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
• Хроматография и спектрометрия
• Иммуноферментный анализ (ELISA)
• Прочие

На основании конечного использования, глобальный рынок бактериологического тестирования был сегментирован как-

• Пищевая промышленность и производство напитков
• Медицинские центры
• Водоочистные сооружения
• Косметика и средства личной гигиены
• Лаборатории общественного здравоохранения
• Прочие

На основе компонентов, мировой рынок бактериологического тестирования был сегментирован как-

• Инструменты
• Реагенты и расходные материалы
• Наборы для испытаний

Глобальное бактериологическое тестирование: ключевые участники

Некоторые из основных участников бактериологического тестирования включают SGS SA, Romer Labs Inc., Thermo Fisher Scientific Inc., Bio-Rad Laboratories, Inc., ALS Limited., Eurofins Scientific SE, Merck & Co., Inc., Intertek Group plc, TÜV SÜD AG, Bureau Veritas SA и т. Д. Другие промышленники и производители продукции проявляют большой интерес к бактериологическому тестированию, поскольку спрос растет с каждым годом.

Возможности для участников рынка:

В качестве параметра безопасности услуги бактериологического тестирования пользуются большим спросом среди различных конечных пользователей во всем мире.Кроме того, услуги бактериологического тестирования в последние годы широко используются разработчиками косметических средств и средств личной гигиены, которые пользуются большим спросом среди потребителей. Ожидается, что благодаря хорошо развитой инфраструктуре в цепочках поставок и расширенному распространению по всему миру инвесторы и другие поставщики услуг глобального бактериологического тестирования получат более высокую прибыль.

Глобальное бактериологическое тестирование: региональный обзор

Бактериологическое тестирование широко используется во всем мире из-за безопасности и эффективности.В глобальном масштабе, среди всех регионов, Европа пользуется услугами бактериологического тестирования, особенно в таких странах, как Великобритания, Швейцария, Германия и другие, из-за строгих рекомендаций и правил, установленных Европейским управлением по безопасности пищевых продуктов (EFSA). В регионе Северной Америки бактериологическое тестирование проводится в лабораториях общественного здравоохранения, чтобы предотвратить патогенные инфекции, тем самым обрабатывая питьевую воду перед употреблением. В Азиатско-Тихоокеанском регионе растущее использование профилактической медицинской диагностики способствовало росту рынка бактериологических тестов.На Ближнем Востоке, в Африке и Латинской Америке бактериологическое тестирование в основном проводится руководящими органами в целях общественного здравоохранения. Что касается всех вышеперечисленных факторов, ожидается, что рост мирового рынка бактериологических тестов останется положительным в течение прогнозируемого периода.

Это исследование TMR представляет собой всеобъемлющую структуру динамики рынка. Он в основном включает критическую оценку пути потребителей или клиентов, текущих и новых направлений, а также стратегическую основу, позволяющую руководителям директивных органов принимать эффективные решения.

Нашей ключевой основой является 4-квадрантная структура EIRS, которая предлагает подробную визуализацию четырех элементов:

• Клиент E Карты опыта
• I наблюдения и инструменты, основанные на исследованиях на основе данных
• Практичность R Результат для удовлетворения всех бизнес-приоритетов
• S трагические рамки для ускорения пути роста

В исследовании предпринята попытка оценить текущие и будущие перспективы роста, неиспользованные возможности, факторы, определяющие их потенциальный доход, а также структуру спроса и потребления на мировом рынке, разбив его на региональную оценку.

Комплексно охватываются следующие региональные сегменты:

• Северная Америка
• Азиатско-Тихоокеанский регион
• Европа
• Латинская Америка
• Ближний Восток и Африка

Структура квадранта EIRS в отчете суммирует наш широкий спектр основанных на данных исследований и рекомендаций для CXO, чтобы помочь им принимать более обоснованные решения для своего бизнеса и оставаться лидерами.

Ниже приведен снимок этих квадрантов.

1. Карта впечатлений клиентов

Исследование предлагает всестороннюю оценку различных поездок клиентов, имеющих отношение к рынку и его сегментам. Он предлагает различные впечатления клиентов об использовании продуктов и услуг. Анализ позволяет более внимательно изучить их болевые точки и опасения в различных точках контакта с клиентами. Решения для консультаций и бизнес-аналитики помогут заинтересованным сторонам, включая CXO, определить карты клиентского опыта с учетом их потребностей.Это поможет им повысить взаимодействие клиентов с их брендами.

2. Анализ и инструменты

Различные идеи исследования основаны на тщательно продуманных циклах первичных и вторичных исследований, с которыми аналитики участвуют в ходе исследования. Аналитики и советники TMR применяют общеотраслевые инструменты количественного анализа клиентов и методологии прогнозирования рынка для получения результатов, что делает их надежными. В исследовании предлагаются не только оценки и прогнозы, но и лаконичная оценка этих цифр в динамике рынка.Эти идеи объединяют основанные на данных исследовательские рамки с качественными консультациями для владельцев бизнеса, CXO, политиков и инвесторов. Эти идеи также помогут их клиентам преодолеть свои страхи.

3. Практические результаты

Выводы, представленные в этом исследовании TMR, являются незаменимым руководством для выполнения всех бизнес-приоритетов, в том числе критически важных. Результаты при внедрении показали ощутимые преимущества для заинтересованных сторон бизнеса и отраслевых субъектов в повышении их производительности.Результаты адаптируются к индивидуальной стратегической структуре. Исследование также иллюстрирует некоторые из недавних тематических исследований по решению различных проблем компаниями, с которыми они столкнулись на пути к консолидации.

4. Стратегические рамки

Исследование дает предприятиям и всем, кто интересуется рынком, возможность сформировать широкие стратегические рамки. Это стало более важным, чем когда-либо, учитывая текущую неопределенность из-за COVID-19. В исследовании обсуждаются консультации по преодолению различных подобных прошлых сбоев и предвидятся новые, чтобы повысить готовность.Эти структуры помогают предприятиям планировать свои стратегические согласования для восстановления после таких разрушительных тенденций. Кроме того, аналитики TMR помогут вам разобраться в сложном сценарии и обеспечить отказоустойчивость в неопределенные времена.

Отчет проливает свет на различные аспекты и дает ответы на актуальные вопросы рынка. Вот некоторые из важных:

1. Какие варианты инвестиций могут быть наилучшими при освоении новых продуктов и услуг?

2. К каким ценностным предложениям следует стремиться предприятиям, финансируя новые исследования и разработки?

3.Какие нормативные акты будут наиболее полезны для заинтересованных сторон в расширении их сети цепочек поставок?

4. В каких регионах в ближайшем будущем может наблюдаться рост спроса в определенных сегментах?

5. Каковы одни из лучших стратегий оптимизации затрат с поставщиками, с которыми некоторые хорошо зарекомендовавшие себя игроки добились успеха?

6. Какие ключевые перспективы использует топ-менеджер, чтобы вывести бизнес на новую траекторию роста?

7.Какие правительственные постановления могут поставить под сомнение статус ключевых региональных рынков?

8. Как новые политические и экономические сценарии повлияют на возможности в ключевых областях роста?

9. Каковы некоторые из возможностей получения прибыли в различных сегментах?

10. Что будет препятствием для входа на рынок новых игроков?

Примечание: Несмотря на то, что были приняты меры для поддержания наивысшего уровня точности отчетов TMR, недавним изменениям, связанным с рынком / поставщиком, может потребоваться время, чтобы отразить их в анализе.

.

Бактериология | наука | Britannica

Бактериология , раздел микробиологии, изучающий бактерии.

бактериология Техник изучает культуру бактерий в лаборатории. © Томаш Невегловски / Shutterstock.com

Британская викторина

Наука и случайная викторина

К какому царству принадлежат грибы?

Зарождение бактериологии происходило параллельно с появлением микроскопа.Первым, кто увидел микроорганизмы, вероятно, был голландский естествоиспытатель Антони ван Левенгук, который в 1683 году описал некоторые анималкулы, как их тогда называли, в воде, слюне и других веществах. Их видели с помощью простой линзы с увеличением примерно 100–150 диаметров. Эти организмы, по-видимому, соответствуют некоторым из наиболее крупных форм бактерий, как теперь известно.

Еще в середине XIX века бактерии были известны лишь немногим специалистам и в некоторых формах представляли собой диковинку для микроскопа, интересную в основном своей мелочью и подвижностью.Современное понимание форм бактерий восходит к блестящей классификации Фердинанда Кона, основные результаты которой были опубликованы в различные периоды между 1853 и 1872 годами. В то время как Кон и другие продвинули знания о морфологии бактерий, другие исследователи, такие как Луи Пастер и Роберт Кох установил связь между бактериями и процессами брожения и болезней, отказавшись от теории спонтанного зарождения и улучшив антисептический эффект при лечении.

Современные методы бактериологической техники зародились в 1870–1885 гг. С появлением красителей и открытием метода разделения смесей организмов на чашках с питательной средой, отвержденной желатином или агаром. Важные открытия были сделаны в 1880 и 1881 годах, когда Пастеру удалось иммунизировать животных от двух болезней, вызываемых бактериями. Его исследования привели к изучению профилактики заболеваний и лечения болезней с помощью вакцин и иммунных сывороток (раздел медицины, который теперь называется иммунологией).Другие ученые признали важность бактерий в сельском хозяйстве и молочной промышленности.

Получите эксклюзивный доступ к контенту из нашего первого издания 1768 с вашей подпиской.
Подпишитесь сегодня

Бактериологическое исследование впоследствии развило ряд специальностей, среди которых сельскохозяйственная или почвенная бактериология; клинико-диагностическая бактериология; промышленная бактериология; морская бактериология; бактериология общественного здравоохранения; санитарная или гигиеническая бактериология; и систематическая бактериология, которая занимается систематикой.

.

Клиническое, бактериологическое и прогностическое проспективное исследование

Цели. Мы провели однолетнее обсервационное исследование с декабря 2012 года по ноябрь 2013 года для описания эпидемиологии бактериемии в отделениях интенсивной терапии (ОИТ) военного учебного госпиталя Мохаммеда V в Рабате (Марокко). Методы. Исследование включало мониторинг всех посевов крови, поступающих из отделений интенсивной терапии, и изучение бактериологического профиля положительных культур крови, а также их клинического значения. Результаты. За этот период произошло 46 эпизодов бактериемии, что соответствует частоте 15,4 случая на 1000 пациентов. Частота внутрибольничных инфекций составила 97% по сравнению с 3% для внебольничных инфекций. Наиболее частым источником бактериемии были легкие в 33% случаев, но в 52% случаев источник не был идентифицирован. Грамотрицательные микроорганизмы были изолированы в 83,6% случаев, из которых Acinetobacter baumannii были наиболее частыми. Устойчивость к антибиотикам была очень высокой: 42,5% бета-лактамаз расширенного спектра (БЛРС) у Enterobacteriaceae и 100% карбапенемазы у Acinetobacter baumannii .Антибиотикотерапия, введенная в первые 24 часа, была адекватной в 72% случаев. Выводы. Инфекции кровотока в отделениях интенсивной терапии чаще всего возникают у пациентов старше 55 лет с гипертонией и диабетом. Вовлеченные бактерии — это в основном грамотрицательные бактерии, обладающие множественной устойчивостью к антибиотикам. Ранний прием антибиотиков значительно снижает смертность пациентов.

1. Общие сведения

Бактериемия продолжает оставаться важной причиной заболеваемости и смертности, несмотря на доступность сильнодействующих противомикробных препаратов и сложных диагностических средств [1].Во всем мире наблюдается постоянный рост заболеваемости бактериемией, что связано со многими факторами, такими как демографические различия населения и распределение факторов риска в регионах [2].

За последние 30 лет частота, этиология и эпидемиология бактериемии изменились с развитием медицинской помощи [3]. В развитых странах эти параметры хорошо известны благодаря регулярному мониторингу [4]. Таким образом, в нескольких исследованиях изучались этиологические агенты, наиболее часто вызывающие эти инфекции, и улучшалось понимание рисков и последствий, связанных с ними [5].В странах с ограниченными ресурсами, таких как Марокко, отсутствие достаточных данных делает бактериемию одной из повседневных проблем медицинской практики, особенно в отделениях интенсивной терапии (ОИТ), где пациенты предрасположены к их приобретению.

Бактериемия — серьезная проблема, которую необходимо решить. Действительно, необходимо найти компромисс между срочностью лечения и сложностью постановки точного диагноза в короткие сроки [1]. В этом контексте клиницисту важно знать наиболее часто встречающиеся виды бактерий и их чувствительность к антибиотикам, чтобы начать быструю и эффективную эмпирическую антибактериальную терапию.Как часть эволюции бактериальной экологии и изменений уровней устойчивости к антибиотикам, необходима периодическая переоценка методов ведения пациентов с бактериемией, чтобы адаптировать их к лучшим решениям о лечении [6].

Целью данного исследования является определение заболеваемости бактериемией в отделениях интенсивной терапии нашей больницы, определение бактериальной эпидемиологии и чувствительности выделенных штаммов к антибиотикам.

2. Методы

Это обсервационное исследование было проспективно проведено в отделениях терапевтической и хирургической интенсивной терапии военного учебного госпиталя имени Мухаммеда V в Рабате, Марокко.Исследование было разработано таким образом, чтобы включить все последовательно встречавшиеся эпизоды бактериемии в период с декабря 2012 г. по ноябрь 2013 г.

Исследование включало мониторинг в бактериологической лаборатории всех культур крови, полученных из отделения интенсивной терапии. Флаконы для аэробных и анаэробных культур крови выполнялись у постели пациента путем периферической пункции или через недавно установленное периферическое или центральное устройство. Затем их транспортируют в бактериологическую лабораторию, где инкубируют при перемешивании при 37 ° C в системе Bactec 9240 (Becton Dickinson).

Выполняем пересадку из бутылочек с положительным результатом на обогащенную среду и мазок на окрашивание по Граму. На основании этого прямого исследования и мономорфного внешнего вида передней части были сделаны биохимическая идентификация и антибиотикограмма непосредственно из бульона для посева крови. Идентификация видов была основана на росте, морфологических и биохимических характеристиках (галерея API, Biomérieux, Марси-Стар / Франция). Тестирование чувствительности к противомикробным препаратам изолятов проводили методом дискового диффузионного агара, как рекомендовано Комитетом по чувствительности Французского общества микробиологии [7].

Каждый положительный посев крови приводит к клиническому обследованию автором и заполнению пробки эксплуатации [8]. Что касается лечения антибиотиками, средняя продолжительность лечения составляла 10 дней; и мы отметили лечение, полученное пациентом с 0-го дня бактериемии (день взятия культуры крови) до 10-го дня. Стоимость противомикробного лечения в день на инфицированного пациента рассчитывалась на основе антимикробного агента, начатого в 0-й день. (включая неправильное лечение) и путем умножения стоимости единицы за дозу на количество ежедневных доз до 10 дня.Стоимость рассчитывается в марокканских дирхамах (MAD) и выражается в евро (EUR / MAD = 10) на основе цены на противомикробные препараты, предоставленные аптекой военного госпиталя на 2012 год.

Количественные переменные были выражены как среднее +/- стандартное отклонение. Тест хи-квадрат использовался для сравнения данных между различными группами; результаты считались значимыми, если значение было меньше 0,05. Статистический анализ проводился с использованием программного пакета SPSS v10.0.

3.Результаты

С декабря 2012 г. по ноябрь 2013 г. было зарегистрировано 46 эпизодов бактериемии у 39 пациентов; общая частота составила 20/1000 дней госпитализации и 15,4 на 1000 пациентов, поступивших в ОИТ. В таблице 1 представлены демографические и клинические данные пациентов. У большинства пациентов (97%) наблюдалась внутрибольничная бактериемия, и на первичную бактериемию приходилось 26,7% случаев. Наиболее частым источником бактериемии были легкие (33%), но в 52% случаев источник не был идентифицирован (Таблица 2). Их было 83.6% бактериемия грамотрицательных бактерий (ГНБ); в целом, Acinetobacter baumannii были наиболее опасными микробами при бактериемии и Klebsiella pneumoniae при заражении. Что касается дрожжей, один из четырех выделенных микробов был ответственен за бактериемию; это было Candida tropicalis . Комменсальные бактерии были ответственны за заражение во всех случаях (70,5%) (таблица 2).

Тридцать восемь (69%) эпизодов бактериемии были вызваны микроорганизмами, устойчивыми к антибиотикам. Среди GNB все Pseudomonas spp. и Acinetobacter spp.были чувствительны к колистину; однако устойчивость к имипенему наблюдалась среди всех изолятов Acinetobacter (13/13) в контексте продукции карбапенемазы, в то время как устойчивость Pseudomonas aeruginosa проявляется со скоростью 20%. Доля энтеробактерий с БЛРС в этом исследовании составляла 42,5%, по существу присутствующих в Klebsiella pneumoniae с частотой 44%. Только 20% (1/5) из изолятов Staphylococcus aureus были устойчивы к метициллину; и, с другой стороны, ни один грамположительный микроб не показал сниженной чувствительности к гликопептидам (таблица 3).

Что касается антибактериальной терапии, мы обнаружили, что почти все пациенты (97.5%) получали лечебную антибактериальную терапию, которая оказалась адекватной в первые 24 часа после введения в 72% случаев, но степень эффективности была ограничена 37%. В 57% случаев это первоначальное лечение представляло собой комбинацию антибиотиков. Наиболее частой ассоциацией был бета-лактам с аминогликозидами, в то время как наиболее часто используемыми препаратами в монотерапии были колистин и имипенем (21,4%). Используемые молекулы показаны на рисунке 1. Первоначальное лечение длилось в 33% случаев за один день до того, как его заменили; основными причинами этого изменения были либо неадекватность, либо неэффективность, либо реализация деэскалации.Однако скрытое лечение было зарегистрировано в 59% случаев и оставалось вероятным в 41% случаев. Уровень ассоциации антибиотиков был выше, чем при первоначальном лечении, и составил 82%. Наиболее частой ассоциацией были бета-лактамы и полимиксины, в то время как имипенем был наиболее часто назначаемой молекулой (рис. 1). Это лечение оказалось адекватным в 93% случаев и эффективным в 65% случаев (таблица 4).

Двадцать- семь пациентов (69%) умерли во время пребывания в ОИТ.У 21 из них смерть была напрямую связана с бактериемией. Смертность в исследуемой популяции по сравнению со всеми случаями смерти в отделении интенсивной терапии за исследуемый период составила 12,5%. Промежуток между возникновением бактериемии и смертью составил в среднем 8,4 дня. Сравнение демографических и клинических характеристик выживших и умерших пациентов представлено в таблице 5.

.

Бактериологическая оценка воздуха в помещениях различных больниц округа Катманду

Нозокомиальная инфекция — это инфекция, обнаруженная в больнице и потенциально вызываемая организмами, не восприимчивыми к антибиотикам. Нозокомиальные инфекции передаются прямо или косвенно через воздух и могут вызывать различные типы инфекций. Это исследование было проведено с целью определить распространенность внутрибольничных бактерий, присутствующих в помещении больницы.В общей сложности было взято 16 проб воздуха из палат общего профиля и отделений неотложной помощи 8 различных больниц с использованием ударного пробоотборника воздуха в питательном агаре, агаре с маннитоловой солью, кровяном агаре, цетримидном агаре и агаре Макконки. Бактериологические агенты были выделены и идентифицированы по культуральным характеристикам, окрашиванию по Граму и биохимическим тестам, а их картина чувствительности к антибиотикам была определена с использованием Руководства CLSI, 2015 г. В соответствии с Руководством Европейского Союза по надлежащей производственной практике, больницы находились под C- и D -сорт качества воздуха.По данным Европейской комиссии, большинство больниц были загрязнены промежуточно. Из 16 проб воздуха в помещении 47,18% Staphylococcus aureus и 1,82% Pseudomonas spp. были изолированы. Co NS , Streptococcus spp., Micrococcus spp. И Bacillus spp. и грамотрицательные бактерии E.coli и Proteus spp. были идентифицированы. Бактериальная нагрузка в отделении неотложной помощи оказалась высокой (55.8%) по сравнению с общей палатой (44,2%). Статистически значимой разницы между бактериальной нагрузкой и двумя палатами (общей и неотложной) в разных больницах и среди разных больниц нет. Самый эффективный антибиотик против S . aureus — гентамицин (81,81%) и офлоксацин (81,81%). Среди антибиотиков, используемых для лечения видов Pseudomonas , эффективными оказались цефтриаксон (83,3%) и офлоксацин (83,3%). В этом исследовании была обнаружена высокая распространенность S. aureus и грамотрицательных бактерий; Поэтому важно регулярно контролировать качество воздуха в различных больницах, чтобы предотвратить ИСМП.

1. Введение

Внутрибольничная инфекция (HAI), также известная как нозокомиальная инфекция, — это инфекция, переданная в больнице или другом медицинском учреждении. Такая инфекция может передаваться восприимчивыми пациентами в больнице, доме престарелых, реабилитационном учреждении, амбулатории или в других клинических учреждениях различными способами. Медицинский персонал может распространять инфекцию не только через зараженное оборудование, постельное белье или воздушные капли. Инфекция может исходить из внешней среды, другого инфицированного пациента, персонала, который может быть инфицирован, или, в некоторых случаях, источник инфекции не может быть определен.В некоторых случаях микроорганизм происходит из собственной микробиоты кожи пациента и становится условно-патогенным после операции или других процедур, нарушающих защитный кожный барьер. Хотя пациент мог заразиться инфекцией через собственную кожу, инфекция по-прежнему считается нозокомиальной, поскольку развивается в медицинских учреждениях [1]. Основным источником микроорганизмов являются люди, поскольку они выделяются в результате человеческой деятельности, такой как кашель, чихание, смех и даже разговоры [2].

Нозокомиальные инфекции — одно из самых серьезных осложнений в больничных условиях, поражающее пациентов в отделениях интенсивной терапии, людей с ослабленным иммунитетом, персонал больниц и людей, часто обращающихся в медицинские учреждения. Нозокомиальные инфекции у пациентов в отделении интенсивной терапии приводят к использованию антибиотиков широкого спектра действия и появлению устойчивых к антибиотикам микроорганизмов, что в конечном итоге приводит к высокой заболеваемости, смертности и стоимости лечения инфекции наряду с длительным пребыванием в больнице. Было замечено, что наиболее распространенные бактерии, вызывающие нозокомиальную инфекцию, такие как Staphylococcus aureus и Pseudomonas spp.развивают высокую множественную лекарственную устойчивость, что приводит к рождению MDRSA и MDRPA, что в конечном итоге приводит к неэффективному медикаментозному лечению [3].

Газ, частицы пыли, водяной пар и воздух содержат микроорганизмы. Есть вегетативные клетки и споры бактерий, грибов, водорослей, вирусов и цисты простейших. Поскольку воздух часто подвергается воздействию солнечных лучей, он имеет более высокую температуру и меньше влаги. Воздух служит транспортной или рассеивающей средой для микроорганизмов; поэтому они встречаются в относительно небольшом количестве в воздухе по сравнению с почвой и водой [4].

Воздух внутри здания называется воздухом в помещении. Наиболее распространенными родами бактерий, обнаруживаемых в воздухе помещений, являются Staphylococci , Bacilli и Clostridium [5]. MRSA (метициллин-устойчивый Staphylococcus aureus ) и гентамицин-резистентные грамотрицательные бактерии в настоящее время считаются серьезными [1]. Люди проводят 80–90% своего времени в помещениях, вдыхая в среднем 14 м ³ воздуха в день. Кроме того, к факторам окружающей среды и физическим факторам, в основном, относятся температура, влажность, скорость воздухообмена, движение воздуха и конструкции здания, расположение, плохой дизайн, система вентиляции, а также перепроектирование интерьера, соответственно, которые увеличивают рост и размножение микроорганизмов в атмосфере помещения [ 5].

Обзор ряда эпидемиологических исследований, проведенный ВОЗ, показал, что существует достаточно доказательств связи между факторами, связанными с сыростью в помещении, и широким спектром воздействий на здоровье органов дыхания, включая развитие астмы, обострение астмы, текущую астму и т. Д. респираторные инфекции, симптомы со стороны верхних дыхательных путей, кашель, хрипы и одышка [6].

Таким образом, это исследование предоставляет точные данные о микробном качестве воздуха и соответствующей бактериальной нагрузке в воздухе помещений больниц района Катманду.Катманду, площадью 395 км ² , является наиболее густонаселенным районом Непала. Поэтому мы провели исследование в больницах, расположенных в районе с относительно высокой плотностью населения, который представляет собой основные районы округа Катманду. Успешная идентификация бактерий, выделенных из воздуха в помещениях больниц, по антимикробной чувствительности проводилась с использованием нескольких препаратов. В глобальном масштабе появление устойчивых к лекарствам бактерий создает угрозу для оказания эффективной медицинской помощи.Как только человек заразится внутрибольничной инфекцией, первым шагом к лечению инфекции является прием антибиотиков. Антибиотики, обычно используемые для лечения нозокомиальных агентов, Staphylococcus spp. и Pseudomonas spp., и регистрировалась чувствительность организмов к антибиотикам. Поэтому мы изучили устойчивость к антибиотикам, которая хорошо выражена в развивающихся странах, таких как Непал, чтобы предупредить врачей и помочь им в принятии правильных решений о лечении и надлежащем ведении таких пациентов.

2. Материалы и методология

2.1. Материалы

2.1.1. Оборудование

Импакторный пробоотборник воздуха, автоклав, печь с горячим воздухом, инкубатор, микроскоп, холодильник, весы, инокуляционная петля газовых горелок и провода были использованы в этом исследовании.

2.1.2. Микробиологические среды

Питательный бульон, тройной сахарный железный агар, питательный агар, цитратный агар Симмонса, агар с маннитоловой солью, серно-индольная подвижная среда, агар МакКонки, окислительный / ферментативный агар, бульон уреазы, агар Мюллера-Хинтона, цетримидный агар, метиловый красный- В этом исследовании использовали бульон Фогеса-Проскауэра и кровяной агар.

2.1.3. Химические вещества и реагенты

Реагент Барритта, реактив оксидазы, реактив Ковача, кристаллический фиолетовый, грамм-йод, ацетон-спирт, сафранин, плазма крови, физиологический раствор, перекись водорода, нитратный реагент A и нитратный реагент B использовались в этом исследовании.

2.1.4. Диски с антибиотиками

Все диски с антибиотиками, использованные для тестов на чувствительность, были от HiMedia Laboratories Pvt. Limited, Бомбей, Индия. Использовались следующие антибиотики: ампициллин, офлоксацин, эритромицин, цефтриаксон, гентамицин, амикацин, хлорамфеникол, цефтазидим и котримоксазол.

2.2. Разное

Конические колбы, вата, дистиллированная вода, капельница, пинцет, предметные стекла, покровные стекла, иммерсионное масло, лизол, мерный цилиндр, чашки Петри, пипетки, шпатель, пробирки и ватный тампон.

3. Методология

3.1. Область исследования

Две палаты — отделение неотложной помощи и отделение общего профиля — различных больниц округа Катманду были выбраны для сравнительного исследования микрофлоры воздуха внутри помещений больниц с использованием микробиологического пробоотборника воздуха.

3.2. Отбор проб

Мы выполнили метод активного ударного отбора проб с помощью пробоотборника воздуха Hi-Air. Высота пробоотборника 54 см, что также является высотой отбора проб. Как уже упоминалось, у нас был только один пробоотборник, поэтому мы отбирали пробы одну за другой. Мы выделили два разных участка в отделениях неотложной помощи и общих больницах. Отбор образцов из обоих отделений одной больницы проводился в один и тот же день, тогда как отбор образцов из разных больниц проводился в разные дни.

В пробоотборниках Impactor используется твердая или клейкая среда, например, агаровый гель. Обычно воздух всасывается в головку для отбора проб насосом или вентилятором и ускоряется через перфорированную пластину (ситовые пробоотборники) [7]. Стандартная чашка с питательным агаром (общее количество), агаром с маннитовой солью (специально для Staphylococcus aureus ), кровяным агаром (специально для Streptococcus видов), агаром МакКонки (специально для грамотрицательных бактерий) и агаром с цетримидом (особенно для для видов Pseudomonas ) были приготовлены и использованы в асептических условиях.

Скорость вращения крыльчатки от 2500 до 2600 об / мин была отрегулирована таким образом, чтобы 100 литров воздуха отбирались каждую минуту в соответствии с каталогом пробоотборника воздуха. У нас было всего 5 чашек для каждой палаты, и одну пластину с агаром поместили в пробоотборник воздуха на 5 минут, чтобы было взято 500 литров воздуха. Таким образом, время отбора проб в одной палате составляло 25 минут, а время подготовки — 15 минут. В целом период нашего отбора проб в одной больнице составил 80 минут. Поскольку мы проводили отбор проб в два разных дня в неделю, общий период отбора проб для 8 больниц составил 1 месяц.

3.3. Транспортировка образца

Сразу после отбора образцов чашки Петри были доставлены в лабораторию микробиологии колледжа Св. Ксавьера. Эти чашки Петри инкубировали в перевернутом положении при 37 ° C в течение 24 часов.

3.4. Микробиологическое исследование образца

После инкубации общий подсчет на чашках производился на основе роста на чашках с NA. Характеристики колоний изучали на солевом агаре с маннитом, агаре МакКонки, кровяном агаре и цетримидном агаре.После этого колонии подвергали окрашиванию по Граму. Затем для грамположительных организмов были выполнены биохимические тесты, такие как каталаза, оксидаза и коагулаза, и тесты OF, тогда как для грамотрицательных организмов были выполнены биохимические тесты, такие как IMViC, TSIA, уреаза, каталс, оксидаза и тесты OF. .

3.5. Тест на чувствительность к антибиотикам

Среди выявленных грамположительных кокков и грамотрицательных бактерий только Staphylococcus aureus и Pseudomonas spp.были дополнительно протестированы на их паттерн AST, соответственно. Для этого были отобраны репрезентативные колонии, которые были суспендированы в питательном бульоне, и суспензия была стандартизирована относительно 0,5 раствора МакФарланда. Чувствительность выделенных организмов к антибиотикам проверяли с использованием метода Кирби-Бауэра на агаре Мюллера-Хинтона (CLSI 2015) [8].

Для Staphylococcus aureus использовали гентамицин, котримоксазол, ампициллин, эритромицин, офлоксацин и хлорамфеникол.А для Pseudomonas spp. Были использованы амоксициллин, цефтриаксон, цефотаксим, имипенем и офлоксацин.

3,6. Статистический анализ

Полученные таким образом данные были проанализированы простым средним значением, процентом и критерием значимости с использованием двухфакторного дисперсионного анализа для определения значимых различий между бактериальной нагрузкой и разными палатами, а также между больницами, где уровень значимости был 5. % для анализа.

Статистика теста: в соответствии с H ₀ две F-статистики ANOVA представлены где MSC = средняя сумма квадратов вариации из-за столбцов, MSR = средняя сумма квадрата вариации из-за строк и MSE = средняя сумма квадратов вариация из-за ошибок [9].

3,7. Ограничения

(i) Поскольку мы являемся студентами бакалавриата, наша исследовательская работа проводилась в лаборатории колледжа. В лаборатории одновременно выполнялось несколько групповых проектов, где мы все использовали одно и то же пространство, инструменты и ресурсы, такие как чашки Петри, пробирки, носители и инкубатор. (Ii) Проект, входящий в учебную программу бакалавриата, проводился параллельно с нашими академическими классами. Время нашего исследования было ограничено 5 рабочими днями с 5 часами в день в лаборатории колледжа.(iii) Из каждой чашки с образцами воздуха мы потребовали, чтобы особые колонии на питательном агаре подверглись дальнейшей обработке и пересеву. Наша предполагаемая методика требовала около 50–60 чашек Петри для полной обработки одной чашки для отбора проб воздуха.

Вышеупомянутые причины ограничили нашу способность выполнять наши дублирующие пробы. Поэтому мы решили сосредоточиться на оригинальных сэмплах, а не на дублирующих сэмплах.

4. Результаты

Для расчета бактериальной нагрузки (КОЕ / м ³ ) использовалась следующая формула: где Pr = вероятная статистическая сумма, r = количество КОЕ, подсчитанное на чашке Петри диаметром 90 мм, и N = Общее количество отверстий в пробоотборной головке = 380 отверстий [10].

Максимальный рост бактерий наблюдался в палатах неотложной помощи (55,72%) по сравнению с палатами общего профиля (44,2%) различных больниц. Высокая бактериальная нагрузка (348 КОЕ / м ³ ) и низкая бактериальная нагрузка (58 КОЕ / м ³ ) были обнаружены в воздухе больниц h5 и H7 соответственно.

Из 8 больниц, общие палаты 3 больниц (h2, H7 и H8) и отделения неотложной помощи 3 больниц (h4, H5 и H7) показали качество воздуха класса C. А общие палаты 5 больниц (h3, h4, h5, H5 и H6) и отделения неотложной помощи 5 больниц (h2, h3, h5, H6 и H8) имели качество воздуха класса D.

Среди 8 больниц общие палаты H7 и H8 и отделения неотложной помощи h4 и H7 показали очень низкую степень бактериального загрязнения воздуха (Таблица 1).

Из 8 больниц Staphylococcus aureus было выделено из 7 больниц, включая как общие, так и отделения неотложной помощи. Было обнаружено, что максимальный процент (10,03%) S. aureus был изолирован из общей палаты h3, а наименьший процент изолятов (1,21%) также был обнаружен из общей палаты H6.Результат показан в таблице 2.

4.1. Встречаемость Pseudomonas spp. в разных больницах

Из 8 больниц Pseudomonas spp. был изолирован только из 1 больницы, т. е. h2, в его общей палате под № из 6 колоний (1,82%).

4.2. Распространение грамположительных бактерий, отличных от S. aureus , в различных больницах

Из 8 больниц Co NS был выделен из 6 больниц, за которым следовали Streptococcus spp. в 3 больницах, тогда как Micrococcus spp.был изолирован только из 1 больницы. И Bacillus spp. был изолирован из 7 больниц.

4.3. Распространение грамотрицательных бактерий, кроме Pseudomonas spp. в разных больницах

Из 8 больниц E.coli было выделено из 2 больниц и Proteus spp. был изолирован только из 1 больницы.

Из 8 больниц 3 больницы были разделены как больницы в оживленном районе, а 5 — как больницы в менее загруженном районе .S. aureus был изолирован из 3 больниц в оживленном районе и 4 больниц в менее загруженном районе. Micrococcus видов. и Pseudomonas spp. были изолированы только от h5, получастной больницы в оживленном районе и h2, государственной больницы в менее загруженном районе, соответственно. Результат показан в Таблице 3 (загруженная зона относится к области с высоким годовым потоком пациентов; менее загруженная зона относится к области со сравнительно низким годовым потоком пациентов).

На рис. 1 показано, что максимальное количество Staphylococcus aureus было обнаружено в 7 из 8 больниц, за которым следует Co NS в 6 из 8 больниц. Streptococcus spp. и E. coli были обнаружены в трех и двух больницах соответственно. И частота встречаемости Micrococcus spp., Proteus spp.и Pseudomonas spp. оказалось очень мало, т.е. только в одной больнице.

На рисунке 2 показано, что Staphylococcus aureus присутствовали в палате общего профиля и отделении неотложной помощи 6 и 5 больниц, соответственно, за которым последовал CO NS в палатах общего профиля и неотложной помощи 3 и 4 больниц соответственно. Однако Micrococcus spp. и E. Coli присутствовали как в отделениях общего профиля, так и в отделениях неотложной помощи одной больницы.Напротив, Proteus spp. и Pseudomonas spp. присутствовали только в общих палатах только одной больницы. Streptococcus spp. находился в отделениях общей и неотложной помощи 1 и 2 больниц. И Bacillus spp. присутствовал как в общем отделении, так и в отделении неотложной помощи 3 и 4 больниц соответственно.

Наиболее эффективными антибиотиками против изолированного Staphylococcus aureus были гентамицин (81,81%) и офлоксацин (81.81%), наименее эффективными оказались хлорамфеникол (36,36%) и эритромицин (36,36%).

Самый эффективный антибиотик против выделенных Pseudomonas spp. был цефтриаксон (83,3%) и офлоксацин (83,3%), наименее эффективным оказался цефотаксим (16,6%).

5. Обсуждение

Микробиологическая оценка качества воздуха в помещениях — одно из наиболее важных исследований для определения микробного загрязнения воздуха в помещениях. Информация о микробных концентрациях переносимых по воздуху бактерий в помещениях необходима как для оценки опасности для здоровья, так и для создания стандартов контроля качества воздуха в помещениях [5].

Определенная бактериальная нагрузка обнаружена в палатах неотложной помощи и общего профиля 8 больниц, где проводилось исследование. Из Таблицы 4 мы можем наблюдать, что среди двух палат в палате скорой помощи была обнаружена высокая бактериальная нагрузка (55,72%) по сравнению с палатой общего профиля (44,2%). Контрастный результат был получен в исследовании, проведенном Awosika et al. [11], где из девяти палат высокая бактериальная нагрузка была обнаружена в медицинском отделении (25%), а наименьшая бактериальная нагрузка — в отделении неотложной помощи (2%).Влажная среда в палате, наличие антисанитарных туалетов, плохая система управления отходами и большое количество пациентов в одной палате, персонал и посетители, занимающие больницу, могут быть причинами высокой бактериальной нагрузки в отделении неотложной помощи в этом исследовании.