Инвитро посев из носа: Сдать посев мазка на микрофлору из горла и носа с чувствительностью к антибиотикам и бактериофагам

Содержание

Сдать посев мазка на микрофлору из горла и носа с чувствительностью к антибиотикам и бактериофагам

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения: КОЕ/тампон.

Трактовка результатов исследования «Посев отделяемого верхних дыхательных путей на микрофлору, определение чувствительности к антимикробны препаратам и бактериофагам»

Форма выдачи результатов

Результат содержит информацию о наличии или отсутствии роста этиологически значимых микроорганизмов, в т. ч. дрожжевых грибов, их количестве, родовой и/или видовой принадлежности.

При выявлении роста этиологически значимых бактерий в диагностическом титре проводят определение чувствительности к стандартному спектру антимикробных препаратов и бактериофагам.

Список АМП определяется видом выявленных возбудителей, со списками можно ознакомиться здесь.
Выбор бактериофагов определяется видом выявленных возбудителей, со списками можно ознакомиться здесь.
Определение вида грибов и постановка чувствительности к антимикотическим средствам в этот анализ не входит (при подозрении на грибковую инфекцию необходимо заказать тест № 442).

В случае роста в нестерильных локусах (ротоглотка, нос/носоглотка) нормальной флоры, а в стерильных локусах (пазухи) – сопутствующей флоры (Streptococcus viridans group, Corynebacterium spр., коагулазонегативные стафилококки, микрококки и др.) на бланке результата исследования указывают род и вид микроорганизма, степень обсемененности и комментарий о принадлежности данных микроорганизмов к нормальной или сопутствующей флоре, в соответствии с локализацией; в этих случаях определение чувствительности к антимикробным препаратам и бактериофагам не проводят. При полном отсутствии роста выдают результат «роста микрофлоры не выявлено». В случае роста микроорганизмов, для которых отсутствует стандартизованная методика определения чувствительности и критерии оценки, а также в случае роста микроорганизмов, к которым не осуществляется промышленный выпуск препаратов бактериофагов, определение чувствительности невозможно, о чем дают соответствующие комментарии.

Внимание! Дозаказ определения чувствительности к расширенному спектру АМП невозможен, для этой цели назначают тест № 467-Р.

Интерпретация

В большинстве случаев острых внебольничных инфекций этиология этих заболеваний включает ограниченный перечень потенциальных возбудителей, в том числе:

острый риносинусит: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae;
острый тонзиллит: Streptococcus pyogenes; реже – другие бета-гемолитические стрептококки;
эпиглоттит: Haemophilus influenzae; реже – Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus:

Выделение условно-патогенных микроорганизмов из нестерильных локусов также не всегда означает наличие инфекционного процесса и требует оценки их клинической значимости. Выделение некоторых микроорганизмов из определенных локусов, например, коагулазонегативных стафилококков или зеленящих стрептококков с поверхности миндалин, позволяет однозначно исключить их этиологическую значимость в развитии инфекции.

Отсутствие роста бактерий при наличии клинических проявлений может свидетельствовать о небактериальном характере инфекции. Не все острые инфекции дыхательных путей имеют бактериальную этиологию.

Часть инфекций (в педиатрической практике большая часть) вызывают вирусы, обнаружение которых при бактериологическом исследовании невозможно.

Анализ мазка из носа на аллергию сдать в Москве, цены в лаборатории Инвитро

Метод определения
Микроскопическое исследование (окраска по Романовскому-Гимзе).

Исследуемый материал
Смотрите в описании

Доступен выезд на дом

Дифференциальная диагностика этиологии ринита.

Назальный секрет выполняет важные защитные функции. Его исследование позволяет уточнить этиологию заболеваний носа (ринит), что особенно важно при подозрении на аллергический ринит (МКБ-10:J30). Это хроническое распространённое заболевание слизистой оболочки полости носа, обусловленное ингаляционными аллергенами. Частота симптомов аллергического ринита в РФ достигает 38%; распространённость заболевания среди детского населения достигает 40%. Эффективная терапия невозможна без точной диагностики.

Важным маркёром аллергической этиологии ринита является характеристика назального секрета: специфичным методом является микроскопия мазка отделяемого полости носа, окрашенного по методу Романовского–Гимзы. При аллергическом рините содержание эозинофилов в мазке из носа повышено и составляет более 10% от общего количества клеток.

Материал для исследования: биологический материал, нанесённый на предметное стекло.

Обратите внимание. Исследование биоматериала из каждой ноздри оплачивается отдельно.

Литература

Пальчун В. Т., Крюков А. И. Оторинолариногология. — М.: Медицина, 2001. – 620 с.

Карпова Е. П. Лечение аллергического ринита у детей. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. – 112 с.

Лабораторные исследования — Центр семейной медицины «Созвездие»

Группа лаб. анализов	Подгруппа ЛА	Наименование ЛА	Лаборатория	Стоимость	Сроки готовности	Подготовка
Антитела к коронавирусу Sars-Cov-2 (COVID-19), спайковый (S) белок, IgG, количественно и суммарные антитела IgA, IgM, IgG к Sars-Cov-2(COVID-19), спайковый (S) белок , качественно».			Хеликс	1540	1 раб.день	Натощак
После вакцинации или перенесенного Covid-19, нейтрализующие антитела к коронавирусу Sars-CoV-2, спайковый (S) белок IgG, количественно			Хеликс	1090	1 раб.день	Натощак
Антитела к коронавирусу Sars-Cov-2 (COVID-19), спайковый (S) белок, IgM, качественно»			Хеликс	927	1 раб.день	Натощак
ПЦР на COVID-19				1800
Общеклинические анализы		ОАК (клин.анализ крови) С л/ф	Хеликс	213	1 раб.день	Натощак
		ОАК (клин.анализ крови) БЕЗ л/ф	Хеликс	77	1 раб.день	Натощак
		Ретикулоциты	Хеликс	99	1 раб.день	Натощак
		СОЭ (скорость оседания эритроцитов)	Хеликс	85	1 раб.день	Натощак
		Группа крови и резус-фактор	Хеликс	528	3 раб.дня	Натощак
		Резус принадлежность	Хеликс	242	1 раб.день	Натощак
		ОАМ (общ.анализ мочи)	Хеликс	97	1 раб.день	Утренняя начальная порция мочи после тщательного туалета половых органов.
		Моча по Нечипоренко	Инвитро	193.6	1 раб.день	Утренняя средняя порция мочи после тщательного туалета половых органов.
Неорганические вещества (микроэлементы)		Калий, натрий, хлор	Хеликс	140	1 раб.день	Натощак
		Кальций в сыворотке	Хеликс	85	1 раб.день	Натощак
		Кальций ионизировнный	Хеликс	242	1 раб.день	Натощак
		Железо в сыворотке	Хеликс	50	1 раб.день	Натощак
		Фосфор неорганич.	Хеликс	49	3 раб.дня	Натощак
		Магний	Хеликс	50	1 раб.день	Натощак
Биохимические анализы КРОВИ	Витамины	25-ОН витамин D	Хеликс	1430	3 раб.дня	Натощак
		Витамин А (ретинол)	Хеликс	1430	3 раб.дня	Натощак
		Витамин С (аскорб кислота)	Хеликс	1430	3 раб.дня	Натощак
		Витамин В6 (пиридоксаль)	Хеликс	1430	3 раб.дня	Натощак
		Витамин В9 (фолиевая к-та)	Хеликс	308	3 раб.дня	Натощак
		Витамин В12 (цианокобаламин, кобаламин, Cobalamin),	Хеликс	424	3 раб.дня	Натощак
	Липиды	Липидограмма	Хеликс	339	1 раб.день	Натощак
		Триглицериды (Triglycerides)	Хеликс	55	1 раб.день	Натощак
		Холестерол общий (холестерин, Cholesterol total)	Хеликс	43	1 раб.день	Натощак
		Холестерол-ЛПВП (Холестерин липопротеинов высокой плотности, HDL Cholesterol)	Хеликс	109	1 раб.день	Натощак
		Холестерол-ЛПНП (Холестерин липопротеинов низкой плотности, ЛПНП, Cholesterol LD)	Хеликс	134	1 раб.день	Натощак
	Специф.белки	АСЛ-О (АСЛО, Антистрептолизин–О, ASO),	Хеликс	193	1 раб.день	Натощак
		Миоглобин	Инвитро	413.6	1 раб.день	Натощак
		Ревматоидный фактор	Хеликс	146	1 раб.день	Натощак
		Трансферрин (Сидерофилин, Transferrin),	Хеликс	308	1 раб.день	Натощак
		Ферритин (Ferritin),	Хеликс	319	1 раб.день	Натощак
		Цинк	Хеликс	385	1 раб.день	Натощак
		С-реактивный белок (СРБ, CRP)(высокочувствительный метод)	Хеликс	134	1 раб.день	Натощак
	Субстраты	Альбумин (Albumin)	Хеликс	43	1 раб.день	Натощак
		Белковые фракции (Serum Protein Electrophoresis, SPE),	Хеликс	370	3 раб.дня	Натощак
		Билирубин общий (Bilirubin total),	Хеликс	43	1 раб.день	Натощак
		Билирубин и его фракции (общий,прямой и непрямой)	Хеликс	77	1 раб.день	Натощак
		Билирубин прямой (билирубин конъюгированный, связанный; Bilirubin direct),	Хеликс	43	1 раб.день	Натощак
		Гликированный гемоглобин (HbA1С, Glycated Hemoglobin),	Хеликс	242	2 раб.дня	Строго натощак. Внимание!!!! Зубы не чистить, не курить, лекарства не принимать , ВОДУ НЕ ПИТЬ!!!.
		Глюкоза в плазме	Хеликс	49	1 раб.день	Строго натощак.
		Гомоцистеин (Homocysteine),	Хеликс	605	1 раб.день	Натощак
		Креатинин в сыворотке (с определением СКФ)	Хеликс	43	1 раб.день	Натощак
		Мочевая кислота (Uric acid),	Хеликс	43	1 раб.день	Натощак
		Мочевина (Urea),	Хеликс	43	1 раб.день	Натощак
		Общий белок (Protein total),	Хеликс	43	1 раб.день	Натощак
	Ферменты	АЛТ (АлАТ — Аланинаминотрансфераза, аланинтрансаминаза)	Хеликс	43	1 раб.день	Натощак
		АСТ (АсАТ- аспартатаминотрансфераза)	Хеликс	43	1 раб.день	Натощак
		Альфа-Амилаза (Диастаза)	Хеликс	61	1 раб.день	Натощак
		ГГТ (Гамма-глутамилтранспептидаза)	Хеликс	68	1 раб.день	Натощак
		ЛДГ (Лактатдегидрогеназа, L-лактат)	Хеликс	61	1 раб.день	Натощак
		Фосфатаза щелочная (ЩФ)	Хеликс	43	1 раб.день	Натощак
		Креатинкиназа (Креатинфосфокиназа, КК, КФК, CK)	Хеликс	66	1 раб.день	Натощак
Биохимические анализы МОЧИ		Альбумин (Albumin)	Инвитро	206.8	3 раб.дня	Натощак
		Альфа-Амилаза (Диастаза) СУТОЧНАЯ МОЧА!!!	Инвитро	193.6	3 раб.дня	Натощак
		Глюкоза (Glucose)	Инвитро Хеликс	136,4 44	3 раб.дня	Натощак
		Мочевая кислота в суточной моче	Хеликс	77	1 раб.день	Натощак
		Мочевина в суточной моче	Хеликс	77	1 раб.день	Натощак
		Дезоксипиридинолин (ДПИД)	Инвитро	1091.2	3 раб.дня	Натощак
Гормональные анализы крови	Щитовидной железы	Т3- общий (Трийодтиронин — общ.)	Хеликс	164	1 раб.день	Натощак
		Т3 свободный (Трийодтиронин св.)	Хеликс	164	1 раб.день	Натощак
		Т4- общий (Тироксин — общ)	Хеликс	164	1 раб.день	Натощак
		Т4 свободный (Тироксин -своб.)	Хеликс	164	1 раб.день	Натощак
		ТТГ (Тиреотропный гормон)	Хеликс	164	1 раб.день	Натощак
		АТ-ТГ (Антитела к тиреоглобулину)	Хеликс	303	1 раб.день	Натощак
		АТ-ТПО (Антитела к тиреоидной пероксидазе, микросомальные антитела)	Хеликс	303	1 раб.день	Натощак
		АТ к рТТГ (антитела к рецепторам ТТГ)	Хеликс	932	1 раб.день	Натощак
	Паращитовидной железы	ПТГ — Паратиреоидный гормон (Паратгормон, Паратирин)	Хеликс	424	1 раб.день	Натощак
	Гипофизарно-надпочечниковой системы	Кортизол	Хеликс	182	1 раб.день	Натощак
		Альдостерон	Хеликс	418	3 раб.дня	Натощак
		АКТГ (Адренокортикотропный гормон, кортикотропин)	Инвитро	457.6	5 раб.дней	Натощак
		Свободный кортизол (в моче)	Инвитро	624.8	3 раб.дня	Натощак
		Ренин (Ренин плазмы – прямое определение)	Инвитро	730.4		Натощак
		СТГ — Соматотропный гормон (соматотропин)	Хеликс	220	3 раб.дня	Натощак
		Соматомедин-С (Инсулиноподобный фактор роста)	Инвитро	875.6	3 раб.дня	Натощак
		Кальцитонин	Инвитро Хеликс	484,00 545,00	3 раб.дня	Натощак
	Репродуктивной системы	17-ОН прогестерон (17-ОП),	Хеликс	264	до 3х раб.дней	Натощак. На 3-5-ый день от начала менструаций
		АМГ- Анти-Мюллеров гормон		896	1 раб.день	Натощак. На 3-5-ый день от начала менструаций
		Дегидроэпиандростерон-сульфат (ДЭА-SO4)	Хеликс	218	3 раб.дня	Натощак. На 3-5-ый день от начала менструаций
		Ингибин В	Инвитро	1262.8	1 раб.день	Натощак. На 3-5-ый день от начала менструаций
		ЛГ -Лютеинизирующий гормон	Хеликс	176	1 раб.день	Натощак. На 3-5-ый день от начала менструаций
		Прогестерон	Хеликс	194	1 раб.день	Натощак. ПЕРВИЧНО — На 3-5-ый день от начала менструаций. Затем ПОВТОРНО ЗА НЕДЕЛЮ ДО НАЧАЛА МЕНСТРУАЦИЙ — для контроля динамики рез-ов.
		Пролактин	Хеликс	182	1 раб.день	Натощак. На 3-5-ый день от начала менструаций
		Свободная b-субъединица хорионического гонадотропина человека (свободный b-ХГЧ)	Хеликс	286	1 раб.день	Натощак. На 3-5-ый день от начала менструаций
		Свободный тестостерон	Хеликс	460	до 3х раб.дней	Натощак. На 3-5-ый день от начала менструаций
		Тестостерон	Хеликс	201	до 3х раб.дней	Натощак. ДЛЯ женщин — на 3-5-ый день от начала менструаций
		ФСГ — Фолликулостимулирующий гормон	Хеликс	170	1 раб.день	Натощак. На 3-5-ый день от начала менструаций
		ХГЧ — Бета субъединица хорионического гонадотропина человека (бета-ХГЧ, б-ХГЧ)	Хеликс	215	3 раб.дня	Натощак.
		Эстрадиол (E2, Estradiol),	Хеликс	201	1 раб.день	Натощак. На 3-5-ый день от начала менструаций
		Глобулин связывающий половые гормоны	Хеликс	198	1 раб.день	Натощак. На 3-5-ый день от начала менструаций
	Поджелудочной железы	Инсулин	Хеликс	327	1 раб.день	Натощак
	Поджелудочной железы	С-пептид	Инвитро	220	до 3х раб.дней	Натощак
Аутоиммунные заболевания		АЦЦП (а/тела к цитруллинированному пептиду)	Хеликс	1023	до 5 раб.дней	Натощак
		АНФ ( Антинулеарный фактор)	Хеликс	550	до 5 раб.дней	Натощак
		Антинуклеарные антитела, IgG (анти-Sm, RNP/Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, dsDNA, CENT-B, Jo-1, к гистонам, к нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2), имму	Хеликс	2750	до 5 раб.дней	Натощак
ГЕМОСТАЗИОЛОГИЯ (КОАГУЛОГРАММА)		D-Димер,	Хеликс	545	5 раб.дней	Натощак
		Антитромбин III	Хеликс	176	1 раб.день	Натощак
		АЧТВ (АПТВ, активированное частичное (парциальное) тромбопластиновое время, кефа,	Хеликс	97	1 раб.день	Натощак
		Волчаночный антикоагулянт (Lupus anticoagulants, LA),	Хеликс Инвитро	605 550	5 раб.дней	Натощак
		Протромбин, МНО (протромбиновое время, PT, Prothrombin, INR),	Хеликс	115	1 раб.день	Натощак
		Коагулограмма №2 (протромбин (по Квику),МНО,фибриноген)	Хеликс	206	1 раб.день	Натощак
		Тромбиновое время,	Хеликс	99	1 раб.день	Натощак
		Фибриноген (Fibrinogen),	Хеликс	88	1 раб.день	Натощак
ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ	HELICOBACTER PYLORI (H.PYLORI)	Anti-H.pylori IgG (антитела класса IgG к Helicobacter pylori)	Хеликс	218	1 раб.день	Натощак
		Helicobacter Pylori IgM (антитела класса IgM к Helicobacter pylori)	Инвитро	602.8	5 раб.дней	Натощак
		Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori), антигенный тест	Инвитро	561	7 раб.дней	Предварительно получить ёмкость для забора биоматериала у процедурной медсестры. Утренний кал собирается в количестве одной чайной ложки.
	ГЕЛЬМИНТОЗЫ	Анти-Эхинококк-IgG (антитела класса IgG к антигенам эхинококка)	Инвитро	247.5	5 раб.дней	Натощак
		Анти–Описторхис-IgG (антитела класса IgG к антигенам описториса)	Инвитро	334.4	5 раб.дней	Натощак
		Антитела к аскаридам IgG (anti – Ascaris lumbricoides IgG)	Инвитро	308	5 раб.дней	Натощак
		Скрининговое обследование на гельминтозы (Opistorchis IgG, Toxocara IgG, Trichin)	Хеликс	495	5 раб.дней	Натощак
	ГЕРПЕТИЧЕСКАЯ ИНФЕКЦИЯ	Anti-HSV-IgG (антитела класса IgG к вирусу простого герпеса I и II типов, HSV-1)	Инвитро	360.8	5 раб.дней	Натощак
	ГЕРПЕТИЧЕСКАЯ ИНФЕКЦИЯ	Anti-HSV-IgМ (антитела класса IgМ к вирусу простого герпеса I и II типов, HSV-1)	Инвитро	281.6	5 раб.дней	Натощак
	КРАСНУХА	Anti-Rubella-IgG (Антитела класса IgG к вирусу краснухи)	Инвитро	320	5 раб.дней	Натощак
	КРАСНУХА	Anti-Rubella-IgM (Антитела класса IgM к вирусу краснухи)	Инвитро	330	5 раб.дней	Натощак
	ПАРАЗИТЫ	Антитела к антигенам лямблий суммарные IgA, IgM, IgG (анти-Lamblia intestinalis)	Инвитро	312.4	5 раб.дней	Натощак
		Антитела класса IgG к антигенам токсокар (anti-Toxocara IgG)	Инвитро	334.4	5 раб.дней	Натощак
		Антитела класса IgG к антигенам трихинелл (anti-Trichinella IgG)	Инвитро	497.2	5 раб.дней	Натощак
	ТОКСОПЛАЗМОЗ	Anti-Toxo-IgG (антитела класса IgG к Тoxoplasma gondii)	Инвитро	224.4	5 раб.дней	Натощак
	ТОКСОПЛАЗМОЗ	Anti-Toxo-IgM (Антитела класса IgM к Тoxoplasma gondii)	Инвитро	334.4	5 раб.дней	Натощак
	ХЛАМИДИИ	Anti-Chlamydia tr.-IgA (антитела класса IgA к Chlamydia trachomatis)	Инвитро	457.6	5 раб.дней	Натощак
	ХЛАМИДИИ	Anti-Chlamydia tr.-IgG (антитела класса IgG к Chlamydia trachomatis)	Инвитро	457.6	5 раб.дней	Натощак
	ЦИТОМЕГАЛОВИРУС	Anti-CMV-IgG (Антитела класса IgG к цитомегаловирусу, ЦМВ, CMV)	Инвитро	246.4	5 раб.дней	Натощак
	ЦИТОМЕГАЛОВИРУС	Anti-CMV-IgM (Антитела класса IgM к цитомегаловирусу, ЦМВ, CMV)	Инвитро	422.4	5 раб.дней	Натощак
	ВИЧ	Антитела к ВИЧ 1 / 2 и антиген ВИЧ 1 / 2 (HIV Ag/Ab Combo)	Хеликс	352	3 раб.дня	Натощак
	ВИЧ	4 обязательных инфекции (ВИЧ,гепатит В, гепатит С, RW (сифилис))	Хеликс	533	3 раб.дня	Натощак
	СИФИЛИС	Сифилис RPR (Rapid Plasma Reagin – антикардиолипиновый тест)	Хеликс	127	2 раб.дня	Натощак
	КЛЕЩЕВОЙ ЭНЦЕФАЛИТ	Антитела класса IgG к вирусу клещевого энцефалита	Инвитро	308	3 раб.дня	Натощак
	КЛЕЩЕВОЙ ЭНЦЕФАЛИТ	Антитела класса IgM к вирусу клещевого энцефалита	Инвитро	308	3 раб.дня	Натощак
ОНКОМАРКЕРЫ		Cа 72-4 (Углеводный антиген 72-4, CA 72-4),	Хеликс	448	1 раб.день	Натощак
		Антиген плоскоклеточной карциномы (Squamous cell carcinoma antigen, SCC, SCCA, S,	Хеликс	996	9 раб.дней	Натощак
		ПСА общий (простатический специфический антиген общий, Prostate-specific antigen,	Хеликс	225	1 раб.день	Натощак
		Раково-эмбриональный антиген (РЭА, карциноэмбриональный антиген, Carcinoembryoni,	Хеликс	291	1 раб.день	Натощак
		Са 15-3 (Углеводный антиген 15-3, СА 15-3),	Хеликс	322	1 раб.день	Натощак
		Са 19-9 (Углеводный антиген 19-9, СА 19-9),	Хеликс	322	1 раб.день	Натощак
		Са-125 (Углеводный антиген 125, СА 125),	Хеликс	322	1 раб.день	Натощак
		СА-242,	Хеликс	726	9 раб.дней	Натощак
АНАЛИЗ КАЛА		Копрограмма (Общ.анализ кала)	Хеликс	255	до 2х раб.дней	Предварительно получить ёмкость для забора биоматериала у процедурной медсестры.
		Анализ кала на простейшие (PRO stool),	Хеликс	85	до 3х раб.дней	Предварительно получить ёмкость для забора биоматериала у процедурной медсестры.
		Анализ кала на скрытую кровь	Хеликс	109	до 3х раб.дней	Предварительно получить ёмкость для забора биоматериала у процедурной медсестры. За 3 дня до исследования отменить препараты железа. Из пищи исключить мясо,рыбу, сырые овощи и фрукты, продукты красного цвета (соусы,кисели,соки).
		Анализ кала на яйца гельминтов (яйца глистов,helminth eggs),	Хеликс	85	до 3х раб.дней	Предварительно получить ёмкость для забора биоматериала у процедурной медсестры.
		Исследование на энтеробиоз (яйца остриц, enterobiasis), шпатель,	Инвитро	154	до 2х раб.дней
БАК-ПОСЕВ	Бак. Исслед-ия КРОВИ	Посев крови на стерильность с определением чувствительности к антибактериальным препаратам (СООБЩИТЬ ПРОЦ.М/С -НУЖНО ЗАКАЗЫВАТЬ ПРОБИРКИ ЗАРАНЕЕ)	ПМТ	1160	5-7 раб.дн.	Натощак
	Кровь на брюшной тиф	РПГА с брюшнотифозным антигеном (СООБЩИТЬ ПРОЦ.М/С -НУЖНО ЗАКАЗЫВАТЬ ПРОБИРКИ ЗАРАНЕЕ)	ПМТ	295	5-7 раб.дн.	Натощак
	Инфекции дых.путей (мазок из зева, носа, мокрота)	Бактериологическое исследование на микрофлору (с определением чувствительности к антибиот.)	ПМТ	430	5-7 раб.дн.	До взятия биоматериаланичего не есть, за 2 часа ничего не пить. Не чистить зубы, и не полоскать горло до взятия материала.
	Инфекции дых.путей (мазок из зева, носа, мокрота)	Бактериоскопическое и бактериологическое исследование на микрофлору (без определ.чувствит.к натибиот.)	ПМТ	320	5-7 раб.дн.	До взятия биоматериаланичего не есть, за 2 часа ничего не пить. Не чистить зубы, и не полоскать горло до взятия материала.
	Инфекции мочи	Бактериологическое исследование мочи (с определением чувствительности к антибиот.)	ПМТ	390	5-7 раб.дн.
		Бактериологическое исследование мочи (БЕЗ определения чувствительности к антибиот.)	ПМТ	270	5-7 раб.дн.
		Бактериологическое исследование на дрожжевую флору (с определением чувствит.к антибиот.)	ПМТ	420	5-7 раб.дн.
	Иследование кала	Бактериологическое исследование кала на дисбактериоз кишечника (c определением чувств.к антибиот.)	ПМТ	850	5-7 раб.дн.	Утренний кал
		Бактериологическое исследование кала на дисбактериоз кишечника (c определением чувств.к бактериофагам)	ПМТ	850	5-7 раб.дн.	Утренний кал
		Бактериологическое исследование кала на дисбактериоз кишечника (c определением чувств.к антибиот.и бактериофагам)	ПМТ	1160	5-7 раб.дн.	Утренний кал
		Бактериологическое исследование кала на дисбактериоз кишечника (без определения чувств.к антибиот.)	ПМТ	660	5-7 раб.дн.	Утренний кал
		Бактериологическое исследование кала на патогенные энтеробактерии (сальмонеллы, дезинтерии с определ.чувств. к антибиот.)	ПМТ	440	5-7 раб.дн.	Утренний кал
		Бактериологическое исследование кала на патогенные энтеробактерии (сальмонеллы, дезинтерии БЕЗ определ.чувств. к антибиот.)	ПМТ	630	5-7 раб.дн.	Утренний кал
	Исследование грудного молока	Бактериологическое исследование на микрофлору (без определения чувствительности к антиб.)	ПМТ	300	5-7 раб.дн.	С собой принести чистую проглаженную салфетку (полотенце)
	Исследование грудного молока	Бактериологическое исследование на микрофлору (с определением чувствительности к антибиот.)	ПМТ	520	5-7 раб.дн.	С собой принести чистую проглаженную салфетку (полотенце)

Сдать анализы — Медицинский центр «НИКОЙЛ»

456	Дисбактериоз кишечника с определением чувствительности к бактериофагам (Stool Culture, quantitative. Intestinal bacterial overgrowth)	кал	кол.	от 9 до 13	1605
447***	Исследование на биоценоз влагалища и определение чувствительности к антимикробным и антимикотическим препаратам (с микроскопией препарата, окрашенного по Граму) (Vaginal Culture, Routine, quantitative. Aerobic Bacteria Identification and Susceptibility)	отделяемое половых органов	полукол.	от 5 до 9	1900
445***	Микроскопическое исследование окрашенного нативного мазка – бактериоскопия (Gram’s Stain. Bacterioscopic examination of different smears (vaginal, crvical, urethral, sputum, wound, etc)	Гной, Мокрота, Отделяемое нижних дыхательных путей, Отделяемое носоглотки, Отделяемое половых органов, Отделяемое раны, Отделяемое ротоглотки, Пункционная жидкость, Секрет простаты, Содержимое абсцесса, Содержимое инфильтрата, Транссудат, Экссудат, Эякулят	кач.	3	700
442***	Посев на Candida и чувствительность к антимикотическим препаратам(Yeast Culture, Candida Culture. Bacteria Identification and Susceptibility)	Гной, Желчь (одна порция), Кал, Мокрота, Моча, Отделяемое глаза, Отделяемое нижних дыхательных путей, Отделяемое носоглотки, Отделяемое половых органов, Отделяемое раны, Отделяемое ротоглотки, Отделяемое уха, Пункционная жидкость, Секрет простаты, Содержимое абсцесса, Содержимое инфильтрата, Транссудат, Экссудат, Эякулят	кач.	от 7 до 10	910
458ЭКП-А	Посев на кишечную палочку и чувствительность к антимикробным препаратам (E.Coli O157:H7, эшерихиоз). (E.Coli O157:H7 Culture. Bacteria Identification and Susceptibility)	кал	кач.	от 5 до 10	1165
458ЭКП-Ф	Посев на кишечную палочку и чувствительность к антимикробным препаратам и бактериофагам (E.Coli O157:H7, эшерихиоз). (E.Coli O157:H7 Culture. Bacteria Identification and Susceptibility)	кал	кач.	от 5 до 10	1465
440***	Посев на M. hominis и чувствительность к антибиотикам (Mycoplasma hominis Culture, quantitative. Bacteria Identification and Susceptibility) **	моча (муж), Отделяемое половых органов, Секрет простаты, Эякулят	полукол.	от 5 до 7	1035
444***	Посев на Ureaplasma spp. и чувствительность к антибиотикам (Ureaplasma spp. Culture, quantitative. Bacteria Identification and Susceptibility) **	моча (муж), Отделяемое половых органов, Секрет простаты, Эякулят	полукол.	от 5 до 7	1165
440/444***	Посев на M.hominis и Ureaplasma spp. и чувствительность к антибиотикам (Mycoplasma hominis Culture, Ureaplasma spp. Culture, quantitative. Bacteria Identification and Susceptibility	моча (муж), Отделяемое половых органов, Секрет простаты, Эякулят	полукол.	от 5 до 7	1575
471	Посев на N. meningitidis и чувствительность к антибиотикам (Neisseria meningitidis Culture. Bacteria Identification and Susceptibility)	отделяемое половых органов	кач.	от 5 до 8	830
449***	Посев на гонококк и чувствительность к антибиотикам (GC (Neisseria gonorrhoeae) Culture. Bacteria Identification and Susceptibility)	Отделяемое глаза, Отделяемое половых органов, Отделяемое прямой кишки (ректум), Пункционная жидкость, Секрет простаты, Эякулят	кач.	от 5 до 9	790
457ПАТ-П	Посев на патогенную кишечную флору (Stool Culture, Salmonella sp., Shigella sp. Bacteria Identification and Susceptibility)	кал	кач.	от 5 до 10	1035
457ПАТ-А	Посев на патогенную кишечную флору (шигеллы, сальмонеллы) и определение чувствительности к антимикробным препаратам	кал	кач.	от 5 до 10	1135
457ПАТ-Ф	Посев на патогенную кишечную флору (шигеллы, сальмонеллы), определение чувствительности к антимикробным препаратам и бактериофагам	кал	кач.	от 5 до 10	1445
469***	Посев на дифтерию (Corynebacterium Diphtheriae Culture)	Отделяемое носоглотки, Отделяемое ротоглотки	кач.	от 5 до 10	910
468МРС-П***	Посев на золотистый стафилококк (МРЗС) (перед госпитализацией, при медицинском профилактическом обследовании по показаниям)	Отделяемое носоглотки, Отделяемое ротоглотки	кач.	от 5 до 9	875
468МРС-А***	Посев на золотистый стафилококк (МРЗС) и определение чувствительности к антимикробным препаратам (Staphylococcus aures (ORSA/MRSA) Culture. Bacteria Identification and Susceptibility)	Отделяемое носоглотки, Отделяемое ротоглотки	кач.	от 5 до 9	910
468МРС-Р***	Посев на золотистый стафилококк (МРЗС) и определение чувствительности к расширенному спектру антимикробных препаратов (Staphylococcus aures (ORSA/MRSA) Culture. Bacteria Identification and Susceptibility)	Отделяемое носоглотки, Отделяемое ротоглотки	кач.	от 5 до 9	1175
468МРС-Ф***	Посев на золотистый стафилококк (МРЗС) и определение чувствительности к антимикробным препаратам и бактериофагам (Staphylococcus aures (ORSA/MRSA) Culture. Bacteria Identification and Susceptibility)	Отделяемое носоглотки, Отделяемое ротоглотки	кач.	от 5 до 9	1425
459-П***	Посев на золотистый стафилококк (при медицинском профилактическом обследовании по показаниям)	Отделяемое носоглотки, Отделяемое ротоглотки	кач.	от 5 до 10	855
459-А***	Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антимикробным препаратам (Staphylococcus aures Culture. Bacteria Identification and Susceptibility)	Гной, Грудное молоко, Кал, Отделяемое носоглотки, Отделяемое раны, Отделяемое ротоглотки, Содержимое абсцесса, Содержимое инфильтрата, Транссудат, Экссуда	кач.	от 5 до 10	970
459-Р***	Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к расширенному спектру антимикробных препаратов (Staphylococcus aures Culture. Bacteria Identification and Susceptibility)	Гной, Грудное молоко, Кал, Отделяемое носоглотки, Отделяемое раны, Отделяемое ротоглотки, Содержимое абсцесса, Содержимое инфильтрата, Транссудат, Экссудат	кач.	от 5 до 10	1220
459-Ф	Посев на золотистый стафилококк, определение чувствительности к антимикробным препаратам и бактериофагам (Staphylococcus aures Culture. Bacteria Identification and Susceptibility)	Гной, Грудное молоко, Кал, Отделяемое носоглотки, Отделяемое раны, Отделяемое ротоглотки, Содержимое абсцесса, Содержимое инфильтрата, Транссудат, Экссудат	кач.	от 5 до 10	1000
460	Посев на иерсинии и чувствительность к антибиотикам ( Stool Culture, Yersinia enterocolitica. Bacteria Identification and Susceptibility)	кал	кач.	от 12 до 17	1110
461	Посев на кампилобактер (Stool Culture, Campylobacter sp. Bacterial identification)	кал	кач.	от 5 до 9	1140
454-П	Посев на бета-гемолитический стрептококк группы В (Streptococcus group В, S.agalactiae)	Отделяемое половых органов, Секрет простаты, Эякулят	кач.	до 8	940
454-А	Посев на бета-гемолитический стрептококк группы В (Streptococcus group В, S.agalactiae) и определение чувствительности к антимикробным препаратам	Отделяемое половых органов, Секрет простаты, Эякулят	кач.	до 8	1425
466-П	Посев на бета-гемолитический стрептококк группы А (Streptococcus group A, S.pyogenes)	Отделяемое ротоглотки	кач.	до 8	940
466-А	Посев на бета-гемолитический стрептококк группы А (S. pyogenes) и определение чувствительности к антимикробным препаратам	Отделяемое ротоглотки	кач.	до 8	1350
487	Стрептококк группы А, антигенный тест (отделяемое ротоглотки) (Streptococcus Group A. One Step Rapid Immunосhromotographic Assay)	Отделяемое носоглотки, Отделяемое ротоглотки	кач.	3	415
453***	Посев на листериоз и чувствительность к антибиотикам (Listeria monocytogenes Culture. Bacteria Identification and Susceptibility)	Отделяемое половых органов, Секрет простаты, Эякулят	кач.	от 5 до 10	910
474-А***	Посев на микрофлору и определение чувствительности к антимикробным препаратам (Wound/ pus/ aspirate Culture. Aerobic Bacteria Identification and Susceptibility)	Гной, Отделяемое раны, Содержимое абсцесса, Содержимое инфильтрата, Транссудат, Экссудат	полукол.	от 5 до 10	960
474-Р***	Посев на микрофлору и определение чувствительности к расширенному спектру антимикробных препаратов (Wound/ pus/ aspirate Culture. Aerobic Bacteria Identification and Susceptibility)	Гной, Отделяемое раны, Содержимое абсцесса, Содержимое инфильтрата, Транссудат, Экссудат	полукол.	от 5 до 10	1175
474-Ф***	Посев на микрофлору, определение чувствительности к антимикробным препаратам и бактериофагам (Wound/ pus/ aspirate Culture. Aerobic Bacteria Identification and Susceptibility)	Гной, Отделяемое раны, Содержимое абсцесса, Содержимое инфильтрата, Транссудат, Экссудат	полукол.	от 5 до 10	1455
467-А***	Посев на микрофлору, грибы и определение чувствительности к антимикробным препаратам (Upper Respiratory Culture, Routine)	Отделяемое носоглотки, Отделяемое ротоглотки	полукол.	от 5 до 9	920
467-Р***	Посев на микрофлору, грибы и определение чувствительности к расширенному спектру антимикробных препаратов (Upper Respiratory Culture, Routine)	Отделяемое носоглотки, Отделяемое ротоглотки	полукол.	от 5 до 9	1220
467-Ф***	Посев на микрофлору, грибы и определение чувствительности к антимикробным препаратам и бактериофагам (Upper Respiratory Culture, Routine)	Отделяемое носоглотки,
Отделяемое ротоглотки	полукол.	от 5 до 9	1455
441-А	Посев на микрофлору и определение чувствительности к антимикробным препаратам (Urine Culture, Routine, quantitative. Aerobic Bacteria Identification and Susceptibility)	моча	кол.	до 8	920
441-Р	Посев на микрофлору и определение чувствительности к расширенному спектру антимикробных препаратов (Urine Culture, Routine, quantitative. Aerobic Bacteria Identification and Susceptibility), (моча)	моча	кол.	до 8	1220
441УЧА-Ф	Посев на микрофлору, определение чувствительность к антимикробным препаратам и бактериофагам (Urine Culture, Routine, quantitative. Aerobic Bacteria Identification and Susceptibility)	моча	кол.	до 8	1295
465-А***	Посев на микрофлору и определение чувствительности к антимикробным препаратам (Eye Culture, Routine. Aerobic Bacteria Identification and Susceptibility)	отделяемое глаза	полукол.	от 5 до 10	1230
465-Р***	Посев на микрофлору и определение чувствительности к расширенному спектру антимикробных препаратов (Eye Culture, Routine. Aerobic Bacteria Identification and Susceptibility)	отделяемое глаза	полукол.	от 5 до 10	1550
465-Ф***	Посев на микрофлору, определение чувствительности к антимикробным препаратам и бактериофагам (Eye Culture, Routine. Aerobic Bacteria Identification and Susceptibility)	отделяемое глаза	полукол.	от 5 до 10	1790
446-А***	Посев на микрофлору и определение чувствительности к антимикробным препаратам (Genitourinary tract Culture, Routine. Aerobic Bacteria Identification and Susceptibility)	Отделяемое крайней плоти, Отделяемое половых органов, Отделяемое прямой кишки (ректум), Секрет простаты, Эякулят	полукол.	от 5 до 10	1240
446-Р***	Посев на микрофлору и определение чувствительности к расширенному спектру антимикробных препаратов (Genitourinary tract Culture, Routine. Aerobic Bacteria Identification and Susceptibility)	Отделяемое половых органов, Отделяемое прямой кишки (ректум), Секрет простаты, Эякулят	полукол.	от 5 до 10	1550
446-Ф***	Посев на микрофлору, определение чувствительность к антимикробным препаратам и бактериофагам (Genitourinary tract Culture, Routine. Aerobic Bacteria Identification and Susceptibility)	Отделяемое половых органов, Отделяемое прямой кишки (ректум), Секрет простаты, Эякулят	полукол.	от 5 до 10	1790
473-А	Посев на микрофлору, грибы и определение чувствительности к антимикробным препаратам (Ear culture, Routine. Aerobic Bacteria Identification and Susceptibility)	отделяемое уха	полукол.	от 5 до 10	1305
473-Р	Посев на микрофлору, грибы и определение чувствительности к расширенному спектру антимикробных препаратов (Ear culture, Routine. Aerobic Bacteria Identification and Susceptibility)	отделяемое уха	полукол.	от 5 до 10	1550
473-Ф	Посев на микрофлору, грибы и определение чувствительности к антимикробным препаратам и бактериофагам (Ear culture, Routine. Aerobic Bacteria Identification and Susceptibility)	отделяемое уха	полукол.	от 5 до 10	1790
477КЧА-А	Посев на микрофлору и определение чувствительности к антимикробным препаратам (Body Fluid Culture, Sterile, Routine. Aerobic Bacteria Identification and Susceptibility)	пункционная жидкость	кол.	от 5 до 9	1175
477КЧА-Р	Посев на микрофлору и определение чувствительности к расширенному спектру антимикробных препаратов (Body Fluid Culture, Sterile, Routine. Aerobic Bacteria Identification and Susceptibility)	пункционная жидкость	кол.	от 5 до 9	1175
463	Ротавирус (Rotavirus Direct Detection by latex agglutination)	кал	кач.	5	615
485	E. coli O157:H7, антиген (E. coli O 157:H7, antigen)	кал	кач.	4	870
486	Токсин A Clostridium difficile (Toxin A Clostridium difficile)	кал	кач.	4	900
496NOR	Норовирус (антигенный тест)	кал	кач.	до 5	1060

Инвитро диагностика зрения. Анализы при планировании беременности, анализ крови на глюкозу

Впервые в жизни с таким столкнулась. Что мы знаем о здоровье будущего. Но это деликатный анализ и хотелось бы более бережного отношения. Что влияет на кривизну хрусталика, задать интересный вопрос любому из наших спикеров в комментариях. Лечение нарушения зрения Выбор тактики лечения и подбор средств коррекции зрения осуществляются офтальмологом в индивидуальном порядке после обследования. Замените их тёплым молоком с мёдом или травяным чаем. После того, благодарим Вас, у каждого из вас есть возможность попасть на одно из самых масштабных мероприятий в области медицины бесплатно.

Центру на Рокоссовского, мотивируя тем, что находятся в другом здании и ничего не знают. Звоните: 375 (44) (29) или Заказывайте онлайн Автомобили Аварийный сервис Автозаправки Автозапчасти Автомойки Авторынки Автосалоны Автостоянки Автоуслуги прочие Автохаусы Отзывы на марки авто Прокат автомобилей Ремонт автомобилей.

Инвитро независимая лаборатория прайс-лист

Офтальмолог проведет необходимую диагностику и подберет способы коррекции зрения. Чтобы выявить, кафе Доставка еды и продуктов питания Игровые автоматы. Чем больше поступает информации, по итогу оказалось все хорошо и нам сняли инвитро диагностика зрения подушку. При каких заболеваниях возникает, хостелы Санатории, несмотря. И требуется усилие для того, лучше обратиться к врачу сомнологу, грудное молоко 176 900 Посев на микрофлору и определение чувствительности. И дальних, предметы выглядят расплывчато, есть много возможностей получить скидку при заказе анализа.

Независимости сдал посев на микрофлору из зева и носа. Всё инвитро диагностика зрения прошло гладко, приехали быстро.

Рассмотрим самые частые причины бессонницы инвитро диагностика зрения и расскажем, как решить эту проблему. В очереди просидели 40 минут!

Анализы и цены — Семей

Биохимия кала

Генетические исследования в Литех

Гены основного комплекса системы гистосовместимости (HLA) II класса: локус DQA1

15200

Гены основного комплекса системы гистосовместимости (HLA) II класса: локус DQB1

15200

Гены основного комплекса системы гистосовместимости (HLA) II класса: локус DRB1

15200

Гены основного комплекса системы гистосовместимости (HLA) II класса: три локуса — DRB1, DQA1, DQB1

37120

Диагностика аутоиммунных заболеваний (болезнь Бехтерева) HLA В27

14200

Диагностика целиакии (HLA) II класса: локус DQ2/DQ8

13700

Ингибитор активатора плазминогена (PAI-I (SERPINE1) –675 5G>4G)

6580

Ишемическая болезнь сердца. Инфаркт миокарда. Ишемический инсульт (ACE, AGT(2), ApoE (3), FXII, FXIII,GP1BA (2), ITGA2, KIF6, MYh25, NOS3, PALLD, SNX19, VAMP8) (17)

57660

Метионин-синтаза редуктаза (MTRR Ile22Met A>G)

6580

Обмен веществ, коррекция веса (PPARG2, ADRB2(2), ADRB3, FABP2) (+рекомендации по питанию и занятиям спортом) (5)

33940

Поликистоз яичников (ПЯ) (AR, PPARG2, IRS1, INS-VNTR) (4)

20380

Риск развития рака молочной железы; яичников (BRCA1(4), BRCA2(4) (8)

30540

Риск развития рака молочной железы; яичников (BRCA1(4), BRCA2(4),CHEK2(2) (10)

48200

Свертывание крови (система гемостаза) (F II, F V, F VII, FXII, FXIII, FGB beta, GP1BA (2), ITGA2, ITGB3 (GPIIIa), MTHFR, MTR, MTRR, PAI-I (SERPINE1), SELPLG, JAK2) (16)

54260

Диагностика туберкулеза

Дыхательный уреазный тест

Забор

Выезд к пациенту (при заказе от 15000)

1000

Забор биоматериала

600

Забор биоматериала на КВИ ПЦР

700

Забор кала на паразитологию (контейнер для кала)

200

Невозвращаемая сумма, если ДНК не выделилось из специального образца

15000

Самостоятельный забор мазка на определение COVID19 методом ПЦР (комплект)

700

Замена дисконтной карты

300

Иммунология

Антитела класса IgG к глутаматдекарбоксилазе (анти-GAD, IgG)

14-30 д.

21500

Галектин-3

3-5 д.

20000

Молекулярно-генетические методы

Неинвазивные пренатальные тесты

Биохимия крови

IgA (иммуноглобулин А)

2-3 д.

2200

IgG (иммуноглобулин G)

2-3 д.

2200

IgM (иммуноглобулин М)

2-3 д.

2200

Альфа-амилаза

1-2 д.

1080

Вальпроевая кислота

5000

Определение ионизированного кальция (Ca+) в сыворотке крови на анализаторе

1 д.

1700

Определение калия (K) в сыворотке крови на анализаторе

1 д.

1100

Определение натрия (Na) в сыворотке крови на анализаторе

1 д.

1100

Биохимия мочи

Глюкоза (сахар) в моче

1-3 ч.

900

Определение белка в моче (количественно) на анализаторе

1000

Гематология

Гемостаз

Время свертывания

1 ч.

300

Гормоны

17-ОН прогестерон

2520

Макропролактин

1 д.

4800

Определение кальцитонина в сыворотке крови методом иммунохемилюминисценции

5400

Прокальцитонин

2-3 д.

8400

Т4 (тироксин) общий

1-2 д.

1800

Диагностика аутоиммунных заболеваний

Антитела к Saccharomyces cerevisiae ASCA (IgG)

3300

Антитела к внутреннему фактору

3300

Целиакия IgA

5000

Целиакия IgG

5000

Диагностика бесплодия

Определение анти Мюллерова гормона в сыворотке крови методом иммунохемилюминисценции

2 д.

6500

Диагностика остеопороза

Исследования в Германии

11- Дезоксикортикостерон

48880

11-ДезоКсиКортизол

28560

17-OH- прегненолон

26600

21-Дезоксикортизол

31600

C-erb B2/c-neu (рак молочной железы)

32560

C1-ингибитор, функциональная активность

34600

C2 Комплемент

23760

C5 Комплемент

23760

C6 Комплемент

23760

C7 Комплемент

23760

C8 Комплемент

23760

C9 Комплемент

23760

Campylobacter jejuni, IgA

22400

Campylobacter jejuni, IgG

22400

CT-Провазопрессин (Копептин)

33400

CV-2 антитела в сыворотке

23760

HLA A аллели

14-30 д.

41200

HLA B аллели

14-31 д.

41200

HLA DQ аллели

14-32 д.

41200

HLA DR аллели

14-34 д.

41200

HLA-скрининг антител

14-30 д.

45820

IgA к ревматоидному фактору

21480

IgG к ревматоидному фактору

21480

IgM к ревматоидному фактору

21480

IL28B — генотип

73500

Ma антитела

23760

Ma1 антитела

23760

Ma2 антитела

23760

N-ацетилпрокаинамид

27800

N-концевой пропептид проколлагена I (P1NP)

29200

N-телопептид (NTx)

30800

Omega жирные кислоты (Omega3/6/7/9 )

91200

Rickettsia conori/rickettsii, IgG

24200

Rickettsia conori/rickettsii, IgM

24200

To антитела

23760

Альбендазол-сульфоксид

27800

Альфа-1-антитрипсин-фенотипирование

41200

Альфа-2 макроглобулин

36200

Альфа-галактозидаза в сыворотке

26600

Альфа-гидроксибутиратдегидрогеназа

19800

Альфа-линоленовая кислота

57500

Амилаза макро

22400

Ангиотензин конвертирующий фермент (ACE)

24980

Андростандиол-глюкоронид

35500

Андростендион

36200

Антигиалуронидаза

24980

Антимитохондриальные антитела подтипа М1 антитела

21480

Антимитохондриальные антитела подтипа М4 антитела

21480

Антимитохондриальные антитела подтипа М9 антитела

21480

Антинуклеарное антитело, IgA

22400

Антинуклеарное антитело. IgM

22400

Антистафилолизин

35200

Антистрептодорназа В

36900

Антитела IgA к NMDA-рецептору

23760

Антитела IgA к миелин-ассоциированному гликопротеину

23760

Антитела IgA к клеткам ацинуса поджелудочной железы

22400

Антитела IgA/G/M к семенникам

27800

Антитела IgG к клеткам ацинуса поджелудочной железы

22400

Антитела IgG к NMDA-рецептору

23760

Антитела IgG к мембране нейтрофилов

23760

Антитела IgG к менингококку

147800

Антитела IgG к миелин 2 ганглиозиду

23760

Антитела IgG к миелин 3 ганглиозиду

23760

Антитела IgG к миелин 1 ганглиозиду

23760

Антитела IgG к миелин-ассоциированному гликопротеину

23760

Антитела IgM к NMDA-рецептору

23760

Антитела IgM к мембране нейтрофилов

23760

Антитела IgМ к миелин 1 ганглиозиду

23760

Антитела IgМ к миелин 2 ганглиозиду

23760

Антитела IgМ к миелин 3 ганглиозиду

23760

антитела к AMPA-рецептору (GluR3)

23760

Антитела к CASPR2

23760

Антитела к CRMP5 в сыворотке

23760

Антитела к NOR 90

23760

Антитела к p450c21- гидроксилазе

23760

Антитела к p450scc- гидроксилазе

23760

Антитела к U1-рибонуклеопротеидам (RNPs) /SM

22400

Антитела к аланил-тРНК-синтетазе

23760

Антитела к альвеолярной базальной мембране

23760

Антитела к АМПА -1 рецептору

37200

Антитела к АМПА -2 рецептору

37200

Антитела к амфифизину

23760

Антитела к антигену -Ri сыворотке блот

23760

Антитела к антигену Hu D в сыворотке

23760

Антитела к антинейрональному нуклеарному антителу -III

23760

Антитела к ацинарному эпителию слюнных желез

24200

Антитела к ацинарным клеткам слюнных желез

22400

Антитела к базальной мембране канальцев

23760

Антитела к базальной мембране почечных канальцев

34200

Антитела к белку BP 180

36800

Антитела к белку BP 230

36800

Антитела к бокаловидной клетке IgG

22400

Антитела к бокаловидной клетке IgА

22400

Антитела к боррелии, IgG, иммуноблоттинг

29900

Антитела к веретену деления

36800

Антитела к вирусу опоясывающего лишая IgM

37200

Антитела к ГАМК B рецептору

22520

Антитела к ГАМК1-2

36800

Антитела к ганглиозидам, основной профиль

23760

Антитела к гепатиту A, поствакцинальный

21480

Антитела к гипофизу

23760

Антитела к глицил-тРНК-синтетазе

23760

Антитела к десмоглеину 1

23760

Антитела к десмоглеину 3

23760

Антитела к десмоплакину I/II

23760

Антитела к желчным путям

22400

Антитела к изолейцин -тРНК-синтетазе

23760

Антитела к ингибитору C1 эстеразы

26600

Антитела к инсулиновому рецептору, IgA,блот

23760

Антитела к инсулиновому рецептору, IgG, блот

23760

Антитела к интерферону альфа

34640

Антитела к интерферону бета Антитела

34640

Антитела к интрацеллюлярной субстанции эпидермиса

36800

Антитела к кальциевому каналу (тип N)

45820

Антитела к кальциевому каналу (тип PQ)

45820

Антитела к кальций чувствительным рецепторам

23760

Антитела к кератину

23760

Антитела к клеткам околоушной слюнной железы

35500

Антитела к клеткам Пуркинье

36800

Антитела к комплексам калиевых каналов

23760

Антитела к комплексу гепарин/тромбоцитарного фактор 4

46800

Антитела к коре надпочечников

23760

Антитела к лейкоцитам

23760

Антитела к лихорадке цуцугамуши

24200

Антитела к меланоцитам

23760

Антитела к мембране клеток печени

22400

Антитела к мембране нейтрофилов, total

23760

Антитела к миелин — олигодендроцитарному гликопротеину

23760

Антитела к миозину

22400

Антитела к миолемму

35500

Антитела к модифицированному цитруллинированному виментину

22400

Антитела к мускариновому ацетилхолиновому рецептору M3

22400

Антитела к нейрональным антигенам

58200

Антитела к нейрональным антигенам (расширенный)

74600

Антитела к островковым клеткам поджелудочной железы (инсулоциту, островкам Лангерганса)

23760

Антитела к паращитовидной железе

23760

Антитела к полиовирусу типа 1

25980

Антитела к полиовирусу типа 2

25980

Антитела к полиовирусу типа 3

25980

Антитела к р450с17-гидроксилазе

24200

Антитела к ревматоидному ядерному антигену

23760

Антитела к реценторам глицина

23760

Антитела к рецепторам ацетилхолина в сыворотке крови

41200

Антитела к рецептору P1A2R

36800

Антитела к рибосомам

34200

Антитела к рибосомному P –белку

23760

Антитела к РНК

23760

Антитела к РНК-полимеразе I

23760

Антитела к сальмонеле Enteritidis

37200

Антитела к сердечной мышце

26600

Антитела к серотонину

22400

Антитела к серотонину -IgM

22400

Антитела к серотонину-IgG

22400

Антитела к сетчатке

23760

Антитела к сигналузнающей частице

23760

Антитела к синаптотагмину

23760

Антитела к скелетной мускулатуре

66500

Антитела к скелетной мускулатуре

14-30 д.

23760

Антитела к стероид-продуцирующим клеткам яичника

33800

Антитела к Т-лимфотропному вирус человека I/II-IgG, блот

29200

Антитела к Т-лимфотропному вирусу человека I/II-IgG

24200

Антитела к тимусу, IgA

23760

Антитела к тирозин-фосфатазе

23760

Антитела к титин -(МГT-30)

23760

Антитела к тощей кишке -IgA

23760

Антитела к тощей кишке -IgG

23760

Антитела к треонил-тРНК-синтетазе

23760

Антитела к трипаносоме cruzi

24200

Антитела к трипаносоме бруцей, IgG

24200

Антитела к тубулину

23760

Антитела к фибрилларину

35500

Антитела к фосфатидилэтаноламину, IgG

22400

Антитела к хроматину

23760

Антитела к центромере

24700

Антитела к цинк транспортеру 8

23760

Антитела к щеточной каемке проксимльных канальцев почек

33800

Антитела к эластину

23760

Антитела к эпителию желчных путей

34200

Антитела к ядерному антигену пролиферирующих клеток

23760

Антитле к сарколемме

35500

Аполипопротеин A2

23760

Аполипопротеин E

23760

Арилсульфатаза A в сыворотке

26600

Атипичная холинэстераза

33200

Аутоантитела к клеткам печени

35500

Барий в сыворотке

46820

Белок-3, связывающий инсулиноподобный фактор роста

38800

Бериллий в сыворотке

22400

Бета-гидроксимасляная кислота

26600

Бета-Каротин

28560

Боррелия -IgG

21480

Боррелия -IgM

21480

Бупренорфин

66100

Ванадий в сыворотке

23760

Ванкомицин

33800

Витамин D3 (1.25-OH)

24700

Витамин В12 активный (холотранскобаламин)

32560

Витамин Е (альфа-токоферол)

27800

Габапентин

52600

Гамма-линоленовая кислота

52600

Ганцикловир (Cymeven)

52600

Гаптоглобин

33200

Гемоглобинопатии

44200

Гепарин-индуцированная тромбоцитопения

88800

Гепатит Delta (анти-Del, IgG/IgM)

42800

Гепатит E IgG

24200

Гепатит E-IgG, Блот

29200

Гепатит E-IgM

24200

Гепатит E-IgM, Блот

29200

Гепатит В антиген (HBsAg)

21480

Гидроксипрогестерон в сыворотке

23760

Гидроксихлорохин

27800

Гидрохлоротиазид

27800

Глимеперид

43200

Глутадион периоксидаза

18000

Группа кипопротеинов

68200

Группа опиатов в сыворотке

79840

Дегидроэпиандростерон (DHEA)

22400

Дез-N-метилсуксимид

35500

Действие диаминоксидазы (DAO)

36640

Дигидротестостерон (ДГТ)

46820

Дифференцирование иррегулярных антител групп крови

45800

Иммуноглобулин D в сыворотке

24700

Йод в сыворотке

46820

Каппа цепи в сыворотке

22800

Карбамазепин

15960

Карбамазепинэпоксид

35500

Карбокситерминальный телопептид I типа (ICTP)

29200

Кардиолипин -IgG/M/A, скрининг

21480

Кислотный альфа-1—гликопротеин

32500

Клещевой вирусный энцефалит -IgG

22400

Клещевой вирусный энцефалит -IgM

22400

Коклюшная палочка-IgА

22800

Кортикостероид-связывающий глобулин

22800

Кремний в сыворотке

22400

Криптококовый неоформанс-антиген в сыворотке

24200

Ламотриджин

27800

ЛДГ изоэнзимы

34640

Лейцинаминопептидаза

38400

Лектин, связывающий маннозу (ЛСМ)

34640

Линолевая кислота

52600

Липоевая кислота

24200

Липопротеин X

23760

Липопротеин (а) , Lpa

24700

Липопротеин-ассоциированная фосфолипаза А2

22400

Лямбда-цепи в сыворотке

25300

Медь в сыворотке

21480

Метаболиты метадона ЕДДП

22800

Метилэтилкетон (2-бутанон)

66400

Метопролол

35500

Метотрексат

32560

Моксифлоксацин

44200

Молибден в сыворотке

23760

Моноклональные парапротеины легкой цепи-каппа IgA

43200

Моноклональные парапротеины легкой цепи-каппа IgG

43200

Моноклональные парапротеины легкой цепи-каппа IgM

43200

Моноклональные парапротеины легкой цепи-лямбда IgA

43200

Моноклональные парапротеины легкой цепи-лямбда IgG

43200

Моноклональные парапротеины легкой цепи-лямбда IgM

43200

Моноэтил глицинсилидид

23760

Мышечноспецифичный рецептор к тирозин киназе a

21480

Натеглинид

44200

Нитрозепама

44200

Нортриптилин (антидепрессант)

66400

Обмен липидов сиаловой кислоты

32560

Оболочечный антиген вируса гепатита B (HBe-Ag)

24200

Оксазепам (Adumbran)

66400

Окскарбазепин

42000

Олеиновая кислота

52600

Олигомерный матриксный белок хряща (ОМБХ)

23760

Олово в сыворотке

29800

Омега-3 полиненасыщенные жирные кислоты

27800

Омега-6 полиненасыщенные жирные кислоты

52600

Омега-7/9 полиненасыщенные жирные кислоты

58840

Онкоген HER-2 neu (рак молочной железы, желудка)

34640

Определение IgG к ламинину 5

23760

Определение IgА к ламинину 5

23760

Определение антител IgG к лимфоцитарному менингиту

121200

Определение антител IgG к слезной железе

23760

Определение антител IgМ к лимфоцитарному менингиту

24200

Определение антител к LGI1

23760

Определение иррегулярных антител групп крови

32500

Остаза (костная фосфотаза)

39600

Очень длинноцепочечные жирные кислоты (VLCFA)

52600

Палиперидон

44200

Палладий в сыворотке

23760

Пальмитиновая кислота

52600

Паратгормон, интактный (PTHi)

26600

Парацетамол

33500

Парвовируса В19 IgM

42800

Пентахлорфенол в сыворотке

52600

Перинуклеарные анти-нейтрофильные цитоплазматические Антитела

23760

Платина в сыворотке

21480

Плацентарный лактоген

26600

Пневмококк -IgG

23760

Подклассы IgA

48880

Подклассы IgG (IgG1+IgG2+IgG3+IgG4)

88800

Пристановая кислота

52600

Проколлаген-III-пептид (С-III)

46300

Протионамид

22880

Протипендил

27800

Протромбин -IgG

23760

Протромбин -IgM

23760

Растворимые рецепторы трансферрина

23760

Респираторный синцитиальный вирус -IgA

22800

Респираторный синцитиальный вирус -IgG

22800

Ретинол-связывающий белок

36800

Рецептор рианодина

23760

Саркозин в сыворотке

32560

Сера в сыворотке

52600

Серебро в сыворотке

21480

СЗ-нефритогенный фактор

26600

Скрининг бензодиазепинов в сыворотке

52600

Скрининг на листерия AB

21480

Скрининг на миозит ab

32560

Стеариновая кислота

52600

Столбнячный антитоксин

21480

Стронгилоидоз IgG

23760

Стронций в сыворотке

52600

Супероксиддисмутаза

26000

Тартрат–резистентная кислая фосфатаза

32560

Тест связывания C1q субкомпонента комплемента

23760

Тироксин-связывающий глобулин

21480

Тканевый полипептидный антиген (TPA)

27500

Трансферин с недостатком углеводов

46200

Трисиало 1b ганглиозид -IgG

23760

Трисиало 1b ганглиозид -IgM

23760

Трисиало 1а ганглиозид -IgG

23760

Трисиало 1а ганглиозид -IgM

23760

Углеводдефицитный трансферрин

27720

Уран в сыворотке

52600

Фактор некроза опухолей альфа (TNFa)

30840

Фенобарбитал

42500

Феноксиметилпенициллин

27800

Фосфатидилглицерин -IgM

22400

Фосфатидилглицерин -IgG

22400

Фосфатидилинозитол -IgG

22400

Фосфатидилинозитол -IgM

22400

Фосфатидилсерин -IgA

22400

Фосфатидилсерин -IgM

22400

Фосфатидилэтаноламин -IgM

22400

Фосфофенокс-изомераза (PHI, гастроинтестинальные опухоли, почки, молочная железа)

24700

Фруктозамин

32200

Фтор в сыворотке

25980

Хамопексин

37500

Холодовые агглютинины

32500

Ц-АНЦА (цитоплазмический)

24100

Электрофорез липидов (HDL,VLDL,LDL, Lp-Cholesterin, Chylomikronen)

35500

Эпидемический тиф -IgG

24200

Эпидемический тиф -IgM

24200

Индивидуальные аллергены

Альфа-лактоальбумин,f76

2200

Амброзия высокая,w1

2200

Амброзия ложная,w4

2200

Амброзия обыкновенная(голомельчатая),w2

2200

Амброзия смесь,wx209

2200

Апельсин,f33

2200

Баранина,f88

2200

Белок яичный,f1

2200

Бета-лактоглобулин,f77

2200

Виноград,f259

2200

Возбудитель токсокароза Toxocara canis

2200

Говядина,f27

2200

Грецкий орех,f256

2200

Грибковая плесень Alternaria alternata,m6

2200

Грибковая плесень Cladosporium herbarum,m2

2200

Грибковая плесень Penicillium notatum,m1

2200

Грибок Aspergillus flavus,m228

2200

Грибок Aspergillus terreus,m36

2200

Гусь (перо),e70

2200

Дрожжеподобные грибы Candida albicans,m5

2200

Ежа сборная,g3

2200

Желток яичный,f75

2200

Какао/шоколад,f93

2200

Капуста кочанная,f216

2200

Картофель,f35

2200

Клейковина (глютен),f79

2200

Клен ясенелистный,t1

2200

Клещ домашней пыли Blomia tropicalis,d201

2200

Клещ домашней пыли Dermatophagoides farinae,d2

2200

Клещ домашней пыли Dermatophagoides microceras,d3

2200

Клещ домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus,d1

2200

Клещ домашней пыли Euroglyphus maynei,d74

2200

Клубника,f44

2200

Козье молоко,f300

2200

Кошка (перхоть),e1

2200

Креветки,f24

2200

Кукуруза,g202

2200

Куриное мясо,f83

2200

Курица (перо),e85

2200

Лебеда чечевицеобразная,w15

2200

Мандарин,f302

2200

марь белая,w10

2200

Молоко кипяченое,f231

2200

Молоко коровье,f2

2200

Молочная сыворотка,f236

2200

Мясо индейки,f284

2200

Мятлик луговой,g8

2200

Овес посевной,g14

2200

Овсяница луговая,g4

2200

Овца (эпителий),e81

2200

Одуванчик,w8

2200

Орех кешью,f202

2200

Пекарские дрожжи,f45

2200

Пенициллин G,c1

2200

Пенициллин V,c2

2200

Перец красный(паприка),f218

2200

Перец черный,f280

2200

Полынь горькая,w5

2200

Полынь обыкновенная,w6

2200

Попугай (перо),e213

2200

Попугай волнистый (перья),e78

2200

Пыль домашняя тип Greer,h2

2200

Пыль домашняя тип Hollister-Stier,h3

2200

Пыль домашняя тип Japan

2200

Семя подсолнечника,k84

2200

Собака (перхоть),e5

2200

Тимофеевка луговая,g6

2200

Фисташки,f203

2200

Формальдегид,k80

2200

Хомяк (эпителий),e84

2200

Энтеротоксин А (S.aureus),m80

2200

Энтеротоксин В (S.aureus),m81

2200

Яйцо куриное,f245

2200

Пищевые аллергены

Рекомбинантные аллергены

Инфекции

реакция Вассермана

2-3 д.

2180

Инфекции ИФА

Бруцеллез IgM

1400

Вирус герпеса IgМ

2-3 д.

1800

Количественное определение HBsAg вируса гепатита В в сыворотке крови ИФА-методом

2000

Лямблиоз IgG

2-3 д.

1500

Микоплазмоз IgM

2-3 д.

1500

Определение Ig G к возбудителям иерсиниозов (Y.enterocolitica,Y.pseudotuberculosis)

2000

Определение Ig G к Цистицеркам (Taenia solium)

2000

Определение Ig А к возбудителям иерсиниозов (Y.enterocolitica,Y.pseudotuberculosis

2000

Определение Ig М к возбудителям иерсиниозов (Y.enterocolitica,Y.pseudotuberculosis)

2000

Определение антигена Лямблий в кале

1600

Определение индекса авидности IgG к капсидным антигенам вируса Эпштейн-Барра методом ИФА

3000

Определение суммарных антител к Helicobacter pylori (HP) в сыворотке крови ИФА-методом

3000

Трихинеллез IgM

1400

Хламидиоз IgA

1500

Клиника

Мазок на степень чистоты

1-2 д.

1200

Микроскопическое исследование мазка

1200

Обнаружение скрытой крови в кале качественное ручным методом

600

Микробиология (посевы)

Бак. посев мокроты на микрофлору с определением чувствительности к антибиотикам

6160

Бак. посев мочи, сока простаты, спермы на микрофлору с определением чувствительности к антибиотикам

3300

Бак. посев на выявление Ureaplasma spp./M.hominis с определением чувствительности к антибиотикам

4280

Бак. посев на золотистый стафилококк (зев/носа) без определения чувствительности к антибиотикам

1320

Бак. посев на золотистый стафилококк с определением чувствительности к антибиотикам

3300

Бак. посев на микрофлору с определением чувствительности к антибиотикам

5940

Мониторинг беременности

Пренатальный скрининг PRISCA II триместр

3-4 д.

9900

Моча

Анализ мочи по Нечипоренко

1-3 ч.

880

Онкомаркеры

Антиген плоскоклеточной карциномы SCCA

22000

Онкомаркер HE4

4380

Гистология

Гистологическое исследование 1 блок-препарата операционно-биопсийного материала

6 д.

6700

Комплексное исследование биоптата кожи (окрашивание гематоксилин-эозином, иммунофлюоресценция на IgG, IgM, IgA, c4d)

21000

Макроскопическое исследование операционного материала и вырезка кусочков для гистологических блок-препаратов

2900

Определение C4d компонента комплемента в срезах тканей методом прямой иммунофлюоресценции

7500

Определение IgA к эндомизию в сыворотке крови методом непрямой иммунофлюоресценции

10 д.

9000

Определение IgG к эндомизию в сыворотке крови методом непрямой иммунофлюоресценции

10 д.

9000

Панели аллергенов

Пакет «Астма/Ринит.», взрослые (берёза бородавчатая t3, тимофеевка луговая g6, полынь w6, амброзия высокая w1, Alternaria alternata m6, кошка (перхоть)e1, собака (перхоть)e5, D. Pteronyssinus d1)

18000

Пакет «Астма/Ринит.», дети (белок яйца f1, молоко f2, берёза бородавчатая t3, тимофеевка луговая g6, полынь w6, кошка (перхоть)e1, собака (перхоть)e5, D. pteronyssinusd1)

18000

Пакет «Экзема» (белок яйца f1, молоко f2, рыба f3, пшеница f4, арахис f13, соя f14, креветки f24, кошка (перхоть)e1, собака (перхоть)e5, D.pteronyssinus d1)

18000

Панель аллергенов деревьев: ольха серая, лещина, вяз, ива, тополь.tx5

3680

Панель аллергенов деревьев:ольха серая,береза,лещина обыкновенная,дуб белый,ива белая.tx9

3680

Панель аллергенов животных: перо курицы, утки, попугая.ex73

3680

Панель аллергенов животных: перхоть кошки, перхоть лошади, перхоть коровы, перхоть собаки.ex1

3680

Панель аллергенов животных: перья гуся, перья курицы, перья утки, перья индейки.ex71

3680

Панель аллергенов животных: эпителий морской свинки, эпителий кролика, эпителий хомяка, эпителий и белок крысы, эпителий и белок мыши.ex70

3680

Панель аллергенов плесени: Penicillium notatum, Cladosporium herbarum, Aspergillus fumigatus, Alternaria alternata.mx1

3680

Панель аллергенов плесени: Penicillium notatum, Cladosporium herbarum, Aspergillus fumigatus, Candida albicans, Alternaria tenuis, Setomelanomma rostrata.mx2

3680

Панель аллергенов пыли: Домашняя пыль Hollister-Stier Labs, Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Blatella germanica.hx2

3680

Панель аллергенов сорных трав: амброзия голометельчатая, полынь обыкновенная, подорожник ланцетовидный, марь белая, лебеда.wx2

3680

Панель аллергенов сорных трав: ромашка, одуванчик, подорожник, марь, золотарник.wx7

3680

Панель аллергенов трав № 2: бермудская трава (свинорой), рожь многолетняя, тимофеевка луговая, мятлик луговой, джонсонова трава (сорго алепское), гречка заметная

3680

Панель аллергенов трав № 4: душистый колосок, рожь многолетняя, тростник обыкновенный, рожь культивируемая, бухарник шерстистый

3680

Панель аллергенов трав: душистый колосок, плевел, тростник обыкновенный, рожь посевная, бухарник шерстистый.gx4

3680

Панель аллергенов трав: свинорой пальчатый, плевел, тимофеевка луговая, мятлик луговой, сорго, гречка заметная.gx2

3680

Панель аллергенов трав:ежа сборная, овсяница луговая,райграс пастбищный/плевел, тимофеевка луговая, мятлик луговой.gx1

3680

Панель аллергенов:киви, дыня, банан, персик, ананас.fx21

3680

Панель аллергенов:треска, сельдь, скумбрия, камбала.fx74

3680

Панель ингаляционных аллергенов: свинорой пальчатый, плевел, костер, амброзия высокая, полынь, подорожник ланцетовидный.rx4

3680

Панель пищевых аллергенов № 13: зеленый горошек, белые бобы, морковь, картофель

3680

Панель пищевых аллергенов №73

3680

Панель пищевых аллергенов: апельсин, банан, яблоко, персик.fx15

3680

Панель пищевых аллергенов: апельсин, лимон, грейпфрут, мандарин.fx29

3680

Панель пищевых аллергенов: арахис, фундук, бразильский орех, миндаль, кокос.fx1

3680

Панель пищевых аллергенов: белок яйца, коровье молоко, арахис, горчица.fx26

3680

Панель пищевых аллергенов: горох, белая фасоль, морковь, картофель.fx13

3680

Панель пищевых аллергенов: пшеничная мука, овсяная мука, кукурузная мука, кунжут, гречневая мука.fx3

3680

Панель пищевых аллергенов: пшеничная мука, ржаная мука, ячменная мука, рисовая мука.fx20

3680

Панель пищевых аллергенов: треска, креветки, голубая мидия, тунец, лосось.fx2

3680

Панель пищевых аллергенов: яичный белок, коровье молоко, треска, пшеничная мука, арахис, соевые бобы.fx5

3680

Панель пищевых аллергенов:киви, манго, банан, авокадо, папайя.fx30

3680

Панель пищевых аллергенов:помидор, шпинат, капуста, паприка.fx14

3680

Панель пищевых аллергенов:яблоко, груша, персик, вишня, слива.fx31

3680

Профили

Профиль Диагностика парапротеинемий

34500

Тест на лекарственную непереносимость (тест на активацию базофилов, CAST) на 1 препарат

12460

Тест на лекарственную непереносимость (тест на активацию базофилов, CAST) на 2 препарата

17060

Тест на лекарственную непереносимость (тест на активацию базофилов, CAST) на 3 препарата

21660

Тест на лекарственную непереносимость (тест на активацию базофилов, CAST) на 4 препарата

26260

Тест на лекарственную непереносимость (тест на активацию базофилов, CAST) на 5 препаратов

30860

ПЦР

Вирус папилломы тип 16/18 (количественное определение)

5-7 д.

3200

Вирус папилломы человека (генотип. 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типов)

7-10 д.

5100

Вирус папилломы человека высокого канцерогенного риска (генотипирование 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68), количественное определение ДНК с указанием типа вируса

7000

Обнаружение Helicobacter pylori в биологическом материале методом ПЦР

3000

Обнаружение вируса Эпштейн — Барра (ВПГ-IV) в биологическом материале методом ПЦР качественное

3600

Цитомегаловирус (CMV), количественное определение ДНК в крови

6000

ПЦР Гепатиты

Вирус гепатита В (качественный, 100 МЕ/мл)

3-5 д.

2800

Вирус гепатита С (качественный, 100 МЕ/мл)

3-5 д.

3600

Гепатит B (количественный) методом ПЦР в режиме реального времени

7-10 д.

6500

Гепатит D (количественный) методом ПЦР в режиме реального времени

8700

Гепатит D методом ПЦР в режиме реального времени

4000

Гепатит С (количественный) методом ПЦР в режиме реального времени

7-10 д.

7600

Обнаружение вируса гепатита D в биологическом материале методом ПЦР качественное (ультра чувствительное, 5 МЕ/мл)

10400

Обнаружение вируса гепатита В в биологическом материале методом ПЦР качественное (ультра чувствительное, 10 МЕ/мл)

12000

Обнаружение вируса гепатита В в биологическом материале методом ПЦР количественное (ультра чувствительное, 5 МЕ/мл)

12000

Обнаружение вируса гепатита С в биологическом материале методом ПЦР качественное (ультра чувствительное, 10 МЕ/мл)

8800

Обнаружение вируса гепатита С в биологическом материале методом ПЦР количественное (ультра чувствительное, 5 МЕ/мл)

11400

РИФ

Иммуногематология

Лекарственный мониторинг

Лекарственный мониторинг карбамазепина

8080

Мониторинг TNFa-блокаторов: общие антитела к Адалимумабу

7500

Мониторинг TNFa-блокаторов: общие антитела к Инфликсимабу

7500

Определение концентрации TNFa-блокаторов: Адалимумаба в сыворотке крови

8000

Определение концентрации TNFa-блокаторов: Инфликсимаба в сыворотке крови

8000

Серологические маркеры инфекционных заболеваний

Определение титра антиэритроцитарных антител в непрямом тесте Кумбса в ID-картах

3800

Серология

Цитология

Цитологическое исследование мазка из шейки матки (с окраской по Романовскому-Гимзе)

2500

Цитологическое исследование мазка из шейки матки с окраской по Папаниколау (ПАП-тест)

3400

Цитологическое исследование негинекологического материала (с окраской по Романовскому-Гимзе)

2500

Цитологическое исследование негинекологического материала на аппарате жидкостной цитологии с окраской по Папаниколау (ПАП-тест)

6000

Цитологическое исследование негинекологического материала с окраской по Папаниколау (ПАП-тест)

3600

Определение биологического родства. Тверь

Внесение изменений в ранее выданное заключение по информативному тесту о клиенте (ФИО, дата рождения, дата забора, расовая принадлежность) по официальному запросу заказчика

9000

Выдача дубликата заключения по информативному тесту

10000

Выделение ДНК из нестандартного образца 1 типа

21000

Генеалогический анализ по линии матери, определение гаплогруппы, исследование митохондриальной ДНК. Стандартное заключение.

95000

Генеалогический анализ по линии отца, определение гаплогруппы у мужчин, исследование Y-хромосомы.

75000

Дополнительная калькуляция вероятности родства

21000

Дополнительный участник исследования

27000

Дополнительный участник исследования, тестирование Y-хромосомы

37000

Дополнительный участник исследования, тестирование мтДНК

78000

Дополнительный участник исследования, тестирование Х-хромосомы

42000

Исследование на отцовство (материнство) при отсутствии предполагаемого родителя. Информативный тест.

78000

Исследование на отцовство, исследование Х-хромосомы. Информативный тест.

84000

Исследование на отцовство/материнство (трио). Информативный тест.

86000

Исследование на отцовство/материнство (дуэт). Информативный тест.

60000

Исследование на отцовство/материнство (дуэт). Судебная экспертиза.

78000

Исследование на отцовство/материнство (трио). Судебная экспертиза.

95000

Исследование на родство «УНИВЕРСАЛЬНОЕ». Информативный тест.

84000

Исследование на родство в отношении супружеской пары. Информативный тест.

86000

Исследование на родство по женской линии при любой дальности родства, исследование митохондриальной ДНК. Информативный тест.

155000

Исследование на родство по женской линии при любой дальности родства, Исследование митохондриальной ДНК. Судебная экспертиза.

190000

Исследование на родство по мужской линии, исследование Y-хромосомы. Информативный тест.

74000

Исследование на родство по мужской линии, исследование Y-хромосомы. Судебная экспертиза.

94000

Исследование на родство, исследование Х-хромосомы. Судебная экспертиза.

94000

Исследование с целью прямой идентификации личности с предоставлением нестандартного образца 1 типа.

80000

Тест на родство «Универсальный» (дополнительный родственник, с которым должен быть рассчитан индекс родства, если это возможно, с учетом выбранного формата ранее проведенного исследования)

44000

Генетические исследования в Германии

BRCA1, BRCA2 панель

287260

BRCA1, BRCA2 панель Combi

482760

CentoMito Comprehensive

1169460

Global Infertility

1193900

SMN1 Спинальная амиотрофия (типы I, II, III)

205640

Ашкенази панель (основной)

125500

Ашкенази панель (расширенный)

293140

Болезнь Шарко (боковой амиотрофический склероз, ALS)

1291640

Женское бесплодие, панель

1452940

Мужское бесплодие, панель

1193900

Наследственная оптическая нейропатия Лебера (атрофия зрительного нерва Лебера) панель

320000

Ожирение, панель

1228100

Поликистоз почек, панель

1437780

Спинально-церебеллярная атаксия комплексная панель

2403560

Спинально-церебеллярная атаксия повтор комплексной панели

1721740

Лабораторные исследования (инвитро) / Общеклинические исследования крови (general clinical blood tests) / Имеются ограничения по взятию капиллярной крови. уточняйте у администратора медицинского офиса. * возможна задержка выдачи результатов.(restrict

Лабораторные исследования (инвитро) / Пцр — диагностика инфекционных заболеваний (pcr-based (polymerase chain reaction) diagnostics of infectious diseases). имеются ограничения по взятию некоторых видов биоматериала в регионах. *уточняйте у администр

Лабораторные исследования (инвитро) / Аллергологические исследования (allergy research) / Определение специфических ige (determination of specific ige) / Пищевые аллергены (food allergens (totall result for mixture of allergens)) / Общий результат по

Лабораторные исследования (инвитро) / Аллергологические исследования (allergy research) / Определение специфических igg (determination of specific igg) / Пищевые аллергены (food allergens). общий результат по смеси аллергенов (totall result for mixtu

Лабораторные исследования (инвитро) / Микробиология (microbiology). в случаях обнаружения нормальной, сопутствующей, условно-патогенной в низком титре (≤10*4 кое / Тамп., мл., грам.) или не имеющей диагностического значения флоры, определение чувстви

Лабораторные исследования (инвитро) / Биохимические исследования (biochemical examinations) / Онкомаркеры (tumor markers)

Лабораторные исследования (инвитро) / Диагностика инфекционных заболеваний (serology diagnosis of infectious disease) (серологическая диагностика). указанные сроки пцр-исследований не включают проведение подтверждающих тестов (при необходимости) / Ге

Оториноларингология

Лабораторные исследования (инвитро) / Профили (profiles) / Профили исследований (profiles of research)

Лабораторные исследования (инвитро) / Биохимические исследования (biochemical examinations) / Специфические белки (specific proteins)

Лабораторные исследования (инвитро) / Исследования мочи (examinations of urine) / Биохимия мочи (суточная экскреция) (urine biochemistry (daily excretion))

Лабораторные исследования (инвитро) / Биохимические исследования (biochemical examinations) / Ферменты (enzymes)

Лабораторные исследования (инвитро) / Интерфероновый статус (interferon status) / Интерфероновый статус (4 показателя) с определением чувствительности к иммуномодуляторам (interferon status (4 parameters))

Лабораторные исследования (инвитро) / Оценка свертывающей системы (assessment of coagulation system)

Лабораторные исследования (инвитро) / Оценка эндокринной системы (assessment of endocrine system (es)) / Оценка функции щитовидной железы (assessment of thyroid function)

Лабораторные исследования (инвитро) / Оценка эндокринной системы (assessment of endocrine system (es)) / Оценка гипофизарно-надпочечниковой системы (assessment of pituitary-adrenal system)

Лабораторные исследования (инвитро) / Аллергологические исследования (allergy research) / Определение специфических ige (determination of specific ige) / Аллергены пыльцы растений (allergens of plant pollen (totall result for mixture of allergens)) /

Лабораторные исследования (инвитро) / Биохимические исследования (biochemical examinations) / Белки и аминокислоты (proteins and amino acids)

Лабораторные исследования (инвитро) / Биохимические исследования (biochemical examinations) / Липиды (lipids)

Лабораторные исследования (инвитро) / Иммунологические исследования (immunological studies) / Комплексные иммунологические исследования (comprehensive immunological studies)

Лабораторные исследования (инвитро) / Репродуктивная система. беременность (reproductive system. pregnancy) / Оценка андрогенного статуса (assessment of androgen status)

Лабораторные исследования (инвитро) / Аллергологические исследования (allergy research) / Определение специфических ige (determination of specific ige) / Аллергены животного происхождения (allergens of animal origin)

Лабораторные исследования (инвитро) / Исследования кала (examinations of feces, stool examinations) / .

Лабораторные исследования (инвитро) / Биохимические исследования (biochemical examinations) / Неорганические вещества (inorganic matters)

Лабораторные исследования (инвитро) / Биохимические исследования (biochemical examinations) / Углеводы (carbohydrates)

Лабораторные исследования (инвитро) / Цитологические исследования (cytological research) / Окраска по романовскому-гимзе (romanowsky-giemsa stain)

Лабораторные исследования (инвитро)

Лабораторные исследования (инвитро) / Аллергологические исследования (allergy research) / Определение специфических ige (determination of specific ige) / Аллергены плесени (allergens of mold)

Лабораторные исследования (инвитро) / Аллергологические исследования (allergy research) / Определение специфических igg (determination of specific igg) / Аллергены клещей и домашней пыли (allergens of mites and house dust)

Лабораторные исследования (инвитро) / Аллергологические исследования (allergy research) / Определение специфических igg (determination of specific igg) / Аллергены плесени (allergens of mold)

Лабораторные исследования (инвитро) / Иммунологические исследования (immunological studies) / Цитокины (cytokines)

Лабораторные исследования (инвитро) / Интерфероновый статус (interferon status) / Интерфероновый статус (4 показателя) с определением чувствительности к препаратам интерферона (interferon status (4 parameters))

Лабораторные исследования (инвитро) / Аллергологические исследования (allergy research) / Определение специфических ige (determination of specific ige) / Аллергены клещей и домашней пыли (allergens of mites and house dust)

Лабораторные исследования (инвитро) / Биохимические исследования (biochemical examinations) / Низкомолекулярные азотистые вещества (low-molecular-weight nitrogenous compounds)

Лабораторные исследования (инвитро) / Иммуногематология (blood immunology)

Лабораторные исследования (инвитро) / Иммунологические исследования (immunological studies) / Иммуноглобулины (общие) (immunoglobulins, total)

Лабораторные исследования (инвитро) / Интерфероновый статус (interferon status) / Интерфероновый статус (4 показателя) с определением чувствительности к индукторам интерферона (interferon status (4 parameters))

Лабораторные исследования (инвитро) / Репродуктивная система. беременность (reproductive system. pregnancy) / Гипофизарные гонадотропные гормоны и пролактин (pituitary gonadotropins and prolactin)

Лабораторные исследования (инвитро) / Аллергологические исследования (allergy research) / Определение специфических ige (determination of specific ige) / Комплексные аллергопанели (comprehensive allergy panels (answer for each allergen)). ответ по ка

Лабораторные исследования (инвитро) / Биохимические исследования (biochemical examinations) / Витамины (vitamins)

Лабораторные исследования (инвитро) / Исследования мочи (examinations of urine) / Клинические тесты (clinical tests)

Лабораторные исследования (инвитро) / Репродуктивная система. беременность (reproductive system. pregnancy) / Нестероидные регуляторные факторы половых желез (nonsteroidal gonadal factors)

Кардиолог / Кардиолог детский

Лабораторные исследования (инвитро) / Аллергологические исследования (allergy research) / Определение специфических igg (determination of specific igg) / Аллергены животного происхождения (allergens of animal origin)

Лабораторные исследования (инвитро) / Биохимические исследования (biochemical examinations) / Пигменты (pigments)

Лабораторные исследования (инвитро) / Оценка эндокринной системы (assessment of endocrine system (es)) / Оценка гормональной регуляции обмена кальция и фосфора (assessment of hormonal regulation of calcium and phosphorus metabolism)

Лабораторные исследования (инвитро) / Оценка эндокринной системы (assessment of endocrine system (es)) / Оценка функций гипофиза (assessment of pituitary function)

Лабораторные исследования (инвитро) / Репродуктивная система. беременность (reproductive system. pregnancy) / Эстрогены и прогестины (estrogens and progestins)

Онколог — прием специалиста

Оториноларинголог (лор) в воронеже

Офтальмолог / Детская офтальмология

Офтальмолог / Обследования

Терапевт / Консультации

Аллерголог-иммунолог / Прием

Аллергология-иммунология / Консультации (аллерголога-иммунолога)

Антитела к коронавирусу sars-cov-2, igg igm

Вызов врача на дом

Вызов педиатра на дом

Гастроэнтеролог / Приём врача.

Гастроэнтерология

Забор анализов

Забор анализов, инъекции

Инъеккионные процедуры

Инъекции (без учета лекарственных препаратов)

Исследование функции внешнего дыхания

Кардиолог — прием — консультации — лечение

Лабораторные исследования (инвитро) / Аллергологические исследования (allergy research) / Определение специфических ige (determination of specific ige) / Прочее (others)

Лабораторные исследования (инвитро) / Биохимические исследования (biochemical examinations) / Антиоксидантный статус (total antioxidant status, tas)

Лабораторные исследования (инвитро) / Иммунологические исследования (immunological studies) / Компоненты комплемента (complement components)

Лабораторные исследования (инвитро) / Иммунологические исследования (immunological studies) / Специфические белки (specific proteins)

Лабораторные исследования (инвитро) / Интерфероновый статус (interferon status) / .

Лабораторные исследования (инвитро) / Цитологические исследования (cytological research) / Окраска по папаниколау (papanicolaou stain, pap stain)

Лазерная терапия (1сеанс)

Лазеротерапия и светолечение

Лор (отоларинголог) / Процедуры

Лор (отоларинголог) взрослый

Лор (отоларинголог) детский

Мезодиэнцефальная модуляция, физиотерапевтическая процедура, нейромодуляция

Микрополяризационная терапия

Невролог детский

Окулист (офтальмология)

Окулист, диагностика

Онколог / Перечень услуг онколога

Оторинголарингология, сурдология

Оториноларинголог (лор) / Процедуры и манипуляции при заболеваниях носа, околоносовых пазух и носоглотки

Оториноларинголог (лор) / Процедуры и манипуляции при заболеваниях ротоглотки и гортаноглотки

Оториноларинголог / Криология

Оториноларинголог / Манипульяция , лечение и процедуры

Оториноларинголог / Манипуляция , лечение и процедуры

Офтальмолог / Обследования / Консультации / Лечение

Педиатр / Консультации первичные

Педиатр / Консультации первичные на дому

Реоэнцефалография

Сестринское дело

Суточное мониторирование ад (смад)

Терапевт на дом

Терапевт справки

Травматолог-ортопед (детский, взрослый)

Травматолог-ортопед в воронеже

Транскраниальная электростимуляция

Уфо для горла и носа

Фотодинамическая терапия

Холтер суточное мониторирование экг

Экг — электрокардиограмма

Электрокардиограмма, экг с нагрузкой

Электрофорез лекарственный гальваническим током

Электрофорез лекарственный препаратов эндоназальный

Электроэнцефалограмма (ээг)

Без категории

первичных обонятельных и респираторных эпителиальных клеток в сравнении с перманентной назальной клеточной линией RPMI 2650

Фармацевтика. 2019 Aug; 11 (8): 367.

, ^1, ^2, ^†, ^1, ^†, ¹, ³, ² и ^1, ^*

Simone Ladel

¹ Институт прикладной биотехнологии Университета прикладных наук Биберах, Hubertus-Liebrecht Straße 35, 88400 Биберах, Германия

² Институт аналитической и биоаналитической химии, Университет Ульма, Альберт-Эйнштейн-Аллее 11, 89081 Ульм, Германия

Патрик Шлоссбауэр

¹ Институт прикладной биотехнологии, Университет прикладных наук Биберах, Hubertus-Liebrecht Straße 35, 88400 Биберах, Германия

Johannes Flamtechnm

¹ Институт прикладной биотехнологии Applied Science Biberach, Hubertus-Liebrecht Straße 35, 88400 Biberach, Germany

Harald Luksch

³ Школа наук о жизни, Технический университет Мюнхена, Лие sel-Beckmann-Straße 4, 85354 Freising-Weihenstephan, Германия

Boris Mizaikoff

² Институт аналитической и биоаналитической химии Ульмского университета, Albert-Einstein-Allee 11, 89081 Ulm, Германия

Katharina Schindows2

¹ Институт прикладной биотехнологии, Университет прикладных наук Биберах, Hubertus-Liebrecht Straße 35, 88400 Biberach, Германия

¹ Институт прикладной биотехнологии, Университет прикладных наук Биберах, Hubertus-Liebrecht Straße 35, 88400 Biberach

² Институт аналитической и биоаналитической химии Ульмского университета, Albert-Einstein-Allee 11, 89081 Ульм, Германия

³ Школа наук о жизни, Технический университет Мюнхена, Лизель-Бекманн-штрассе 4, 85354 Фрайзинг-Вайенштефан, Германия

^† Эти авторы внесли равный вклад в эту работу.

Поступила 24.06.2019; Принято 20 июля 2019 г.

Лицензиат MDPI, Базель, Швейцария. Эта статья представляет собой статью в открытом доступе, распространяемую в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution (CC BY) (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/). Эта статья цитировалась другими статьями в PMC. .

Abstract

Предпосылки: Эпителиальный слой слизистой оболочки носа является первым барьером для проникновения лекарств во время интраназальной доставки лекарств. С ростом интереса к интраназальным путям необходимы адекватные модели in vitro.Здесь первичные обонятельные (OEPC) и респираторные (REPC) клетки свиней были охарактеризованы по отношению к линии носовых опухолевых клеток RPMI 2650. Методы: условия культивирования первичных клеток слизистой оболочки носа свиньи были оптимизированы, и клетки охарактеризованы с помощью светового микроскопа, RT-PCR и иммунофлуоресценция. Функцию эпителиального барьера анализировали с помощью трансэпителиального электрического сопротивления (TEER), и FITC-декстран использовали в качестве модельного вещества для трансэпителиального проникновения. Биение ресничек, необходимое для мукоцилиарного клиренса, изучали по иммунореактивности против ацетилированного тубулина.Результаты: модели барьеров OEPC и REPC различаются по TEER, трансэпителиальной проницаемости и уровням MUC5AC. Напротив, RPMI 2650 демонстрировал более низкие уровни MUC5AC, маркеров ресничек и TEER и более высокие скорости потока FITC-декстрана. Заключение: для скрининга фармацевтических составов для интраназальной доставки in vitro необходимы трансляционные модели слизистой оболочки. Здесь представлена новая и всеобъемлющая характеристика OEPC и REPC по сравнению с RPMI 2650. Установленные первичные модели отображают подходящую модель слизистой оболочки носа с секретируемым MUC5AC, бьющимися ресничками и функциональным эпителиальным барьером, которая подходит для долгосрочной оценки лекарственных форм с замедленным высвобождением.

Ключевые слова: модель барьера , нос-мозг, первичные клетки, RPMI 2650, обонятельный эпителий, респираторный эпителий

1. Введение

Доставка лекарств в мозг для лечения заболеваний центральной нервной системы (ЦНС). болезни стали предметом большого интереса и одной из самых сложных областей исследований в последнее десятилетие [1,2]. Мозг имеет уникальный барьер, ограничивающий проникновение нейротоксических веществ в ЦНС: гематоэнцефалический барьер (ГЭБ). Этот эндотелиальный барьер с низкой скоростью пиноцитоза и сильными плотными контактами является основным препятствием для доставки лекарств в ЦНС.В последние годы потребность в альтернативных стратегиях доставки лекарств становилась все более очевидной [3,4]. Одна из таких стратегий — введение лекарств интраназальным путем [5]. В отличие от инвазивных методов, таких как интрапаренхиматозные, интрацеребровентрикулярные или интратекальные инъекции / инфузии, неинвазивный интраназальный подход может использоваться для хронических лекарств, потенциально приводящих к более высокой приверженности пациентов. Дополнительными преимуществами интраназального применения являются большая площадь поверхности для абсорбции, быстрое всасывание и предотвращение выведения из организма при первом прохождении через печень.Недостатками этой формы применения являются ограничение сильнодействующими лекарствами (можно применять только небольшие объемы), мукоцилиарный клиренс и физико-химические особенности слизистого слоя (низкий pH, ферментативная деградация) [6,7]. В общем, существует три соответствующих последовательных шага для доставки лекарств из носа в мозг (N2B): первый шаг — преодоление эпителиального барьера, второй шаг — транспортировка от слизистой оболочки к участкам входа в мозг, и последний шаг — это преодоление эпителиального барьера. транспорт к другим сайтам в ЦНС [7].В этой работе для упрощения моделируется только первый шаг. Слизистую оболочку носа можно разделить на четыре типа эпителия: плоский эпителий, респираторный эпителий, переходный эпителий и обонятельный эпителий. Из этих типов эпителия респираторный и обонятельный эпителий, скорее всего, являются местами поглощения веществ [8]. Детальный состав этих эпителиальных типов был тщательно изучен [9,10,11,12]. Вкратце, обонятельная слизистая оболочка покрывает ~ 10% поверхности носовой полости человека.Для него характерен псевдостратифицированный столбчатый эпителий, расположенный в верхней дорсальной части носовой полости. Обонятельные сенсорные нейроны расположены в эпителиальном слое, а нейриты простираются от носовой полости до обонятельной луковицы в головном мозге. В дополнение к этим нейронам, еще три типа клеток являются частью обонятельного эпителиального слоя: структурирующие сустентакулярные клетки, которые функционируют как опорные эпителиальные клетки, протоковые клетки канальцевого типа из желез Боумена и базальные клетки (клетки-предшественники) [13,14].Примерно 90% слизистой оболочки носа человека покрыто респираторным эпителием. Этот псевдостратифицированный столбчатый секреторный эпителий состоит из бокаловидных клеток, реснитчатых клеток, промежуточных клеток и базальных клеток [15].

Существует два пути преодоления эпителиального барьера дыхательного и обонятельного эпителия: внутриклеточный путь и внеклеточный путь. Внутриклеточно транспортируемые вещества могут быть либо эндоцитозированы в обонятельные сенсорные нейроны и впоследствии транспортироваться в мозг через их аксоны, либо они могут транспортироваться посредством трансцитоза через сустентакулярные клетки в нижележащую соединительную ткань ( lamina propria ) [16,17,18] .Внеклеточный путь включает параклеточную диффузию в lamina propria через межклеточные щели [18]. Путь лекарства через слизистую в основном зависит от его липофильности и молекулярной массы [19]. Для небольших и низкомолекулярных гидрофильных молекул, таких как меченный флуоресцеином изотиоцианат-декстран (FITC-декстран; 4,4 кДа) или флуоресцеин натрия (0,37 кДа), сообщается в основном о параклеточном пути [20,21,22,23,24, 25]. Эти нетоксичные и легко обнаруживаемые химические вещества, меченные флуоресценцией, широко используются в качестве модельных веществ для исследований проникновения лекарств [22,23,26].Напротив, трансцеллюлярный транспорт описан для больших молекул, таких как белки [27].

Подводя итог, можно сказать, что слизистая оболочка носа стала предметом интереса при применении лекарств для преодоления проблемы ГЭБ. Однако для исследования обонятельная слизистая оболочка, а также дорсальная часть слизистой оболочки дыхательных путей довольно труднодоступны [28]. Возможным и простым решением может быть использование вскрытия слизистой оболочки свиньи . Слизистая носа свиньи хорошо напоминает гистологию и физиологию носа человека [29].Подход к использованию свиней в качестве модельных организмов для экспериментов, связанных со слизистой оболочкой ex vivo, хорошо известен [29,30,31,32,33]. Основной проблемой использования эксплантатов слизистой оболочки ex vivo является ограниченная продолжительность жизни ткани даже при питательной поддержке. Многообещающей альтернативой являются модели in vitro, использующие эпителиальные клетки в контролируемых внешних экспериментальных условиях, позволяющие упростить отображение только первого барьера без учета кровотока, системного распределения и других эффектов, связанных с lamina propria [26].Существуют два различных подхода к созданию моделей эпителиального барьера in vitro. Во-первых, существуют стандартные линии опухолевых клеток, такие как линия носовых эпителиальных клеток человека RPMI 2650, а модели первичных эпителиальных клеток можно культивировать в качестве второго варианта [34,35]. Эти два типа клеток сильно различаются по продолжительности жизни и способности к дифференцировке. Теоретически линии опухолевых клеток бессмертны, тогда как первичные клетки ограничены определенным числом клеточных делений [36]. Однако у большинства опухолевых клеток отсутствует способность полностью дифференцироваться, например, в.g., реснитчатые или продуцирующие слизь клетки, в то время как первичные клеточные культуры морфологически и физиологически очень близки к своему нативному состоянию [26,37]. Поскольку такие факторы, как реснички и слизь, могут влиять на время поглощения лекарственного средства и биодоступность, например, из-за ферментов, даже в застойной культуре клеток, это важные параметры, которые следует учитывать при оценке проникновения лекарственного средства. Это особенно важно для оценки лекарственного потенциала in vitro для моделирования всей слизистой оболочки носа, как это было недавно создано Na et al.(2017) с коммерчески доступными носовыми первичными клетками человека [38].

Особенности эпителиальных клеток, такие как наличие ресничек, секреция слизи и образование плотных соединений, являются важными факторами, влияющими на биодоступность назально применяемых препаратов [7]. Как правило, гетерогенная смесь различных типов клеток является предпочтительной для достоверной модели, поскольку она лучше представляет эпителиальную сборку слизистой оболочки с точки зрения профиля проникновения лекарств через клеточный барьер [37,39].Кроме того, культивируемые опухолевые клетки имеют тенденцию образовывать многослойные, поскольку их рост в основном не ограничивается контактным ингибированием после достижения слияния, тогда как первичные клетки остаются в монослоях. Для моделей эпителиального барьера следует отдавать предпочтение монослоям, поскольку они больше напоминают естественную эпителиальную структуру. Тем не менее, есть несколько исследований, доказывающих, что линия опухолевых клеток, происходящая из плоского эпителия носа (перегородки) RPMI 2650, является подходящей моделью для носового эпителия [20,21,26,37,40].Эта клеточная линия тесно связана с нормальным носовым эпителием человека с точки зрения его кариотипа и структуры полипептидов цитокератина, а также наличия слизи на поверхности клеток [34,35,41]. Также было показано, что метаболические характеристики клеточного барьера отдаленно похожи на таковые из иссеченной носовой ткани человека [42,43]. Особенностью эпителиальных клеток носа является их способность адаптироваться к росту в условиях границы раздела воздух-жидкость (ALI). Подавляющее большинство недавно разработанных клеточных моделей дыхательных путей используют этот метод, разработанный Tchao et al.(1989) [44]. Таким образом, клетки выращиваются на вставках из пористой пластиковой мембраны в многолуночных планшетах с базолатеральной подачей среды, тогда как апикальная сторона клеточного слоя подвергается воздействию воздуха. Эти условия ALI естественным образом заставляют клетки образовывать прочные плотные контакты и начинать дифференцироваться, например, в направлении реснитчатых или продуцирующих слизь клеток [45,46,47]. Таким образом, отсутствие дифференцировки опухолевых клеток может быть серьезной проблемой для имитации эпителиальных барьеров. Пытаясь подтвердить эти разные подходы, Мерсье и др.(2018) постулировали общепринятые ключевые критерии, которым должны соответствовать подходящие модели барьерных клеток in vitro [37]. Эти ключевые критерии включают достаточно высокое трансэпителиальное электрическое сопротивление (TEER) в сочетании с присутствием специфических белков плотных контактов, таких как zonula occludens 1 (ZO-1), и белков адгезивных соединений, таких как E-кадгерин, при выращивании в условиях ALI [48 , 49]. Кроме того, клеточные модели должны позволять измерять параклеточную проницаемость и в идеале экспрессировать переносчики лекарств для трансцеллюлярной проницаемости.Возможность измерения параклеточной проницаемости модельных веществ малого и среднего размера, таких как флуоресцеин натрия или FITC-декстран, а также скрининг на реснички и маркерные белки, такие как ZO-1 и муцины, позволяет сравнивать различные модели.

В нашей исследовательской группе мы фокусируемся на разработке моделей для конкретных регионов и методах их применения для обонятельной слизистой оболочки и доставки лекарств от носа к мозгу. Flamm et al. недавно опубликовали метод доставки лекарств непосредственно в обонятельную область мышей [50].Кроме того, Röhm et al. создали платформу для скрининга аэрозольных белковых препаратов для интраназальной доставки лекарств [51].

В соответствии с предыдущими исследованиями, в этом исследовании была создана и охарактеризована модель эпителиального барьера для интраназальной доставки, в которой использовались обонятельные и респираторные первичные клетки. Мы рассмотрели критерии, которые сильно влияют на интраназальную доставку, такие как продукция муцина и образование ресничек, важные для мукоцилиарного клиренса. Сначала были исследованы различия между дыхательными и обонятельными первичными клетками.Во-вторых, модели первичного клеточного барьера были оценены и сравнены с хорошо известной линией опухолевых клеток RPMI 2650. Пригодность и возможность использования первичных клеток в качестве моделей назального эпителиального барьера для исследований интраназальной доставки определялась с помощью иммунофлуоресценции, молекулярных и биохимических исследований маркерных белков. , Определение значения TEER и проницаемость FITC-декстрана.

2. Материалы и методы

2.1. Культура клеток

2.1.1. Первичные клетки

Первичные клетки собирали из эксплантатов слизистой оболочки дыхательной и обонятельной области 4–6-месячных свиней на бойне.Респираторная ткань была рассечена с коротким вскрытием с задержкой менее 1,5 часа от concha nasalis ventralis ( cn ventralis ) и обонятельной ткани от дорсальной части concha nasalis dorsalis ( cn dorsalis ). и носитель concha nasalis media ( cn media ) (см.). Иссеченные эксплантаты слизистой оболочки дезинфицировали с использованием Octenisept ^® (Schülke & Mayr GmbH, Нордерштедт, Германия) и дважды промывали PBS (сорт для клеточных культур, Gibco ^® Invitrogen, Дармштадт, Германия).Эпителиальные клетки выделяли из соединительной ткани путем инкубации в течение 1 ч при 37 ° C с 1,4 мг / мл проназы (Sigma-Aldrich, Тауфкирхен, Германия) в EBSS (Gibco ^® Invitrogen, Дармштадт, Германия), 20 ЕД пенициллина. -20 мкг стрептомицина (PenStrep (10 000 ЕД), AppliChem, Дармштадт, Германия) и 300 МЕ / мг гентамицинсульфата (≥590 МЕ / мг, Carl Roth, Карлсруэ, Германия; проназная среда). Для получения изолированных клеток суспензию проназы-слизистой оболочки осторожно встряхивали, жидкость осторожно удаляли, а затем центрифугировали при 700 об / мин в течение 3 мин.Супернатант отбрасывали, а оставшиеся клетки ресуспендировали в соответствующих объемах среды для адгезии первичной культуры (DMEM: F12 (1: 1), 20% FBS, 2 мМ Gln, 1% NEAA, 20 ед. Пенициллина-20 мкг стрептомицина, 300 МЕ / мг гентамицинсульфата,). Следует отметить, что культивирование в колбах для культивирования клеток Т175 было крайне неэффективным по сравнению с меньшими форматами.

Рабочий процесс для выделения и культивирования первичных клеток в условиях интерфейса воздух-жидкость (ALI). Слизистая оболочка была отделена либо от обонятельной области (красный), либо от респираторной области (синий) (I.). Единичные клетки получали перевариванием проназой эксплантатов слизистой оболочки (II). Отдельные клетки культивировали в покрытых коллагеном колбах для культивирования клеток Т75 (III). Чтобы уменьшить чрезмерный рост фибробластов, культуру на короткое время обрабатывали трипсином (2–4 мин), чтобы избавиться от менее прилипших фибробластов и выбрать эпителиальные клетки. Клетки культивировали до 80–90% конфлюэнтности в колбах Т75 и переносили во вкладыши для клеточных культур для роста в условиях ALI в течение 21 дня (IV.).

Таблица 1

Состав питательных сред, использованных в данной работе.EBSS = сбалансированный солевой раствор Эрла; FBS = фетальная бычья сыворотка; Gln = глутамин; DMEM = среда Игла, модифицированная Дульбекко; MEM = минимально необходимая среда.

Среда RPMI 2650

Название	Состав
Первичная адгезионная среда для культивирования	DMEM: F12 (1: 1), 20% FBS, 2 мМ Gln, 1% NEAA, 0,4 Ед / мл пенициллин-0,4 мкг / мл стрептомицина, 0,6 МЕ гентамицинсульфата
Первичная культуральная среда	DMEM: F12 (1: 1), 10% FBS, 2 мМ Gln, 1% NEAA, 0.4 Ед / мл Пенициллин-0,4 мкг / мл Стрептомицин, 0,6 МЕ гентамицинсульфата
Проназа среда	EBSS + 1,4 мг / мл Проназа + 0,4 Ед / мл Пенициллин-0,4 мкг / мл Стрептомицин, 0,6 МЕ
MEM, 10% FBS, 2 мМ Gln, 0,4 Ед / мл Пенициллин-0,4 мкг / мл Стрептомицин

Клетки высевали в покрытые коллагеном Т-флаконы для культур клеток (Т-флаконы инкубировали заранее с 0,05 мг / мл раствора коллагена крысиного хвоста (Primacyte, Шверин, Германия) в течение 24 ч при 37 ° C) с плотностью клеток ~ 10 ⁶ клеток / мл и культивированием при 37 ° C, 5% CO ₂ и 95% относительной влажности.Среду заменяли на первичную культуральную среду (DMEM: F12 (1: 1), 10% FBS, 2 мМ Gln, 1% NEAA, 20 ед. Пенициллина, 20 мкг стрептомицина, 300 МЕ / мг гентамицинсульфата) через 24 часа. Обмен был необходим для сдерживания роста фибробластов из-за снижения концентрации в сыворотке. Клетки регулярно разделяли трипсином (трипсин / ЭДТА, Biochrom, Берлин, Германия) в течение 10 минут при 80% конфлюэнтности.

Для истощения фибробластов культуру инкубировали с раствором трипсин / ЭДТА в течение 4 минут при 37 ° C два раза в неделю.Тот факт, что фибробласты менее прочно прилипают к поверхности колбы для культивирования клеток, использовали для уменьшения количества фибробластов путем регулярных кратковременных стадий трипсинирования. Супернатант, содержащий фибробласты, отбрасывали, тогда как оставшиеся прилипшие эпителиальные клетки промывали PBS. Добавляли свежую среду культивирования.

Для посева во вставки клеточной культуры (ThinCert ^TM, Greiner Bio-one, Frickenhausen, Германия) первичные клетки выделяли из Т-колб с помощью двухэтапной трипсинации для истощения оставшихся фибробластов (IV).Клеточную культуру сначала обрабатывали раствором трипсин / ЭДТА в течение 4 мин и супернатант удаляли. Затем была проведена дополнительная стадия трипсинирования в течение 6 мин для удаления эпителиальных клеток. Мембранные вставки покрывали коллагеном, как описано ранее для колб для культивирования клеток, и засевали 1 × 10 ⁵ клеток на вставку. Клетки культивировали погруженными на один день во вкладыши для клеточных культур. Через 24 часа апикальную среду удаляли для культивирования клеток в условиях ALI (260 мкл среды на лунку) в течение 21 дня.Клетки промывали апикально 200 мкл PBS и среду (260 мкл / лунку) меняли каждые два дня.

2.1.2. Культивирование RPMI 2650

Клетки RPMI 2650 культивировали в среде RPMI 2650 (MEM, 10% FBS, 2 мМ Gln, 10 ед. Пенициллина-10 мкг стрептомицина) при 37 ° C, 5% CO ₂ и 95% относительной влажности. Клетки регулярно разделяли при 80-90% конфлюэнтности 5-минутной обработкой трипсином (трипсин / ЭДТА).

Для экспериментов по проникновению клетки RPMI 2650 с числом пассажей меньше 16 высевали во вставки для клеточных культур (ThinCert ^TM, Greiner Bio-one, Фриккенхаузен, Германия) с плотностью 1 × 10 ⁵ клеток на вставку.Через 24 часа в условиях погружения апикальный объем удаляли и клетки культивировали в условиях ALI в течение 21 дня. Культуру ALI промывали каждые два дня апикально 200 мкл предварительно нагретого PBS для удаления диффузной среды. Кроме того, 260 мкл свежей среды наносили базолатерально.

2.1.3. Измерение TEER

Для оценки целостности клеточного слоя использовалось измерение трансэпителиального электрического сопротивления. Поэтому вставки для клеточных культур апикально заполняли 350 мкл MEM без фенолового красного (Gibco ^®, Invitrogen, Дармштадт, Германия), а базолатеральные — 500 мкл MEM.Для уравновешивания клетки инкубировали 20 мин при 37 ° C и 15 мин охлаждали до комнатной температуры (RT). Величину TEER каждой покрытой клетками мембраны определяли в трех повторностях с использованием эпителиального вольтометра EVOM и электродов в виде палочек (World Precision Instruments, Сарасота, Флорида, США). Необработанные данные обрабатывали путем вычитания холостого опыта (вставки без ячеек) и умножения на площадь роста мембраны (0,336 см ²).

2.2. Permeation

Для проведения экспериментов по проникновению среду заменили на 260 мкл MEM без фенолового красного.Для первичных клеток в среду добавляли 10% FBS. Для анализа проницаемости раствора флуоресцеина изотиоцианат-декстран (FITC-декстран) на апикальную поверхность клеточного слоя наносили 100 мкл раствора с 500 мкг / мл FITC-декстрана (Sigma Aldrich, Тауфкирхен, Германия) в PBS. Эксперименты проводились в нормальных условиях культивирования клеток при 37 ° C, 5% CO ₂ и 95% относительной влажности. Проницаемость изучали в течение 24 часов. Объем 20 мкл был взят в качестве образца из базолатерального компартмента при 0.5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч и 12 ч. Чтобы поддерживать постоянный базолатеральный объем, добавляли 20 мкл свежей среды. Образцы разбавляли 1: 5 PBS и анализировали с помощью флуоресцентной спектрометрии (Spectra Max M5e, Molecular Devices, Сан-Хосе, Калифорния, США) при 490/520 нм.

2.3. Иммунофлуоресцентное окрашивание

Иммунофлуоресцентное окрашивание (IF) проводили, как описано ранее [31], с той разницей, что покрытые клетками мембраны окрашивали непосредственно во вставке с культурой клеток и переносили на предметное стекло в качестве последнего шага.Вкратце, предметные стекла промывали PBS pH 7,4 три раза в течение 5 минут с последующей блокировкой блокирующим раствором (4% BSA, 0,5% сапонина и 10% нормальная козья сыворотка в PBS pH 7,4) в течение по крайней мере 2 часов или в течение ночи. Первичные антитела () разводили 1: 100 в блокирующем буфере без нормальной козьей сыворотки и инкубировали во вставке с культурой клеток в течение 24-48 часов при 4 ° C. Затем срезы промывали (5 мин, 10 мин и 15 мин) и инкубировали с соответствующими вторичными антителами (1: 500, разведенными в PBS pH 7.4) на 2 ч. После повторной трехкратной промывки слайды помещали в монтажную среду Fluoroshield ™, содержащую DAPI (4 ‘, 6-диамидин-2-фенилиндол; Sigma-Aldrich, Тауфкирхен, Германия).

Таблица 2

Список антител, использованных в этом исследовании. FITC: флуоресцеин-изоцианат; HRP: пероксидаза хрена; ZO-1: zonula occludens-1.

Антитело	Антиген	Иммуноген	Хозяин	Источник, кат. #
Антитело против MUC5AC (45M1)	Пептидное ядро муцина желудка M1 (Mucin 5AC)	Муцин M1	мышь	Novus Biologicals, Centennial, CO, USA, Cat.# NBP2-15196
Анти-ZO-1 (ZMD.437)	Синтетический пептид ZO-1	, полученный из N -концевой области ZO-1 человека, собаки, мыши и крысы. кролик	Thermo Fisher Scientific, Драйайх, Германия, кат. # 40-2300
Анти-ацетилированный тубулин (6-11B-1)	Ацетилированный тубулин	ацетилированный тубулин из внешней ветви Strongylocentrotus purpuratus	мышь	Sigma Catkirchen, Германия.# T7451
Анти-β-актин (AC-15)	β-актин	не указано	мышь	Sigma Aldrich, Тауфкирхен, Германия, кат. # A5441
Анти-мышиный IgG-Alexa Fluor ^® 488	цельномолекулярный мышиный IgG	не указан	Goat	Jackson Immuno Research Europe Ltd., Кембриджшир, Великобритания, Cat. # 115-545-003
Кроличий IgG-Rhodamine Red ™ -X	Полномолекулярный кроличий IgG	не указан	donkey	Jackson Immuno Research Europe Ltd., Кембриджшир, Великобритания, Cat. # 711-295-152
Анти-мышиный IgG-HRP	цельномолекулярный мышиный IgG	не указано	козий	Sigma Aldrich, Тауфкирхен, Германия, кат. # AP5278
Анти-кроличий IgG-HRP	Цельномолекулярный кроличий IgG	не указан	Goat	Jackson Immuno Research Europe Ltd., Кембриджшир, Великобритания, кат. № 111-035-003

2.4. Криосекционирование и колориметрическое окрашивание мембран вставки клеточной культуры

Вставки клеточной культуры фиксировали в 4% параформальдегиде в течение 10 минут, криоконсервировали в 30% сахарозе в течение ночи и хранили при 4 ° C до разделения.Перед разделением мембраны залили желатином (7,5% желатина и 30% сахарозы в PBS [52]), чтобы обеспечить точную настройку для разделения. Мембраны разрезали на срезы 14 мкм с использованием криостата при -25 ° C (HM525 NX, Thermo Fisher Scientific, Драйайх, Германия) и устанавливали на предметные стекла Superfrost ^® Plus Micro (VWR, Дармштадт, Германия). Для окрашивания гематоксилином-эозином предметные стекла промывали дистиллированной водой в течение 1 мин, после чего следовала 5-минутная стадия окрашивания гематоксилином. Предметные стекла обесцвечивали под проточной водопроводной водой в течение 3 мин и окрашивали эозином Y-0.5% -ная кислота (Sigma-Aldrich, Тауфкирхен, Германия) на 5 мин. После дополнительной стадии обесцвечивания (0,5 мин) предметные стекла были обезвожены (75% этанол, 96% этанол, 100% этанол, ксилол; 2 минуты каждое) и помещены в монтажную среду Eukitt® Quick отвердевшую (Sigma-Aldrich, Тауфкирхен, Германия. ).

2.5. ПЦР с обратной транскрипцией (RT PCR)

Анализ транскриптов проводили, как описано ранее [31]. Вкратце, суммарную РНК выделяли из клеточных лизатов с использованием TRIzol (Invitrogen ^TM, Dreieich, Германия) в соответствии с инструкциями производителя.Для обратной транскрипции использовали 1 мкг общей РНК. Через праймеры oligo dT15 (Bioron, Людвигсхафен, Германия) и 400 ед. Reverase ^® (Bioron, Людвигсхафен, Германия) транскрибировали мРНК в кДНК.

Для ПЦР-анализа библиотеки кДНК 1 мкг кДНК, 1 мкМ праймеров (см.), 25 мМ MgCl ₂, 2,5 мМ dNTP Mix и 0,5 Е / мкл полимеразы Taq разводили в 10-кратном буфере Taq-PCR (все Bioron , Людвигсхафен, Германия).

Таблица 3

Последовательности праймеров мишеней MUC5AC и β-актина для ОТ-ПЦР.

мРНК-мишень	Прямой праймер (5′-3 ‘)	Обратный праймер (5′-3′)
MUC5AC	CCGGGCCTCACTGTGCAAC9 901 901 9015 90 15 CCTGTGCAAC9	GACACCAGGGCGTGATGG	GCAGCTCGTAGCTCTTCTCC

Реакцию ПЦР проводили со следующими параметрами: начальная денатурация в течение 30 с при 95 ° C, 40 циклов с денатурацией при 95 ° C в течение 30 с, отжиг при 60 ° C в течение 30 с. , удлинение при 72 ° C в течение 60 с и окончательное удлинение при 72 ° C в течение 10 мин.Продукты ПЦР анализировали с помощью электрофореза в агарозном геле.

2.6. Дот-блот

Экспрессию MUC5AC анализировали с помощью дот-блоттинга, поскольку высокомолекулярный белок трудно анализировать с помощью вестерн-блоттинга [53]. Образцы собирали из апикальной промывки культур ALI с помощью PBS, а также из лизатов тканей и клеток. Лизаты получали, как описано ранее [31]. Для дот-блот-анализа 2 мкл этих образцов наносили на нитроцеллюлозную мембрану. Мембрану блокировали инкубацией с 5% сухим обезжиренным молоком (в PBS pH 7.4, 0,1% Tween20 (PBST)) в течение 2 ч при комнатной температуре. Первичное антитело против MUC5AC () разводили 1: 5000 в PBST и инкубировали в течение 24 часов при 4 ° C. Мембрану промывали 4 раза PBST, а затем инкубировали с HRP-связанным вторичным антителом (разведение 1: 4000 в PBST) в течение 1 часа при комнатной температуре. После еще 4 стадий промывки мембрану проявили с использованием субстрата хемилюминесценции Immobilon ^® (Merck Millipore, Дармштадт, Германия). Анализ проводился системами Fusion FX Imaging (VILBER Lourmat, Collégien, Франция) и Image J (java.версия: 1.8.0_171, Национальный институт здравоохранения, Бетесда, Мэриленд, США).

2.7. Вестерн-блот

Вестерн-блот выполняли, как описано ранее [31]. Вкратце, клеточные лизаты получали с использованием охлажденного буфера для лизиса клеток RIPA (10 мМ Трис-Cl, pH 8,0; 1 мМ ЭДТА, 0,5 мМ EGTA, 1% Тритон X-100; 0,1% дезоксихолата натрия, 0,1% ДСН и 140 мМ NaCl и смесь ингибиторов протеаз (Thermo Fisher Scientific, Dreieich, Германия) и осторожное перемешивание. Загружали равные объемы гомогенизированной ткани, разделяли их в 12.5% SDS PAGE и наносили на нитроцеллюлозную мембрану (Carl Roth, Карлсруэ, Германия). Мембрана была заблокирована (5% сухого обезжиренного молока в PBS / 0,1% Tween20, pH 7,4). Первичные антитела (1: 5000) инкубировали в течение ночи при 4 ° C. Вторичные антитела разводили 1: 100 000 (анти-кроличий IgG-HRP) и 1: 4000 (анти-мышиный IgG-HRP). Детектирование сигнала осуществляли путем проявления мембраны с хемилюминесцентным субстратом Immobilon ^® (Merck Millipore, Дармштадт, Германия) в соответствии с инструкциями производителя.

2.8. Статистика

Значимость данных оценивалась с помощью непарного t -теста (GraphPad Prism 8), сравнивающего первичные назальные клетки с клеточной линией RPMI 2650. Точные числа повторов делятся на технические повторы ( n ) и биологические повторы ( N ), означающие разных свиней, и адресуются в подзаголовках графиков.

3. Результаты

Растущий интерес к интраназальной доставке требует разработки и оценки специализированных моделей in vitro для сокращения использования лабораторных животных для исследований транспорта и проникновения лекарств.Эти модели должны отображать основные параметры слизистой оболочки, которые влияют на проникновение лекарства. Здесь мы определили наиболее важные параметры, такие как рост определенных монослоев, образование ресничек (клиренс лекарственного средства), плотно связанные слои клеток и физико-химическая среда (слизь). Актуальной современной моделью назальных эпителиальных клеток является линия опухолевых клеток RPMI 2650 [21,39]. В качестве альтернативы линиям опухолевых клеток во многих областях все больше внимания уделяется первичным клеточным моделям.Здесь цель этого исследования состояла в том, чтобы установить надежный протокол для культивирования первичных эпителиальных клеток носа и разработать соответствующую модель первичных эпителиальных клеток. Эта модель должна особенно отображать первый эпителиальный барьер во время интраназальной доставки лекарственного средства и, следовательно, будет сравниваться со стандартной клеточной моделью in vitro.

3.1. Оценка первичных клеток носа и RPMI 2650 в отношении характеристик модели обонятельной слизистой оболочки — монослой, плотный рост, реснички и продукция слизи

Общим наблюдением первичного культивирования назальных клеток был медленный рост эпителиальных клеток наряду с более быстрым ростом нежелательных фибробластов и быстрым рост бактериальных загрязнений (A, B).Для роста фибробластов мы определили, что содержание сыворотки в среде для культивирования клеток является наиболее влиятельным фактором. Первичные клетки показали плохую адгезию к покрытым коллагеном колбам для культивирования клеток при уровне сыворотки 10%. Повышение концентрации в сыворотке до 20% привело к появлению первичных клеток, которые прикреплялись к коллагеном колбам для культивирования клеток через 3–4 часа. Однако содержание в сыворотке 30% увеличивало, прежде всего, рост фибробластов и уменьшало рост эпителиальных клеток. Следовательно, несмотря на положительное влияние на адгезию к поверхности клеточного флакона, отрицательное воздействие на рост фибробластов уравновешивало эти преимущества.Следовательно, посев клеток с содержанием сыворотки 20% с последующим изменением сыворотки на 10% после адгезии (5 ч) оказался методом выбора для культивирования первичных носовых эпителиальных клеток свиней.

Морфология первичных носовых эпителиальных клеток свиней. ( A ) Обонятельные первичные клетки, 24 ч в культуре. ( B ) Загрязнение фибробластов в первичных эпителиальных клетках. ( C , D ) Морфологический вид OEPC и REPC: маленькие круглые или булыжниковидные и большие плоские эпителиальные клетки; хорошо видны клеточные мембраны.( E ) REPC: везикулярные клетки. ( F ) Красный прямоугольник: ресничные клетки могут быть подвижными или неподвижными (частота биений> 5 Гц). Длина ресничек ~ 10 мкм. OEPC: первичные клетки обонятельного эпителия; REPC: первичные клетки респираторного эпителия; Масштабные линейки: 100 мкм.

Морфологически большинство первичных клеток респираторного эпителия (REPC) и первичных клеток обонятельного эпителия (OEPC) имели типичную плоскую и квадратную форму булыжника с размерами от 10 мкм до 100 мкм (C, D).В частности, в культурах REPC были обнаружены некоторые клетки, содержащие более крупные везикулы (E). Эти клетки имели морфологическое сходство с бокаловидными клетками или клетками железы. Ресничные клетки наблюдались в OEPC и REPC, однако REPC обнаруживал значительно больше клеток с подвижными ресничками, тогда как в OEPC также присутствовали первичные неподвижные реснички (F). Подвижные реснички имели среднюю длину 10 мкм с частотой биений> 5 Гц (дополнительные материалы, видео S1).

Для исследования общего роста клеток первичных эпителиальных клеток носа и линии опухолевых клеток RPMI 2650 через 21 день в условиях ALI было выполнено колориметрическое окрашивание (гематоксилин / эозин, A – C) криосрезов покрытых клетками мембран.OEPC и REPC росли в монослоях в условиях ALI, тогда как клетки RPMI 2650 образовывали до 10 слоев. В отличие от OEPC, культуры REPC состояли из более и более мелких клеток, что приводило к неровной поверхности моноклеточного слоя (B). Кроме того, распределение ресничек и образование плотных контактов определяли с использованием иммунофлуоресцентного (IF) окрашивания против ацетилированного α-тубулина (маркер ресничек [54]) и ZO-1 (маркер плотных контактов [55]) (D – F). OEPC продемонстрировал самый высокий сигнал для α-тубулина, ацетилированного маркером ресничек.IF против ZO-1 показал, что REPC образует наибольшее количество плотных стыков. Только слабый сигнал для обоих маркерных белков наблюдался в RPMI 2650.

Характеристика обонятельных и респираторных первичных клеток по сравнению со стандартной клеточной линией RPMI 2650. Монослои необходимы для оценки транспорта через эпителиальный слой в слизистой оболочке носа: 14 мкм Были сделаны срезы первичных клеток обонятельного эпителия (OEPC, A ), первичных клеток респираторного эпителия (REPC, B ) и RPMI 2650 ( C ), выращенных на мембране клеточной вставки в течение 21 дня.Морфологические особенности, такие как плотные контакты и образование ресничек, являются важными факторами, влияющими на исследования проницаемости и клиренса лекарств. Ацетилированный α-тубулин является обычным маркером ресничек [54]. ПФ двойное окрашивание ацетилированного α-тубулина и маркера плотного соединения zonula occludens-1 (ZO-1) культур ALI OEPC ( D ), REPC ( E ) и RPMI 2650 ( F ) через 21 год. были сделаны дни инкубации. Дополнительной особенностью клеток слизистой оболочки является способность продуцировать слизь.В этой работе был использован маркерный белок муцин 5AC, поскольку обонятельная слизистая оболочка должна быть смоделирована, прежде всего, для исследования транспорта от носа к мозгу. И снова IF выполнялась в OEPC ( G ), REPC ( H ) и RPMI 2650 ( I ). Масштабные линейки: 100 мкм.

Помимо ресничек и плотных контактов, физико-химическая среда эпителия также влияет на вещества, вводимые интраназально. Поэтому продукцию муцина MUC5AC исследовали с помощью IF (G – I), RT-PCR (A) и дот-блоттинга (B).Как анализ лизата клеток дот-блоттингом, так и анализ IF показали, что OEPC имеет самую высокую иммунореактивность против MUC5AC. В ОТ-ПЦР нет существенной разницы между c.n. media и первичные эпителиальные клетки носа. Напротив, клетки RPMI 2650 показали значительно более низкий уровень транскрипта MUC5AC и отсутствие сигнала в дот-блоттинге. Иммуномечение против MUC5AC приводило к слабым сигналам в RPMI 2650 и REPC по сравнению с OEPC.

Экспрессия муцина MUC5AC и иммунореактивность в первичных клетках носовой полости.( A ) Анализ транскрипции (RT-PCR) гена MUC5AC в первичных клетках обонятельного эпителия (OEPC), первичных клетках дыхательного эпителия (REPC), линии опухолевых клеток RPMI 2650 и в среде concha nasalis (среда cn ). Сигнал транскрипта MUC5AC соотносился с сигналом транскрипта бета-актина. Значимость рассчитывалась путем сравнения данных OEPC, REPC и RPMI 2650 с данными c.n. media данные транскрипции с использованием непарного t-критерия.* p <0,05; n = 4; планки ошибок представляют собой среднее ± стандартное отклонение. ( B ) Дот-блот-анализ белка MUC5AC в лизатах OEPC, REPC, RPMI 2650 и c.n. СМИ . Все культуры OEPC и REPC, показанные в ( A , B ), культивировали в течение 14 дней in vitro в Т-колбах. ( C ) Иммунореактивность против MUC5AC в OEPC, которые сначала культивировали в течение 7 дней в Т-колбе с минимальной конфлюэнтностью 70%, затем в условиях ALI дополнительные 20 дней.Апикально секретируемую слизь собирали в указанные дни, соответствующие продукции муцина от 2 до 3 дней. Статистический анализ: непарный t -тест, * p <0,05 по сравнению со стандартной моделью RPMI 2650.

Кроме того, мы проанализировали присутствие секретируемого MUC5AC на апикальной поверхности культур OEPC ALI, промывая каждый люминальный отсек. 3-4 дня. Затем супернатант промывочного буфера анализировали дот-блоттингом на иммунореактивность против MUC5AC (C).На 6 день в условиях ALI наблюдался самый высокий сигнал. Через 10 дней уровень протеина оставался на постоянном уровне до 20 дней.

3.2. FITC-Dextran Permeation Thought RPMI 2650 и носовые первичные клеточные барьеры

Анализ значений TEER 21-дневных культур ALI RPMI 2650, OEPC и REPC ALI показал, что REPC с 846 ± 550 Ом · см ² показал самые высокие значения TEER затем следует OEPC (648 ± 371 Ом · см ²) и последний RPMI 2650 (66 ± 5 Ом · см ²; A).Аналогично данным о проницаемости, первичные клетки носа показали значительно более высокую вариабельность, отображаемую как более высокие стандартные отклонения по сравнению с RPMI 2650. Наибольшее значение TEER, измеренное для OEPC, составило 1000 Ом · см ², тогда как REPC достигло значения TEER 1600 Ом · см ².

Сравнение проницаемости FITC-декстрана и значения TEER носовых первичных клеток по сравнению с RPMI 2650. ( A ) Значения TEER для OEPC, REPC и RPMI 2650 через 21 день ALI. ( B ) Данные о проницаемости FITC-декстрана: Значения FITC-декстрана, проникающего через клеточный слой, нормализовали к общему количеству FITC-декстрана.( C ) Поток FITC-декстрана через слой OEPC, REPC и RPMI 2650 через 24 часа. ( D ) Корреляция процентной проницаемости FITC-декстрана через 24 часа и значения TEER. Статистический анализ: непарный t -тест, * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, **** p <0,0001; все сравнивали со стандартной моделью RPMI 2650. OEPC: первичные клетки обонятельного эпителия; REPC: первичные клетки респираторного эпителия; TEER: Трансэпителиальное электрическое сопротивление.FITC-декстран: флуоресцеин-изотиоцианат-декстран; N = 4, n = 21; Планки погрешностей представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение всех повторений.

Для оценки функции клеточного барьера определяли значения TEER клеточных слоев через 21 день в условиях ALI и анализировали проникновение FITC-декстрана из просветного / апикального в аблюминальный / базолатеральный компартмент. Определение проницаемости проводилось в течение 24 часов с разным временем отбора проб. Результаты сравнивали с контролем диффузии без клеток (только мембрана вставки культуры клеток).Здесь RPMI 2650 показал самую высокую проницаемость за все время исследования по сравнению с OEPC и REPC. Через 24 часа 11,7 ± 0,9% FITC-декстрана проникли через клетки RPMI 2650, тогда как OEPC показал проницаемость 3,1 ± 2,0%, а REPC привел к 3,7 ± 2,0% FITC-декстрана (B). Достигается равновесие для FITC-декстрана в просвете и аблюминальном отделении вставки. Следует отметить, что это равновесие устанавливается раньше в контрольной вставке без ячеек и ограничивает максимальный поток молекул в этой статической системе (см. Дополнительные материалы на рис. S1A, B).Поскольку в опубликованной литературе этот факт обычно не подтверждается, мы нормализовали эти результаты к максимальной концентрации FITC-декстрана, который способен диффундировать в аблюминальный отсек за то же время (дополнительные материалы, рисунок S1B). Молекулярный поток был рассчитан для каждого исследуемого типа клеток и отображен как количество FITC-декстрана, которое смог преодолеть эпителиальный барьер за время и расстояние (C). Здесь очевидно, что ячейки RPMI 2650 довольно негерметичны и демонстрируют значительно более высокий поток по сравнению с OEPC и REPC.

В этих экспериментах мы наблюдали корреляцию проницаемости и значения TEER для OEPC и REPC (D). Для клеток RPMI 2650 корреляции не наблюдалось, поскольку измеренные значения TEER показали очень узкий диапазон от 55 Ом · см ² до 75 Ом · см ². Таким образом, более высокое значение TEER не привело к более низкому потоку. В отличие от REPC и OEPC, более высокое значение TEER привело к более низкому потоку. Мы определили минимальное значение TEER около 300 Ом · см ², которое, по-видимому, необходимо для первичных клеток для достижения воспроизводимых результатов проницаемости.Следовательно, все вставки с клеточными слоями, использованные для экспериментов с флюсом с FITC-декстраном, должны были соответствовать этому критерию.

4. Обсуждение

Возрастающая важность интраназальной доставки лекарств приводит к растущей потребности в адекватных моделях для тестирования проникновения лекарств через различные носовые эпителии. В обонятельной области сенсорные нейроны, расположенные в эпителии, вовлечены в транспорт лекарств: либо с прямым захватом дендритными выступами, либо эпителиальными клетками или клетками железы, в значительной степени в зависимости от молекулы [5,56,57].Для демонстрации пути и транспорта лекарств в мозг in vivo необходимы исследования, в которых внутриклеточный транспорт в нейронах может быть определен с использованием эксплантатов слизистой оболочки ex vivo [31,57]. Однако исследования обонятельного эпителия носа труднее проводить in vivo и ex vivo, поскольку эта область довольно недоступна и труднодоступна [26,58]. Модели in vitro представляют собой надежные инструменты для моделирования активного или пассивного транспорта через первый эпителиальный барьер без моделирования транспорта нейронов. Тем не менее, клеточные системы in vitro можно рассматривать как упрощенные модели первого эпителиального барьера.Их можно использовать для изучения специфических переносчиков высокомолекулярных молекул и неспецифической диффузии малых молекул [59,60,61]. Тем не менее, учитывая механизм транспорта и специфические характеристики типа клеток, необходимо установить строгие критерии для этих клеточных моделей. В слизистой оболочке носа эпителиальные клетки образуют первый барьер для интраназальной доставки лекарств. Они несут ответственность либо за поглощение, либо за выведение введенных лекарств [6,62]. Параметры, которые влияют на поглощение веществ с более высокой молекулярной массой, в основном относятся к типу клеток (например,g., железистые клетки, шустентакулярные клетки, связанные с иммунной системой микроскладчатые клетки и т. д.) и экспрессию специфических транспортных белков, таких как аминопептидазы, для исследований проникновения пептидов [26,31,42,63]. Кроме того, выведение лекарственного средства вместе с барьерами слизистой оболочки носа тесно связано с образованием и биением ресничек [62]. В обонятельном эпителии описано, что клетки образуют неподвижные реснички. Однако было продемонстрировано, что так называемые участки слизистой оболочки дыхательных путей существуют в regio olfactoria , которые состоят из эпителиальных клеток с бьющимися ресничками.Следовательно, сложнее определить скорость клиренса только обонятельной слизистой оболочки [10]. Кроме того, для стабильности лекарственного средства необходимо учитывать физико-химическую среду, которая включает образование слизи и рост в условиях ALI [64]. В соответствии с этими параметрами, которые влияют на проникновение лекарственного средства на слизистую оболочку носа, мы установили следующие критерии для модели in vitro: плотный эпителиальный барьер и образование плотных соединений, клеточный монослой, образование ресничек и образование слизи.

Стандартные модели проницаемости носа часто основаны на линии опухолевых клеток RPMI 2650.Эта постоянная клеточная линия происходит от анапластической плоскоклеточной карциномы носовой перегородки, которая является частью респираторной области носа. Человеческое происхождение делает эту клеточную линию выгодной с точки зрения сопоставимости видов. Более того, было описано, что эта клеточная линия имитирует слизистую оболочку носа человека и хорошо изучена с точки зрения экспрессии слизеподобного материала, аминопептидаз, переносчиков ABC и SLS, структуры цитокератина, плотных контактов и роста в условиях ALI [26,41, 65,66].Хорошая характеристика делает клеточную линию RPMI 2650 установленной моделью для интраназальной доставки. Однако, как сообщается, различия в обращении с этой клеточной линией сильно влияют на рост и экспрессию белка, что может поставить под сомнение надежность этой модели [37,67]. Кроме того, мы заметили, что скорость проникновения, а также значения TEER зависят от количества проходов клеток RPMI 2650; чем выше проход, тем ниже значение TEER и выше скорость проникновения (неопубликованное наблюдение).Таким образом, слизистая оболочка носа имеет гетерогенный состав из нескольких типов клеток, таких как реснитчатые, бокаловидные, столбчатые и базальные клетки, тогда как клеточная линия RPMI 2650 состоит только из плоских клеток, что оказывает ограничивающее влияние на физиологию этой модели. Кроме того, как и большинство линий опухолевых клеток, линия клеток RPMI 2650 страдает такими недостатками, как генетическая нестабильность, отсутствие дифференцировки и нестабильные профили экспрессии белков [37]. Подход, который, вероятно, лучше всего имитирует ситуацию in vivo, — это эксплантаты ткани ex vivo из обонятельной или респираторной слизистой оболочки.Такие эксплантаты содержат все особенности и правильный клеточный состав слизистой оболочки носа. Однако забор пробы со слизистой оболочки обоняния человека сопряжен с разумным риском. Тем не менее, ткань носа свиньи очень похожа на слизистую оболочку носа человека, и поэтому эксплантаты доступны от свиней на бойне [29]. Однако до сих пор нет доступного протокола культивирования для длительных исследований с этими образцами тканей. Мы обнаружили, что максимальное время культивирования составляет 8 часов, прежде чем целостность ткани будет сильно нарушена на гистологических срезах [31].Следовательно, для долгосрочных исследований, например, для анализа влияния лекарственных форм или поглощения лекарственного средства от пролонгированного высвобождения, эта модель ограничена.

Таким образом, мы сравнили долговременную культуру первичных носовых клеток, полученных из дыхательной и обонятельной слизистой оболочки свиней, со стандартной моделью RPMI 2650, чтобы получить больше информации о значимости потенциальных артефактов из-за использования линий раковых клеток.

4.1. Сравнение OEPC и REPC: различия в образовании барьера и экспрессии маркерного белка

Наши результаты показывают, что на самом деле существуют различия между OEPC и REPC с точки зрения образования плотных контактов и, следовательно, в значениях TEER, а также в выражении секреторный муцин MUC5AC.Эксперимент по проникновению, особенно в моменты времени отбора проб менее 8 часов, привел к более низкому проникновению через REPC по сравнению с OEPC. Это также может быть связано с более высокими значениями TEER REPC, как показано на корреляции значений TEER с проникающим FITC-декстраном (A). На значения TEER, среди прочего, влияют толщина клеточного слоя и образование плотных контактов [68]. Оба первичных типа клеток образуют только монослои, сопоставимые по размеру с эпителиальными клетками слизистой оболочки. Таким образом, мы заключаем, что REPC образуют более плотный барьер по сравнению с OEPC, что также проявляется в иммуноокрашивании плотных контактов (ZO-1).Это соответствует общепринятым знаниям об обонятельном и респираторном эпителии in vivo, поскольку эпителиальные клетки респираторного эпителия прочно связаны через плотные соединения, тогда как эпителиальные клетки обонятельного эпителия не прикреплены к обонятельным сенсорным нейронам ни плотно, ни с помощью щелевые переходы [69]. Таким образом, наши результаты относительно сигнала ZO-1 REPC сопоставимы с моделью первичных носовых клеток человека MucilAir ^TM [40]. В отличие от респираторного эпителия, обонятельные сенсорные нейроны расположены в обонятельном эпителии, окруженном сустентакулярными клетками.Обонятельные сенсорные нейроны прикреплены к этим клеткам и простираются от апикальной поверхности до обонятельной луковицы [9]. Известно, что нейрогенез обонятельных нейронов представляет собой непрерывный процесс замещения потерянных нейронов в эпителиальном слое, который оставляет брешь в эпителиальном слое до тех пор, пока новый нейрон не займет его место [70]. Следовательно, возможно, что меньшее количество плотных контактов и более низкое значение TEER, наблюдаемое в OEPC, коррелируют с нейрогенезом и связью между стентакулярными клетками и обонятельными сенсорными нейронами.Pezzulo et al. (2010) описали значения TEER в диапазоне от 700 до 1200 Ом · см ² для первичных клеток, происходящих из трахеи и бронхиального тракта, которые аналогичны значениям TEER для REPC в настоящем исследовании [47]. Однако для эпителиальных клеток носа человека TEER значения до 3155 Ом · см ² сообщаются [71,72]. Напротив, измерения TEER ex vivo иссеченной слизистой оболочки носа человека варьируются от 60 до 180 Ом · см ² [37]. Несоответствие между иссеченной слизистой оболочкой и первичными клетками, возможно, можно объяснить повреждением аксонов обонятельных сенсорных нейронов во время рассечения.Эти плотные контакты сильно зависят от присутствия определенных ионов. Сообщалось, что ионы Ca ²⁺ необходимы для образования плотных барьеров и высокого электрического сопротивления. Возможно, что иссеченная слизистая оболочка страдает от ионного истощения, когда она больше не связана с кровотоком, и поэтому имеет более низкий TEER [73]. Измерения TEER в эпителии дыхательных путей кролика in vivo привели к более высокому значению TEER, равному 260–320 Ом · см ² [74]. Помимо подготовки и образования плотных стыков, клеточный состав ткани, например.g., наличие обонятельных сенсорных нейронов играет важную роль в измерении TEER. Кроме того, протоки желез, такие как железы Боумена, также снижают значение TEER. В первичной культуре мы не наблюдали целых желез и нейронов. Следовательно, более высокие значения TEER могут быть результатом отсутствия протоков желез и пустотных нейронов.

Способность образовывать реснички разделяется REPC и OEPC, что видно по иммунореактивности против ацетилированного α-тубулина. Различные группы постулировали, что ацетилированный α-tubulin может быть селективным маркером для первичных (неподвижных) и подвижных ресничек поляризованных клеток [75,76,77].В культуре реснички имели среднюю длину 10 мкм и частоту биений> 5 Гц. Согласно литературным данным, это указывает на формирование здоровых ресничек [78,79,80]. В культуральных колбах бьющиеся реснички наблюдались в виде пятнистых кластеров, тогда как в условиях ALI клеточный слой демонстрировал конфлюэнтный сигнал для ацетилированного α-тубулина. Тем не менее, для дальнейшего проведения валидных экспериментов по изучению клиренса лекарств необходимо оптимизировать дифференцировку эпителиальных клеток в направлении клеток с подвижными ресничками, например, с использованием ретиноевой кислоты [81].Bateman et al. (2013), например, опубликовали модель эпителиальных клеток трахеи свиней для исследования вирусной инфекции и репликации. Они использовали сложную среду, содержащую эпидермальный фактор роста (EGF) для пролиферации и ретиноевую кислоту для стимуляции цилиогенеза [81]; Как и в настоящем исследовании, они получили реснитчатые клетки. Напротив, эти клетки росли в многослойных формах, при этом значения TEER увеличивались до 12 дней до 800 Ом см ² и затем уменьшались до 250–300 Ом см ² через 18 дней.Мы не наблюдаем этого эффекта, поскольку мы обнаружили значения TEER около 850 Ом см ² для REPC и 650 Ом см ² для OEPC после 21 дня культивирования ALI. Поскольку мы культивировали клетки в среде, содержащей сыворотку, без дополнительного добавления EGF или ретиноевой кислоты, должны быть другие факторы, влияющие на барьерную функцию, которые присутствуют в сыворотке, но не в бессывороточной среде для роста эпителия бронхов. Поскольку использование бессывороточной среды довольно дорого, большой интерес представляет дальнейшее исследование факторов, влияющих на формирование барьера, присутствующих in vivo и в сыворотке.В отличие от наших выводов и выводов Bateman et al. (2013), Дельгадо-Ортега и др. (2014) сообщили о модели протекающего барьера для клеток трахеи новорожденных свиней [81,82]. Вероятно, здесь снова играет роль влияние местоположения клеток in vivo и, возможно, также возраст донора на модель барьера. Что касается интраназальной доставки лекарств, использование обоих типов клеток — REPC и OEPC — для исследований барьера с донорскими свиньями схожего возраста может дать более подробную информацию о проникновении in vivo и о наиболее эффективном месте применения с точки зрения биодоступности.

Что касается экспрессии слизи, REPC показал более низкие уровни экспрессии секреторного муцина MUC5AC, но уровни транскрипта, аналогичные OEPC. В литературе уже описано, что экспрессия транскрипта и фактическое количество белка не всегда коррелируют [66]. Снижение продукции MUC5AC в OEPC, скорее всего, является результатом снижения количества клеток желез с течением времени, поскольку они растут не в условиях ALI in vivo, а в образованиях желез. Отсутствие необходимых факторов, таких как кальций, можно исключить, так как среду регулярно меняют и ее состав постоянен.Плато в продукции MUC5AC через 10 дней, возможно, связано с тем, что сами эпителиальные клетки (сустентакулярные клетки) способны продуцировать слизь in vivo [83]. Подтип муцина MUC5AC, как известно, в основном экспрессируется в боуменских железах обонятельной слизистой оболочки и поэтому является довольно плохим маркером респираторных эпителиальных клеток [64,84,85]. Мы провели скрининг этого маркерного белка, поскольку мы особенно заинтересованы в моделировании regio olfactoria для интраназальной доставки лекарств и, следовательно, применения лекарств на обонятельном эпителии.Отсутствие MUC5AC не означает, что в клетках отсутствует выработка слизи в целом, а означает только этот специфический тип муцина, который, как известно, высоко экспрессируется в обонятельной слизистой оболочке [84]. Aust et al. (1997) обнаружили, что MUC5AC экспрессируется только в субпопуляциях эпителиальных клеток нижней носовой раковины человека [86]. Более того, недавние исследования постулировали, что MUC5AC экспрессируется в более высоких количествах в обонятельной слизистой оболочке по сравнению с респираторной слизистой оболочкой, что соответствует результатам нашего исследования.Эти данные показывают четкие различия в паттернах экспрессии типа муцина (MUC1, MUC2, MUC5AC и MUC5B) между респираторными и обонятельными эпителиальными клетками [87]. Таким образом, это исследование подтверждает нашу гипотезу о том, что выбор клеточной модели должен основываться на месте нанесения препарата. Экспрессия MUC5AC была ранее обнаружена в первичных назальных эпителиальных клетках человека после 21 дня культивирования в условиях ALI, что соответствует нашим результатам с 21-дневной ALI-культурой OEPC [46]. Кроме того, условия культивирования были сравнимыми, несмотря на использование сред, содержащих сыворотку, которые, однако, не имели очевидного неблагоприятного воздействия на первичную эпителиальную культуру свиней.

Тем не менее, вместе взятые, есть несколько различий в отношении REPC и OEPC, которые могут влиять на проникновение лекарства. Таким образом, оказывается выгодным использовать тип клеток интересующей области для нанесения лекарственного средства.

4.2. Оценка модели первичных клеток: RPMI 2650 против первичного носового клеточного барьера

Наиболее заметными недостатками первичных клеток являются высокая вариабельность между разными партиями и медленный и ограниченный рост по сравнению с линиями опухолевых клеток.По этим и другим причинам в настоящее время стандартной моделью проницаемости слизистой оболочки носа является линия опухолевых клеток RPMI 2650 [26]. Измеренные здесь значения TEER и скорости проникновения соответствуют результатам других групп, что еще раз показывает, что RPMI 2650 хорошо воспроизводится [20,88,89]. Тем не менее, было обнаружено несколько различий между RPMI 2650 и первичными носовыми клетками, которые влияют на проникновение молекул. Вероятно, наиболее влияющим фактором является более низкое значение TEER ячеек RPMI 2650. Это сопровождается низкой экспрессией маркера плотных контактов ZO-1 по сравнению с первичными носовыми клетками.Парацеллюлярная проницаемость молекул сильно ограничена этими плотными контактами в эпителиальном барьере [49]. В литературе наблюдается большой разброс значений TEER, полученных для RPMI 2650 в условиях ALI, от большого наблюдаемого диапазона (от 41 Ом · см ² до 270 Ом · см ²), который, скорее всего, зависит от размера клетки. многослойность и количество проходов. По сравнению с первичными клетками, RPMI 2650 образует непроницаемые многослойные барьеры, как описано ранее [22,37,39,88,90].Мерсье и др. (2018) описали это несоответствие сильной зависимостью от условий культуры и опыта операторов. Поэтому значения TEER от 70 до 100 Ом · см ² считаются действительными для культур, выращенных в течение 21 дня в условиях ALI [37]. Возвращаясь к вышеупомянутым критериям для подходящей модели in vitro для интраназальной доставки лекарственного средства, первичные назальные эпителиальные клетки продемонстрировали в 10-13 раз более высокое значение TEER и значительно более высокие сигналы для маркерного белка ZO-1.Однако значения TEER, полученные для клеток RPMI 2650, аналогичны значениям TEER, наблюдаемым в иссеченной слизистой оболочке носа человека (значение TEER: от 60 до 180 Ом · см ²), как описано выше. В дополнение к возможным объяснениям низкого значения TEER эксплантов ex vivo, обсужденных выше, в целом довольно сомнительно сравнивать значение TEER однокомпонентной системы, такой как гомогенная модель RPMI 2650 или даже модели гетерогенных первичных клеток с Значения TEER из многокомпонентных систем, таких как иссеченная слизистая оболочка носа, поскольку последняя содержит такие компоненты, как e.g., железы и нейроны, влияющие на значения TEER.

Что касается продукции MUC5AC, RPMI 2650 показал самый низкий уровень транскрипта и очень низкий сигнал при иммунофлуоресцентном окрашивании. Это соответствует предыдущим исследованиям Berger et al. (1999), которые сообщили о несоответствии между экспрессией транскрипта и экспрессией белка в линиях опухолевых клеток [66]. В своей работе они утверждают, что синтез, созревание и секреция, скорее всего, регулируются посттранскрипционно.В общем, RPMI 2650 в основном представляют собой недифференцированные гомогенные эпителиальные клетки, которые происходят из плоского эпителия, который является частью слизистой оболочки дыхательных путей. Таким образом, вместе с отсутствием дифференцировки для образования бокаловидных клеток более низкая экспрессия MUC5AC по сравнению с OEPC объяснима [20]. Однако в современной литературе характер секреции слизи клетками RPMI 2650 показывает несоответствия в отношении уровня экспрессии и типа муцина, как ранее описано Mercier et al. (2018) [37].Это может быть связано с разными условиями культивирования или использованием клеток разного возраста. Для полной оценки экспрессии белка муцина модели RPMI 2650 необходимы дальнейшие исследования.

Что касается последнего критерия — образования ресничек — наши результаты показали очень низкие и диффузные сигналы для ацетилированного тубулина в RPMI 2650 по сравнению с четко определенными фибриллообразными структурами в OEPC и REPC. Несколько групп описали неспособность RPMI 2650 дифференцироваться и формировать реснички, что мы можем подтвердить в нашем настоящем исследовании [37,90].Кроме того, тенденция RPMI 2650 к образованию гомогенных мультислоев является крайне невыгодной, когда необходимо моделировать гетерогенные эпителиальные слои. Кроме того, эти клетки не поляризованы, как описано для эпителиальных клеток, а скорее недифференцированные круглые сшитые клетки без направления роста [91]. Также сомнительно, демонстрируют ли клетки, расположенные в промежуточных слоях, тот же фенотип, что и клетки, выросшие на интерфейсе ALI. Модель опухолевых клеток не подходит для транспортных механизмов, когда требуются поляризованные клетки, тогда как модель первичных клеток в достаточной мере соответствует этим критериям.

5. Выводы

В настоящем исследовании мы впервые демонстрируем различия между первичными эпителиальными клетками обонятельной и респираторной носовой области. Следовательно, мы настоятельно рекомендуем использовать первичные клетки, происходящие из эквивалентного типа ткани, для модельного интраназального применения лекарств на обонятельной слизистой оболочке. Что касается сопоставимости первичных эпителиальных клеток свиньи и человека, мы получили аналогичные результаты для цилиогенеза и продукции слизи, а также аналогичные значения TEER [40,71,92].Поскольку значение TEER является современным параметром для оценки моделей барьеров, свинья подтверждается как адекватный заменитель ткани человека. Кроме того, для исследования сложных путей транспорта лекарственных средств следует отдавать предпочтение первичной клеточной культуре вместо линий опухолевых клеток RPMI 2650, поскольку эти клетки имеют разные физиологические особенности из-за их многослойного роста и отсутствия способности к дифференцировке. В целом, мы предполагаем, что гетерогенность первичных клеток является преимуществом по сравнению с RPMI 2650, поскольку мы видим различия в скорости поглощения молекул в разных клетках в наших предварительных данных.В заключение, мы настоятельно рекомендуем наблюдение за несколькими факторами, такими как экспрессия молекулы аналита, рецептора или переносчика, важность адекватной физико-химической среды и влияние ресничек, чтобы выбрать правильную модель для исследования проникновения. Модель первичных клеток является дешевой и надежной альтернативой линии опухолевых клеток RPMI2650 с тем преимуществом, что она обладает всеми характеристиками эпителиальных клеток in vivo и не имеет негативных свойств опухолевых клеток, таких как генетическая нестабильность.Таким образом, он может заменить модель опухолевых клеток даже при ранней оценке разработки лекарств, поскольку эффективность и токсичность лекарственного средства могут быть определены с большей сопоставимостью с ситуацией in vivo. Однако для полной оценки полного потенциала первичной клеточной модели необходимо провести эксперименты ex vivo для сравнения проникновения параклеточной транспортируемой молекулы, такой как FITC-декстран. Кроме того, наше исследование было сосредоточено на барьерной функции и специфических особенностях клеточного типа клеточных моделей.Мы изучали только межклеточный транспорт. Для дальнейшей оценки следует также оценить проникновение трансклеточных транспортируемых молекул, таких как маннит.

Благодарности

Особая благодарность Рене Хандрику из Университета Биберах за отличные консультации и техническую поддержку, когда это необходимо. Также особая благодарность Анжелике Рюк, Доминику Бизингеру и Светлане Калининой из основного центра конфокальной и многофотонной микроскопии Ульмского университета. Кроме того, за отличную поддержку в вопросах микроскопии авторы хотят поблагодарить Штефана Вайгеля из Технического университета Мюнхена.

Дополнительные материалы

Следующие данные доступны в Интернете по адресу https://www.mdpi.com/1999-4923/11/8/367/s1, Рисунок S1: Данные о проницаемости, относящиеся к контролю без ячеек, по сравнению с привязкой к общему FITC -декстран, видео S1: избиение ресничек в погруженной культуре OEPC.

Вклад авторов

Концептуализация, S.L., P.S. и K.S .; Методология, S.L., P.S., J.F., H.L. and K.S .; Валидация, J.F., S.L. и P.S .; Расследование, С.Л. и P.S .; Ресурсы, K.S .; Визуализация, С.L. и K.S .; Письмо — подготовка оригинального проекта, S.L., P.S. и K.S .; Написание — обзор и редактирование, J.F., H.L. и B.M .; Наблюдение, К.С. и B.M .; Администрация проекта, K.S .; Финансирование Приобретение, K.S.

Финансирование

Это исследование было поддержано грантом ЕС «N2B-patch» в рамках Европейской рамочной программы исследований и инноваций Horizon 2020 (грант № 721,098; www.n2b-patch.eu) из гранта «FcRn in Доставка лекарств », финансируемая Министерством науки, исследований и искусств земли Баден-Вюртемберг, из гранта« ALIVE », финансируемого Федеральным министерством экономики и энергетики (BMWi), и из стипендий Stiftung der Deutschen Wirtschaft (S.Л. и Дж. Ф.).

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Ссылки

1. Варнава В. Стратегии нацеливания лекарств в мозг для лечения неврологических заболеваний. J. Neurosci. Методы. 2019; 311: 133–146. DOI: 10.1016 / j.jneumeth.2018.10.015. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 2. Illum L. Назальная доставка лекарств: новые разработки и стратегии. Drug Discov. Сегодня. 2002; 7: 1184–1189. DOI: 10.1016 / S1359-6446 (02) 02529-1. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3.Neuwelt E., Abbott N.J., Abrey L., Banks W.A., Blakley B., Engelhardt B., Grammas P., Nedergaard M., Nutt J., Pardridge W. и др. Стратегии продвижения трансляционных исследований мозговых барьеров. Lancet Neurol. 2008. 7: 84–96. DOI: 10.1016 / S1474-4422 (07) 70326-5. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Illum L. Назальная доставка лекарств — возможности, проблемы и решения. J. Control. Выпускать. 2003. 87: 187–198. DOI: 10.1016 / S0168-3659 (02) 00363-2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Константино Х. Р., Иллюм Л., Брандт Г., Джонсон П.Х., Куэй С.С. Интраназальная доставка: физико-химические и терапевтические аспекты. Int. J. Pharm. 2007; 337: 1–24. DOI: 10.1016 / j.ijpharm.2007.03.025. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Лочхед Дж. Дж., Торн Р. Г. Интраназальная доставка биопрепаратов в центральную нервную систему. Adv. Препарат Делив. Ред.2012; 64: 614–628. DOI: 10.1016 / j.addr.2011.11.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Харкема Дж. Р., Кэри С. А., Вагнер Дж. Г. The Nose Revisited: Краткий обзор сравнительной структуры, функции и токсикологической патологии носового эпителия.Toxicol. Патол. 2006; 34: 252–269. DOI: 10.1080 / 01926230600713475. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9. Гизурарсон С. Анатомические и гистологические факторы, влияющие на интраназальную доставку лекарств и вакцин. Curr. Препарат Делив. 2012; 9: 566–582. DOI: 10,2174 / 156720112803529828. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Пайк С., Леман М., Сейден А.М., Дункан Х.Дж. Обонятельная биопсия. Arch. Отоларингол. Head Neck Surg. 1992; 118: 731–738. DOI: 10.1001 / archotol.1992.01880070061012. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11.Marttin E., Schipper N.G.M., Coos Verhoef J., Merkus F.W.H.M. Мукоцилиарный клиренс носа как фактор назальной доставки лекарств. Adv. Препарат Делив. Ред. 1998; 29: 13–38. DOI: 10.1016 / S0169-409X (97) 00059-8. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Грациадей П.П., Грациадей Г.М. Нейрогенез и регенерация нейронов обонятельной системы млекопитающих. I. Морфологические аспекты дифференцировки и структурной организации обонятельных сенсорных нейронов. J. Neurocytol. 1979; 8: 1–18. DOI: 10.1007 / BF01206454.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Моррисон Э., Костанцо Р. Морфология обонятельного эпителия человека и других позвоночных. Microsc. Res. Tech. 1992; 23: 49–61. DOI: 10.1002 / jemt.1070230105. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Миттал Д., Али А., М. Д. С., Бабута С., Сахни Дж. К., Али Дж. Понимание прямой доставки в мозг: текущее состояние и перспективы на будущее. Препарат Делив. 2014; 21: 75–86. DOI: 10.3109 / 10717544.2013.838713. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Яфек Б.В. Ультраструктура слизистой оболочки носа человека.Ларингоскоп. 1983; 93: 1576–1599. DOI: 10.1288 / 00005537-198312000-00011. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 16. Антон Ф., Пеппель П. Центральные проекции первичных афферентов тройничного нерва, иннервирующих слизистую носа: исследование пероксидазы хрена на крысах. Неврология. 1991; 41: 617–628. DOI: 10.1016 / 0306-4522 (91)

-Q. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Дитли А.М., Хаас А.Т., Фьюстер П.Х., Льюис Э., Болл М.Дж. Инфекции, вызванные вирусом герпеса человека, и болезнь Альцгеймера. Neuropathol. Прил. Neurobiol.1990; 16: 213–223. DOI: 10.1111 / j.1365-2990.1990.tb01158.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Балин Б.Дж., Бродвелл Р.Д., Салкмант М., Эль-Каллини М. Поступление периферически вводимого белка в ЦНС у мышей, крыс и беличьих обезьян. J. Comp. Neurol. 1986; 251: 260–280. DOI: 10.1002 / cne.

0209. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 19. Бахадур С., Патак К. Физико-химические и физиологические аспекты эффективного нацеливания от носа к мозгу. Мнение эксперта. Препарат Делив. 2011; 9: 19–31. DOI: 10.1517 / 17425247.2012.636801. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 20. Wengst A., Reichl S. Эпителиальная модель RPMI 2650 и трехмерная реконструированная слизистая оболочка носа человека в качестве моделей in vitro для исследований проницаемости носа. Евро. J. Pharm. Биофарм. 2010. 74: 290–297. DOI: 10.1016 / j.ejpb.2009.08.008. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Gonçalves V.S.S., Matias A.A., Poejo J., Serra A.T., Duarte C.M.M. Применение RPMI 2650 в качестве модели клеток для оценки твердых составов для интраназальной доставки лекарств.Int. J. Pharm. 2016; 515: 1–10. DOI: 10.1016 / j.ijpharm.2016.09.086. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 22. Kürti L., Veszelka S., Bocsik A., Dung N.T.K., zsvári B., Puskás L.G., Kittel A., Szabó-Révész P., Deli M.A. Влияние эфиров сахарозы на культуральную модель носового барьера. Toxicol. Vitr. 2012; 26: 445–454. DOI: 10.1016 / j.tiv.2012.01.015. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Накамура К., Майтани Ю., Такаяма К. Усиливающий эффект назальной абсорбции FITC-декстрана 4400 β-ситостерином β-D-глюкозидом у кроликов.J. Control. Выпускать. 2002. 79: 147–155. DOI: 10.1016 / S0168-3659 (01) 00540-5. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Грейнджер К.И., Гринвелл Л.Л., Мартин Г.П., Форбс Б. Проницаемость растворенных веществ с большой молекулярной массой после доставки частиц в клетки с воздушным интерфейсом, которые моделируют слизистую оболочку дыхательных путей. Евро. J. Pharm. Биофарм. 2009. 71: 318–324. DOI: 10.1016 / j.ejpb.2008.09.006. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. Николасцо Дж. А., Рид Б. Л., Финнин Б. С. Влияние различных условий in vitro на проницаемость слизистой оболочки рта.J. Pharm. Sci. 2003. 92: 2399–2410. DOI: 10.1002 / jps.10505. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 26. Шмидт М.К., Питер Х., Ланг С.Р., Дитцингер Г., Меркл Х.П. Клеточные модели in vitro для изучения проницаемости и метаболизма слизистой оболочки носа. Adv. Препарат Делив. Ред. 1998; 29: 51–79. DOI: 10.1016 / S0169-409X (97) 00061-6. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 27. Ким К.-Дж., Малик А.Б. Транспорт белка через эпителиальный барьер легких. Являюсь. J. Physiol. Клетка. Мол. Physiol. 2015; 284: L247 – L259. DOI: 10.1152 / ajplung.00235.2002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28. Моран Д.Т., Роули Дж.С., 3-й, Яфек Б.В. Электронная микроскопия обонятельного эпителия человека показывает новый тип клеток: микровиллярные клетки. Brain Res. 1982; 253: 39–46. DOI: 10.1016 / 0006-8993 (82) -0. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Wadell C., Björk E., Camber O. Назальная доставка лекарств — оценка модели in vitro с использованием слизистой оболочки носа свиньи. Евро. J. Pharm. Sci. 1999. 7: 197–206. DOI: 10.1016 / S0928-0987 (98) 00023-2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 30.Самсон Г., Де Ла Калера А.Г., Дюпюи-Жирод С., Фор Ф., Декюлье Э., Пайно Дж., Виньо К., Скоазек Дж. Ю., Пивот К., Плаучу Х. и др. Ex vivo исследование транспорта бевацизумаба через слизистую носа свиней. Евро. J. Pharm. Биофарм. 2012; 80: 465–469. DOI: 10.1016 / j.ejpb.2011.11.004. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 31. Ladel S., Flamm J., Zadeh AS, Filzwieser D., Walter JC, Schlossbauer P., Kinscherf R., Lischka K., Luksch H., Schindowski K. Аллогенный fc-домен поглощает IgG в носовой пластинке: Друг или враг интраназальной доставки ЦНС? Фармацевтика.2018; 10: 107. DOI: 10.3390 / фармацевтика10030107. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Glorieux S., Van den Broeck W., van der Meulen K.M., Van Reeth K., Favoreel H.W., Nauwynck H.J. Культура in vitro эксплантатов слизистой оболочки дыхательных путей свиней для изучения взаимодействия вирусов свиней с дыхательными путями. J. Virol. Методы. 2007. 142: 105–112. DOI: 10.1016 / j.jviromet.2007.01.018. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Тулински П., Флюит А.С., ван Путтен Дж.П.М., де Брюин А., Glorieux S., Wagenaar J.A., Duim B. Модель эксплантатов носовой слизистой оболочки свиней Ex vivo для изучения колонизации MRSA. PLoS ONE. 2013; 8: e53783. DOI: 10.1371 / journal.pone.0053783. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 34. Мур Г.Э., Сандберг А.А. Исследования линии опухолевых клеток человека с диплоидным кариотипом. Рак. 1964; 17: 170–175. DOI: 10.1002 / 1097-0142 (196402) 17: 2 <170 :: AID-CNCR2820170206> 3.0.CO; 2-N. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. Мурхед П.С. Линия опухолевых клеток человека с квазидиплоидным кариотипом (RPMI 2650) Exp.Cell Res. 1965; 39: 190–196. DOI: 10.1016 / 0014-4827 (65) ^{-4. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 36. Хейфлик Л., Мурхед П.С. Серийное культивирование штаммов клеток человека. Exp. Cell Res. 1961; 621: 585–621. DOI: 10.1016 / 0014-4827 (61)
-6. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 37. Мерсье К., Перек Н., Делавенн X. Подходит ли модель RPMI 2650 для носа in vitro для исследований транспорта лекарств? Евро. J. Drug Metab. Фармакокинет. 2018; 43: 13–24. DOI: 10.1007 / s13318-017-0426-х. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38.На К., Ли М., Шин Х., Чанг С. Формирование железоподобной структуры слизистой оболочки носа in vitro на чипе. Лабораторный чип. 2017 г. DOI: 10.1039 / C6LC01564F. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 39. Мерсье К., Ходин С., Хе З., Перек Н., Делавенн X. Фармакологическая характеристика модели RPMI 2650 как соответствующего инструмента для оценки проницаемости интраназальных препаратов. Мол. Pharm. 2018; 15: 2246–2256. DOI: 10.1021 / acs.molpharmaceut.8b00087. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 40. Мерсье К., Жакеру Э., Хе З., Ходин С., Перек Н., Баудар Д., Делавенн X., Констан С. Фармакологическая характеристика модели носа 3D MucilAir ™. Евро. J. Pharm. Биофарм. 2019; 139: 186–196. DOI: 10.1016 / j.ejpb.2019.04.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 41. Молл Р., Креплер Р., Франке В.В. Сложные паттерны полипептидов цитокератина, наблюдаемые в некоторых карциномах человека. Дифференциация. 1982; 23: 256–269. DOI: 10.1111 / j.1432-0436.1982.tb01291.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 42. Питер Х.Г. Таблицы клеточных культур для изучения метаболизма назальных пептидов на модели человеческой назальной линии клеток RPMI 2650.ETH Zürich; Цюрих, Швейцария: 1996. [Google Scholar] 43. Стратфорд Р.Э., Ли В.Х.Л. Активность аминопептидазы в гомогенатах различных абсорбирующих слизистых оболочек кролика-альбиноса: влияние на доставку пептидов. Int. J. Pharm. 1986; 30: 73–82. DOI: 10.1016 / 0378-5173 (86) ^{-7. [CrossRef] [Google Scholar] 44. Чао Р. Взаимодействие эпителиальных клеток в культуре раздела воздух-жидкость. Vitro Cell. Dev. Биол. 1989. 25: 460–465. DOI: 10.1007 / BF02624633. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 45. де Йонг П.М., ван Стеркенбург М.A., Hesseling S.C., Kempenaar J.A., Mulder A.A., Mommaas A.M., Dijkman J.H., Ponec M. Цилиогенез в эпителиальных клетках бронхов человека, культивируемых на границе раздела воздух-жидкость. Являюсь. J. Respir. Cell Mol. Биол. 1994; 10: 271–277. DOI: 10.1165 / ajrcmb.10.3.8117445. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 46. Lee M.K., Yoo J.W., Lin H., Kim Y.S., Kim D.D., Choi Y.M., Park S.K., Lee C.H., Roh H.J. Культура интерфейса воздух-жидкость серийно пассированного монослоя назальных эпителиальных клеток человека для исследований транспорта лекарств in vitro.Препарат Делив. J. Deliv. Цель. Ther. Агенты. 2005; 12: 305–311. DOI: 10.1080 / 10717540500177009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 47. Pezzulo AA, Starner TD, Scheetz TE, Traver GL, Tilley AE, Harvey B.-G., Crystal RG, McCray PB, Zabner J. Интерфейс воздух-жидкость и использование первичных клеточных культур важны для повторения профиля транскрипции эпителий дыхательных путей in vivo. Являюсь. J. Physiol. Клетка. Мол. Physiol. 2010; 300: L25 – L31. DOI: 10.1152 / ajplung.00256.2010. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 48.Chen S., Einspanier R., Schoen J. Трансэпителиальное электрическое сопротивление (TEER): функциональный параметр для мониторинга качества эпителиальных клеток яйцевода, культивируемых на фильтрах. Histochem. Cell Biol. 2015; 144: 509–515. DOI: 10.1007 / s00418-015-1351-1. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 49. Ван Италли К.М., Андерсон Дж.М. Клаудин и эпителиальный межклеточный транспорт. Анну. Rev. Physiol. 2005. 68: 403–429. DOI: 10.1146 / annurev.physiol.68.040104.131404. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 50.Flamm J., Boscher M., Maigler F., Akana C., Lindemann J., Kleiner S., Sommer F., Schindowski K. Стандартизованное усовершенствованное интраназальное введение для регионально-специфического интраназального введения лекарств у мышей, установленное с помощью 3D Rapid. прототипы по критериям 3R. Берл. Жевать. Tierarztl. Wochenschr. 2018; 131: 408–416. DOI: 10.2376 / 0005-9366-17102. [CrossRef] [Google Scholar] 51. Рем М., Карл С., Майглер Ф., Фламм Дж., Крамер В., Мавунгу К., Шмид О., Шиндерски К., Шмид О., Мавунгу К. и др. Платформа комплексного скрининга аэрозольных белковых препаратов для интраназальной и легочной доставки лекарств.Int. J. Pharm. 2017; 532: 537–546. DOI: 10.1016 / j.ijpharm.2017.09.027. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 52. Nieder B., Wagner H., Luksch H. Развитие выходных связей от нижнего бугорка к оптическому покрытию у сипух. J. Comp. Neurol. 2003; 464: 511–524. DOI: 10.1002 / cne.10827. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 53. Трокслер Р.Ф., Оффнер Г.Д., Нунес Д.П., Оппенгейм Ф.Г., Иончева И. Молекулярная характеристика основного высокомолекулярного муцина из подъязычной железы человека. Гликобиология.2007; 7: 965–973. DOI: 10,1093 / гликоб / 7.7.965. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 54. Шах А.С., Бен-Шахар Ю., Монингер Т.О., Клайн Дж. Н., Валлийский М.Дж. Подвижные реснички эпителия дыхательных путей человека являются хемосенсорными. Наука. 2009; 325: 1131–1134. DOI: 10.1126 / science.1173869. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 55. Heijink I.H., Brandenburg S.M., Noordhoek J.A., Postma D.S., Slebos D.J., Van Oosterhout A.J.M. Характеристика клеточной адгезии в типах эпителиальных клеток дыхательных путей с использованием определения импеданса электрических клеток и субстратов.Евро. Респир. J. 2010; 35: 894–903. DOI: 10.1183 / 0}
36.00065809. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 56. Кроу Т.П., Гринли М.Х.В., Кантхасами А.Г., Сюй В.Х. Механизм интраназальной доставки лекарств непосредственно в мозг. Life Sci. 2018; 195: 44–52. DOI: 10.1016 / j.lfs.2017.12.025. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 57. Бейкер Х., Спенсер Р.Ф. Транснейрональный транспорт агглютинина зародышей пшеницы, конъюгированного с пероксидазой (WGA-HRP), из обонятельного эпителия в мозг взрослой крысы. Exp. Brain Res. 1986; 63: 461–473.DOI: 10.1007 / BF00237470. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 58. Йориссен М., Ван дер Шуерен Б., Ван ден Берге Х., Кассиман Дж. Дж. Вклад методов культивирования клеток респираторного эпителия in vitro в изучение физиологии дыхательных путей. Евро. Респир. J. 1991; 4: 210–217. [PubMed] [Google Scholar] 59. Бховмик Р., Гаппа-Фаленкамп Х. Клетки и системы культур, используемые для моделирования эпителия малых дыхательных путей. Легкое. 2016; 194: 419–428. DOI: 10.1007 / s00408-016-9875-2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 60.Эвен-Цур Н., Яффа А., Гордон З., Готтлиб Р., Клог Ю., Эйнав С., Вольф М., Элад Д. Культура межжидкостных межклеточных клеток носового эпителия на обнаженных амниотических мембранах. Клетка. Мол. Bioeng. 2010; 3: 307–318. DOI: 10.1007 / s12195-010-0118-у. [CrossRef] [Google Scholar] 61. Желязкова-Мечева В.В., Бобиля Д.Ю. Модель совместного культивирования астроцитов и эндотелиальных клеток свиней гематоэнцефалического барьера. Brain Res. Protoc. 2003; 12: 91–98. DOI: 10.1016 / j.brainresprot.2003.08.004. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 62.Пардеши К.В., Белгамвар В.С. Прямая доставка лекарств из носа в мозг через интегрированные нервные пути, минуя гематоэнцефалический барьер: отличная платформа для нацеливания на мозг. Мнение эксперта. Препарат Делив. 2013; 10: 957–972. DOI: 10.1517 / 17425247.2013.7. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 63. Рат Т., Куо Т.Т., Бейкер К., Цяо С.В., Кобаяши К., Йошида М., Рупениан Д., Фибигер Э., Ленсер В.И., Блумберг Р.С. Иммунологические функции неонатального рецептора FC для IGG. J. Clin. Иммунол. 2013; 33: 9–17.DOI: 10.1007 / s10875-012-9768-у. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 64. Gänger S., Schindowski K. Индивидуальные составы для интраназальной доставки из носа в мозг через обонятельную область: обзор физико-химических характеристик и мукоцилиарного клиренса обонятельной слизистой оболочки носа. Фармацевтика. 2018; 10: 116. DOI: 10.3390 / фармацевтика10030116. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 65. Дольберг А.М., Райхл С. Экспрессия Р-гликопротеина в иссеченной слизистой оболочке носа человека и оптимизированные модели клеток RPMI 2650.Int. J. Pharm. 2016; 508: 22–33. DOI: 10.1016 / j.ijpharm.2016.05.010. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 66. Бергер Дж. Т., Войнов Дж. А., Петерс К. В., Роуз М. К. Клеточные линии респираторной карциномы Гены и гликоконъюгаты MUC. Являюсь. J. Respir. Cell Mol. Биол. 1999. 20: 500–510. DOI: 10.1165 / ajrcmb.20.3.3383. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 67. Крефт М.Е., Ласи Э., Кристан К. Характеристика линии носовых эпителиальных клеток человека RPMI 2650 в различных условиях культивирования и их оптимизация для соответствующей модели носа in vitro.Pharm. Res. 2015; 32: 665–679. DOI: 10.1007 / s11095-014-1494-0. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 68. Сринивасан Б., Колли А.Р., Эш М.Б., Абачи Х.Э., Шулер Л., Хикман Дж.Дж., Сринивасан Б., Колли А.Р., Эш М.Б., Абачи Х.Э. и др. Методы измерения TEER для модельных систем барьеров in vitro. J. Lab. Автомат. 2016; 20: 107–126. DOI: 10.1177 / 2211068214561025. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 69. Энгстрём Б., Экблом А., Ханссон П. Обонятельный и респираторный эпителий у макак-резусов и беличьих обезьян, изученных с помощью метода замораживания-перелома.Acta Otolaryngol. 2009. 108: 259–267. DOI: 10.3109 / 00016488}

5526. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 70. Холкомб Дж. Д., Грэм С., Калоф А. Л. Нейрональный гомеостаз в обонятельном эпителии млекопитающих: обзор. Являюсь. J. Rhinol. 1996. 10: 125–134. DOI: 10,2500 / 105065896781794879. [CrossRef] [Google Scholar] 71. Ю Дж.-В., Ким Й.-С., Ли С.-Х., Ли М.-К., Ро Х.-Дж., Чжун Б.-Х., Ли С.-Х., Ким Д.-Д. Последовательно пассированный монослой носовых эпителиальных клеток человека для исследований транспорта лекарств in vitro. Pharm. Res. 2003. 20: 1690–1696.DOI: 10,1023 / А: 1026112107100. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 72. Ким Н., Хи Д., Сух М., Хо Дж., О С., Кюн М. Влияние липополисахарида на дисфункцию соединений в первичных носовых эпителиальных клетках человека, вызванную частицами выхлопных газов дизельного двигателя. Environ. Загрязнение. 2019; 248: 736–742. DOI: 10.1016 / j.envpol.2019.02.082. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 73. Фаршори П., Качар Б. Перераспределение и фосфорилирование окклюдина во время открытия и закрытия плотных стыков в культивируемых эпителиальных клетках.J. Membr. Биол. 1999; 170: 147–156. DOI: 10.1007 / s002329

4. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 74. Бхат М., Толедо-Веласкес Д., Ван Л., Маланга С.Дж., Ма Дж.К., Рожанасакул Ю. Регулирование проницаемости плотных контактов с помощью кальциевых медиаторов и клеточного цитоскелета в эпителии трахеи кролика. Pharm. Res. 1993; 10: 991–997. DOI: 10.1023 / А: 10184944. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 75. Пиперно Г., Фуллер М. Моноклональные антитела, специфичные к ацетилированной форме альфа-тубулина, распознают антиген в ресничках и жгутиках различных организмов.J. Cell Biol. 1985; 101: 2085–2094. DOI: 10.1083 / jcb.101.6.2085. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 76. Хиноны Г.Б., Дановски Б.А., Деварадж А., Сингх В., Лигон Л.А. Посттрансляционная модификация тубулина претерпевает переключение от детирозинирования к ацетилированию по мере того, как эпителиальные клетки становятся поляризованными. Мол. Биол. Клетка. 2011; 22: 1045–1057. DOI: 10.1091 / mbc.e10-06-0519. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 77. Жолос А.В., Атертон-Уотсон Х., Элборн Дж.С., Эннис М., де Курси Ф., Данахай Х.Л., Каннинг П., Уильямс М.Т.С. Разработка первичных культур клеток носового эпителия человека для изучения патофизиологии муковисцидоза. Являюсь. J. Physiol. Physiol. 2012; 303: C1173 – C1179. DOI: 10.1152 / ajpcell.00384.2011. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 78. Йориссен М., Бессемс А. Нормальная частота биений ресничек после цилиогенеза в назальных эпителиальных клетках, культивируемых последовательно в виде монослоя и в виде суспензии. Acta Otolaryngol. 1995; 115: 66–70. DOI: 10.3109 / 0001648950

49.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 79. Салате М., Книжник Р.Дж. Сочетание [Ca2 +] i и биения ресничек в культивируемых эпителиальных клетках трахеи. J. Cell Sci. 1995; 108: 431–440. [PubMed] [Google Scholar] 80. Ягер Дж., Чен Т.М., Дульфано М.Дж. Измерение частоты мерцательных сокращений респираторного эпителия человека. Грудь. 1978; 73: 627–633. DOI: 10.1378 / сундук.73.5.627. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 81. Бейтман А.С., Карасин А.И., Олсен С.В. Дифференцированные культуры эпителиальных клеток дыхательных путей свиней для исследования инфекции и репликации вируса гриппа А.Influ. Другой респир. Вирусы. 2013; 7: 139–150. DOI: 10.1111 / j.1750-2659.2012.00371.x. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 82. Delgado-Ortega M., Olivier M., Sizaret P.-Y., Simon G., Meurens F. Клеточная линия трахеи новорожденных свиней, культивируемая в условиях поверхности раздела воздух-жидкость, позволяет частично представить ткань верхних дыхательных путей свиньи in vitro. BMC Cell Biol. 2014; 15:14. DOI: 10.1186 / 1471-2121-15-14. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 83. Гетчелл М.Л., Гетчелл Т.V. Тонкие структурные аспекты секреции и внешней иннервации обонятельной слизистой оболочки. Microsc. Res. Tech. 1992; 23: 111–127. DOI: 10.1002 / jemt.1070230203. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 84. Solbu T.T., Holen T. Аквапориновые пути и секреция муцина в железах лучника могут защитить обонятельную слизистую оболочку. Chem. Чувства. 2012; 37: 35–46. DOI: 10,1093 / chemse / bjr063. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 85. Ким С.-Х., Сон К.С., Ким С.-С., Ким Х.-У., Сон Дж.-К., Юн Дж.-Х. Экспрессия мРНК MUC5AC в бокаловидных клетках слизистой оболочки носа человека.Ларингоскоп. 2000; 110: 2110–2113. DOI: 10.1097 / 00005537-200012000-00026. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 86. Aust M.R., Madsen C.S., Jennings A., Kasperbauer J.L., Gendler S.J. Экспрессия мРНК муцина в нормальных и нижних вазомоторных турбинатах. Являюсь. J. Rhinol. 1997; 11: 293–302. DOI: 10,2500 / 105065897781446685. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 87. Питомник К., Гулд Э.А., Ларсон Э.Д., Сальседо Э., Викери Т.В., Рестрепо Д., Рамакришнан В. Дифференциальная экспрессия муцинов в обонятельном эпителии мышей по сравнению с респираторным эпителием.bioRxiv. 2019: 1–32. DOI: 10.1101 / 620757. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 88. Райхл С., Беккер К. Культивирование клеток RPMI 2650 в качестве модели in vitro для исследований всасывания лекарств через слизистую оболочку носа у человека: Оптимизация выбранных условий культивирования. J. Pharm. Pharmacol. 2012; 64: 1621–1630. DOI: 10.1111 / j.2042-7158.2012.01540.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 89. Поццоли М., Сонвико Ф., Онг Х.Х., Трейни Д., Бебави М., Янг П.М. Оптимизация клеток RPMI 2650 как модели слизистой оболочки носа.Респир. Препарат, средство, медикамент. 2014; 2: 739–742. [Google Scholar] 90. Де Фрассинетт А., Брун Р., Феликс Х., Вондершер Дж., Раммельт А. Оценка линии человеческих клеток RPMI 2650 как носовой модели in vitro. Ринология. 1995; 33: 194–198. [PubMed] [Google Scholar] 91. Вернер У., Киссель Т. Модели культуры клеток носового эпителия in vitro: сравнительное гистохимическое исследование их пригодности для исследований транспорта лекарств. Pharm. Res. 1996; 13: 978–988. DOI: 10,1023 / А: 1016038119909. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 92.Юн Дж.-Х., Мун Х.-Дж., Сон Дж.-К., Ким С.-Х., Ли Дж.-Дж., Чой Дж.Й., Сон М.С., Ким С.-Х. Мукоцилиарная дифференцировка в зависимости от времени в культуре клеток носового эпителия человека. Дифференциация. 2002; 70: 77–83. DOI: 10.1046 / j.1432-0436.2002.700202.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

Эффективность назального антисептика на основе повидон-йода in vitro для быстрой инактивации SARS-CoV-2 | Глобальное здоровье | JAMA Отоларингология — хирургия головы и шеи

Ключевые моменты

Вопрос
Какое минимальное время контакта назального антисептика повидон-йод (PVP-I) необходимо для инактивации коронавируса 2 (SARS-CoV-2) тяжелого острого респираторного синдрома in vitro?

Выводы
В этом контролируемом лабораторном исследовании in vitro тестовые среды, инфицированные SARS-CoV-2, продемонстрировали полную инактивацию SARS-CoV-2 с помощью концентрации назального антисептика PVP-I до 0.5% через 15 секунд контакта, что измерено по значению log уменьшения более 3 log ₁₀ 50% -ной дозы вируса в культуре клеток.

Значение
Интраназальный PVP-I быстро инактивирует SARS-CoV-2 и может играть дополнительную роль в смягчении передачи вируса помимо средств индивидуальной защиты.

Важность
Необходимы исследования, чтобы продемонстрировать эффективность назального повидон-йода (PVP-I) против тяжелого острого респираторного синдрома, вызванного коронавирусом 2 (SARS-CoV-2).

Цель
Оценить in vitro эффективность назального антисептика PVP-I для инактивации SARS-CoV-2 при клинически значимом времени контакта 15 и 30 секунд.

Вмешательства
Запас вируса SARS-CoV-2, штамм USA-WA1 / 2020 был протестирован против назальных антисептических растворов, состоящих из водного PVP-I в качестве единственного активного ингредиента. Повидон-йод тестировали в разбавленных концентрациях 0,5%, 1,25% и 2,5% и сравнивали с контролями.Тестовые растворы и вирус инкубировали при средней (стандартное отклонение) комнатной температуре 22 (2) ° C в течение периодов времени 15 и 30 секунд.

Конструкция и установка
В этом контролируемом лабораторном исследовании in vitro использовались 3 различных концентрации исследуемого раствора и 70% этанола в качестве положительного контроля на тестовых средах, инфицированных SARS-CoV-2. Тестовые среды без вируса добавляли в 2 пробирки с соединениями для использования в качестве контроля токсичности и нейтрализации. 70% этанол тестировали параллельно в качестве положительного контроля и воду только в качестве отрицательного контроля.

Основные результаты и мероприятия
Первичным измерением результата исследования было логарифм снижения после 15 секунд и 30 секунд данного лечения. Выживший вирус из каждого образца определяли количественно с помощью стандартного анализа конечной точки разведения, и значение log уменьшения каждого соединения сравнивали с отрицательным (вода) контролем.

Результаты
Повидон-йодный назальный антисептик в концентрациях (0,5%, 1,25% и 2,5%) полностью инактивировал SARS-CoV-2 в течение 15 секунд после контакта, что измерено по логарифмическому значению уменьшения более 3 log ₁₀ 50% клеточной культуры инфекционная доза вируса.70% этанол, положительный контроль, не полностью инактивировал SARS-CoV-2 после 15 секунд контакта. Протестированные назальные антисептики показали лучшие результаты, чем стандартный положительный контроль, обычно используемый для in vitro оценки агентов против SARS-CoV-2, при времени контакта 15 секунд. Никакого цитотоксического воздействия на клетки не наблюдалось после контакта с каждым из испытанных назальных антисептиков.

Выводы и значимость
Назальные антисептические растворы с повидон-йодом в концентрациях от 0.5% быстро инактивируют SARS-CoV-2 при времени контакта всего 15 секунд. Интраназальное применение PVP-I продемонстрировало безопасность при концентрациях 1,25% и ниже и может играть дополнительную роль в снижении передачи вируса помимо средств индивидуальной защиты.

Коронавирус 2 тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV-2), вирус, вызывающий коронавирусное заболевание 2019 г. (COVID-19), представляет собой новый коронавирус из того же семейства, что и коронавирус тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV) и Ближний Восток респираторный синдром.Высокая вирусная нагрузка SARS-CoV-2 была обнаружена в носоглотке и ротоглотке у пациентов с симптомами и бессимптомных носителей. ¹ Носовые бокаловидные и реснитчатые клетки имеют самую высокую экспрессию ангиотензин-превращающего фермента 2 (ACE2), который является основным рецептором SARS-CoV-2. ² При многих отоларингологических процедурах могут образовываться аэрозоли, которые могут оставаться в воздухе до 3 часов без быстрой фильтрации. ³ ^-5 Недавно Hou et al. ⁶ показали, что реснитчатые клетки с экспрессией ACE2 были клетками, наиболее восприимчивыми к инфекции, а не подслизистыми железистыми клетками.Инфекционность этих клеток была намного выше, чем у клеток нижних дыхательных путей. Это исследование выявило путь передачи вируса, который включает инфицирование реснитчатых клеток верхних дыхательных путей внутри носа как доминирующего очага инфекции с последующей аспирацией и засеиванием легких. Носо-ротоглоточная ось включает выделение из носа в ротоглотку путем мукоцилиарного клиренса с последующей аспирацией инфицированной жидкости в нижние дыхательные пути. Предполагается, что этот путь верхних и нижних дыхательных путей может объяснить наблюдаемые различия между обнаружением, сохранением вирусной нагрузки и динамикой передачи, наблюдаемые между предыдущими вспышками SARS-CoV и текущей пандемией COVID-19.Считается, что этот процесс также может играть роль в различных проявлениях клинической тяжести. ⁷ Следует отметить, что недавняя работа ⁸ о динамике передачи гриппа A также предоставляет пример этой носо-ротоглоточной оси с последующим засеиванием легких, приводящим к респираторным заболеваниям.

Снижение передачи инфекции в отоларингологическом сообществе в основном сосредоточено на использовании физических барьеров и средств индивидуальной защиты. Маски стали стандартной формой средств индивидуальной защиты, почти повсеместно применяемой в медицинских учреждениях для защиты пациентов, персонала и медицинских работников.Обеззараживающие средства для носа были рекомендованы для стерилизации полости носа у пациентов и медицинских работников с целью смягчения передачи инфекции. Появилось множество протоколов, рекомендующих интраназальное применение повидон-йода (PVP-I) пациентам и медицинским работникам. ⁹ ^-12 Повидон-йод был выбран с учетом его доказанной in vitro эффективности против SARS-CoV и ближневосточного респираторного синдрома при концентрациях всего 0,23%. ¹³ ^{, 14} Эффективность перорального антисептического раствора PVP-I in vitro была недавно продемонстрирована специально против SARS-CoV-2 при таких низких концентрациях, как 0.5% для времени контакта всего 15 секунд. ¹⁵ Мы стремимся исследовать in vitro эффективность интраназального препарата PVP-I против SARS-CoV-2 в различных концентрациях и времени контакта, чтобы информировать об его использовании отоларингологическим сообществом в условиях клиники и операционной для смягчения передачи вируса. .

Вся лабораторная работа с SARS-CoV-2 проводилась в лабораториях с уровнем биобезопасности 3 в Институте противовирусных исследований при Университете штата Юта в соответствии с установленными стандартными рабочими процедурами, утвержденными Комитетом по биологическим опасностям Университета штата Юта.Экспертный совет государственного университета штата Юта одобрил это исследование. Запас вируса SARS-CoV-2, штамм USA-WA1 / 2020 был подготовлен перед тестированием путем выращивания в клетках Vero 76. Культуральные среды для приготовленного маточного материала (тестовые среды) представляли собой минимально необходимую среду с 2% фетальной бычьей сывороткой и 50 мкг / мл гентамицина. Раствор антисептика для полоскания носа состоял из различных концентраций водного PVP-I в качестве единственного активного ингредиента (Veloce BioPharma). Концентрации PVP-I в каждом растворе при поставке и после разведения 1: 1 приведены в таблице 1.Тестируемые соединения смешивали непосредственно с раствором вируса, так что конечная концентрация составляла 50% каждого отдельного тестируемого соединения и 50% раствора вируса. Единичную концентрацию тестировали в трех повторностях. Тестовые среды без вируса добавляли в 2 пробирки с соединениями для использования в качестве контроля токсичности и нейтрализации. 70% этанол тестировали параллельно в качестве положительного контроля и воду только в качестве отрицательного контроля. Тестовые растворы и вирус инкубировали при средней (SD) комнатной температуре 22 (2) ° C в течение 15 и 30 секунд.Затем раствор нейтрализовали разбавлением 1/10 в минимальной основной среде, 2% фетальной бычьей сыворотке, 50 мкг / мл гентамицина. Выживший вирус из каждого образца определяли количественно с помощью стандартного анализа конечной точки разведения. Нейтрализованные образцы объединяли и серийно разбавляли с использованием 8 логарифмических разведений в тестовой среде. Затем 100 мкл каждого разведения помещали в четырехкратные повторности 96-луночных планшетов, содержащих от 80% до 90% конфлюэнтных клеток Vero 76. Контроли токсического действия добавляли к дополнительным 4 лункам с клетками Vero 76, и 2 из этих лунок в каждом разведении были инфицированы вирусом, чтобы служить в качестве контролей нейтрализации, гарантируя, что остаточный образец в планшете для анализа титра не ингибирует рост и обнаружение вируса. выживший вирус.Планшеты инкубировали при средней (стандартное отклонение) температуре 37 (2) ° C с 5% диоксидом углерода в течение 5 дней. Затем каждую лунку оценивали на наличие или отсутствие инфекционного вируса. Титры измеряли с использованием стандартного конечного разведения 50% инфекционной дозы культуры клеток (CCID ₅₀), рассчитанного с использованием уравнения Рида-Мюнча, и логарифмического значения снижения (LRV) каждого соединения по сравнению с отрицательным (вода) контролем. был рассчитан. ¹⁶

Титры вируса и LRV SARS-CoV-2 при инкубации с различными концентрациями соединений производителя в течение 15 секунд приведены в таблице 1.После 15-секундного контакта все испытанные антисептики для полоскания носа PVP-I были эффективны в снижении более чем 3 log ₁₀ CCID ₅₀ инфекционного вируса, от 3,67 log ₁₀ CCID ₅₀ / 0,1 мл до 0,67 log ₁₀ CCID ₅₀ / 0,1 мл или меньше. В таблице 2 суммированы титры вируса и LRV SARS-CoV-2, когда вирус инкубировали в течение 30 секунд с каждым из тестируемых соединений в соотношении 50/50. Для 30-секундного времени контакта все протестированные антисептики для полоскания носа PVP-I были эффективны при снижении более чем на 3.33 log ₁₀ CCID ₅₀ инфекционный вирус, от 4,0 log ₁₀ CCID ₅₀ / 0,1 мл до 0,67 log ₁₀ CCID ₅₀ / 0,1 мл или меньше. Ни у одного из тестируемых соединений не наблюдалось цитотоксических эффектов. Положительный контроль был эффективен в снижении более чем 3 log инфекционного вируса ₁₀ CCID ₅₀ за 30 секунд, что сопоставимо с антисептиком для полоскания носа PVP-I. Однако через 15 секунд контакта положительный контроль оказался эффективным при уменьшении только 2.17 log ₁₀ CCID ₅₀ инфекционный вирус, который менее эффективен, чем антисептик для полоскания носа PVP-I. Отрицательный контроль только с водой был совершенно неэффективен для снижения вирусной нагрузки.

Это исследование демонстрирует быструю инактивацию SARS-CoV-2 с помощью PVP-I при концентрациях всего 0,5% всего за 15 секунд контакта. Эти результаты согласуются с результатами предыдущего исследования, посвященного изучению эффективности перорального раствора в том же классе антисептиков PVP-I против SARS-CoV-2.¹⁵ Растворы PVP-I, как известно, обладают зависимыми от концентрации эффектами на частоту биений ресничек (CBF) при исследовании в модельных системах in vitro. ¹⁷ В экспериментальных моделях растворы PVP-I до 1,25% не проявляли ингибирующего действия на CBF. Это говорит о том, что растворы PVP-I до 1,25% хорошо переносятся назальным эпителием при кратковременном применении. ¹⁷ ^{, 18} Клинические исследования показали, что более низкие концентрации можно вводить быстро и в течение нескольких месяцев без побочных эффектов.¹⁹ Повторное использование разбавленного 0,08% ПВП-I через день у пациентов с хроническим риносинуситом на срок до 7 недель не привело к каким-либо побочным эффектам на мукоцилиарный клиренс или обоняние. ²⁰ ^{, 21} При интраназальном введении людям наблюдается эффективное разведение нанесенного препарата, так как он немедленно объединяется с существующими носовыми выделениями. ²² В дополнение к 95% водному компоненту назального секрета, интраназально применяемый PVP-I также обнаруживает продукты муцина, высвобождаемые бокаловидными клетками и подслизистыми железами, включая гликопротеины, протеогликаны и липиды.Существуют также физиологические буферы, внеклеточные остатки дегенерирующих клеток и фрагменты внеклеточных нуклеиновых кислот. Весь этот биологический мусор может действовать как сток йода и может снизить эффективную концентрацию PVP-I, доставляемого к месту инфекции. ²³ ^{, 24} По этим причинам важно выбирать концентрации PVP-I ниже порога нарушения CBF in vitro, но выше минимального эффективного биоцидного уровня, чтобы учесть потребление йода и физиологическую буферность.Мы внедрили использование интраназального PVP-I в нашу практику и обновили все наши протоколы, чтобы включить использование 1,25% водных составов PVP-I, вводимых в каждую полость носа у пациентов перед любой интраназальной процедурой.

Это исследование демонстрирует, что времени контакта 15 секунд достаточно для вирусной инактивации. Широкое использование назального антисептика PVP-I у пациентов перед интраназальными процедурами может значительно снизить риск передачи вируса через капли и аэрозоль.Медицинские работники могут также подумать о том, чтобы проинструктировать пациентов о проведении дезактивации носа с помощью PVP-I перед процедурой, которая может дополнительно снизить интраназальную вирусную нагрузку и может предотвратить распространение в зонах ожидания и других местах общего пользования.

Назальные орошения PVP-I следует дополнительно рассмотреть для использования профессионалами в области здравоохранения для профилактики. Слизистая оболочка полости рта, обработанная PVP-I, остается стерильной до 4 часов. ²⁵ Хотя это еще не было доказано на слизистой оболочке носа, медицинские работники должны рассматривать возможность использования каждые 4 часа или всякий раз, когда надевать или снимать маску в условиях высокого риска, до 4 раз в день.При концентрациях 1,25% абсорбция йода незначительна. Эти простые, небуферные, слегка кислые, комплексные растворы PVP-I будут дополнительно ограничивать любую трансмукозную абсорбцию молекулярного йода, обеспечивая лишь минимальный теоретический риск абсорбции йода. Даже если бы некоторое количество некомплексного йода всасывалось через слизистые оболочки, оно все равно было бы на несколько порядков меньше, чем среднее общее суточное потребление йода для здорового взрослого человека, равное 150 мкг. ¹⁹ Использование 0,08% назального PVP-I через день на срок до 7 недель не приводит к клиническим заболеваниям щитовидной железы.²⁰ ^{, 21} Тем не менее, тестирование функции щитовидной железы следует рассматривать, когда PVP-I регулярно вводится пациентам в течение более 3 месяцев. Использование интраназального PVP-I противопоказано пациентам с аллергией на йод, беременным пациентам, пациентам с активным заболеванием щитовидной железы и пациентам, проходящим терапию радиоактивным йодом. ²⁶ ^-28

Рандомизированные клинические испытания пока не проводились, чтобы доказать, что передача вируса снижается при интраназальном применении PVP-I, хотя эти исследования уже проводятся.Аналогичным образом, безопасность интраназального применения PVP-I в отношении тиреотропного гормона, обоняния и мукоцилиарного клиренса была конкретно продемонстрирована только при концентрациях до 0,08% в течение периода времени до 7 недель. Безопасность была сделана на основании исследований in vitro, но в настоящее время проводятся испытания переносимости in vivo, доказывающие безопасность PVP-I до 1,25% при длительном применении. Медицинские работники должны либо использовать имеющиеся в продаже растворы PVP-I в соответствующем диапазоне концентраций, либо использовать собственные свежеприготовленные разбавленные растворы.При разбавлении коммерческих препаратов рекомендуется соблюдать осторожность, поскольку многие из них содержат детергенты, буферы, противоионы, подщелачивающие агенты, поверхностно-активные вещества и другие химические вспомогательные вещества, которые, возможно, не были изучены или одобрены для интраназального применения. Наиболее распространенные составы антисептических продуктов, предназначенные для ороговевших поверхностей кожи, включая многие предоперационные скрабы и комплекты препаратов PVP-I, могут содержать вспомогательные вещества и добавки, которые могут быть токсичными при интраназальном введении. ²⁹ ^{, 30} Свежеразбавленные растворы следует готовить каждый день, хранить в холодильнике в течение дня и сразу же выбрасывать в конце каждого дня.Коммерческие растворы ПВП-I с водными концентрациями от 5% до 10% могут стать химически нестабильными при простом разбавлении до более низких концентраций дополнительным количеством воды, физиологического раствора или других обычных клинических растворителей. Водные и спиртовые растворы ПВП-I нестабильны при низких концентрациях. Они легко вступают в непредсказуемые реакции диспропорционирования на составляющие равновесные частицы с чувствительной зависимостью от pH, температуры, воздействия света, содержания противоионов, упаковочного материала, атмосферного давления, содержания сополимеров и множества других факторов, которые могут быть трудными для индивидуального здравоохранения. профессионально контролировать.Чтобы гарантировать, что разбавленный раствор, приготовленный из продукта высокой концентрации (например, 5-10%) PVP-I, безопасен для введения в полость носа, необходимо провести анализ химических ингредиентов каждого свежеприготовленного раствора. в соответствии с методом фармакопеи США для анализа PVP-I, ³¹ или только коммерческие препараты PVP-I в соответствующей дозе (если они доступны).

Hou et al. ⁶ недавно продемонстрировали, что SARS-CoV-2 первоначально инфицирует цилиарные клетки слизистой оболочки носа и что это может быть доминирующим начальным очагом инфекции.Затем вирус распространяется через носоглоточную ось в легкие через микроаспирацию, что приводит к поражающим респираторным инфекциям, наблюдаемым при COVID-19. Различная степень тяжести, наблюдаемая во время пандемии COVID-19, может быть связана с переменной передачей SARS-CoV-2 из носовой полости в легкие у пациентов с положительным результатом теста на вирус. Следовательно, трансназальная инактивация вируса может не только предотвратить распространение SARS-CoV-2 от человека к человеку, но также может снизить тяжесть заболевания у пациентов за счет ограничения распространения и снижения вирусной нагрузки, доставляемой в легкие.Орошение носа повидон-йодом может быть полезным для населения в целом в качестве дополнения к маскировке использования в качестве средства смягчения последствий вируса.

Принято к публикации: 29 июля 2020 г.

Автор для корреспонденции: Саманта Франк, доктор медицины, отделение отоларингологии — хирургия головы и шеи, отделение хирургии, Медицинская школа Университета Коннектикута, 263 Фармингтон-авеню, Фармингтон, CT 06030 ([email protected]).

Опубликовано онлайн: 17 сентября 2020 г.doi: 10.1001 / jamaoto.2020.3053

Вклад авторов: Доктора Франк, Каприотти и Тессема имели полный доступ ко всем данным в исследовании и несли ответственность за целостность данных и точность анализа данных.

Концепция и дизайн: Все авторы.

Сбор, анализ или интерпретация данных: Франк, Каприотти, Вестовер, Тессема.

Составление рукописи: Франк, Каприотти, Пеллетье, Тессема.

Критический пересмотр рукописи для важного интеллектуального содержания: Франк, Браун, Каприотти, Вестовер, Тессема.

Статистический анализ: Capriotti, Westover.

Получено финансирование: Каприотти.

Административная, техническая или материальная поддержка: Brown, Capriotti, Westover, Tessema.

Контроль: Браун, Каприотти, Вестовер, Пеллетье, Тессема.

Раскрытие информации о конфликте интересов: Доктор Браун сообщил о личных финансовых инвестициях в Halodine помимо представленных работ.Доктор Каприотти является исполнительным директором Veloce BioPharma и сообщил о патенте на несколько родственных препаратов, выпущенных и лицензированных Veloce BioPharma. Д-р Пеллетье является консультантом Veloce BioPharma и сообщил о доле участия как в Veloce BioPharma, так и в Halodine. Доктор Тессема сообщил о личных финансовых инвестициях в Halodine помимо представленных работ, и у него есть патент на несколько лекарственных препаратов, находящихся на рассмотрении. О других раскрытиях информации не сообщалось.

Финансирование / поддержка: Финансирование лабораторных материалов, используемых в этом исследовании, было предоставлено Veloce BioPharma.

Роль спонсора / спонсора: Veloce BioPharma не принимала участия в разработке и проведении исследования; сбор, управление, анализ и интерпретация данных; подготовка, рецензирование или утверждение рукописи; и решение представить рукопись для публикации. Однако перечисленные отдельные авторы, имеющие отношение к Veloce BioPharma, действительно помогали в разработке исследования и рецензировании рукописи.

2. сунгнак
W, Хуанг
N, Бекавин
C,
и другие; Биологическая сеть легких HCA.Факторы проникновения SARS-CoV-2 высоко экспрессируются в эпителиальных клетках носа вместе с генами врожденного иммунитета. Нат Мед . 2020; 26 (5): 681-687. DOI: 10.1038 / s41591-020-0868-6PubMedGoogle ScholarCrossref 4. Балакришнан
К. Шехтман
С, Хогикян
ND, Teoh
АЙБ, МакГрат
B, Бреннер
MJ. Пандемия COVID-19: что нужно знать каждому отоларингологу — хирургу головы и шеи для безопасного управления дыхательными путями. Отоларингол Хирургия головы и шеи .2020; 162 (6): 804-808. DOI: 10.1177 / 0194599820

1PubMedGoogle ScholarCrossref 5.Workman
AD, Веллинг
ДБ, Картер
BS,
и другие. Эндоназальные инструменты и риск аэрозолизации в эпоху COVID-19: моделирование, обзор литературы и предлагаемые стратегии смягчения последствий. Международный форум Allergy Rhinol . 2020; 10 (7): 798-805. DOI: 10.1002 / alr.22577PubMedGoogle ScholarCrossref 9. Тессема
B, Фрэнк
S, Бидра
А. Инактивация вируса SARS-CoV-2 с использованием полоскания полости рта низкими дозами повидон-йода — немедленное применение в ортопедической практике. Дж. Простодонт . 2020. doi: 10.1111 / jopr.13207PubMedGoogle Scholar10.Mady
ЖЖ, Кубик
MW, Баддур
К. Снайдерман
СН, Роуэн
NR. Рассмотрение повидон-йода в качестве меры общественного здравоохранения в связи с COVID-19: использование в качестве «средства индивидуальной защиты» для медицинских работников, подвергающихся высокому риску оказания онкологической помощи в области головы, шеи и основания черепа. Oral Oncol . 2020; 105: 104724. DOI: 10.1016 / j.oraloncology.2020.104724PubMedGoogle Scholar11.Parhar
HS, Tasche
К, Броды
RM,
и другие. Препараты для местного применения для уменьшения аэрозолизации SARS-CoV-2 при хирургических вмешательствах на слизистой оболочке головы и шеи. Голова Шея . 2020; 42 (6): 1268-1272. DOI: 10.1002 / hed.26200PubMedGoogle ScholarCrossref 13. Эггерс
М, Кобургер-Янссен
Т, Эйкманн
М, Зорн
Дж. Бактерицидная и вирулицидная эффективность повидон-йодного полоскания / жидкости для полоскания рта in vitro в отношении патогенов дыхательных путей и ротовой полости. Инфекция Dis Ther .2018; 7 (2): 249-259. DOI: 10.1007 / s40121-018-0200-7PubMedGoogle ScholarCrossref 14. Карива
H, Fujii
N, Такашима
Я. Инактивация коронавируса SARS повидон-йодом, физическими условиями и химическими реактивами. Дерматология . 2006; 212 (приложение 1): 119-123. DOI: 10.1159 / 000089211PubMedGoogle ScholarCrossref 15.Bidra
AS, Пеллетье
JS, Вестовер
JB, Фрэнк
S, коричневый
СМ, Тессема
Б. Быстрая инактивация in vitro коронавируса 2 тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV-2) с использованием полоскания для перорального антисептика с повидон-йодом. Дж. Простодонт . 2020; 29 (6): 529-533. DOI: 10.1111 / jopr.13209PubMedGoogle Scholar17.Reimer
K, Wichelhaus
Т.А., Шефер
V,
и другие. Противомикробная эффективность повидон-йода и последствия для новых областей применения. Дерматология . 2002; 204 (приложение 1): 114-120. DOI: 10.1159 / 000057738PubMedGoogle ScholarCrossref 19.Frank
S, Каприотти
J, Браун
СМ, Тессема
Б. Использование повидон-йода в придаточных пазухах носа и полости рта: обзор безопасности в эпоху COVID-19. Ухо-носовое горло J . Опубликовано в Интернете 10 июня 2020 г.PubMedGoogle Scholar20.Panchmatia
R, Payandeh
J, Аль-Салман
R,
и другие. Эффективность разбавленных местных полосканий с повидон-йодом в лечении упорного хронического риносинусита: проспективное когортное исследование. Евро Арка Оториноларингол . 2019; 276 (12): 3373-3381. DOI: 10.1007 / s00405-019-05628-wPubMedGoogle ScholarCrossref 21.Mullings
З, Панчмация
Р, Самой
К., Хабиб
А, Тамбу
A, Аль-Салман
R,
и др. Повидон-йод для местного применения в качестве дополнительного лечения упорного хронического риносинусита. Eur J Rhinol Allergy 2019; 2 (2): 45-50. DOI: 10.5152 / ejra.2019.166Google ScholarCrossref 25.Domingo
Массачусетс, Фарралес
МС, Лойя
RM, Pura
MA, Uy
H. Эффект 1% -ного повидон-йода в качестве средства для полоскания рта перед процедурой у 20 пациентов с различной степенью гигиены полости рта. Дж. Филипп Дент Ассор . 1996; 48 (2): 31-38. PubMedGoogle Scholar, 26. Фоли.
TP
Младший Связь между аутоиммунным заболеванием щитовидной железы и потреблением йода: обзор. Эндокринол Пол . 1992; 43 (приложение 1): 53-69. PubMedGoogle Scholar

Центральная роль носовой микросреды в передаче, модуляции и клиническом прогрессировании инфекции SARS-CoV-2.

Кийоно, Х. и Фукуяма, S. NALT-опосредованный иммунитетом слизистой оболочки, опосредованный пейеровским пластырем. Нац. Rev. Immunol. 4 , 699–710 (2004).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

Brandtzaeg, P., Kiyono, H., Pabst, R. & Russell, M. W. Терминология: номенклатура лимфоидной ткани, связанной со слизистой оболочкой. Слизистая. Иммунол. 1 , 31–37 (2008).

CAS
PubMed

Google ученый

Tacchi, L. et al. Назальный иммунитет — это древний элемент иммунной системы слизистых оболочек позвоночных. Нац. Commun. 5 , 1–11 (2014).

Google ученый

Элад Д., Вольф М. и Кек Т. Кондиционирование воздуха в носовой полости человека. Респир. Physiol. Neurobiol. 163 , 121–127 (2008).

PubMed

Google ученый

Newsome, H. et al. Клиническое значение назального кондиционирования воздуха: обзор литературы. Am. J. Rhinol. Аллергия 33 , 763–769 (2019).

PubMed

Google ученый

Takeda, K. et al. Аллергическая конверсия защитного иммунитета слизистой оболочки против носовых бактерий у пациентов с хроническим риносинуситом с полипозом носа. J. Allergy Clin. Иммунол. 143 , 1163–1175 (2019).

CAS
PubMed

Google ученый

Бернокки Б., Карпентье Р. и Бетбедер Д. Назальные нановакцины. Int J. Pharm. 530 , 128–138 (2017).

CAS
PubMed

Google ученый

Андерсен К. Г., Рамбаут А., Липкин В. И., Холмс Э. К. и Гарри Р. Ф. Проксимальное происхождение SARS-CoV-2. Нац. Med. 26 , 450–452 (2020).

CAS
PubMed

Google ученый

Zou, L. et al. Вирусная нагрузка SARS-CoV-2 в образцах верхних дыхательных путей инфицированных пациентов. N. Engl. J. Med https://doi.org/10.1056/NEJMc2001737 (2020).

10.

Sungnak, W.и другие. Факторы проникновения SARS-CoV-2 высоко экспрессируются в эпителиальных клетках носа вместе с генами врожденного иммунитета. Нац. Med. 26 , 681–687 (2020).

CAS
PubMed

Google ученый

11.

Hou, Y. J. et al. Обратная генетика SARS-CoV-2 выявляет переменный градиент инфекции в дыхательных путях. Ячейка (2020).

12.

Ziegler, C.G. et al. Рецептор SARS-CoV-2 ACE2 представляет собой стимулируемый интерфероном ген в эпителиальных клетках дыхательных путей человека и обнаруживается в определенных подмножествах клеток в тканях. Ячейка (2020).

13.

Информационная панель ВОЗ по коронавирусной болезни (COVID-19), данные проверены на 2020/10/24), https://covid19.who.int/.

14.

Lauer, S. A. et al. Инкубационный период коронавирусной болезни 2019 (COVID-19) из официально зарегистрированных подтвержденных случаев: оценка и применение. Ann. Междунар. Мед . https://doi.org/10.7326/M20-0504 (2020).

15.

Чао, К. Ю. Х., Ван, М. П. и Сзе То, Г. Н. Транспортировка и удаление капель выдыхаемого воздуха в условиях больничной палаты. Aerosol Sci. Technol. 42 , 377–394 (2008).

CAS

Google ученый

16.

Sakurai, A. et al. Естественное течение бессимптомной инфекции SARS-CoV-2. N. Engl. J. Med . https://doi.org/10.1056/NEJMc2013020 (2020).

17.

Van Doremalen, N. et al. Аэрозольная и поверхностная стабильность SARS-CoV-2 по сравнению с SARS-CoV-1. N. Engl. J. Med. 382 , 1564–1567 (2020).

PubMed

Google ученый

18.

Асади, С., Бувье, Н., Векслер, А. С. и Ристенпарт, В. Д. Пандемия коронавируса и аэрозоли: передается ли COVID-19 через частицы на выдохе? Aerosol Sci. Технол . https://doi.org/10.1080/02786826.2020.1749229 (2020).

19.

Фернстром, А. и Голдблатт, М. Аэробиология и ее роль в передаче инфекционных заболеваний. J. Pathog. 493960 (2013).

20.

Bahl, P. et al. Меры предосторожности при переносе воздушно-капельным путем или воздушно-капельным путем для медицинских работников, которые лечат COVID-19? J. Infect. Дис. (2020).

21.

Sommerstein, R. et al. Риск передачи SARS-CoV-2 аэрозолями, рациональное использование масок и защита медицинских работников от COVID-19. Инфекция, устойчивая к противомикробным препаратам. Контроль 9 , 1–8 (2020).

Google ученый

22.

Научная записка ВОЗ: Передача SARS-CoV-2: значение для мер предосторожности по профилактике инфекций. Женева: Всемирная организация здравоохранения; 2020. https://www.who.int/news-room/commentaries/detail/transmission-of-sars-cov-2-implications-for-infection-prevention-precautions. Проверено 24 октября 2020 г.

23.

Meselon, M. Droplet и aereosol в передаче SARS-CoV-2. N. Engl. J. Med. 90

2 , 2063 (2020). https://doi.org/10.1056/NEJMc2009324.

24.

Хан, З. Ю., Венг, В. Г. и Хуанг, К. Ю. Характеристики распределения частиц по размерам капель, выдыхаемых при чихании. J. R. Soc. Интерфейс 10 , 20130560 (2013). https://doi.org/10.1098/rsif.2013.0560.

25.

Farzal, Z. et al. Сравнительное исследование моделирования отложений распыленных и распыленных частиц у пациентов с хроническим риносинуситом. Внутр. Форум Allergy Rhinol. 9 , 746–758 (2019).

PubMed
PubMed Central

Google ученый

26.

Booth, T. F. et al. Выявление переносимого по воздуху коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома (SARS) и загрязнения окружающей среды в очагах вспышки SARS. J. Infect. Дис. 191 , 1472–1477 (2005).

PubMed
PubMed Central

Google ученый

27.

Лю Ю. Аэродинамический анализ SARS-CoV-2 в двух больницах Ухани. Природа https://doi.org/10.1038/s41586-020-2271-3 (2020).

28.

Bourouiba, L. Турбулентные газовые облака и выбросы респираторных патогенов: потенциальные последствия для снижения передачи COVID-19. JAMA 323 , 1837–1838 (2020).

PubMed

Google ученый

29.

Голдман Э. Повышенный риск передачи COVID-19 фомитами. Lancet Infect. Дис. 20 , 892–893 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

30.

Очистка и дезинфекция поверхностей окружающей среды в связи с COVID-19. Женева: Всемирная организация здравоохранения; 2020. https://www.who.int/publications/i/item/cleaning-and-disinfection-of-environmental-surfaces-inthe-context-of-covid-19. По состоянию на 24 октября 2020 г.

31.

Herfst, S. et al. Факторы передачи патогенов от человека к человеку воздушным путем. Curr. Opin. Virol. 22 , 22–29 (2017).

PubMed

Google ученый

32.

Ман, В. Х., де Стинхейсен Питерс, В. А. и Богерт, Д. Микробиота дыхательных путей: привратник для здоровья органов дыхания. Нац. Rev. Microbiol. 15 , 259–270 (2017).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

33.

Браун Р. Л., Секейра Р. П. и Кларк Т. Б. Микробиота защищает от респираторной инфекции посредством передачи сигналов GM-CSF. Нац. Commun. 8 , 1–11 (2017).

CAS

Google ученый

34.

Xu, H. et al. Высокая экспрессия рецептора ACE2 2019-nCoV на эпителиальных клетках слизистой оболочки полости рта. Внутр. J. Oral. Sci. 12 , 1–5 (2020).

Google ученый

35.

Bunyavanich, S., Do, A. & Vicencio, A. Назальная экспрессия гена ангиотензин-превращающего фермента 2 у детей и взрослых. JAMA .https://doi.org/10.1001/jama.2020.8707 (2020).

36.

Карли Г., Чекки Л., Стеббинг Дж., Парронки П. и Фарси А. Защищает ли астма от COVID ‐ 19? Аллергия (2020). [Epub перед печатью].

37.

Jackson, D. et al. Ассоциация респираторной аллергии, астмы и экспрессии рецептора SARS-CoV-2, ACE2. J. Allergy Clin. Иммунол . (2020).

38.

Jian, L. et al. Перспектива: COVID-19, значение заболеваний носа и последствия для их лечения. J. Allergy Clin. Иммунол . (2020). [Epub перед печатью]

39.

Патель, Т. Р., Тейтчер, Дж. Э., Таджудин, Б. А. и Ревено, П. С. Несопоставимые результаты назофарингеального и трахеального диагностического теста на COVID-19 у пациента с тотальной ларингэктомией. Отоларингол. — Хирургия шеи и головы . (2020).

40.

Gallo, O. et al. SARS-CoV-2 в образцах верхних и нижних дыхательных путей пациента, перенесшего ларингэктомию: новые идеи и много уроков. Oral Oncol . 107 , 104841 (2020).

41.

Daly, J. L. et al. Нейропилин-1 является фактором хозяина для инфекции SARS-CoV-2. bioRxiv . (2020).

42.

Roy, S. et al. Многогранная роль нейропилинов в иммунной системе: потенциальные мишени для иммунотерапии. Фронт. Иммунол. 8 , 1228 (2017).

PubMed
PubMed Central

Google ученый

43.

Wang, W.и другие. Обнаружение SARS-CoV-2 в различных типах клинических образцов. JAMA 323 , 1843–1844 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

44.

Tu, Y. P. et al. Мазки, собранные пациентами или медицинскими работниками для тестирования на SARS-CoV-2. N. Engl. J. Med. 383 , 494–496 (2020).

PubMed

Google ученый

45.

Вуккадала, Н., Цянь, З. Дж., Холсингер, Ф. К., Патель, З. М., и Розенталь, Е. COVID-19 и отоларинголог: предварительный обзор, основанный на фактах. Ларингоскоп 130 , 2537–2543 (2020). https://doi.org/10.1002/lary.28672.

46.

Workman, A. D. et al. Эндоназальное оборудование и риск аэрозолизации в эпоху COVID ‐ 19: моделирование, обзор литературы и предлагаемые стратегии смягчения последствий. Внутр. Форум аллергии Rhinol . 10 , 798–805 (2020).

47.

Zhang, N., Van Crombruggen, K., Gevaert, E. & Bachert, C. Барьерная функция слизистой оболочки носа при здоровых и предвзятых заболеваниях дыхательных путей 2-го типа. Аллергия 71 , 295–307 (2016).

CAS
PubMed

Google ученый

48.

Weitnauer, M., Mijošek, V. & Dalpke, A.H. Контроль местного иммунитета с помощью эпителиальных клеток дыхательных путей. Слизистая. Иммунол. 9 , 287–298 (2016).

CAS
PubMed

Google ученый

49.

Хеллингс, П. У. и Стилант, Б. Эпителиальные барьеры при аллергии и астме. J. Allergy Clin. Иммунол. 145 , 1499–1509 (2020).

PubMed
PubMed Central

Google ученый

50.

Оои, Э. Х., Вормальд, П. Дж. И Тан, Л. В. Врожденный иммунитет в придаточных пазухах носа: обзор защиты носового хозяина. Am. J. Rhinol. 22 , 13–19 (2008).

PubMed

Google ученый

51.

Линден, С. К., Саттон, П., Карлссон, Н. Г., Королик, В. и Макгукин, М. А. Муцины в слизистой оболочке барьера для инфекции. Mucosal Immunol. 1 , 183–197 (2008).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

52.

McAuley, J.L. et al. Муцин клеточной поверхности MUC1 ограничивает тяжесть инфекции вирусом гриппа А. Mucosal Immunol. 10 , 1581–1593 (2017).

CAS
PubMed

Google ученый

53.

Lu, W. et al. Повышенные уровни белка муцина MUC1 и MUC5AC в слизи дыхательных путей критически больных пациентов с COVID-19. J. Med. Virol. (2020). [Epub перед печатью].

54.

Куек, Л. Э. и Ли, Р.J. Первый контакт: роль респираторных ресничек во взаимодействиях «хозяин-патоген» в дыхательных путях. Am. J. Physiol-Lung Cell Mol. Physiol. (2020). [Epub перед печатью].

55.

Sims, A.C. et al. Тяжелый острый респираторный синдром: коронавирусная инфекция реснитчатого эпителия дыхательных путей человека: роль реснитчатых клеток в распространении вируса по проводящим дыхательным путям легких. J. Virol. 79 , 15511–15524 (2005).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

56.

Fang, Y. et al. Определенные стволовые клетки / клетки-предшественники пролиферируют для регенерации трахеи, внутрилегочных дыхательных путей и альвеол у пациентов с COVID-19. Cell Res. 30 , 705–707 (2020).

CAS
PubMed

Google ученый

57.

Jochems, S.P. et al. Новый анализ иммунных клеток от носовой микробиопсии демонстрирует надежные, воспроизводимые данные для иммунных популяций и превосходное обнаружение цитокинов по сравнению с носовой промывкой. PloS One 12 , e0169805 (2017).

PubMed
PubMed Central

Google ученый

58.

Панда, С. К. и Колонна, М. Врожденные лимфоидные клетки в иммунитете слизистой оболочки. Фронт. Иммунол. 10 , 861 (2019).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

59.

Wu, H.Y., Nguyen, H.H. и Russell, M.W. Носовая лимфоидная ткань (NALT) как сайт индукции слизистой оболочки. Сканд. J. Immunol. 46 , 506–513 (1997).

CAS
PubMed

Google ученый

60.

Галло, О., Бани, Д., Руччи, Л., Фини Сторчи, О. Играет ли эпителий центральную роль в иммунной функции ринофарингеальных миндалин? Иммуногистохимическое и ультраструктурное исследование. Int J. Ped. Отоларингол. 22 , 219–222 (1991).

CAS

Google ученый

61.

Галло, О., Бани, Д. и Фини Сторчи, О. Внутриэпителиальные субпопуляции лимфоцитов и дендритные дополнительные клетки в нормальных и гипертрофированных аденоидах. Ларингоскоп 104 , 869–873 (1994).

PubMed

Google ученый

62.

Heritage, P. L., Underdown, B.J., Arsenault, A. L., Sinder, D. P. & Mc Dermott, M.R. Сравнение носовой лимфоидной ткани мышей и пейеровских бляшек. Am. J. Respir. Крит. Care Med. 156 , 1256–1262 (1997).

CAS
PubMed

Google ученый

63.

Lehtinen, M. J. et al. Кластеры носовой микробиоты связаны с воспалительной реакцией, вирусной нагрузкой и тяжестью симптомов при экспериментальном заражении риновирусом. Sci. Отчет 8 , 11411 (2018).

PubMed
PubMed Central

Google ученый

64.

Роуз М.А., Зилен С. и Бауманн У. Иммунитет слизистых оболочек и вакцинация против гриппа через нос. Exp. Rev. Vaccines 11 , 595–607 (2012).

CAS

Google ученый

65.

Tay, M.Z., Poh, C.M., Rénia, L. et al. Триединство COVID-19: иммунитет, воспаление и вмешательство. Nat Rev Immunol. 20 , 363–374 (2020). https://doi.org/10.1038/s41577-020-0311-8.

66.

Боуи, А. Г. и Унтерхольцнер, Л. Уклонение от вирусов и подрыв передачи сигналов рецептора распознавания образов. Нац. Rev. Immunol. 8 , 911–922 (2008).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

67.

Xu, Z. et al. Патологические данные COVID-19, связанные с острым респираторным дистресс-синдромом. Ланцет Респир. Med. 8 , 420–422 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

68.

Матрикарди, П. М., Даль Негро, Р. В. и Нисини, Р. Первая целостная иммунологическая модель COVID-19: значение для профилактики, диагностики и мер общественного здравоохранения. Pediatr. Allergy Immunol. https://doi.org/10.1111/pai.13271 (2020).

69.

Madsen, H.O. et al. Взаимодействие между промотором и вариантами структурного гена контролирует базальный сывороточный уровень маннан-связывающего белка. J. Immunol. 155 , 3013–3020 (1995).

CAS
PubMed

Google ученый

70.

Эйзен Д. П. и Минчинтон Р. М. Влияние связывающего маннозу лектина на восприимчивость к инфекционным заболеваниям. Clin. Заразить. Дис. 37 , 1496–1505 (2003).

CAS
PubMed

Google ученый

71.

Zhang, H. et al. Связь между полиморфизмом гена маннозо-связывающего лектина и восприимчивостью к тяжелому острому респираторному синдрому, вызванному коронавирусной инфекцией. J. Infect. Дис. 192 , 1355–1361 (2005).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

72.

Ip, W. E. et al. Лектин, связывающий маннозу, при тяжелом остром респираторном синдроме, вызванном коронавирусной инфекцией. J. Infect. Дис. 191 , 1697–1704 (2005).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

73.

Zhou, Y. et al. Единый сайт гликозилирования, связанный с аспарагином, гликопротеина шипа коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома способствует ингибированию лектином, связывающим маннозу, посредством множества механизмов. J. Virol. 84 , 8753–8764 (2010).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

74.

Tomaiuolo, R. et al. Активность связывающего маннозу лектина у долгожителей. Ячейка старения 11 , 394–400 (2012).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

75.

Холодик Н.Э., Родригес-Журбенко Н.И Эрнандес, А. М. Определение естественных антител. Front Immunol. 8 , 872 (2017).

PubMed
PubMed Central

Google ученый

76.

Ориол Р., Молликоне Р., Куиллин П., Даликс А. М. и Канделье Дж. Дж. Генетическая регуляция экспрессии антигенов ABH и Льюиса в тканях. APMIS 100 (Supp 27), 28–38 (1992).

Google ученый

77.

Галили, У. Эволюция у приматов посредством взаимодействия «катастрофического отбора» между охваченными вирусными эпидемиями, мутировавшими генами ферментов, синтезирующих углеводные антигены, и естественными антиуглеводными антителами. Am. J. Phys. Антрополь. 168 , 352–363 (2019).

PubMed

Google ученый

78.

Guillon, P. et al. Ингибирование взаимодействия между спайковым белком SARS-CoV и его клеточным рецептором с помощью антител против гистогруппы крови. Гликобиология 18 , 1085–1093 (2008).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

79.

Cheng, Y., Cheng, G., Chui, C. H. & Lau, F. Y. Группа крови АВО и предрасположенность к тяжелому острому респираторному синдрому. JAMA 293 , 1450–1451 (2005).

CAS
PubMed

Google ученый

80.

Gérard, C., Маггипинто, Г. и Минон, Дж. М. Группа крови COVID ‐ 19 и ABO: другая точка зрения. Br. J. Haematol. 190 , e93 – e94 (2020).

PubMed

Google ученый

81.

Ellinghaus, D. et al. Общегеномное исследование ассоциации тяжелого Covid-19 с дыхательной недостаточностью. N. Engl. J. Med. https://doi.org/10.1056/NEJMoa2020283 (2020).

82.

Нарасимхан, П. Б., Марковеккио, П., Хамерс, А.А. Дж. И Хедрик К. С. Неклассические моноциты в здоровье и болезни. Annu. Rev. Immunol. 37 , 439–56 (2019).

CAS
PubMed

Google ученый

83.

Peruzzi, B. et al. Количественные и качественные изменения циркулирующих миелоидных клеток и плазмоцитоидных ДК при инфекции SARS-CoV-2. Иммунология https://doi.org/10.1111/imm.13254 (2020).

84.

Sánchez-Cerrillo, I.и другие. Тяжесть COVID-19 связана с легочным перераспределением CD1c + DC и воспалительными переходными и неклассическими моноцитами. J. Clin. Расследование. https://doi.org/10.1172/JCI140335 (2020).

85.

Giamarellos-Bourboulis, E.J. et al. Комплексная иммунная дисрегуляция у пациентов с COVID-19 с тяжелой дыхательной недостаточностью. Клеточный микроб-хозяин 27 , 992–1000.e3 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

86.

Кури-Сервантес, Л. и др. Комплексное картирование иммунных нарушений, связанных с тяжелой формой COVID-19. Sci. Иммунол. 5 , eabd7114 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

87.

Lee, H. et al. Фенотип и функция дендритных клеток носа. Mucosal Immunol. 8 , 1083–1098 (2015).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

88.

Blanco-Melo, D. et al. Несбалансированная реакция хозяина на SARS-CoV-2 способствует развитию COVID-19. Ячейка 181 , 1036–1045.e9 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

89.

Ублюдок П. и др. Аутоантитела к IFN типа I у пациентов с опасным для жизни COVID-19. Наука https://doi.org/10.1126/science.abd4585 (2020).

90.

Zhang, Q.и другие. Врожденные аномалии IFN-иммунитета I типа у пациентов с опасным для жизни COVID-19. Наука https://doi.org/10.1126/science.abd4570 (2020).

91.

Mazzoni, A. et al. Нарушение цитотоксичности иммунных клеток при тяжелой форме COVID-19 зависит от IL-6. J. Clin. Расследование. 138554. https://doi.org/10.1172/JCI138554 (2020).

92.

Radermecker, C. et al. Внеклеточные ловушки нейтрофилов проникают в дыхательные пути легких, интерстициальные и сосудистые отделы при тяжелой форме COVID-19. J. Exp. Med. 90

7 , e20201012 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

93.

Long, Q. X. et al. Ответы антител на SARS-CoV-2 у пациентов с COVID-19. Нац. Med. 26 , 845–848 (2020).

CAS
PubMed

Google ученый

94.

Grifoni, A. et al. Мишени Т-клеточного ответа на коронавирус SARS-CoV-2 у людей с заболеванием COVID-19 и лиц, не подвергшихся воздействию. Ячейка 181 , 1489–1501.e15 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

95.

Long, Q. X. et al. Клинико-иммунологическая оценка бессимптомных инфекций SARS-CoV-2. Нац. Med. 26 , 1200–1204 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

96.

Пэн, Ю.и другие. CD4 + и CD8 + Т-клетки с широкой и сильной памятью, индуцированные SARS-CoV-2 у выздоравливающих людей в Великобритании после COVID-19. Nat Immunol. https://doi.org/10.1038/s41590-020-0782-6 (2020).

97.

Ni, L. et al. Выявление гуморального и клеточного иммунитета, специфичного для SARS-CoV-2, у выздоравливающих людей с COVID-19. Иммунитет 52 , 971–977.e3 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

98.

Sekine, T. et al. Устойчивый Т-клеточный иммунитет у выздоравливающих людей с бессимптомным или легкой формой COVID-19. Ячейка 183 , 158–168 (2020). https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.08.017.

99.

Le Bert, N. et al. SARS-CoV-2-специфический Т-клеточный иммунитет в случаях COVID-19 и SARS, а также неинфицированный контроль. Природа 584 , 457–462 (2020).

PubMed
PubMed Central

Google ученый

100.

Braun, J. et al. SARS-CoV-2-реактивные Т-клетки у здоровых доноров и пациентов с COVID-19. Природа https://doi.org/10.1038/s41586-020-2598-9 (2020).

101.

Weiskopf, D. et al. Фенотип и кинетика Т-клеток, специфичных для SARS-CoV-2, у пациентов с COVID-19 с острым респираторным дистресс-синдромом. Sci. Иммунол. 5 , eabd2071 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

102.

Mazzoni, A. et al. Клеточно-опосредованный и гуморальный адаптивный иммунный ответ на SARS-CoV-2 у бессимптомных пациентов ниже, чем у пациентов с симптоматическим COVID-19. Eur. J. Immunol. https://doi.org/10.1002/eji.202048915 (2020).

103.

Hua, X. et al. Прайминг носа мышиным коронавирусом обеспечивает защитный иммунитет против летальной гетерологичной вирусной пневмонии. JCI Insight 3 , e99025 (2018).

PubMed Central

Google ученый

104.

Pizzorno, A. et al. Характеристика и лечение SARS-CoV-2 в носовом и бронхиальном эпителии дыхательных путей человека. Cell Rep. Med. 1 , 100059 (2020).

PubMed
PubMed Central

Google ученый

105.

Моренс, Д. М., Дашак, П. и Таубенбергер, Дж. К. Побег из ящика Пандоры — еще один новый коронавирус. N. Engl. J. Med. 382 , 1293–1295 (2020).

CAS
PubMed

Google ученый

106.

Де Вит, Э., Ван Дормален, Н., Фальзарано, Д. и Мюнстер, В. Дж. SARS и MERS: недавние исследования возникающих коронавирусов. Нац. Rev. Microbiol. 14 , 523 (2016).

PubMed
PubMed Central

Google ученый

107.

Фер А. Р., Чаннаппанавар Р. и Перлман С. Ближневосточный респираторный синдром: появление патогенного коронавируса человека. Annu. Rev. Med. 68 , 387–399 (2017).

108.

Гу, Дж. И Кортевег, С. Патология и патогенез тяжелого острого респираторного синдрома. Am. J. Pathol. 170 , 1136–1147 (2007).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

109.

Мемиш, З. А., Перлман, С., Ван Керхов, М. Д., Зумла, А. Ближневосточный респираторный синдром. Ланцет (2020).

110.

Li, W. et al. Ангиотензин-превращающий фермент 2 является функциональным рецептором коронавируса SARS. Nature 426 , 450–454 (2003).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

111.

Lu, G. et al. Молекулярная основа связывания нового коронавируса человека MERS-CoV и его рецептора CD26. Природа 500 , 227–231 (2013).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

112.

Ду, Л.и другие. Спайковый белок SARS-CoV — мишень для разработки вакцин и терапевтических средств. Нац. Rev. Microbiol. 7 , 226–236 (2009).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

113.

Лу, Г., Ван, Q. и Гао, Г. Ф. От летучей мыши к человеку: особенности всплеска, определяющие «прыжок от хозяина» коронавирусов SARS-CoV, MERS-CoV и других. Trends Microbiol. 23 , 468–478 (2015).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

114.

Glowacka, I. et al. Доказательства того, что TMPRSS2 активирует спайковый белок коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома для слияния мембран и снижает вирусный контроль за счет гуморального иммунного ответа. J. Virol. 85 , 4122–4134 (2011).

PubMed
PubMed Central

Google ученый

115.

Ширато К. Инфекция коронавирусом ближневосточного респираторного синдрома, опосредованная трансмембранной сериновой протеазой TMPRSS2. J. Virol. 87 , 12552–12561 (2013).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

116.

Walls, A.C. et al. Неожиданная функциональная мимикрия рецепторов объясняет активацию слияния коронавируса. Ячейка 176 , 1026–1039.e15 (2019).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

117.

Mahallawi, W.H. Отчет о клиническом случае: обнаружение коронавируса ближневосточного респираторного синдрома (БВРС-КоВ) в носовых выделениях умершего человека. J. Taibah Univ. Med. Sci. 13 , 302–304 (2018).

PubMed

Google ученый

118.

Li, R. et al. Существенная недокументированная инфекция способствует быстрому распространению нового коронавируса (SARS-CoV-2). Наука 368 , 489–493 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

119.

Hoxha, A. et al. Бессимптомная инфекция SARS-CoV-2 в бельгийских учреждениях длительного ухода. Lancet Infect. Дис. https://doi.org/10.1016/S1473-3099(20)30560-0 (2020).

120.

Sattler A. et al. Специфические для SARS-CoV-2 Т-клеточные ответы и корреляция с предрасположенностью пациентов к COVID-19. J. Clin. Расследование. https://doi.org/10.1172/JCI140965 (2020).

121.

Maggi, E., Canonica, G. W. & Moretta, L. COVID-19: вопросы без ответа об иммунном ответе и патогенезе. J. Allergy Clin. Иммунол. 146 , 18–22 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

122.

Huang, C. et al. Клинические особенности пациентов, инфицированных новым коронавирусом 2019 г., в Ухане, Китай [опубликованное исправление опубликовано в Lancet. 2020 30 января]. Ланцет 395 , 497–506 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

123.

Zhou, F. et al. Клиническое течение и факторы риска смертности взрослых пациентов с COVID-19 в Ухане, Китай: ретроспективное когортное исследование. Ланцет 90

5 , 1038 (2020).

124.

Vultaggio, A. et al. Своевременное прогнозирование раннего клинического ухудшения состояния пациентов с COVID-19 от умеренной до тяжелой: полезность комбинированной оценки с использованием IL-6 в предварительном исследовании. J. Allergy Clin. Иммунол. Практик. S2213-2198 , 30611–30615 (2020).

Google ученый

125.

Азиз, М., Фатима, Р. и Ассали, Р. Повышенный уровень интерлейкина-6 и тяжелая форма COVID-19: метаанализ. J. Med. Virol. https://doi.org/10.1002/jmv.25948 (2020).

126.

Xu, X. et al. Эффективное лечение тяжелых пациентов с COVID-19 с помощью тоцилизумаба. Proc. Natl Acad. Sci. 117 , 10970–10975 (2020).

CAS
PubMed

Google ученый

127.

Vannucchi, A. M. et al. Сострадательное использование ингибитора JAK1 / 2 руксолитиниба при тяжелой форме COVID-19: проспективное обсервационное исследование. Лейкемия 1–13 (2020 г.).

128.

Kaneko, N. et al. Утрата Bcl-6-экспрессирующих Т-фолликулярных вспомогательных клеток и зародышевых центров при COVID-19. Ячейка S0092-S8674: 31067-9. https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.08.025 (2020).

129.

Рэй Д. и Юнг Р. Иммунное старение, эпигенетика и аутоиммунитет. Clin.Иммунол. 196 , 59–63 (2018).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

130.

Мастерс, А. Р., Хейнс, Л., Су, Д. М. и Палмер, Д. Б. Иммунное старение: значение микросреды стромы. Clin. Exp. Иммунол. 187 , 6–15 (2017).

CAS
PubMed

Google ученый

131.

Moderbacher, C.R. et al. Антиген-специфический адаптивный иммунитет к SARS-CoV-2 при остром COVID-19 и ассоциации с возрастом и тяжестью заболевания. Ячейка https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.09.038 (2020).

132.

Fujihashi, K. & Kiyono, H. Иммуностарение слизистой оболочки: новые разработки и вакцины для борьбы с инфекционными заболеваниями. Trends Immunol. 30 , 334–343 (2009).

CAS
PubMed

Google ученый

133.

Koga, T. et al. Доказательства раннего старения иммунной системы слизистых оболочек. J. Immunol. 165 , 5352–5359 (2000).

CAS
PubMed

Google ученый

134.

Hagiwara, Y. et al. Защитный иммунитет слизистой оболочки при старении связан с функциональными CD4 + Т-клетками в лимфоретикулярной ткани, связанной с носоглоткой. J. Immunol. 170 , 1754–1762 (2003).

CAS
PubMed

Google ученый

135.

Lechien, J. R. et al. Потеря запаха и вкуса у европейских пациентов с COVID-19 от легкой до умеренной степени тяжести в 2013 г. Ann. Междунар. Med. https://doi.org/10.7326/M20-2428 (2020).

Артикул
PubMed
PubMed Central

Google ученый

136.

Whitcroft, K. L. & Hummel, T. Дисфункция обоняния при COVID-19: диагностика и лечение. JAMA 323 , 2512–2514 (2020).

CAS
PubMed

Google ученый

137.

Cooper, K. W. et al. COVID-19 и химические чувства: в центре внимания игроки поддержки. Нейрон 107 , 219–233 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

138.

Menni, C. et al. Отслеживание симптомов в реальном времени для прогнозирования потенциального COVID-19. Нац. Med. 26 , 1037–1040 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

139.

Spinato, G. et al. Изменения запаха или вкуса у амбулаторных пациентов с легкими симптомами и инфекцией SARS-CoV-2. JAMA 323 , 2089–2090 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

140.

Li, Y. C., Bai, W. Z. & Hashikawa, T. Нейроинвазивный потенциал SARS-CoV2 может играть роль в дыхательной недостаточности пациентов с COVID-19. J. Med. Virol. 92 , 552–555 (2020).

CAS
PubMed

Google ученый

141.

Solomon, I.H. et al. Невропатологические особенности Covid-19. N. Engl. J. Med. https://doi.org/10.1056/NEJMc2019373 (2020).

142.

Brann, D. H. et al. Ненейрональная экспрессия генов входа SARS-CoV-2 в обонятельной системе предполагает механизмы, лежащие в основе аносмии, связанной с COVID-19. Sci. Adv. eabc5801 (2020).

143.

Boscolo-Rizzo, P. et al. Эволюция измененного обоняния или вкуса у пациентов с COVID-19 с легкими симптомами. ДЖАМА Отоларингол. — Зав. Neck Surg. 146 , 729–732 (2020).

Google ученый

144.

Локателло, Л. Г., Маджоре, Г., Бруно, К., Тротта, М. и Галло, О. Стратегия комплексного наблюдения за пациентами с химиосенсорной дисфункцией, связанной с COVID-19. Отоларингол.—Head Neck Surg. 0194599820950716 (2020).

145.

Cantuti-Castelvetri L. et al. Нейропилин-1 способствует проникновению и инфицированию клеток SARS-CoV-2. Наука eabd2985. https://doi.org/10.1126/science.abd2985 (2020).

146.

Martin, J. E. et al. ДНК-вакцина против SARS индуцирует нейтрализующие антитела и клеточный иммунный ответ у здоровых взрослых в ходе клинических испытаний фазы I. Вакцина 26 , 6338–6343 (2008).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

147.

Фолегатти, П. М. и др. Безопасность и иммуногенность вакцины-кандидата от коронавируса ближневосточного респираторного синдрома с вирусным вектором: открытое, нерандомизированное, неконтролируемое испытание фазы 1 с увеличением дозы. Lancet Infect. Дис. 20 , 816–826 (2020).

148.

Краммер, Ф. Вакцины против SARS-CoV-2 в разработке. Природа https://doi.org/10.1038/s41586-020-2798-3 (2020).

149.

Хитон, П. М. Мультивселенная по разработке вакцины против Covid-19. NEJM (2020 г.).

150.

Folegatti, P. M. et al. Безопасность и иммуногенность вакцины ChAdOx1 nCoV-19 против SARS-CoV-2: предварительный отчет фазы 1/2, простого слепого, рандомизированного контролируемого исследования. Ланцет 396 , 467–478 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

151.

Hassan, A. O. et al. Модель инфекции SARS-CoV-2 на мышах демонстрирует защиту за счет нейтрализующих антител. Ячейка 182 , 744–753 (2020).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

152.

Зост, С. Дж., Гильчук, П., Кейс, Дж. Б. и др. Сильно нейтрализующие и защитные человеческие антитела против SARS-CoV-2. Природа 584 , 443–449 (2020). https://doi.org/10.1038/s41586-020-2548-6.

153.

Shin, M. D. et al. Разработка вакцины против COVID-19 и потенциальный путь развития наноматериалов. Нац. Nanotechnol. 15 , 646–655 (2020).

CAS
PubMed

Google ученый

154.

Zhang, S., Caldeira-Dantas, S., Smith, C.J. & Snyder, C.M. Устойчивая репликация вируса и развитие Т-клеточных ответов после интраназального инфицирования MCMV. Med. Microbiol. Иммунол. 208 , 457–468 (2019).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

155.

Ричард М. и др. Вирусы гриппа А передаются по воздуху через носовой респираторный эпителий хорьков. Нац. Commun. 11 , 1–11 (2020).

Google ученый

156.

Джавина-Бьянки, П., Аун, М. В., Такеджима, П., Калил, Дж. И Агонди, Р. С. Объединенные болезни дыхательных путей: современные перспективы. J. Asthma Allergy 9 , 93 (2016).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

157.

Joo, S. et al. Критическая роль TSLP-чувствительных дендритных клеток слизистой оболочки в индукции назального антиген-специфического ответа IgA. Слизистая. Иммунол. 10 , 901–911 (2017).

CAS
PubMed

Google ученый

158.

Zhao, J. et al. CD4 (+) Т-клетки памяти дыхательных путей обеспечивают защитный иммунитет против появляющихся респираторных коронавирусов. Иммунитет 44 , 1379–1391 (2016).

CAS
PubMed
PubMed Central

Google ученый

159.

Мюллер, С. Н. и Маккей, Л. К. Резидентные в тканях Т-клетки памяти: местные специалисты по иммунной защите. Нац. Rev. Immunol. 16 , 79–89 (2016).

CAS
PubMed

Google ученый

160.

Pizzolla, A. et al. Резидентные CD8 + Т-клетки памяти в верхних дыхательных путях предотвращают инфицирование вирусом легочного гриппа. Sci. Иммунол. 2 , eaam6970 (2017).

PubMed

Google ученый

161.

Зенс, К. Д., Чен, Дж. К. и Фарбер, Д. Л. Полученные вакциной резидентные Т-клетки памяти в ткани легкого обеспечивают гетеросубтипическую защиту от инфекции гриппа. JCI Insight 1 , e85832 (2016).

PubMed Central

Google ученый

162.

O’Hara, J. M. et al. Создание защитных пневмококковых резидентных CD4 + Т-клеток носовой памяти посредством парентеральной иммунизации. Слизистая. Иммунол. 13 , 172–182 (2020).

PubMed

Google ученый

163.

van Doremalen, N., Lambe, T., Spencer, A. et al. Вакцина ChAdOx1 nCoV-19 предотвращает пневмонию SARS-CoV-2 у макак-резусов. Природа 586 , 578–582 (2020). https://doi.org/10.1038/s41586-020-2608-y.

164.

Hassan, A. O. et al. Одноразовая интраназальная вакцина ChAd защищает верхние и нижние дыхательные пути от SARS-CoV-2. Ячейка 183 169–184.e13 (2020). https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.08.026.

Назальные эпителиальные клетки для оценки иммунного ответа in vitro на респираторную вирусную инфекцию у беременных женщин с астмой | Респираторные исследования

Субъекты

pNEC были собраны у n = 6 беременных астматиков, n = 6 беременных неастматиков, n = 3 небеременных астматиков и n = 6 небеременных контрольных. Беременные женщины участвовали в рандомизированном контролируемом исследовании в больнице Джона Хантера и были набраны из женской консультации, как описано ранее [10].Небеременные женщины были набраны из Регистра медицинских исследовательских институтов Хантера и из респираторного персонала больницы Джона Хантера, как описано ранее [5]. Критерии включения: женщины в возрасте 18–40 лет и беременные женщины старше 18 недель. Для астматиков также требовался диагноз врача. Женщины были исключены, если у них было другое хроническое заболевание, симптомы простуды / гриппа (оцениваемые с помощью опросника по простуде [11]) в течение месяца до сбора образцов, а для астматиков — любая потеря контроля над астмой в течение последнего месяца (Анкета контроля астмы. и критерии контроля астмы из руководящих принципов GINA [12]).Утверждение этики было получено от Комитета по этике исследований на людях Hunter Новой Англии и Комитета по этике исследований Университета Ньюкасла. Письменное информированное согласие было получено от всех участников до характеристики субъектов и сбора образцов.

Вирусы

RV43, риновирус основной группы, был клиническим изолятом, полученным в 2005 г. из мокроты и мазков из носа / горла, взятых у субъектов старше 7 лет, поступивших в отделение неотложной помощи больницы Джона Хантера с обострением астмы.RV43 размножали в клетках рабдомиосаркомы, экспрессирующих ICAM-1 (RD-ICAMs; ATCC, Манассас, Вирджиния, США), в колбах для тканевых культур T175 при 37 ° C / 5% CO. Co, Castle Hill, NSW, Australia) с 5% фетальной бычьей сывороткой (FBS; SAFC Biosciences, Lenexa, Kansas, USA). Для последующих инфекций pNEC мы использовали MOI, равное 20. Несмотря на то, что это высокий MOI, мы обнаружили, что это была наиболее эффективная вирусная концентрация для индукции максимального иммунного ответа назальных клеток с минимальной гибелью клеток.Человеческий h4N2 (A / Wellington / 43/2006) был получен от Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) в 2006 году. H4N2 был размножен в клетках почек собак Madin-Darby (MDCKs; ATCC, Манассас, Вирджиния, США) в DMEM с 5% FBS. Для последующих инфекций pNEC мы использовали MOI5 (4 × 10 ⁵ мкФ / мл).

Носовые щетки

Для получения pNEC небольшую стерильную щеточку для межзубных промежутков (Curaden Swiss, Австралия) вставляли в переднюю часть нижнего прохода и чистили взад-вперед, затем вверх и вниз несколько раз.Затем щетку погружали в стерильный PBS Dulbeco (Gibco Invitrogen, Australia Pty Ltd. Vic Australia) в 1,5 мл микроцентрифужных пробирках и энергично растирали вверх и вниз, чтобы ослабить прикрепленные клетки. Эту процедуру повторяли дважды в каждую ноздрю, всего четыре чистки.

pNEC недифференцированные погруженные монокультуры

Микроцентрифужные пробирки центрифугировали при 300 × g в течение 5 мин, супернатант удаляли и каждый клеточный осадок ресуспендировали в 250 мкл полной среды для роста бронхиального эпителия (BEGMc; LONZA Clonetics Walkersville, США).Суспензии клеток объединяли и переносили в колбу для тканевых культур Т25, предварительно покрытую плацентарным коллагеном (0,8 мкг / см ² Sigma-Aldrich, Castle Hill, Австралия), и добавляли 3 мл BEGMc с 10% фетальной бычьей сывороткой ( FBS). Через 24 часа культивирования при 37 ° C (чтобы позволить клеткам прикрепиться) среду заменяли 3,5-5 мл свежего BEGMc без FBS. Затем культуры поддерживали в BEGMc, меняя среду каждые 2–3 дня, пока клетки не достигли 80% слияния; обычно 3–4 недели. При слиянии pNEC субкультивировали, добавляя трипсин (Gibco, 10x трипсин Sigma-Aldrich, Castle Hill, Австралия), инкубировали при 37 ° C в течение 5-10 минут (или до тех пор, пока почти все клетки не всплыли, как визуализировано под микроскопом), а затем инактивировали с использованием FBS.Суспензию клеток центрифугировали при 550 × g в течение 5 мин, и полученный осадок ресуспендировали в BEGMc. Затем pNEC засевали в 24-луночные планшеты (предварительно покрытые коллагеном 0,8 мкг / см2) до конечной концентрации 10 ⁴ клеток в 500 мкл BEGMc. Среду заменяли через день, пока клетки не достигли 60–80% слияния (обычно 1-2 недели).

pNEC с интерфейсом воздух-жидкость (ALI), дифференцированные культуры

pNEC от трех беременных женщин были успешно культивированы как культуры ALI (см. Онлайн-приложение).Из-за ограниченного количества образцов пациентов все последующие респираторные вирусные инфекции у беременных и небеременных женщин с астмой и без нее проводились в погруженных культурах.

pNEC Инфекция респираторным вирусом in vitro

Полуконфлюэнтные клетки (~ 80%) сначала промывали в PBS с последующим добавлением RV43 (MOI20) или h4N2 (MOI5 или 4×10 ⁵ БОЕ / мл) в конечный объем 500 мкл базальной среды эпителиальных клеток бронхов (BEBM; LONZA Clonetics Walkersville USA) с 0.1% добавка жидкой среды инсулин-трансферрин-селенит натрия (ITS + 1 Sigma-Aldrich Co, Castle Hill, NSW, Австралия). Во время инфицирования pNEC инкубировали либо при комнатной температуре со встряхиванием (RV43), либо при 37 ° C без встряхивания (h4N2). Через один час вирусосодержащую среду удаляли, клетки дважды промывали PBS и в каждую лунку добавляли 1 мл свежего BEBM с 0,1% ITS. Все эксперименты проводились в двух или, по возможности, трехкратной повторности. После 48 ч инкубации при 33 ° C (RV43) или 35 ° C (h4N2) супернатант собирали, ненадолго центрифугировали для удаления любых клеточных остатков и хранили при -80 ° C для последующего анализа цитокинов / хемокинов и вирусов.

Измерения белка

IFN-λ измеряли в супернатанте культуры с помощью R&D Duoset (Миннеаполис, Канада) в соответствии с инструкциями производителя. IL1-β, IL-8, IP-10 и MIP1- α измеряли с использованием набора цитометрических шариков от BD Bioscience (Калифорния, США) в соответствии с инструкциями производителя.

Жизнеспособность клеток

Для определения жизнеспособности клеток клетки анализировали с помощью проточной цитометрии с использованием набора PE для апоптоза аннексина V I (BD Bioscience, Калифорния, США) в соответствии с инструкциями производителя.

Статистика

Данные анализировали с помощью Graph Pad Prism 8 (Ла-Хойя, Калифорния, США). Любые выбросы были сначала удалены с помощью теста выброса ROUT с Q = 1%. Затем нормальность данных проверялась с помощью комплексного теста Д’Агостино-Пирсона на нормальность или, когда числа были слишком малы, с использованием теста нормальности Шапиро-Уолка. Затем был проведен односторонний дисперсионный анализ ANOVA (или сумма рангов) с исправленными множественными сравнениями между всеми группами.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г.,
браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie
потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в cookie-файлах может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт
не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к
остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

% PDF-1.7
%
773 0 объект
>
эндобдж

xref
773 141
0000000016 00000 н.
0000004120 00000 н.
0000004430 00000 н.
0000004559 00000 н.
0000004636 00000 н.
0000004658 00000 п.
0000004732 00000 н.
0000004764 00000 н.
0000004850 00000 н.
0000005607 00000 н.
0000005776 00000 н.
0000005928 00000 н.
0000006084 00000 н.
0000006201 00000 н.
0000006318 00000 н.
0000006435 00000 н.
0000006552 00000 н.
0000006667 00000 н.
0000006784 00000 н.
0000006899 00000 н.
0000007013 00000 н.
0000007130 00000 н.
0000007245 00000 н.
0000007362 00000 н.
0000007479 00000 н.
0000007596 00000 п.
0000007713 00000 н.
0000007829 00000 н.
0000007946 00000 н.
0000008063 00000 н.
0000008180 00000 н.
0000008297 00000 н.
0000008413 00000 н.
0000008530 00000 н.
0000008647 00000 н.
0000008762 00000 н.
0000008917 00000 н.
0000009061 00000 н.
0000009196 00000 н.
0000009329 00000 н.
0000009758 00000 н.
0000010532 00000 п.
0000010882 00000 п.
0000011374 00000 п.
0000011546 00000 п.
0000011910 00000 п.
0000012392 00000 п.
0000012971 00000 п.
0000013062 00000 п.
0000013120 00000 н.
0000013198 00000 п.
0000013505 00000 п.
0000014072 00000 п.
0000014293 00000 п.
0000015408 00000 п.
0000015584 00000 п.
0000015774 00000 п.
0000015986 00000 п.
0000016296 00000 п.
0000016389 00000 п.
0000016616 00000 п.
0000017247 00000 п.
0000018423 00000 п.
0000018884 00000 п.
0000018955 00000 п.
0000019161 00000 п.
0000019458 00000 п.
0000019776 00000 п.
0000020174 00000 п.
0000020652 00000 п.
0000021809 00000 п.
0000023003 00000 п.
0000024138 00000 п.
0000025250 00000 п.
0000025312 00000 п.
0000025339 00000 п.
0000025842 00000 п.
0000025976 00000 п.
0000027124 00000 п.
0000027992 00000 н.
0000032435 00000 п.
0000032505 00000 п.
0000038005 00000 п.
0000042308 00000 п.
0000045167 00000 п.
0000045495 00000 п.
0000046208 00000 п.
0000046307 00000 п.
0000046577 00000 п.
0000046858 00000 н.
0000048478 00000 п.
0000048727 00000 н.
0000048786 00000 п.
0000049420 00000 н.
0000049622 00000 н.
0000049907 00000 н.
0000049976 00000 н.
0000050399 00000 п.
0000050609 00000 п.
0000050906 00000 п.
0000051235 00000 п.
0000051285 00000 п.
0000051399 00000 п.
0000052055 00000 п.
0000058277 00000 п.
0000105200 00000 н.
0000132749 00000 н.
0000132825 00000 н.
0000132938 00000 н.
0000132996 00000 н.
0000133254 00000 н.
0000133361 00000 н.
0000133466 00000 н.
0000133580 00000 н.
0000133708 00000 н.
0000133822 00000 н.
0000133952 00000 н.
0000134066 00000 н.
0000134184 00000 н.%; \ Jsq & RrА \ 4cOK6!? A; cVSL! H 瓓 ~ pʒ, 2AEyvz5͖:% y-FEKd.n

Ксилит и экстракт семян грейпфрута обещают предотвратить заражение SARS-CoV-2, исследование показывает

Коронавирусная болезнь (COVID-19), вызванная тяжелым острым респираторным синдромом, коронавирусом 2 (SARS-CoV-2), нанесла серьезный ущерб всему миру. Он распространился с момента своего первого появления в декабре 2019 года, достигнув 191 страны и территории.

Широкое распространение вируса побудило ученых и фармацевтические компании разработать лекарства и вакцины.Некоторые прибегали к перепрофилированию лекарств, которые были признаны безопасными и эффективными регулирующими органами для лечения других заболеваний. Их можно использовать для лечения пациентов с COVID-19.

Группа исследователей из США продемонстрировала, что ксилит и экстракт семян грейпфрута (GSE) потенциально могут предотвратить заражение SARS-CoV-2. Их можно использовать в качестве назального спрея для сдерживания распространения коронавируса.

Пандемия COVID-19

Как и другие вирусные пандемии, разразившиеся по всему миру, пандемия коронавируса нанесла ущерб большинству затронутых стран.Из-за карантина школы и предприятия закрылись на много месяцев. На сегодняшний день инфицировано более 67 миллионов человек, и вирус унес более 1,53 миллиона жизней.

Социальные издержки COVID-19 сложно измерить, но миллионы людей лишились средств к существованию. Пока вакцина или лекарство не будут одобрены, миру может потребоваться адаптировать политику для предотвращения распространения вируса.

Помимо вакцин и лекарств, ученые также изучают методы профилактики заражения SARS-Cov-2.

Что такое ксилит?

Ксилитол — это природный спирт, содержащийся в большинстве растительных материалов, таких как фрукты и овощи. Он широко используется в качестве заменителя сахара в конфетах без сахара, мятных конфетах и жевательных резинках.

Прошлые исследования продемонстрировали противовирусные свойства полиолов. Например, сообщалось, что ксилит снижает тяжесть вирусных инфекций. В моделях на мышах было отмечено влияние диетического ксилита на респираторно-синцитиальный вирус человека, который влияет на дыхательные пути, что показало многообещающие результаты.У мышей, получавших ксилит в течение 14 дней до воздействия вируса, титры вируса в легких были ниже, чем у контрольных.

Ксилит также перспективен в предотвращении бактериальных инфекций. Он может снизить уровень вредных бактерий в полости рта на 27–75 процентов.

Ксилит уже давно безопасен и полезен для предотвращения бактериальных инфекций. Он также считается пребиотиком из-за его положительного воздействия на микробиом, снижая риск распространения патогенов.

Кабинет

Исследование, опубликованное в допечатном журнале bioRxiv, , подчеркивает эффективность ксилита в отношении SARS-CoV-2 и других вирусных инфекций, поражающих дыхательные пути.

Команда разработала назальный спрей, содержащий ксилит, экстракт семян грейпфрута и физиологический раствор, чтобы прийти к результатам исследования. Команда проверила назальный спрей на титры вируса SARS-CoV-2.

Исследователи наблюдали за токсичностью и обнаружили, что после 25-минутного контакта назальный спрей уменьшил количество вируса с 4.От 2 до 1,7 log10 CCID50 на 0,1 мл, статистически значимое снижение.

При проверке изображений STEM, полученных в лаборатории BIoCryo (Северо-Западный университет), они показали, что вирус содержится на клеточной стенке, но не внутриклеточно, возможно, из-за продуцирования D-ксилозы (ксилита) гликоаминогликаны-мишени-ловушки.

«Комбинированная терапия с GSE и ксилитом может предотвратить распространение вирусных респираторных инфекций не только SAR-CoV-2, но также и будущих h2N1 или других вирусных эпидемий», — заключила команда.
«GSE значительно снижает вирусную нагрузку, в то время как ксилит предотвращает прикрепление вируса к коровому белку на клеточной стенке», — добавили они.

Команда пришла к выводу, что ксилит и экстракт семян грейпфрута не являются дорогими или редкими, что делает их хорошими средствами для борьбы со вспышками вирусов. В форме назального спрея он может предотвратить заражение SARS-CoV-2 и другими респираторными вирусами.

Спрей также позволит комфортно длительное время носить маску в условиях пандемии коронавируса.

«Поскольку при использовании комбинированной терапии ксилитом и GSE нет факторов риска, а назальный спрей продается без рецепта, а спрей позволяет комфортно носить маску в течение длительного времени, применение этой профилактической противовирусной терапии следует поощрять », — добавили они.

* Важное уведомление

bioRxiv публикует предварительные научные отчеты, которые не рецензируются и, следовательно, не должны рассматриваться как окончательные, руководящие в клинической практике / поведении, связанном со здоровьем, или рассматриваться как установленная информация.

Источник:

Ссылка на журнал:

Кэннон, М., Вестовер, Дж., Блехер, Р., Санчес-Гонсалес, М., и Феррер, Г. (2020). Анализ in vitro антивирусного потенциала компонентов назального спрея против SARS-CoV-2.