Диагностика пцр у мужчин: как берется и как подготовиться к исследованию?

Содержание

как берется и как подготовиться к исследованию?

ПЦР (полимеразная цепная реакция) диагностика — метод выявления ДНК вирусных агентов и инфекционных возбудителей в биоматериале пациента. Методика активно применяется в венерологической, урологической практике и практике врачей-инфекционистов.

Если не вдаваться в технические сложности, суть метода заключается в многократном воспроизведении ДНК при определенных температурных режимах. В результате диагносты могут получить полноценную цепочку ДНК в количестве достаточном для изучения и определения патогенного агента. Методика позволяет обнаружить следы генетического материала того или иного возбудителя в крови, моче, иных биологических образцах.

Анализ ПЦР — наиболее точный метод диагностики ИППП

При подозрениях на какие заболевания назначается исследование?

Современные средства для самообороны — это внушительный список предметов, разных по принципам действия. Наибольшей популярностью пользуются те, на которые не нужна лицензия или разрешение на покупку и использование. В интернет магазине Tesakov.com, Вы можете купить средства самозащиты без лицензии.

Многие заболевания, передающиеся половым путем имеют слабую, смазанную клиническую картину. Это, например, цитомегалия (поражение вирусом герпеса пятого типа), уреаплазмоз. Выраженных симптомов данные и некоторые другие болезни не имеют, либо их можно списать на проявления иных недугов. В данном случае метод ПЦР незаменим и применяется наравне с ИФА (поиском антител в крови к тем или иным возбудителям).

Вначале выделяется ДНК/ РНК, затем идет ПЦР

Какие же патологии можно выявить посредством ПЦР? Сюда входят:

Теоретически, полимеразная цепная реакция позволяет выявить много больше возбудителей, однако в контексте венерических заболеваний перечень будет именно таким.

Подготовка к исследованию

Методы подготовки стандартны и не требуют больших усилий от пациента:

Перед направлением на анализ ПЦР врач даст рекомендации по подготовке

  • Лучше всего сдавать анализы в период обострения того или иного инфекционного заболевания, реального или вероятно существующего. Так будет проще обнаружить генетический материал вируса.
  • За 3 часа до сдачи анализа рекомендуется не мочиться (если речь идет о сдаче мочи или мазке из уретры).
  • Перед сдачей анализа рекомендуется провести гигиену половых органов (также, если речь идет о сдаче мочи или мазке).
  • Отказаться от сексуальных контактов (за 2-3 дня до обследования).
  • За неделю до исследования исключается прием антибактериальных препаратов. Они могут смазать клиническую картину.

Как производится забор биоматериала

Для начала нужно определиться, какой биоматериал подлежит исследованию. Может быть произведен забор:

  • мочи;
  • крови;
  • уретральных выделений;
  • секрета предстательной железы (редко).

Зонд вводят в уретру и поворачивают

Моча сдается в стерильной пластиковой таре. В тот же день производится анализ биоматериала. Кровь забирают из вены. Что касается уретральных выделений, их собирают одноразовым зондом с тампоном на конце.

Зонд вводится в уретру на глубину 2-3 см, круговым движением собирают секрет или экссудат, помещают тампон в стерильную посуду. Сам по себе процесс у мужчин может быть несколько болезненным, но вполне терпимым.

Анализ проводится 1-2 дня. В исключительных случаях врач может порекомендовать пациенту пройти исследование повторно, спустя полторы-две недели. Но речь лишь о сомнительных клинических ситуациях.

ПЦР во многих случаях является незаменимым исследованием. Основания для назначения подобного анализа многочисленны.

Бояться мужчинам совершенно нечего. В процессе сдачи возможны минимальные дискомфортные ощущения, но здоровье того стоит.

  • Борода не растет? Или она не такая густая и шикарная, как хотелось бы? Не все еще потеряно.
  • Косметика и аксессуары для правильного ухода за бородой и усами. Зайдите сейчас!
















Что такое ПЦР анализ у мужчин и на какие инфекции он проверяет.

На какие инфекции ПЦР мазка у мужчин?

При помощи ПЦР можно обнаружить любую информацию, которая присутствует в урогенитальном тракте.При обращении пациента с симптомами уретрита обычно назначается анализ на все часто встречаемые ИППП.

В их числе:

  • гонококк;
  • хламидия;
  • микоплазма;
  • трихомонада;
  • 2 вида уреаплазм;
  • 3 вида кандид.

Инфекций может быть и больше в этом списке. Разные лаборатории предлагают разные типы исследований.

Одномоментное исследование сразу на несколько инфекций имеет немало преимуществ:

  • позволяет быстро установить диагноз;
  • взятие биоматериала проводится только один раз;
  • исследование обходится дешевле.

ПЦР крови у мужчин

Кровь тоже может быть использована в качестве материала для исследования.

Вот на какие инфекции делают ПЦР крови у мужчин:

  • хламидиоз;
  • цитомегаловирус;
  • сифилис;
  • ВИЧ;
  • вирусные гепатиты;
  • микоплазма;
  • герпес;
  • листерия.

В списке присутствуют инфекции, которые обнаруживаются только в крови.

Здесь также есть патогены, которые обычно обитают в структурах урогенитального тракта, но при диссеминации патологического процесса обнаруживаются и в сыворотке крови.

Подготовка к ПЦР крови мужчине

Особая подготовка не требуется. Кровь сдается натощак. Обычно её сдают утром, на фоне 8-часового голодания.

Делать исследование нужно до начала антибиотикотерапии или через несколько дней после её окончания. Нельзя употреблять алкоголь за день до диагностики и курить за 1 час до процедуры забора крови.

Подготовка к ПЦР мазка у мужчин

Для получения достоверных результатов требуется подготовка к исследованию.

Мужчине нужно:

  • не применять антибиотики и антисептики несколько дней перед анализом;
  • не заниматься сексом 2 суток;
  • не мочиться 3 часа перед забором биоматериала.

Расшифровка ПЦР у мужчин

В большинстве случаев проводится качественный анализ ПЦР. То есть, результат может быть положительным или отрицательным.

Положительный результат говорит о том, что инфекция в организме присутствует, а значит пациенту требуется терапия.

Отрицательный результат подтверждает, что мужчина здоров. Иногда проводится количественное исследование. Оно предполагает определение концентрации бактериальной или вирусной ДНК в клиническом материале.

ПЦР с концентрацией мазка и крови у мужчин обычно требуется при определении условно-патогенных бактерий. В малых количествах они не вызывают воспаление, в то время как при увеличении популяции могут стать причиной уретрита или другого воспалительного процесса.

ПЦР на ВИЧ с вирусной нагрузкой у мужчин

Качественная ПЦР определяет только сам факт наличия РНК вируса иммунодефицита в организме. В то время как исследование количественное определяет вирусную нагрузку. Определяется количество копий генетического материала вируса на единицу объема клинического материала (копии в мкл). Проводится исследование для оценки результатов терапии. Целью лечения является достижение неопределяемой вирусной нагрузки. Высокой считается нагрузка более 100 копий в мкл, а низкой – меньше 10 копий в мкл.

ПЦР на гепатиты у мужчин

Анализ на гепатит В может быть качественным и количественным.

При количественном исследовании определяется концентрация вируса:

  • до 100 МЕ/мл – низкая;
  • до 108 МЕ/мл – высокая;
  • более 108 МЕ/мл – очень высокая.

Анализ на гепатит С тоже проводится как качественный, так и количественный. Низкой считается концентрация ниже 15 МЕ/мл, а высокой – больше чем 108 МЕ/мл.

При необходимости сдачи анализа ПЦР у мужчин обращайтесь к грамотным венерологам.

ПЦР мазки у мужчин.

ПЦР у мужчин: когда и как берут

При наличии симптоматики со стороны мочеполовых органов, патологии спермы или если врач подозревает латентное течение венерической инфекции, мужчине проводится исследование урогенитального мазка и отделяемого из уретры. Бывает, пациент категорически отказывается от процедуры мазка. Тогда допускается проведение ПЦР мочи.

Но такой подход очень ненадежен. Так как многие возбудители ЗППП скрываются в межклеточном пространстве эпителиальной выстилки уретры и в струю мочи не попадают.

Чтоб сдать мазок из уретры на ПЦР, проводятся такие манипуляции:

  • Туалет наружных половых органов – пенис моют теплой водой и насухо промакивают.
  • Врач берет специальный тонкий зонд со стерильным тампоном на конце и заводит в уретру на глубину 2-2,5 см.
  • Зонд поворачивают вокруг продольной оси на 360 градусов и аккуратно извлекают.
  • Помещают тампон в стерильную пробирку с транспортной средой и отправляют в лабораторию для проведения ПЦР.

Многие мужчины боятся этого анализа, так как считают, что взятие мазка причиняет болезненность и дискомфорт. На самом деле, квалифицированный специалист знает, как берется мазок правильно, и процедура причиняет минимум неудобств. Для получения секрета простаты, врач проводит ее массаж через переднюю стенку прямой кишки. Для этого палец доктора заводится в анальное отверстие и несколько раз аккуратно нажимает на простату. Мужчина при этом испытывает сильное желание помочиться. И из уретры выделяется несколько капель секрета простаты, которые собирают в специальный контейнер и направляют в лабораторию. Если имеется подозрение на поражение половых желез (яичек и их придатков), то для анализа методом ПЦР берут сперму пациента.

ПЦР при экстрагенитальной патологии

К сожалению, возбудители ЗППП способны «обживаться» не только в тканях мочеполовой системы. Практически все бактериальные и вирусные инфекции могут поражать слизистую оболочку прямой кишки, перианальную область, глаза и ЛОР-органы. Чтоб взять мазок из ануса применяется зонд со стерильным ватным тампоном, который заводится на 3-4 см в прямую кишку. Затем доктор аккуратно касается ее стенок и после извлекает зонд. Помещает в пробирку с транспортной средой и направляет в лабораторию. Также приходится сталкиваться с локализацией трихомонад, хламидий (глаза, слизистая оболочка ротовой полости и ЛОР-органы). При подозрении на такую атипичную инфекцию, доктор берет мазок у мужчины с пораженных участков – конъюнктивального мешка в области нижнего века, с миндалин, изо рта (внутренней поверхности щек).

Иногда бывает нужно провести лаваж бронхов для получения промывных вод.

ПЦР диагностика гемотрансмиссивных инфекций

Неоценимую информацию ПЦР предоставляет в плане диагностики тяжелых и опасных вирусных гепатитов, и ВИЧ – возбудителя синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД). Эти хронические инфекции обладают очень длительным инкубационным периодом.

За счет которого и распространяются: мужчина чувствует себя нормально и не прекращает половую жизнь, заражая партнеров. Для исследования можно сдать всего несколько миллилитров венозной крови.

В современной лабораторной службе применяются специальные системы – вакутайнеры. После сбора анализа крови, образцы необходимо как можно скорее доставить в лабораторию.

ПЦР у мужчин: где проводится анализ?

Оборудование для проведения ПЦР диагностики является высокотехнологичным и очень дорогостоящим. Поэтому позволить себе иметь такой аппарат могут далеко не все специалисты, оказывающие помощь мужчинам. Как правило, доктора заключают договор с аккредитованными лабораториями на обслуживание своих пациентов со скидкой.

В таких условиях не столь важно, где можно получить образец: критически необходимо соблюсти правильность забора материала и своевременно доставить его для исследования:

  • Мазки на бактериальные инфекции – в течение 24 часов.
  • Соскобы с кожи – до 48 часов.
  • Венозная кровь на вирусные инфекции – в течение 2-3 дней.

Такая модель делает методику ПЦР доступной практически для любого мужчины. Просто обратитесь к врачу дерматологу сразу после того, как возник эпизод по риску заразиться любым ЗППП.

Врач оценит риски и подскажет, когда после вероятного заражения и какие сдать тесты, чтоб получить максимально достоверную информацию о здоровье.

Как правильно подготовиться к ПЦР мужчине

Чтоб исследование получилось максимально информативным и достоверным, необходимо пройти подготовку к сдаче анализов. Детали в каждом отдельном случае расскажет врач, мы лишь задержимся на основных моментах.

Чтоб получить качественный мазок, необходимо:

  • Провести утром деликатный туалет половых органов.
  • Не мочиться за 2-3 часа до взятия мазка.
  • Если нужен секрет простаты – то наоборот, помочиться перед манипуляцией.
  • Воздержаться от интима минимум 24 часа до процедуры.
  • Если велся прием антибактериальных средств – сообщить об этом доктору (несколько дней тесты могут быть неточными).

Дальше все зависит от профессионализма врача. Всех мужчин беспокоит, больно ли сдать мазок на ПЦР. Скажем так, при активном инфекционном воспалении в уретре, когда даже акт мочеиспускания или эякуляция, выброс спермы, причиняет мучения, манипуляция скорее всего вызовет некоторую болезненность. Также нельзя исключить, что неприятные ощущения в уретре будут беспокоить еще 1-2 суток.

Для взятия образца крови есть только одна рекомендация – не есть с утра перед сдачей анализа. Иначе всасывающийся в кишечнике жир откладывается на стенках вакутайнера или пробирки и образец портится (хилез). Что касается забора мазка из глаза или ротовой полости, материал можно сдавать без особой подготовки. Если нужен образец из прямой кишки перед тем, как сдавать его – ставят очистительную клизму.

Как оценивать результаты анализа ПЦР?

Настоятельно рекомендуется, чтоб интерпретацию данных ПЦР анализа осуществлял тот же доктор, который и направил пациента на обследование.

Результат сильно зависит от типа ПЦР, как она проводится (качественная или количественная):

  • Ответ отрицательный. С вероятностью в 99,9% патогенных микроорганизмов в сданном образце нет, мужчина здоров.
  • Ответ положительный. С вероятностью в 99,9% возбудитель присутствует, нужно лечиться.
  • Результат положительный, обнаружено столько-то микробных или вирусных тел.

Последний в списке пункт – это ПЦР в реальном времени. С его помощью можно отслеживать динамику заболевания и отклик на проводимую терапию.

В основном такую разновидность метода применяют для мониторинга и контроля лечения мужчин с вирусными гепатитами и ВИЧ. Или при активной антибиотикотерапии хламидиоза, трихомоноза.

Бывает анализ не точным?

Любая лабораторная методика не обладает 100% точностью. Касается это и ПЦР.

Проблемы могут возникать по вине пациентов, если те:

  • Неправильно готовились к анализу.
  • Самостоятельно лечились с применением антибиотиков широкого спектра действия.
  • Пропустили назначенное время приема.
  • Вели накануне половую жизнь и в материале очень много сперматозоидов.

Не исключены и накладки со стороны медработника. Так, ложноотрицательные результаты бывают, если брать пробу неправильно и возбудители просто не попали в мазок. Или были нарушены сроки хранения и условия транспортировки образца.

Ложноположительных – практически не бывает. Поэтому важно правильно выбрать место, где сдать пробы – обращайтесь для этого к профессиональным дерматовенерологам.

Квалифицированные доктора гарантируют, что достоверные результаты будут получены максимально быстро (срок изготовления ПЦР составляет несколько часов).

Если вам необходимо сдать ПЦР анализы, обращайтесь к грамотным венерологам.

ПЦР на ЗППП, как сдавать.

Он обладает не только высокой диагностической точностью, но и позволяет при желании пациента выявить наличие не одной, а сразу нескольких инфекций в организме.

Анализ на ПЦР ЗППП сегодня проводится во многих частных диагностических центрах. Каковы показания к выполнению исследования? В чем его преимущества и особенности?

Показания к анализу ПЦР на ЗППП

Заболевания, передающиеся половым путем – обширная группа патологий, от которых в современном мире не застрахован ни один человек. Передаваться эти патологии способны не только через сексуальный контакт, как ошибочно полагают многие люди, но и на бытовом уровне, что делает их еще более опасными.

ПЦР диагностика на ЗППП – один из наиболее эффективных на сегодняшний день способов диагностики. Используется в основном в том случае, если пациент уже подозревает у себя наличие болезни. В качестве скрининга эту методику из-за достаточно большой цены не применяют.

Рекомендуется выполнять ПЦР на 12 ЗППП и более всем людям, которые подозревают у себя наличие инфекции, но не могут точно сказать, чем конкретно они могли заразиться. Все 12 и более инфекций в этом случае будут разыскиваться в одном биологическом материале. Повторные сдачи анализа в 12-ти кратном размере не потребуются.

Лучше всего прибегать к анализу пациентам, у которых:

  • был незащищенный половой акт на стороне, вне брака, с работником сексуальных услуг
  • половой партнер, с которым практиковался незащищенный секс, был уличен в измене или пара практикует свободные сексуальные связи
  • если у партнера уже выявлено венерологическое заболевание (здесь не имеет значение защищенность секса)
  • произошло изнасилование
  • мужчина имел незащищенные гомосексуальные контакты

Показанием к исследованию также могут стать также симптомы, характерные для этой группы патологий. В этом случае анализ на ЗППП методом ПЦР поможет выявить возбудителя, который спровоцировал появление признаков.

Суть исследования ПЦР на ЗППП

ПЦР – аббревиатура, которая расшифровывается, как полимеразная цепная реакция. Впервые она была применена в 1983 году, а исследователь, открывший ее, получил Нобелевскую премию.

В течение длительного времени реакция применялась только в лабораторных условиях с научными целями. Использовать ее в медицинской диагностике стали совсем недавно.

Суть исследования сама по себе очень проста: происходит активное распознавание молекул ДНК и РНК возбудителя в ходе активной реакции.

Распознавание происходит за счет того, что любой патогенный микроорганизм или вирус встраивает свою РНК или ДНК в клетки хозяина. Именно эти «вкрапления» и обнаруживаются в ходе полимеразной цепной реакции.

ПЦР на ЗППП у женщин и мужчин играет огромную роль в первоначальной постановке диагноза. Особенно важно это, если у больного диагностировано сразу несколько инфекций, и необходимо определить именно ту, с которой все началось.

Часто от успешности определения первопричины зависит эффективность лечения и вероятность выздоровления.

ПЦР на ЗППП для мужчин и представительниц прекрасного пола также играет большую роль, так как благодаря ней выделяется не только сама внедрившаяся ДНК, но и определяется участок изменений. Подобный подход успешно исключает вероятность ошибочных результатов в большинстве случаев.

ПЦР анализ у мужчин – где сдать безболезненно.

ПЦР анализ у мужчин используется врачами в основном для диагностики различных инфекционных заболеваний.

Как отмечают доктора, методика отличается высокой диагностической ценностью. Вероятность ошибок при ее использовании сведена к минимуму. Определить можно не только бактерии и грибы, но и вирусные микроорганизмы.

Нередко пациенты, которым назначили подобное исследование, интересуются, что это вообще за исследование, и какие преимущества у него есть в сравнении с другими методами. Также нередко звучат вопросы о правилах подготовки и расшифровке.

Содержание статьи

  • В чем преимущества ПЦР анализа у мужчин
  • Как выполняется анализ ПЦР
  • Подготовка к ПЦР у мужчин
  • Подготовка к исследованию ПЦР крови
  • Подготовка к ПЦР мочи и мазка
  • Другие варианты забора ПЦР анализа
  • Расшифровка ПЦР анализа
  • Особенности ПЦР исследования на ВИЧ
  • Особенности ПЦР оценки при подозрении на гепатиты

В чем преимущества ПЦР анализа у мужчин

Анализ методом ПЦР у мужчин направлен на то, чтобы определить в биологическом материале ДНК-фрагменты вируса, грибка или бактерии, которую винят в появлении негативных симптомов.

Как только фрагмент обнаруживается, специальная система обеспечивает его копирование. Благодаря чему значительно облегчается идентификация. Исследование включает в себя три основных этапа.

В ходе подготовки исследователи особым образом обрабатывают материал, полученный от пациента. В результате удается выделить нужный для копирования фрагмент ДНК.

Под термином амплификации понимают увеличение количества выделенных фрагментов. Именно благодаря этому этапу становится возможным следующая часть диагностики.

В полученные многократным копированиям элементы ДНК добавляют специальные флуоресцирующие фрагменты. Благодаря их присоединению становится возможен подсчет и постановка итогового диагноза.

ПЦР имеет несколько весомых преимуществ, которые позволяют использовать его в современной диагностике особенно активно.

К ним относят:

  • чувствительность методики, благодаря которой многие болезни удается определить еще в период инкубации, когда число патологических клеток составляет не более 10 штук, а симптомы и вовсе отсутствуют;
  • специфичность, под которой понимают возможность метода определять строго определенные ДНК последовательности, не учитывая варианты, которые могут сказаться на результате, сделав его недостоверным;
  • доказательность, под которой понимают возможность точно определить, что в организме присутствует инфекционный агент, а не определить косвенные признаки его наличия;
  • широкий выбор биологического материала, благодаря чему можно использовать практически любые вещества человеческого тела, которые могут быть получены как инвазивно, так и без инвазии;
  • быстрота – скорость получения результатов обычно не превышает одного часа, если лаборатория не слишком загружена.

В комплексе все эти преимущества сделали полимеразную цепную реакцию одним из ведущих диагностических методов на сегодняшний день.

Как выполняется анализ ПЦР

Вопрос о том, как делают анализ, беспокоит большое количество представителей сильного пола. На самом деле существует несколько вариантов получения материала для последующей оценки.

  • Мазок из уретры

В условиях клиники часто выполняются мазки из уретры. Процедура известна среди мужчин, как весьма болезненная и неприятная. Выполняют ее с помощью специального зонда, который заводят в мочеиспускательный канал. Через него потом заводят небольшой шпатель, которым и собирают материал для исследования.

  • Оценка спермы

ПЦР в сперме у мужчин нередко позволяет получить те же данные, что и исследование мазка. При этом процедур совершенно безболезненна, и даже приятна. Ведь сперму представитель сильного пола должен предоставить самостоятельно.

ПЦР мочи у мужчин также может служить альтернативой мазку. Его выполняют в том случае, если представитель сильного пола отказывается проходить процедуру забора мазка из-за болезненности или неприязни к ней. Также методика используется в том случае, если есть подозрение на вовлечение в патологический процесс мочевого пузыря или почек.

Часто от пациентов врачи слышат вопрос о том, чем отличается ПЦР мочи и мазка у мужчин. Может показаться, что разницы нет, однако это неверно. В моче обычно не выявляются вирусные возбудители, такие как ВПЧ или герпес. Ее лучше оценивать в том случае, если есть подозрение на бактериальную или грибковую инфекцию, а также заражение простейшими. Нередко представителям сильного пола может потребоваться сдача секрета простаты. Секрет собирают после пальцевого ректального исследования. В течение, которого врач стимулирует орган на более активную, чем обычно, секрецию.

Подготовка к ПЦР у мужчин

Зная о том, как берется анализ ПЦР у мужчин, больные забывают поинтересоваться о том, как правильно подготовиться к исследованию. А ведь от того, насколько тщательно пациент выполнит рекомендации врача по подготовке, зависит результат.

Если правила подготовки будут проигнорированы, не стоит ожидать достоверных результатов. Более того, если доктор заподозрит, что результаты анализа и клиническая картина не соответствуют друг другу, он попросит пациента пройти анализ повторно. А ведь полимеразная цепная реакция – недешевое исследование.

Как отмечают доктора, подготовка обычно не требует особых навыков и умений. Потому большинство пациентов легко соблюдают полученные рекомендации.

Подготовка к исследованию ПЦР крови

Подготовка к ПЦР крови мужчине не представляет труда.

Существует не так много правил, которых нужно придерживаться для того, чтобы получить результат, которому можно будет верить.

  • Диета

В первую очередь рекомендуется отказаться от блюд, в которых содержится большое количество соли. Также придется исключить слишком соленые и жареные продукты. Не подойдут продукты с большим количеством специй, так как их наличие в рационе способно сильно исказить результаты исследования.

  • Небольшое голодание

На анализ крови нельзя являться на полный желудок. Пищеварение способствует изменению состава крови. Из-за чего можно получить совсем не те результаты, которых ожидает врач и сам пациент. Между посещением врачебного кабинета и последним приемом пищи должно пройти минимум 8 часов.

  • Время посещения

Доктора рекомендуют приходить на анализ крови в утреннее время. Этому способствует и работа кабинетов, которые обеспечивают забор крови у населения.

Оптимальный временной промежуток – с 8 до 11 утра. В это время в крови можно обнаружить максимальную концентрацию патогенного возбудителя.

  • Отсутствие стрессов

Стресс – еще один неблагоприятный фактор, который может исказить результаты исследования. Пациенту рекомендуется избегать стрессов за несколько дней до исследования.

  • Отказ от физической нагрузки

Перед исследованием не должно быть никакой физической нагрузки. Нельзя забывать о том, что она выступает в качестве стрессового фактора для организма. Из-за чего результаты исследования могут смазаться.

  • Лекарственный контроль

Больной обязательно должен сообщить врачу обо всех лекарствах, которые он принимает. Дело в том, что использование некоторых медикаментов может повлиять на итоговые результаты. Например, придется исключить антибиотики и противовирусные средства, которые могут смазать картину заболевания.

Также нельзя забывать о том, что повлиять на итоги может прием глюкокортикостероидов, иммунодепрессантов и ряда других препаратов.

Если подготовка к ПЦР крови у мужчин прошла верно, можно не опасаться того, что будут получены недостоверные результаты.

Подготовка к ПЦР мочи и мазка

Правильная подготовка к ПЦР мазка у мужчин также важна, как подготовка к исследованию крови с помощью полимеразной цепной реакции. Тут, как и в случае с кровью, стоит помнить о контроле лекарственных средств, диете и отсутствии стрессов. Эти три фактора подготовки остаются неизменными, а также играют важное значение в итоговых результатах. Но добавляются и дополнительные правила:

  • Не мочиться

Пациентам перед забором мазка рекомендуется отказаться от походов в туалет. Дело в том, что урина имеет слабое антисептическое действие.

Также способна смывать патогенные микроорганизмы со слизистой оболочки уретры. В результате велик риск получить неверные результаты.

  • Отказаться от секса

Секс больным, которым предстоит сдача мазка, придется исключить минимум на несколько суток. Если мужчина продолжает заниматься сексом, результаты также могут исказиться.

  • Соблюдать правила ухода за половыми органами

Если мужчина привык постоянно пользоваться антисептиками для ухода за половыми органами, доктор попросит его на время прекратить их использование. Антисептики могут повлиять на результаты анализа по тому же принципу, что и урина, только значительно более выражено.

Если для исследования сдается не мазок, а моча, нельзя забывать и о подготовке специальной посуды. Баночку, в которую пациенту нужно будет помочиться, приобретают в аптеке и вскрывают непосредственно перед мочеиспусканием. Сосуд стерилен и герметично закрывается, что позволяет избежать искажения результатов во время доставки анализа в лабораторию.

Другие варианты забора ПЦР анализа

ПЦР мазка у мужчины не всегда выполняется только из уретры. Есть и другие варианты забора биологического материала. Например, может собираться материал с анальной области. Его выполнять рекомендуют, если:

  • в аноректальной зоне обнаружено большое количество кондилом, которые затрудняют отхождение кала, травматизируются при дефекации;
  • в анамнезе у пациента или на момент выполнения исследования есть сексуальные контакты однополого типа;
  • выявлены признаки проктита, которые заставляют задуматься об инфекционном поражении прямой кишки.

Для подготовки к забору материала из аноректальной зоны требования, в принципе, стандартные. В ряде случаев может потребоваться ПЦР мазок изо рта у мужчин. Его выполнение рекомендовано, если:

  • есть подозрение на заражение одним из типов герпеса;
  • пациент страдает от папилломавируса;
  • выявлены признаки орального кандидоза;
  • есть признаки стоматита, фарингита или других воспалительных изменений в ротоглотке, объяснить которые не удается.

Для оценки ротовой полости пациенту не рекомендуется перед исследованием проводить чистку зубов. Ведь зубная паста не только убивает часть бактерий, но и способна просто напросто смыть их. В остальном рекомендации для пациентов не отличаются от стандартных.

Расшифровка ПЦР анализа

Часто больные интересуются, на какие инфекции делают ПЦР крови у мужчин или берут другой биологический материал. Анализ выполняется при подозрении на заражение:

  • хламидиозом – болезнью, которая вызывается хламидиями, и редко протекает у представителей сильного пола в активной форме;
  • гонореей, вызываемой гонококком и характеризующейся яркой симптоматикой, которую практически невозможно игнорировать;
  • любым из видов герпеса;
  • трихомониазом, вызываемым трихомонадами, которые нередко провоцируют появление неприятных симптомов у мужчин;
  • многими вирусами, такими как герпес, ВПЧ и др.

В основном пациентам рекомендуют прохождение качественного способа исследования. Это значит, что в результатах будет просто написано, положителен анализ на тот или иной микроорганизм, или отрицателен. Качественный анализ – самый дешевый вариант ПЦР, а потому он иногда применяется в качестве способа скрининга.

Если результат исследования положителен, то инфекция присутствует в организме, и пациенту необходимо начать ее лечение.

Если результат отрицателен, то беспокоиться не о чем, здоровье находится вне опасности.

Особенности ПЦР исследования на ВИЧ

Больных особенно сильно занимает расшифровка ПЦР у мужчин при исследовании на ВИЧ инфекцию.

Важно понимать, что при подозрении на заражение вирусом иммунодефицита используют два варианта полимеразной цепной реакции.

Первый вариант – стандартный, выступающий при ПЦР в качестве скрининга. По его результатам можно судить о том, есть ли патогенный микроорганизм в теле человека, произошло ли заражение, как таковое.

Если пациент получает отрицательный результат во время качественного исследования, дальнейшие анализы не проводятся. Однако если в результате стоит отметка о положительности, проводится второй вариант исследования.

Анализ носит название ПЦР на ВИЧ с вирусной нагрузкой у мужчин. В ходе исследования с определением вирусной нагрузки доктор определяет не только тот факт, что человек заражен патогенным микроорганизмом. Он также устанавливает, какое количество вируса находится в организме.

Оценка вирусной нагрузки необходима врачам для того, чтобы правильно выбрать для пациента терапию.

Люди с положительным ВИЧ-статусом должны время от времени проходить ПЦР анализ с вирусной нагрузкой. По его результатам судят о том, насколько подавлен вирус, как пациент принимает выписанные врачом лекарства. Также этот показатель позволяет судить о прогнозе.

Если вирусная нагрузка высокая, значит иммунитет сильно поражен патогенным микроорганизмом, и, скорее всего, требуется изменение курса лечения.

Если же вирусная нагрузка низкая, это хороший прогностический признак, говорящий о том, что тактика лечения выбрана верно.

Особенности ПЦР оценки при подозрении на гепатиты

ПЦР на гепатиты у мужчин, как и в случае с ВИЧ, может быть качественным и количественным. Первый вариант играет роль скрининга. Второй вариант используют в том случае, если качественный анализ показал положительные результаты.

Как и в случае с ВИЧ, по результатам количественного анализа контролируют эффективность лечения и делают выводы о дальнейшем прогнозе. Если нагрузка высока, пациенту подбирают более эффективные лекарственные средства, меняют слабо действующие препараты на более сильные.

Также вирусная нагрузка при гепатитах позволяет понять, насколько будет поражена печень. Чем она выше, тем больше вероятность исхода в цирроз, который является смертельным заболеванием у человека.

Важно помнить о том, что заниматься расшифровкой анализов может только врач.

Самостоятельно назначать себе лечение, увидев в графе результата положительный показатель, ни в коем случае нельзя. Подобный поступок может только усугубить состояние пациента, особенно если речь идет о таких болезнях, как гепатиты или ВИЧ.

ПЦР, если исследование используется грамотно и по показаниям, является незаменимой для врачей методикой диагностики.

Главное – помнить о правилах сдачи материала и том, что расшифровку нужно доверить врачу!

При необходимости сдать ПЦР анализ на инфекции обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

что сдавать и как не переплатить? – НаПоправку

17.05.2019

Обзор

Диагностика методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) показывает наличие половых инфекций с очень большой точностью. С помощью ПЦР анализа можно найти все, что угодно. Главное, знать, что искать.

Совсем недавно ПЦР использовали как последнюю надежду, когда с помощью других диагностических процедур подтвердить или исключить диагноз не получалось — методам не хватало чувствительности. Сейчас ПЦР-диагностику освоили во многих крупных лабораториях и продвигают её в качестве коммерческого метода, доступного каждому, кто хочет обследоваться. Обычно предлагают готовые наборы анализов: ПЦР на 3-5-7-14-16 и другое количество инфекций, передающихся половым путем.

Нередко анализ навязывают тогда, когда обследоваться совсем не обязательно или можно обойтись более дешевой диагностикой без потери качества. Давайте разберемся, когда нужно искать половые инфекции (ЗППП), и когда это необходимо делать именно методом ПЦР.

Как часто сдавать ПЦР анализ на ЗППП если ничего не беспокоит?

Обследоваться на ЗППП можно хоть каждый день — по желанию. Все зависит от наличия свободного времени, денег и уровня вашей тревожности. Есть только один нюанс. Метод ПЦР — очень точный анализ. С его помощью можно обнаружить в недрах организма считанные копии вируса или бактерии. И ни один честный врач не скажет вам наверняка, насколько эта находка опасна для здоровья, и каков достоверный риск осложнений. Поэтому решите для себя заранее, сможете ли вы спокойно жить дальше или будете лечить результаты анализа даже в тех случаях, когда до похода в клинику у вас не было никаких проблем с интимным здоровьем.

Иначе обстоят дела с обследованием на ЗППП в группе риска — у людей с рискованным сексуальным поведением и беременных женщин. Им необходимо периодически сдавать анализы на половые инфекции, даже если нет никаких жалоб на здоровье. Сексуальным экстремалам профилактическое обследование нужно, чтобы выявить факт инфицирования еще до появления симптомов и как можно раньше принять меры для защиты своих половых партнеров от заражения. Беременным женщинам диагностика ЗППП необходима, потому что многие мамины инфекции передаются будущему малышу. Даже если нет симптомов у женщины, последствия для ребенка могут быть тяжелыми.

Согласно принятым государственным программам как в нашей стране, так и в США, профилактическая диагностика (скрининг) на ЗППП проводится только среди людей с рискованным сексуальным поведением и у беременных женщин. У них делают анализ на сифилис, гонорею, трихомониаз, хламидиоз, ВИЧ, гепатит В и С. Скрининг на герпес и ВПЧ не проводят даже в группе риска. Для остальных людей в отсутствии жалоб и клинических проявлений обследование на ЗППП вообще не рекомендуется.

А как обнаружить скрытые инфекции у мужчин и женщин?

По настоящему скрытые инфекции — это редкость. Гораздо чаще встречаются не скрытые, а забытые инфекции: когда вроде что-то было, но само прошло, хотя инфекция никуда не делась, а только перешла в вялотекущую форму.

Дело в том, что многие половые инфекции имеют волнообразное течение. Первые симптомы быстро пропадают без лечения. Затем наступает так называемая «скрытая» стадия: субъективные жалобы отсутствуют, человек считает, что выздоровел, но инфекция медленно развивается, вызывая хроническое воспаление. Спустя какое-то время симптомы болезни обычно возвращаются, только уже вместе с осложнениями. Поэтому любые проблемы в интимной сфере решайте безотлагательно.

И еще! Если вы 1-2 раза в год профилактически посещаете профильного врача (гинеколога — для женщин, уролога — для мужчин), то вероятность пропустить «скрытую» ЗППП снижается многократно. Врач во время осмотра видит признаки воспаления, может заподозрить инфекцию и назначить анализы, даже если вы не предъявляете никаких жалоб. Вот здесь очень важно найти врача, который не заинтересован в коммерческой составляющей диагностики и лечения. Читайте отзывы, а если сомневаетесь — ищите второе мнение.

Когда анализ на ЗППП действительно необходим?

Если есть жалобы со стороны мочеполовых органов:

  • появились или изменились выделения,

  • есть боль или дискомфорт в нижней части живота,

  • проблемы с мочеиспусканием, эрекцией (у мужчин) и менструациями (у женщин),

  • не получается забеременеть.

Если есть эти и другие симптомы половых инфекций, однозначно нужно обследоваться. Чем быстрее, тем лучше! Даже если вы уверены в себе и своем половом партнере или всегда пользуетесь барьерными методами контрацепции. Это как раз тот случай, когда работает правило — выявить на ранней стадии. Кстати, обнаружение какого-либо возбудителя ЗППП в крепких парах далеко не всегда является доказательством измены. Поэтому положительный ПЦР анализ ни в коем случае не должен быть причиной для скандала или разрыва отношений.

И еще целесообразно провериться на инфекции тем парам, которые планируют беременность. Что искать?

  • Нужно удостовериться в отсутствии сифилиса и гонореи. Эти заболевания однозначно потребуют лечения, будучи обнаруженными во время беременности. Кроме того, высок риск прерывания беременности, врожденных уродств у ребенка, а также его инфицирования и болезней.

  • Имеет смысл сдать анализ на хламидиоз — выявление этой инфекции во время беременности (даже если нет никаких симптомов) по существующим стандартам будет поводом к назначению антибиотиков. Поэтому лучше сдать анализы и, при необходимости, пролечиться заранее, чем во время беременности взвешивать гипотетические риски, оказавшись перед выбором: пить или не пить антибиотики.

А вот обследоваться просто так, без симптомов, на ВПЧ, герпес, цитомегаловирус, а также условные патогены (уреаплазму, кандиду) на этапе планирования беременности нет необходимости, так как результаты диагностики, какими бы они не оказались, ни на что не повлияют. Их не лечат, если нет признаков болезни.

Какой метод диагностики выбрать?

Клиники предлагают готовые пакеты услуг: ПЦР на разное количество инфекций — от 3 до 16. На самом деле метод полимеразной цепной реакции действительно незаменим только при определении четырех возбудителей половых инфекций, это:

  • ВПЧ (HPV16, 18, 31, 33, 35, 39, 45 и др.)— вирус папилломы человека;

  • ВПГ (HSV 1, 2) — вирус простого герпеса;

  • хламидия;

  • микоплазма.

Из этого списка ПЦР на ВПЧ назначают только тогда, когда у женщины есть изменения на шейке матки. Просто так этот анализ не делают. ПЦР на герпес при отсутствии проявлений инфекции не имеет никакого смысла.

Остается анализ ПЦР на микоплазму и хламидию — это мелкие бактерии, выявить их другими методами можно, но гораздо сложнее. Хламидии вызывают всевозможные воспаления в мочеполовой системе. Хроническая инфекция может осложняться образованием спаек в малом тазу, а значит болями и, возможно, бесплодием. Считается, что даже бессимптомный хламидиоз опасен, хотя достоверных данных и прогнозов на этот счет нет. По существующим стандартам, если хламидию нашли, это нужно лечить.

Чтобы выявить микоплазменную инфекцию, сдают количественный ПЦР, чтобы определить, сколько именно бактерий поселилось внутри. Большая часть микоплазм может существовать мирно, не причиняя вреда человеку, только если их больше 104 КОЕ/мл и есть признаки воспаления, назначают лечение.

Для других инфекций, передающихся половым путем, существуют не менее достоверные, но более дешевые и простые анализы:

  • на сифилис — микроскопия мазка, иммуноферментный анализ (ИФА) крови;

  • на гонорею, трихомониаз, кандидоз — микроскопия мазка, бактериологический анализ;

  • на ВИЧ, гепатиты В, С — ИФА и ПИФ — иммунологические исследования крови.

Простой мазок и бактериологический анализ дают, порой, гораздо больше информации об интимном здоровье, чем ПЦР на 16 инфекций, так как показывают не только наличие и количество возбудителя, но и его чувствительность к различным антибиотикам, а также признаки воспаления.

Резюме

1. Найдите доверенного гинеколога или уролога (для мужчин) и посещайте его раз в полгода-год даже если ничего не беспокоит. Врач направит вас на обследование, если будет необходимость. Это дешевле и надежнее, чем сдавать ПЦР на ЗППП «на всякий случай». Кстати, по показаниям все анализы на ЗППП можно сдать бесплатно, по полису ОМС.

2. Появились жалобы со стороны мочеполовых органов, особенно если вы не исключаете инфекцию, постарайтесь посетить врача в течение нескольких дней.

3. Если ваша интимная жизнь подходит под определение «рискованной», сдавать анализы на ЗППП нужно после каждой смены полового партнера, но не реже, чем раз в полгода.

4. Анализ ПЦР оправдан для диагностики хламидиоза, микоплазмоза, уреаплазмоза. При этом ПЦР на микоплазму и уреаплазму имеет смысл только тогда, когда есть симптомы болезни или признаки воспаления, заметные врачу при осмотре.

5. Сифилис, гонорея, трихомониаз, кандидоз, ВИЧ-инфекция и гепатиты качественно определяются другими способами. Диагностика методом ПЦР этих инфекций — необоснованная трата денег, из разряда «любой каприз за ваши деньги».

6. На этапе планирования беременности целесообразно, хотя и не обязательно, сдать ПЦР анализ на хламидиоз, а также обычные тесты на сифилис и гонорею.

Другие статьи по темам:

Все материалы сайта были проверены врачами. Однако, даже самая достоверная статья не позволяет учесть все особенности заболевания у конкретного человека. Поэтому информация, размещенная на нашем сайте, не может заменить визита к врачу, а лишь дополняет его. Статьи подготовлены для ознакомительных целей и носят рекомендательный характер. При появлении симптомов, пожалуйста, обратитесь к врачу.

Напоправку.ру 2020

ПЦР-тестов на COVID19 бессмысленны с научной точки зрения — Болгарская ассоциация патологов

Хотя весь мир полагается на ОТ-ПЦР для «диагностики» инфекции Sars-Cov-2, наука ясна: они не подходят для этой цели

От Торстена Энгельбрехта и Константина Деметера

Блокировки и гигиенические меры во всем мире основаны на количестве случаев и показателях смертности, созданных так называемыми тестами SARS-CoV-2 RT-PCR, используемыми для выявления «положительных» пациентов, при этом «положительный» обычно приравнивается к «инфицированным». .”

Но если внимательно присмотреться к фактам, можно сделать вывод, что эти ПЦР-тесты не имеют смысла в качестве диагностического инструмента для определения предполагаемой инфекции якобы новым вирусом под названием SARS-CoV-2.

НЕОБХОДИМО «ТЕСТ, ТЕСТ, ТЕСТ,…» МАНТРА

На брифинге для СМИ по COVID-19 16 марта 2020 г. Генеральный директор ВОЗ д-р Тедрос Адханом Гебрейесус сказал:

У нас есть простое сообщение для всех стран: тест, тест, тест ».

Сообщение было разослано заголовками по всему миру, например, Reuters и BBC.

Еще 3 мая модератор журнала heute — одного из самых важных новостных журналов на немецком телевидении — передавал своей аудитории мантру догмы короны с предостерегающими словами:

Тестировать, тестировать, тестировать — это кредо на данный момент, и это единственный способ действительно понять, насколько распространяется коронавирус ».

Это указывает на то, что вера в достоверность тестов PCR настолько сильна, что соответствует религии, которая практически не допускает противоречий.

Но хорошо известно, что религии основаны на вере, а не на научных фактах. И как сказал Вальтер Липпманн, двукратный лауреат Пулитцеровской премии и, возможно, самый влиятельный журналист ХХ века: «Там, где все думают одинаково, никто не думает особо».

Итак, для начала очень примечательно, что сам Кэри Муллис, изобретатель технологии полимеразной цепной реакции (ПЦР), не думал одинаково. Его изобретение принесло ему Нобелевскую премию по химии в 1993 году.

К сожалению, Муллис скончался в прошлом году в возрасте 74 лет, но нет никаких сомнений в том, что биохимик посчитал ПЦР непригодным для выявления вирусной инфекции.

Причина в том, что предполагаемое использование ПЦР было и остается применением в качестве производственного метода, позволяющего воспроизводить последовательности ДНК миллионы и миллиарды раз, а не в качестве диагностического инструмента для обнаружения вирусов.

Как объявление вирусных пандемий на основе тестов ПЦР может закончиться катастрофой, было описано Джиной Колата в статье New York Times в 2007 году. Вера в быстрое тестирование ведет к эпидемии, которой не было .

ОТСУТСТВИЕ ДЕЙСТВУЮЩЕГО ЗОЛОТОГО СТАНДАРТА

Кроме того, стоит упомянуть, что тесты ПЦР, используемые для выявления пациентов с так называемым COVID-19, предположительно инфицированных так называемым SARS-CoV-2, не имеют действительного золотого стандарта для их сравнения.

Это фундаментальный момент. Тесты необходимо оценивать для определения их точности — строго говоря, их «чувствительности» [1] и «специфичности» — путем сравнения с «золотым стандартом», то есть наиболее точным из доступных методов.

Например, для теста на беременность золотым стандартом будет сама беременность. Но как, например, австралийский специалист по инфекционным заболеваниям Санджая Сенанаяке заявил в интервью телеканалу ABC в ответ на вопрос : «Насколько точны тесты [COVID-19]?» :

Если бы у нас был новый тест на обнаружение [бактерии] золотистого стафилококка в крови, мы уже получили посев крови, это наш золотой стандарт, который мы используем в течение десятилетий, и мы могли бы сопоставить этот новый тест с этим.Но на COVID-19 у нас нет золотого стандарта ».

Джессика К. Уотсон из Бристольского университета подтверждает это. В своей статье «Интерпретация результатов теста на COVID-19» , недавно опубликованной в журнале The British Medical Journal , она пишет, что «не хватает такого четкого« золотого стандарта »для тестирования COVID-19. . »

Но вместо того, чтобы классифицировать тесты как непригодные для обнаружения SARS-CoV-2 и диагностики COVID-19, или вместо того, чтобы указывать на то, что только вирус, подтвержденный путем выделения и очистки, может быть твердым золотым стандартом, Уотсон со всей серьезностью заявляет что, «прагматично» сама диагностика COVID-19, включая саму ПЦР-тест, «может быть наилучшим доступным« золотым стандартом ». Но это не научно обосновано.

Помимо того факта, что совершенно абсурдно проходить сам тест ПЦР как часть золотого стандарта для оценки теста ПЦР, нет никаких отличительных специфических симптомов для COVID-19, поскольку даже такие люди, как Томас Лёшер, бывший глава Департамент инфекций и тропической медицины Мюнхенского университета и член Федеральной ассоциации немецких терапевтов нам уступили [2].

И если нет отличительных специфических симптомов COVID-19, диагноз COVID-19 — вопреки утверждению Уотсона — не может служить действующим золотым стандартом.

Кроме того, «эксперты», такие как Уотсон, упускают из виду тот факт, что только изоляция вируса, то есть однозначное доказательство вируса, может быть золотым стандартом.

Вот почему я спросил Уотсона, как диагностика COVID-19 «может быть наилучшим доступным золотым стандартом», если нет отличительных специфических симптомов COVID-19, а также не будет ли сам вирус, то есть выделение вируса, лучший доступный / возможный золотой стандарт. Но она пока не ответила на эти вопросы, несмотря на многочисленные просьбы.И она еще не ответила на наш пост быстрого ответа на ее статью, в которой мы обращаемся к точно таким же вопросам, хотя она написала нам 2 июня: «Я постараюсь опубликовать ответ позже на этой неделе, когда у меня будет возможность . »

ОТСУТСТВИЕ ДОКАЗАТЕЛЬСТВА РНК ВИРУСНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

Теперь вопрос: что требуется в первую очередь для изоляции / доказательства вируса? Нам нужно знать, откуда берется РНК, для которой откалиброваны тесты ПЦР.

В качестве учебников (эл.г., Белый / Феннер. Медицинская вирусология, 1986, стр. 9), а также ведущие исследователи вирусов, такие как Люк Монтанье или Доминик Дуайер, заявляют, что очистка частиц — то есть отделение объекта от всего остального, что не является этим объектом, как, например, лауреат Нобелевской премии Мария Кюри очистила 100 мг хлорида радия в 1898 году. путем извлечения ее из тонны урана — важная предпосылка для доказательства существования вируса и, таким образом, доказательства того, что РНК рассматриваемой частицы происходит от нового вируса.

Причина этого в том, что ПЦР чрезвычайно чувствительна, что означает, что она может обнаруживать даже самые маленькие фрагменты ДНК или РНК, но не может определить , откуда эти частицы произошли . Это должно быть определено заранее.

И поскольку тесты ПЦР откалиброваны для последовательностей генов (в данном случае последовательностей РНК, поскольку SARS-CoV-2 считается РНК-вирусом), мы должны знать, что эти фрагменты генов являются частью искомого вируса. И чтобы знать это, необходимо выполнить правильное выделение и очистку предполагаемого вируса.

Таким образом, мы попросили научные группы соответствующих статей, которые упоминаются в контексте SARS-CoV-2, доказать, показывают ли электронно-микроскопические снимки, сделанные в их экспериментах in vitro, очищенные вирусы.

Но ни одна команда не смогла ответить на этот вопрос «да» — и NB., Никто не сказал, что очистка не является необходимым шагом. Мы получили только ответы типа «Нет, мы не получали электронную микрофотографию, показывающую степень очистки» (см. Ниже).

Исследование 1: Лео Л. М. Пун; Малик Пейрис. «Появление нового человеческого коронавируса, угрожающего здоровью человека» Nature Medicine , март 2020 г.
Автор ответа: Малик Пейрис
Дата: 12 мая 2020 г.
Ответ: «Изображение — вирус, зарождающийся из инфицированная клетка. Это не очищенный вирус ».

Исследование 2: Myung-Guk Han et al. «Выявление коронавируса, изолированного от пациента в Корее с COVID-19», Osong Public Health and Research Perspectives , February 2020
Ответственный автор: Myung-Guk Han
Дата: 6 мая 2020 г.
Ответ: «Мы не смогли оценить степень очистки, потому что мы не очищаем и не концентрируем вирус, культивируемый в клетках.”

Исследование 3: Wan Beom Park et al. «Изоляция вируса от первого пациента с SARS-CoV-2 в Корее», Журнал корейской медицинской науки , 24 февраля 2020 г.
Автор ответа: Ван Бом Парк
Дата: 19 марта 2020 г.
Ответ : «Мы не получили электронную микрофотографию, показывающую степень очистки».

Исследование 4: На Чжу и др., «Новый коронавирус у пациентов с пневмонией в Китае», 2019, Медицинский журнал Новой Англии , 20 февраля 2020 г.
Ответственный автор: Вэньцзе Тан
Дата: 18 марта 2020 г.
Ответ: «[Мы показываем] изображение осажденных вирусных частиц, а не очищенных.”

Подробнее читайте здесь.

Будущее ПЦР-диагностики

Получившая Нобелевскую премию полимеразную цепную реакцию (ПЦР) 1 Метод произвел революцию в молекулярной биологии своим изобретением в 1986 году, и он сделал то же самое в медицинской диагностике за последние 15 лет. Возможность копировать и размножать определенные целевые молекулы ДНК открыла дверь для быстрой, точной диагностики заболеваний во многих областях и с меньшими затратами со временем.

ПЦР создает неограниченное количество копий ДНК только из одной исходной цепи, используя ферменты полимеразы, праймеры (небольшие последовательности ДНК, которые определяют ДНК, подлежащую амплификации) и несколько термических циклов. Достижения произошли в 1980-х годах с использованием бактериальных ферментов, способных выдерживать высокие температуры, а в 1991 году технология была приобретена фармацевтическим гигантом Roche, который начал совершенствовать науку для использования в медицинской диагностике.

Преимущества ПЦР

«Современные методы [культивирования] могут быть довольно трудоемкими и иногда могут занимать от нескольких дней до недель, тогда как количественные методы ПЦР могут дать вам ответы за часы.Это может быть намного быстрее и надежнее », — говорит Ребекка Сандерс, ученый-метролог из компании LGC, Теддингтон, Великобритания. ПЦР-диагностика выполняется быстрее и менее подвержена перекрестному заражению, поскольку этот метод обычно выполняется в автоматических термоциклах. Он также более чувствителен и специфичен, чем иммуноанализ на планшетах.

В некоторых случаях ПЦР становится предпочтительным методом диагностики. Например, этот метод был одобрен Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) для быстрой диагностики туберкулеза легких (ТБ) 2 , чтобы заменить стандартный метод микроскопии мазка мокроты, разработанный более века назад.ПЦР или тесты амплификации нуклеиновых кислот (NAAT) дают быстрые результаты, и это позволяет использовать их в полевых условиях для ранней диагностики туберкулеза, что важно для предотвращения распространения болезни.

Возможности ПЦР-диагностики огромны. «Было бы проще определить, где ПЦР не будет использоваться — все на этой планете имеет геном ДНК или РНК, поэтому, если вы хотите обнаружить что-либо, вы переходите к ПЦР», — объясняет Джонатан О’Халлоран, главный научный сотрудник QuantumDx. стартап по ПЦР-диагностике, базирующийся в Ньюкасле, Великобритания.Он добавляет, что, помимо клинических применений, ПЦР-диагностика также может стать важной в таких отраслях, как пищевая и сельскохозяйственная. Еще одним преимуществом ПЦР-диагностики является их использование в мультиплексных анализах — амплификация нескольких мишеней в одном эксперименте ПЦР путем простого использования нескольких пар праймеров. Это может быть полезно при диагностике инфекционных агентов, симптомы которых сложно охарактеризовать. В одном тесте можно охватить до 20 патогенов. 3

Арон Коэн, главный исполнительный директор лондонского отделения диагностики.ai, говорит, что в текущей экосистеме ПЦР-диагностики в настоящее время преобладает лабораторное тестирование, «на данный момент очень мало тестов, одобренных FDA, возможно, 10 различных тестов имеют одобрение FDA (например, для ВИЧ) и полностью автоматизированы, но для подавляющего большинства люди полагаются на тесты, разработанные в лаборатории ».

КПЦР идет впереди

Большинство диагностик будет основано на количественной ПЦР в реальном времени или на количественной ПЦР (qPCR). 4 Он работает за счет использования флуоресцентно меченных олигонуклеотидных зондов и мониторинга флуоресценции после каждого цикла — интенсивность сигнала отражает количество амплифицированной ДНК, а количество циклов, в которых флуоресценция обнаруживается впервые, используется для расчета начального числа молекул ДНК в образце после калибровки системы.

Признавая важность молекулярной диагностики для ранней диагностики опасных для жизни инфекций, Bruker недавно запустила ПЦР в реальном времени для инвазивных грибковых заболеваний. Fungiplex® Aspergillus и Fungiplex® Candida обнаруживают ДНК Aspergillus и Candida , соответственно, непосредственно из образцов пациентов, что позволяет на ранней стадии диагностировать инвазивное заболевание, не дожидаясь посева грибкового патогена. Тогда для улучшения результатов лечения пациентов может быть назначена таргетная противогрибковая лекарственная терапия.

КПЦР также адаптирован для обнаружения РНК-вирусов, таких как ВИЧ и гепатит С, и анализа транскриптов РНК, связанных с некоторыми видами рака. В двухэтапной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (RT-PCR) молекулы РНК преобразуются в их последовательности комплементарной ДНК (кДНК) ферментами обратной транскриптазы с последующей амплификацией кДНК с помощью стандартной ПЦР. Разрабатываемый новый сверхбыстрый метод может обещать более эффективный процесс, особенно при анализе большого количества образцов.В этом методе используется генетически модифицированная термостабильная обратная транскриптаза, поэтому процесс ПЦР может происходить непосредственно с РНК. 5

Преодоление ограничений

Но есть также ограничения, связанные с ПЦР-диагностикой, «все дело в пробоподготовке с ПЦР, в отличие от иммунодиагностики, где вы можете по существу использовать образец сырой сыворотки крови, для ПЦР-диагностики вы нужны. провести сложную пробоподготовку », — говорит О’Халлоран. Многие органические и неорганические вещества будут ингибировать ПЦР, поэтому их необходимо удалить, и эти дополнительные стадии усложняют процедуру.

Ряд компаний и академических групп изучают технологии для улучшения диагностики ПЦР. Люк Ли, профессор биоинженерии Калифорнийского университета в Беркли, разрабатывает альтернативный метод циклического изменения температуры. Он изобрел способ более быстрого изменения температуры — с помощью плазмоники — взаимодействия света с электронами на поверхности металла, которые генерируют тепло. Светодиоды нагревают 120-нм золотую пленку в контакте с раствором ДНК в микрожидкостной лунке. Механизм позволял переключаться с 55 ° C до 95 ° C, 30 раз за 5 минут.

Компания O’Halloran’s QuantumDx представила портативное настольное устройство, которое может сократить время теста до 7 минут и имеет улучшенную чувствительность до менее 1 клетки на мл — огромное улучшение по сравнению со стандартными методами, которые составляют около 150 клеток на мл. Это было достигнуто с помощью интеллектуальной микрофлюидики и технологии полевых транзисторов с нанопроволокой. 7 «Мы решаем некоторые проблемы чувствительности с помощью действительно новой физики, называемой диэлектрофорезом», — объясняет О’Халлоран.Это явление вызывает силу, действующую на частицу в неоднородном электрическом поле, и позволяет точно захватить интересующие клетки из необработанного образца: «Мы устанавливаем электрические поля с частотой и величиной, которые вызывают дипольные моменты, в частности, в представляющую интерес клетку, и мы используем микрожидкости для высвобождения этих концентрированных клеток в нашу ПЦР ».

В крупных диагностических лабораториях большая часть ПЦР проводится с помощью автоматизированных, роботизированных высокопроизводительных систем. Но стандартизация и контроль качества ПЦР по-прежнему требует кропотливого участия человека.Инновационный стартап Diagnostics.ai придумал решение, использующее искусственный интеллект. Мы эффективно передаем в обучающую машину контролируемый набор данных, набор входных данных с кучей известных результатов, а обучающаяся машина автоматически проверяет себя и гарантирует, что может давать те же результаты на регулярной основе — то, что невозможно сделать без ручного ввода в текущих систем из-за вариабельности ПЦР в реальном времени для разных платформ и анализов », — говорит Коэн. После того, как их система настроена, о результатах можно будет сообщить почти сразу, и это только отметит неожиданные результаты, требующие дальнейшего анализа.Система тестируется крупнейшим поставщиком услуг патологии Великобритании Viapath в одной из своих ведущих лабораторий.

Цифровая точность

Изобретенная в начале 1990-х, но вытесненная qPCR в 1996 году, цифровая PCR теперь вернулась в специализированные приложения. Этот метод не требует стандартной калибровки, но работает путем разделения исходного образца на большое количество отдельных лунок перед амплификацией, так что каждая лунка будет содержать 1 или 0 молекул ДНК (отсюда и цифровая).После амплификации простой расчет положительных или отрицательных лунок может определить абсолютное количественное определение. 8

«Цифровая технология обеспечивает уровень точности, которого невозможно достичь с помощью количественной ПЦР», — говорит Сандерс, но О’Халлоран отмечает, что «это откровенно избыточно для большинства клинических приложений». Это полезно, когда вам нужно точно знать, какая часть цели находится в вашем образце. «Например, есть некоторые виды рака, которые вызваны множеством копий одного и того же гена, поэтому изменение количества копий и знание количества копий может изменить режим лечения», — объясняет Сандерс.Она говорит, что в настоящее время большинство больниц не имеют доступа к подобным приборам; «стоимость должна снизиться, и это произойдет, если на рынке появится больше платформ».

Взгляд в будущее

ПЦР-диагностика также окажет большое влияние на будущий рост точной медицины — индивидуальный подход к лечению индивидуального пациента. О’Халлоран говорит, что QuantumDx уже разработали тест на варфарин. Антикоагулянтный препарат выбора на протяжении десятилетий, его недавно заменили дорогостоящими альтернативами из-за риска тромбоза и других осложнений у части пациентов.«Расходы на [антикоагулянты] ежегодно растут на сотни тысяч фунтов, — говорит О’Халлоран, — но« мы разработали тест, который позволяет нам проводить быстрые тесты на пациентах, а затем сообщать врачу, кто может принять варфарин (это 75% нашего населения) ».

В конечном итоге О’Халлоран рассматривает ПЦР-диагностику как нечто, что расширится до первичной медико-санитарной помощи:« вы собираетесь увидеть ее в кабинете врача и в аптеке, она поможет это будет действительно захватывающее время для ПЦР ». QuantumDx работает над переносным устройством для ПЦР, и он предполагает, что однажды он может оказаться в нашей домашней аптечке рядом с термометром:« Я не вижу причин, по которым это невозможно. произойдет в ближайшие 10 лет.’

Ссылки

1 Mullis KB и Faloona FA« Специфический синтез ДНК in vitro с помощью цепной реакции, катализируемой полимеразой ». Методы в энзимологии vol. 155 (F) pp. 335–50 (1987)

2 Boehme et al. 2010. Быстрая молекулярная диагностика туберкулеза и устойчивости к рифампину. N Engl J Med. 363: 1005-1015, DOI: 10.1056 / NEJMoa0

  • 7

    3 Пол К. Шрекенбергера и Александр Дж. МакАдамб. Точка-контрапункт: большие мультиплексные панели ПЦР должны быть тестами первой линии для обнаружения респираторных и кишечных патогенов.J. Clin. Microbiol. Октябрь 2015 г. 53 нет. 10 3110-3115. DOI: 10.1128 / JCM.00382-15

    4 Петр Кралик и Маттео Рикки. Базовое руководство по ПЦР в реальном времени в микробной диагностике: определения, параметры и все остальное. Front Microbiol. 2017; 8: 108. doi: 10.3389 / fmicb.2017.00108

    5 Петра Хованцова, Верена Мерк, Андреас Маркс, Марсель Лейст, Рамон Кранастер; Количественная ПЦР с обратной транскрипцией непосредственно из клеток без экстракции РНК и без изотермической обратной транскрипции: протокол RT-qPCR с нулевым шагом, Биологические методы и протоколы, Том 2, Выпуск 1, 1 января 2017 г., bpx008, https: // doi.org / 10.1093 / biomethods / bpx008

    6 Джун Хо Сон, Бьюнгрэ Чо, Сун Гвён Хонг, Сан Хун Ли, Ори Ходжа, Аманда Дж. Хаак и Люк П. Ли. Сверхбыстрая фотонная ПЦР. Свет: Наука и приложения, том 4, страница e280 (2015) doi: 10.1038 / lsa.2015.53

    7 http://quantumdx.com/systems/q-poc

    8 Джим Ф. Хаггетт, Александра Уэйл . Цифровая ПЦР как новая технология и ее потенциальное значение для молекулярной диагностики. Клиническая химия.2013, 59 (12) 1691–1693; DOI: 10.1373 / Clinchem.2013.214742

    Диагноз

    Перейти к основному содержанию

    • Доступность

    • Сообщество

    • Свяжитесь с нами

    • Работайте с нами

    • Новости

    • Магазин

    Пожертвовать

    • Совет и руководство

    Заболевания — ММ — Диагностика

    Диагностика

    Ни один из характерных симптомов митохондриального заболевания — мышечная слабость, непереносимость физических упражнений, нарушение слуха, атаксия, судороги, нарушение обучаемости, катаракта, пороки сердца, диабет и задержка роста — не являются уникальными для митохондриальных заболеваний.Однако сочетание этих симптомов у одного человека убедительно указывает на митохондриальное заболевание, особенно когда симптомы затрагивают более одной системы органов.

    Чтобы оценить степень этих симптомов, врач обычно начинает с личного медицинского анамнеза пациента (подробный семейный анамнез, включающий не менее трех поколений, необходим для оценки наследственности), а затем приступает к физическому и неврологическому обследованию. Внизу страницы находится таблица, в которой подробно объясняются эти тесты и то, что они должны показывать.

    Диагностические тесты при митохондриальных заболеваниях

    Физический осмотр обычно включает в себя тесты на силу и выносливость, такие как тест с физической нагрузкой, который может включать в себя такие действия, как многократное сжатие кулаков или подъем и спуск по небольшой лестнице. Неврологическое обследование может включать в себя проверку рефлексов, зрения, речи и основных когнитивных (мыслительных) навыков.

    В зависимости от информации, полученной во время сбора истории болезни и обследований, врач может провести более специализированные тесты, которые могут выявить аномалии в мышцах, головном мозге и других органах. 1

    Самым важным из этих тестов является биопсия мышцы, которая включает в себя удаление небольшого образца мышечной ткани для исследования. При обработке красителем, окрашивающим митохондрии, в мышцах, пораженных митохондриальной болезнью, часто появляются рваные красные волокна — мышечные клетки (волокна) с избыточным количеством митохондрий. С помощью других красителей можно обнаружить отсутствие в мышцах основных митохондриальных ферментов. Также возможно извлечь митохондриальные белки из мышц и измерить их активность.В большинстве случаев генетические исследования должны проводиться перед инвазивным тестированием, таким как биопсия мышцы, поэтому биопсия мышцы предлагается, когда генетическое тестирование не может подтвердить диагноз или когда требуется исключить другие условия в дифференциальной диагностике. Основное ограничение мышечной биопсии при диагностике митохондриальных миопатий состоит в том, что она может быть нормальной или показывать лишь минимальные отклонения от нормы при определенных митохондриальных дефектах.

    В дополнение к биопсии мышц можно использовать неинвазивные методы для исследования мышц без взятия образца ткани.Например, метод, называемый магнитно-резонансной спектроскопией (MRS) мышечного фосфора, позволяет измерять уровни фосфокреатина и АТФ (соединений, которые часто истощаются в мышцах, пораженных митохондриальными заболеваниями).

    Сканирование

    КТ и МРТ можно использовать для визуального осмотра мозга на предмет признаков повреждения, а поверхностные электроды, помещенные на кожу головы, можно использовать для записи активности мозга, называемой электроэнцефалограммой (ЭЭГ).

    Подобные методы можно использовать для исследования функций других органов и тканей тела.Например, электрокардиограмма (ЭКГ) может контролировать активность сердца, а анализ крови может обнаружить признаки нарушения функции почек.

    Наконец, генетический тест может определить, есть ли у кого-то генетическая мутация, вызывающая митохондриальные заболевания. В идеале тест проводится с использованием генетического материала, взятого из крови или из мышечной биопсии. Важно понимать, что, хотя положительный результат теста может подтвердить диагноз, отрицательный результат теста не обязательно является окончательным.

    Диагностические тесты при митохондриальных заболеваниях

    Тип Тест Что показывает

    Семейная история

    Клинический осмотр или устный анамнез членов семьи

    Иногда может указывать на образец наследования, отмечая «мягкие признаки» у здоровых родственников.К ним относятся глухота, низкий рост, мигренозные головные боли и ПЭО.

    Биопсия мышцы

    1. Гистохимия

    2. Иммуногистохимия

    3. Биохимия

    4. Электронная микроскопия

    1. Обнаруживает аномальную пролиферацию митохондрий и дефицит цитохром с оксидазы (ЦОГ, который является комплексом IV в цепи переноса электронов).

    2. Обнаруживает наличие или отсутствие определенных белков.Может исключить другие заболевания или подтвердить потерю белков транспортной цепи электронов.

    3. Измеряет активность определенных ферментов. Специальный тест, называемый полярографией, измеряет потребление кислорода митохондриями.

    4. Может подтвердить ненормальный вид митохондрий, хотя сегодня используется нечасто.

    Анализ ферментов крови

    1. Уровни лактата и пирувата

    2. Креатинкиназа сыворотки

    1.Если он повышен, это может указывать на недостаток в цепи переноса электронов; аномальные соотношения могут помочь идентифицировать заблокированную часть цепи.

    2. Может быть немного повышенным при митохондриальной болезни, но обычно высоким только в случае истощения митохондриальной ДНК.

    Генетический тест

    1. Известные мутации

    2. Редкие или неизвестные мутации

    1. Использует образец крови или мышцы для скрининга известных мутаций, сначала ища общие мутации.

    2. Может также искать редкие или неизвестные мутации, но может потребовать образцы от членов семьи; это дороже и требует много времени.

    Прочие испытания

    · Общий анализ крови

    · Креатинкиназа сыворотки (КК) и мочевая кислота

    · Трансаминазы сыворотки

    · Сывороточный альбумин

    · Лактат и пируват сыворотки

    · Соотношение лактат / пируват, если лактат в сыворотке повышен

    · Аминокислоты сыворотки (для повышенного аланина)

    · Ацилкарнитин в сыворотке крови (низкий уровень свободного карнитина и повышенное соотношение ацил / свободный карнитин свидетельствуют о нарушенном окислении жирных кислот)

    · 3-метилглютиконовая кислота в сыворотке крови и моче

    Эти тесты предложены в основанных на консенсусе экспертных рекомендациях по оценке и диагностике митохондриальных заболеваний, опубликованных в 2014 году. 2

    Ссылки
    1. Нардин, Р. А. и Джонс, Д. Р. Митохондриальная дисфункция и нервно-мышечные заболевания. Мышцы и нервы (2001). DOI: 10.1002 / 1097-4598 (200102) 24: 2 <170 :: AID-MUS30> 3.0.CO; 2-0
    2. Parikh, S. et al. Диагностика и лечение митохондриальных заболеваний: согласованное заявление Общества митохондриальной медицины. Генетика в медицине (2015). DOI: 10.1038 / гим.2014.177

    Молекулярная диагностика

  • Молекулярная диагностика патогенов

  • Возникающие болезни

    Возникающие болезни являются значительным бременем для мировой экономики и общественного здравоохранения

    Большинство возникающих болезней вызываются вирусами

    Большинство вирусов происходят из животные (зоонозы), и большинство из них происходят от диких животных

    Большинство появляющихся вирусов имеют геном РНК и способны к быстрой мутации и адаптации к новым хозяевам

  • Лабораторная диагностика вирусов

    Болезни

    Пять подходов:

    1.Идентификация вируса в клеточной культуре

    2. Идентификация под микроскопом непосредственно в образце

    3. Серологические процедуры для выявления повышения титра антител

    или наличия антител IgM

    4. Обнаружение вирусных антигенов в крови или организме жидкости

    5. Обнаружение вирусных нуклеиновых кислот в крови или клетках пациентов

  • Молекулярные методы

    Методы, основанные на обнаружении вирусного генома, также широко известны как молекулярные методы.

    Часто говорят, что молекулярные методы — это будущее направление вирусной диагностики

    .

    Однако на практике, хотя использование этих методов действительно растет, роль, которую играют молекулярные методы

    в рутинной диагностической вирусной лаборатории, все еще

    мала по сравнению с традиционными методами.

    Несомненно, что в ближайшем будущем роль молекулярных методов будет быстро возрастать.

  • Почему молекулярный тест?

    Традиционно вирусные инфекции диагностировали:

    дорогостоящих,

    трудоемких,

    высококвалифицированных,

    медленных.

    Серология часто бесполезна на ранних стадиях инфекции.

    Иногда бывает трудно получить специфическую антисыворотку для серологических тестов.

    Технология ПЦР улучшила обнаружение

    этих вирусов.

  • Зачем нужен молекулярный тест?

    Нужна точная и своевременная диагностика

    Важно для начала правильного лечения

    Важно для предотвращения распространения заразной болезни

  • Каковы недостатки

    с использованием молекулярного теста? Дорогой

    Настолько специфический, что до начала тестирования необходимы хорошие клинические данные, подтверждающие инфицирование этим организмом.

    Будет пропускать новые организмы, если не будет проведено секвенирование, как мы будем делать в лаборатории для молекулярных неизвестных (непрактично в клинических условиях).

    Может возникнуть проблема со смешанными культурами, поэтому необходимо провести анализ на все организмы, вызывающие инфекцию.

  • Объемы промышленных испытаний и

    Приложения 55% — Инфекционные заболевания

    23% — Скрининг крови

    13% — Генетическое тестирование

    7% — Рак

    .

    Laboratorio de Genmica Viral &

    Humana — Facultad de

    Medicina — Universidad

    Прогнозирование риска онкотипа. Раннее выявление — Fragile X.

    Классификация болезней Лейкемии. Терапевтическое приближение к предполагаемой цели.

    Прогнозирование токсичности и реакции Герцептина.

  • Структура вирусов

  • Классические молекулярные методы

    Дот-блот, Саузерн-блоттинг, гибридизация in situ являются примерами

    классических методов.Они зависят от использования

    специфичных ДНК / РНК-зондов для гибридизации.

    Специфичность реакции зависит от условий

    , используемых для гибридизации. Однако чувствительность этих методов

    не лучше, чем у традиционных методов диагностики вирусов

    .

    Однако, поскольку они обычно более утомительны и

    дороже, чем традиционные методы, они никогда не находили широкого распространения.

  • Прямое тестирование зонда

    Объединение гибридизации посредством комплементарного спаривания оснований.

    Может использоваться для идентификации.

    При гибридизации колонии колония обрабатывается для высвобождения нуклеиновой кислоты, которая затем денатурируется до одиночных цепей.

    Добавляется меченая одноцепочечная ДНК (зонд), уникальная для организма, на который вы тестируете, и разрешается гибридизация.

    Несвязанный зонд смывается, а наличие связанного зонда определяется по присутствию метки.

  • Прямое тестирование зонда

  • Требуемые помещения

    Минимальный BSL-2 (уровень биобезопасности 2) Объект Однонаправленный рабочий поток

    Чистая комната

    (нуклеиновая кислота не разрешена

    )

    0005 Нуклеиновая кислота

    Комната

    Амплификация

    и визуализация

    Комната

    Установка BSL3

    Минимальная установка BSL- 2 (уровень биобезопасности 2) Однонаправленная последовательность операций

  • Цепная реакция полимеразы (ПЦР)

    Полимеразная цепная реакция (ПЦР) метод молекулярного анализа

    пенггандаан ДНК секара in vitro энзим дан сепасанг праймер

    янь берсифат спесифик терхадап ДНК-мишень.

    Pertama kali dirumuskan oleh Kary Mullis pada tahun 1983, dan berkat jasa

    temuannya ini ia memperoleh хадия Нобелевский биданг kimia pada tahun 1993.

    Perkembangan dan aplikasi pada tahun 1993.

    Perkembangan dan aplikasi pada tahun. Энзим ДНК-полимераза ян умум

    дигунакан адалах Taq полимераза ян диизолази дари бактерии Thermus

    aquaticus.

    ПЦР digunakan secara rutin pada berbagai labratorium seperti di perguruan

    tinggi, lembaga riset, industrial farmasi, maupun labratorium klinik.

  • Hibridisasi Primer pada DNA Templat

  • Komponen Pereaksi PCR

    Pereaksi standard dalam PCR meliputi:

    Шаблон ДНК (1 пг 1 мг),

    (

    мг),

    (

    мг2) мМ),

    праймер (1 мМ),

    ДНК-полимераза (1 5 единиц),

    дан буфер (pH 8,3).

  • Proses PCR

  • Profil Suhu pada PCR

  • Процесс ПЦР

  • Экспоненциальная амплификация ПЦР

  • Визуализация PCR

    4 9275

    Обнаружение полос ДНК в агарозе 92750008 продукт

    из 142 пар оснований и

    98 пар оснований

    Гель-агароза

    Электрофорез

    использует электрическое поле, чтобы

    перемещать отрицательно заряженную ДНК

    к положительному электроду

    через матрицу

  • геля агарозы

    ОТ-ПЦР (обратная транскриптаза-ПЦР)

    ПЦР с обратной транскриптазой

    merupakan metode ampifikasi

    кДНК (комплементарная ДНК),

    yaitu DNA hasil proses

    transkripsi balik

    .

    Terdiri dari 2 tahap:

    1. Sintesis cDNA

    2. Amplifikasi dengan PCR

  • Блок-схема обнаружения и анализа вируса птичьего гриппа

  • Диагностические сайты 5 9000 HA4 гена 9000 HA4 9000 AI4 9000 bp

    1 1700

    H5aF H5aR H5bF H5bR

    275 689

    698

    1253

    1 2 3 4 — + M

    Фрагмент H5b 565 bp

    907

    9000 327

    сайт для гена NA

    AI 1

    550

    N1-R

    1165 1458

    N1-F

    M + — 1 2 3 4

    Продукт амплификации = 615 п.н.

  • Молекулярная диагностика

    Chikungunya Virus

    600 bp

    427 bp

    Молекулярная диагностика ChikV с использованием анализа RT-PCR, который усиливает фрагмент гена E2 длиной 427 п.н.

  • ПЦР в реальном времени

    Разработка традиционной ПЦР, которая позволяет в РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ контролировать амплификацию ДНК во время процесса амплификации.

    ПЦР в реальном времени или количественная ПЦР (qPCR).

    Амплификация ДНК основана на флуоресценции в качестве индикатора амплификации. Сигнал флуоресценции прямо пропорционален количеству продуктов ПЦР

  • Кривая амплификации ПЦР

  • Количественная оценка с помощью ПЦР в реальном времени

  • Корреляция CT с операцией

    Log

  • Мониторинг вирусной нагрузки

    вирусная ДНК или РНК стали стандартом лечения

    нескольких хронических вирусных инфекций:

    ВИЧ

    HBV

    HCV

    CMV

    Тестирование вирусной нагрузки ВИЧ является неотъемлемым компонентом управления ВИЧ-инфекцией.

    Это основной инструмент, используемый для мониторинга эффективности антиретровирусной терапии и выявления появления вирусной устойчивости.

    Вирусная нагрузка ВИЧ также позволяет прогнозировать прогрессирование заболевания и дает прогностическую информацию.

  • Мониторинг вирусной нагрузки HBV / HCV РНК HCV вирусные нагрузки используются для мониторинга ответа на

    комбинированную терапию интерфероном-а и рибавирином.

    Пациенты, которые остаются отрицательными по РНК ВГС через 6 месяцев после комбинированной терапии, обычно достигают стойкого вирусологического ответа

    Если РНК ВГС не обнаруживается после 12 недель терапии, вероятность устойчивого вирусологического ответа составляет 75%.

    У носителей HBV с активным заболеванием печени ВН определяет необходимость и эффективность противовирусной терапии интерфероном-а или ламивудином.

    .

  • Мониторинг вирусной нагрузки ЦМВ

    ЦМВ-инфекция опасна для костного мозга, реципиентов трансплантатов твердых органов и ВИЧ-инфицированных пациентов.

    Низкая чувствительность традиционных методов культивирования (и очень медленная).

    Тестирование VL в настоящее время является общепринятым стандартом для наблюдения за возникновением ЦМВ-инфекции во время иммуносупрессии.

    Позволяет превентивную терапию до появления клинического заболевания с высокой чувствительностью по сравнению с посевом.

  • Анализ последовательности

    гена нейраминидазы

    Замена

    Т в нуклеотиде 763 с изменением кодона CAC для 274H на TAC для

    274Y

    Необработанные следы секвенирования выявили присутствие второстепенной

    субпопуляции 274Y дикого типа.

  • Нагрузка вирусной РНК H5N1 от 8

    пациентов

  • Множественное выравнивание ДНК и

    последовательностей

    белков

  • Мультиплексная ПЦР

    Мультиплексная ПЦР o Множественные вирусы

    Респираторные инфекции

    могут вызывать одинаковый клинический синдром

    o Модификация ПЦР для быстрой диагностики

    d

  • Предимплантационная генетическая диагностика — Центр бесплодия Санкт-ПетербургаLouis

    ЧТО ТАКОЕ ПРЕДИМПЛАНТАЦИОННЫЙ ГЕНЕТИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ (PGD) ИЛИ СКРИНИНГ (PGS)?

    Большинство из примерно 25 000 генов в геноме человека были идентифицированы и их ДНК секвенированы. Молекулярный анализ генов становится проще и эффективнее. Как следствие, ПГД с ЭКО теперь может избавить пары от необходимости сталкиваться с трудностями при рождении детей практически с любыми генетическими дефектами, по которым они могут быть носителями рецессивной мутации, такой как кистозный фиброз, мышечная дистрофия, серповидно-клеточная анемия. анемия, болезнь Тея-Сакса, болезнь Гоше, умственная отсталость и др., которые беспокоят каждую беременную женщину. С помощью ПГД мы также можем лучше понять проблему повторного, раннего выкидыша и генетических ошибок, возникающих при беременности у пожилых матерей.

    PGD не следует толковать как создание «дизайнерских младенцев» — неправильный термин, используемый только прессой, а не врачами. Мы не могли манипулировать (даже если бы хотели) чертами или характеристиками потомства. Это просто выдумка. Все, что мы можем сделать, это устранить душераздирающие и разрушительные генетические заболевания, вызванные мутациями одного или обоих мужей и жен.Это генетическое тестирование можно было бы использовать для выбора пола, но мы не верим, что это законно, и не будем этого делать, хотя мы легко могли бы. Существует два разных типа PGD: либо для устранения родительских мутаций, либо для проверки количества хромосом (скрининг на анеуплоидии). Последний широко используется, но обычно больше вреден, чем полезен, по интересным причинам, которые я объясню позже. Первые, устраняющие мутации носителей генетических заболеваний, чрезвычайно эффективны и полезны.

    Рисунок 1: 8-ми клеточный эмбрион, готовый к биопсии (т.е. удалению одной клетки)

    ЧТО ТАКОЕ ЭМБРИОНАЛЬНАЯ БИОПСИЯ?

    Когда эмбрион достигает третьего дня развития, у него обычно восемь клеток. Одна или две из этих клеток, называемые «бластомерами», могут быть удалены из эмбриона с помощью техники микроманипуляции. Эмбрион обычно не поврежден и может развиваться так же, как если бы эта единственная клетка никогда не была удалена. Конечно, не всегда бывает так, что нет вреда. То же самое можно сделать с трофобластом эмбрионов 5-го дня.Затем вы можете подвергнуть эти клетки генетическому анализу и узнать хромосомный состав эмбрионов и наличие у них конкретной мутации, вызывающей заболевание. Как ни странно, это снижает частоту наступления беременности. Но он приносит большие деньги и часто используется ненадлежащим образом.

    Рис. 2: Удаление одной клетки для анализа ДНК

    ОСНОВНЫЕ ГЕНЕТИЧЕСКИЕ УРОКИ

    Тестирование ДНК и болезнь одного гена

    Это наиболее подходящее показание для ПГД. Все, что мы имеем физически, определяется примерно 25 000 генами, расположенными в нашей ДНК.Все ваше тело, поэтому даже биопсия бластопсии, в которой вы можете получить 5 клеток, очень часто будет содержать аномальные клетки, несмотря на то, что эмбрион на самом деле нормальный, состоит из многих тысяч различных белков, структура и ориентация которых определяют невероятный механизм вашего тела и мозга. Однако эти многие тысячи различных белков, в свою очередь, состоят всего из двадцати аминокислот. Разнообразие аминокислот, существование которых теоретически можно было ожидать, безгранично. Химики могут синтезировать многие тысячи из них.Однако живая природа состоит всего из двадцати определенных аминокислот, которые абсолютно одинаковы для всех живых существ на Земле. Различия между живыми существами заключаются в различиях в последовательностях этих двадцати аминокислот, которые составляют все различные белки, из которых они состоят. В свою очередь, эта последовательность аминокислот была определена последовательностью четырех основных букв, составляющих нашу ДНК. Весь геном человека состоит из 3 миллиардов пар оснований или «букв» ДНК.Определенный набор комбинаций из трех букв ДНК — это коды для каждой из двадцати аминокислот. Следовательно, порядок, в котором буквы ДНК встречаются на хромосоме, определяет последовательность аминокислот, а это, в свою очередь, определяет белки, которые определяют все в нашем организме. Единственная ошибка в аминокислотной последовательности любого белка может вызвать резкое изменение его структуры и серьезное генетическое заболевание, такое как кистозный фиброз или Tay Sachs. Эти ошибки в последовательности ДНК могут быть легко диагностированы с помощью процесса (выполняемого в пробирке, а затем на матричном чипе или с помощью процесса, называемого ПЦР), и это является основой PGD для генетического заболевания одного гена


    Хромосома Тестирование и скрининг на анеуплоидию

    Это тип ПГД, который часто не подходит, но пытается определить, какие эмбрионы с большей вероятностью забеременеют, а не выкидыши.Я объясню это ниже, а затем объясню, почему это обычно больше вредно, чем полезно. Все наши 6 миллиардов «букв» ДНК расположены на сорока шести хромосомах, которые свернуты спиралями внутри ядра каждой отдельной клетки вашего тела и разделены на двадцать три пары, двадцать две «аутосомные» пары и одну « пара хромосом «X» и «Y». Ребенок с двумя X-хромосомами будет девочкой, а ребенок с одной Y-хромосомой и одной X-хромосомой будет мальчиком.

    Чтобы произошло зачатие, 23 хромосомы из 46 набора мужа и 23 хромосомы из 46 набора жены должны встретиться в момент оплодотворения и превратиться в эмбрион с новым нормальным набором из 46 хромосом.Процесс, при котором примитивные сперматозоиды и примитивные яйцеклетки теряют половину своего числа хромосом, когда они становятся сперматозоидами и зрелыми яйцеклетками, готовыми к оплодотворению, называется «мейозом». Процесс старения яиц затрудняет им процесс мейоза, чем сперматозоидов. Вот почему яйцеклетки от пожилых женщин с меньшей вероятностью приведут к жизнеспособному эмбриону, и именно поэтому пожилые женщины более бесплодны, чем молодые женщины, и почему у пожилых женщин выше уровень выкидышей и детей с такими аномалиями, как синдром Дауна. .

    Если происходит ошибка в делении хромосом яйца и одна из пар хромосом не может разделиться, то яйцо будет иметь 24 хромосомы вместо 23. Например, при синдроме Дауна у эмбриона всего 47 хромосом. вместо 46, потому что у него три набора 21 хромосомы вместо обычных двух. Такой вид хромосомной ошибки, при которой одна из хромосом имеет три копии вместо правильных двух копий, называется «трисомией». Все эти хромосомные ошибки, включая трисомии, моносомы и различные комбинации, могут возникать практически в любой из хромосом, и эти ошибки, как группа, называются «анеуплоидией».Эти числовые хромосомные ошибки в клетке можно диагностировать путем подсчета цветовых сигналов на слайде с помощью процесса, называемого FISH. В настоящее время лучшими методами являются матричная CDH или количественная ПЦР.

    Большинство этих хромосомных дефектов, встречающихся в человеческих эмбрионах, являются летальными и приводят либо к невозможности имплантации эмбриона, либо к выкидышу. Только редкие хромосомные дефекты, такие как трисомия 21 или синдром Дауна, приводят к фактическому рождению аномального ребенка, и даже при трисомии 21 только 20% приводят к рождению ребенка.Никакие сведения об экстракорпоральном оплодотворении (ЭКО) или ИКСИ не увеличивают риск этих хромосомных аномалий.


    Критика и ограничения PGD

    Дефекты одного гена — это редкие генетические заболевания, такие как кистозный фиброз или болезнь Тай Сакса (их тысячи), которые возникают у потомков плодовитых пар, являющихся носителями, и диагностируются у ПЦР. ПГД для таких пар сегодня чрезвычайно точен, потому что для проверки можно проверить несколько последовательностей ДНК рядом с дефектным геном (связанные маркеры), а также саму мутацию.ПГД также очень точен при повторном невынашивании беременности, вызванном хромосомными транслокациями, носителями которых являются около 1,5% бесплодных пар.

    Тем не менее, PGD (называемый в Европе PGS) для рутинного скрининга на анеуплоидию во время ЭКО у бесплодных пар недавно подвергся серьезной критике в Европе из-за нескольких проспективных рандомизированных контрольных исследований в Голландии и Бельгии. PGS не продемонстрировала какого-либо улучшения клинических исходов ЭКО за начатый цикл у пожилых женщин, а также в отношении повторной неудачной имплантации.Фактически, это снижает частоту беременностей, и причина этого увлекательна с точки зрения понимания нашей специфической генетики человека.

    В европейских исследованиях даже более молодых бесплодных пар было обнаружено, что только 36% эмбрионов, подвергшихся PGD, являются хромосомно нормальными (при этом удаляются и проверяются два эмбриона, а не один). Когда эмбрионы, у которых на 3-й день была диагностирована хромосомная аномалия (и, следовательно, не были переданы пациенту), были повторно исследованы на 5-й день, только 54% ​​обнаружили эту аномалию.Было ясно показано, что частота ошибок для метода FISH составляет всего 5%. Следовательно, это 50% несоответствие, по-видимому, в основном связано с широким распространением мозаицизма эмбрионов. Это означает, что некоторые клетки у многих эмбрионов нормальные, а некоторые — ненормальные. Таким образом, около 50% человеческих эмбрионов в европейских исследованиях оказались мозаичными. Следовательно, использование PGS может привести к выбрасыванию хороших эмбрионов (диагностированных как аномальные) и переносу аномальных эмбрионов (диагностированных как нормальные).Удивительно, что все мы, то есть люди, «мозаики», имеем небольшое количество хромосомных аномальных клеток. Даже бластоциста, в которой можно получить 5 клеток, часто будет содержать аномальные клетки, несмотря на то, что на самом деле эмбрион нормальный.

    У нас обширный опыт работы с PGS и PGD, и мы можем посоветовать вам, подходит ли это для вашего конкретного цикла ЭКО. В общем, его лучше всего использовать для носителей болезни с одним геном, которые не хотят, чтобы у их потомства было такое заболевание, а также для повторного выкидыша.


    Обманчивая шумиха вокруг PGS или PGT-A при ЭКО

    Хотя генетическое тестирование эмбриона очень точно помогает исключить конкретное генетическое заболевание, носителем которого вы, возможно, являетесь, есть много отрицательных моментов для обычного «генетического тестирования». «Эмбрионы для подсчета хромосом, которые часто ошибочно рекомендуются пациентам ЭКО, что не помогает, а только навязывается им, чтобы клиника могла взимать больше денег, обманывая пациента, заставляя его ошибочно думать, что этот неточный тест является точным.Вы должны понимать, что существует разница между PGD, который является очень точным, и PGS или PGT-A, который может вводить в заблуждение.

    Мы были первыми, кто провел генетическое тестирование эмбрионов, наш первый зарегистрированный случай произошел в 1993 году. Таким образом, у нас есть большой опыт и знания в том, что стало новым увлечением вращением денег. Вы должны понимать разницу между PGS и PGD или PGT-A и PGD. ПГД означает, что муж или жена являются носителями генетической мутации, такой как кистозный фиброз, или серповидно-клеточная анемия, или мышечная дистрофия Хантингтона, или Марфанса, и т. Д., мы можем сделать микробиопсию эмбриона и проверить наличие таких мутаций, и вернуть матери только нормальные эмбрионы, не несущие этой мутации. Это очень точно и снимает большую часть обоснованного беспокойства. Мы успешно делаем это с 1993 года.

    Однако PGS или то, что иногда называют PGT-A, на самом деле не является генетическим тестированием для предотвращения генетического заболевания. Это просто «подсчет хромосом», чтобы попытаться выбрать эмбрион, который с наибольшей вероятностью приведет к успешной беременности.Проблема в том, что он очень неточный, с коэффициентом ошибок от 10 до 40 процентов. Причина такого высокого количества ошибок заключается в том, что у эмбрионов есть множество «клеток с нормальным количеством хромосом» и «клеток с аномальным количеством хромосом». Нормальные клетки перерастают аномальные, и область, которую мы можем безопасно провести биопсией (трофэктодерма), становится плацентой, которая прекрасно функционирует с «аномальными» клетками. Таким образом, можно считать эмбрион «ненормальным», который на самом деле был бы здоровым ребенком.Более того, часто бывает, что эмбрион, которому поставлен диагноз «нормальный», не приводит к беременности или выкидышу. Так что рутинное генетическое тестирование такого рода навязывается пациентам ЭКО только для того, чтобы заработать больше денег. И это, по иронии судьбы, скорее снижает, чем увеличивает вероятность успеха на яйцо или эмбрион. Фактически, 4 недавних исследования, одно из которых было проведено самым большим энтузиастом PGS, доктором Мунном, теперь признают, что оно не дает никаких преимуществ для увеличения количества беременностей или количества живых детей.

    Конечно, мы хорошо владеем этими методами и будем применять их, когда это необходимо и когда пациент этого требует.Но мы никого не навязываем, и наши результаты великолепны. Программы ЭКО, которые обычно настаивают на проведении так называемого и вводящего в заблуждение «генетического тестирования эмбрионов», и просто обманчиво заинтересованы только в том, чтобы заработать больше денег.

    Дополнительная информация:

    Преимплантационный генетический скрининг: какова клиническая эффективность?

    Улучшение ЭКО: есть ли предел нашей способности манипулировать биологией человека?

    Во всем мире живорожденные после переноса хромосомных «аномальных» эмбрионов после PGT / A: результаты всемирного интернет-исследования

    Влияние мозаичных эмбрионов на репродуктивную свободу и репродуктивную ответственность: время поставить инновационные технологии на «паузу»

    Преимплантационное генетическое тестирование морфологии анеуплоидных стихов как критерий отбора для переноса одного замороженного-размороженного эмбриона у пациентов с хорошим прогнозом: многоцентровое рандомизированное клиническое исследование

    «Влияние мозаичных эмбрионов на репродуктивную свободу и репродуктивную ответственность: время внедрить инновационные технологии» на «Пауза».

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *