Бромид натрия для электрофореза: Электрофорез при заболеваниях крупных кровеносных сосудов (с раствором натрия бромида)

Сеансы электрофореза с натрия бромидом при заболеваниях щитовидной железы (тиреотоксикоз)

Бром является химическим соединением, которое стоит на 35 месте в таблице Менделеева (по современной классификации – на 17). Несмотря на то, что с греческого перевод этого слова звучит не очень красиво («вонючий», «зловонный»), для организма это вещество имеет огромное значение. Именно поэтому постепенно его, в форме бромидов, начали применять в медицине.
Сегодня с натрия бромидом проводятся сеансы электрофореза, которые отлично помогают бороться с заболеваниями щитовидной железы. Речь идет лишь о болезнях, сопровождающихся тиреотоксикозом, а вот при гипотиреозе этот препарат применять нецелесообразно, и даже опасно.

Действие брома на организм

Бром принимает участие во многих процессах, протекающих в организме человека. Но особенно остро в нем нуждается щитовидная железа, хотя процесс его поглощения клетками организма и происходит значительно медленнее из-за йода и других микроэлементов .

Этот химический элемент обладает седативным эффектом, в чем и заключается целесообразность его применения при тиреотоксикозе. Помимо этого, использование таких препаратов для электрофореза на ЩЖ обеспечивает устранение и других нарушений, происходящих на фоне гипертиреоза.

Показания и противопоказания натрия бромида при тиреотоксикозе

Применение натрия бромида целесообразно в том случае, когда гипертиреоз сопровождается:

• неврастенией;
• неврозами;
• истерией;
• повышенной раздражительностью;
• расстройствами сна;
• артериальной гипертензией.

К сожалению, большая часть подобных расстройств как раз таки характерна для тиреотоксикоза. Электрофорез с натрия бромидом поможет постепенно вернуть деятельность эндокринной, нервной и сердечно-сосудистой систем в нормальное русло.

Но у этого препарата есть и свои противопоказания, так же, как и у электрофореза, как у физиотерапевтической процедуры. Так, не проводят такие сеансы пациентам с:

• гиперчувствительностью к натрия бромиду;
• депрессией;
• выраженной артериальной гипотензией;
• гипотиреозом;
• анемией;
• дыхательной недостаточностью;
• выраженной атеросклеротической болезнью;
• недостаточностью печеночного или почечного типа.

Категорически запрещено проводить сеансы электрофореза с данным препаратом пациентам, которые не переносят электрический ток. Ограничения есть и для беременных и кормящих грудью женщин, поэтому данный вопрос нужно обязательно согласовывать с врачом.

Как проводится сеанс электрофореза при гипертиреозе

Процедура электрофореза подразумевает использование специальных электродов, подсоединенных к аппарату, подающему слабые разряды электрического тока. Специальный лоскуток ткани обрабатывается раствором натрия бромида, после чего в него вставляется электрод. Впоследствии он помещается на зону шеи, и физиотерапевт включает аппарат.

На протяжении процедуры может ощущаться легкое пощипывание. Если оно не слишком интенсивное, то на такую неприятность можно закрыть глаза. Но если ощущается не пощипывание, а жжение, то об этом необходимо срочно известить врача. Возможно, напряжение слишком сильное, и его необходимо уменьшить.

Одна процедура длится от 10 до 15 минут, но ее продолжительность может корректироваться врачом с учетом эффективности проводимого лечения.

Экстемпоральные лекарственные формы ГОСАПТЕК | Сеть аптек ГОСАПТЕКА

Реактивы для электрофореза | Диаэм

Notification information 0346300022915000006

Натрия бромид 3% 100 мл РПО

Состав: Натрия бромид 3г, вода очищенная до 100мл

Форма выпуска: Препарат выпускается в форме растворов, предназначенного для приема внутрь, для проведения электрофореза.

Показания к применению: Натрия бромид — препарат, оказывающий выраженное седативное действие, применяется для устранения раздражительности и бессонницы.
Кроме того раствор широко используется в составе комплексной терапии при лечении неврастении, неврозов, истерии, хореи, артериальной гипертензии на начальной стадии, а также эпилепсии. Электрофорез с бромидом натрия применяется при воспалительных процессах, сопровождающихся болевыми ощущениями; при болях, сопровождающих опоясывающий лишай.

Противопоказания: Противопоказан при печеночной, почечной и дыхательной недостаточности, а также при атеросклерозе. Кроме того данное средство нельзя использовать при анемии, гипотензии, депрессии, а также при наличии у пациента гиперчувствительности к препарату.

Инструкция по применению: Раствор натрия бромид взрослым пациентам назначают в дозировке по 0,1-1 г три-четыре раза в сутки. Детям в возрасте до одного года препарат обычно назначают в дозировке 50-100 мг, детям в возрасте до двух лет – в дозировке 150 мг, детям в возрасте от трех до четырех лет – в дозировке 200 мг, детям в возрасте от пяти до шести лет – в дозировке 250 мг, детям от семи до девяти лет – 300 мг препарата, а детям десяти-четырнадцати лет – до 500 мг лекарственного средства внутрь.

При эпилепсии начальная доза препарата должна составлять 1-2 г в сутки. Дозу постепенно увеличивают на 1-2 г каждую неделю. Максимально допустимая доза в данном случае составляет 6-8 г. В процессе лечения рекомендуется сократить употребление поваренной соли до 5-10 г в сутки при условии применения в дозировке 4-5 г. Это поможет существенно увеличить терапевтический эффект от приема средства.

Побочные эффекты: Раствор бромида натрия может стать причиной развития вялости и кожной сыпи. В некоторых случаях у пациентов отмечаются следующие побочные действия: нарушение памяти, кашель, конъюнктивит и ринит. В случае возникновения нежелательных побочных действий для их устранения следует ввести раствор натрия хлорида в дозировке 10-20 г в сутки. При этом назначают обильное питье в объеме 3-8 л в сутки. Необходимо следить за постоянным опорожнением кишечника, постоянно полоскать рот и мыть кожные покровы. Как уже отмечалось выше, следует ограничить потребление поваренной соли. 

Передозировка: При передозировке чаще всего развивается бромизм. Его характерными признаками являются: апатия, кашель, общая слабость, ринит, высыпания на коже, конъюнктивит, акне, проблемы со слухом, памятью и зрением.
В качестве лечения показано обильное питье (до 5 литров в день) и хлорид натрия (по 10-20 грамм в день). Полоскание рта, опорожнение кишечника и частый прием душа способствует выведению лекарства из организма.

При беременности и грудном вскармливании: Лекарство нельзя принимать беременным.

Вещество обильно выделяется с грудным молоком, поэтому грудное вскармливание во время лечения средством необходимо прекратить.

Отпускается по рецепту.

Условия хранения: Хранить в герметичной упаковке, вдали от прямых солнечных лучей и влаги.

Срок годности: 10 дней.
 

Химические реактивы Fisher Organics

Электрофорез в полиакриламидном геле — это… Что такое Электрофорез в полиакриламидном геле?

Электрофорез в полиакриламидном геле (сокр. электрофорез в ПААГ, ПААГ электрофорез; англ. PAGE, Polyacrylamide Gel Electrophoresis) — метод молекулярной биологии и биохимии, используемый для разделения белков и нуклеиновых кислот, основанный на движении заряженных биологических макромолекул в постоянном электрическом поле. Разделение в полиакриламидном геле происходит за счёт различий заряда разделяемых молекул и отличий молекулярных масс, а также от конфигурации молекул. Разделяют т. н. неденатурирующий, или нативный ПААГ-электрофорез (при котором разделяемые биологические макромолекулы в процессе электрофореза остаются в нативном состоянии) и денатурирующий ПААГ-электрофорез (при котором пробы предварительно денатурируют, в случае нуклеиновых кислот используют непродолжительное нагревание пробы с формамидом либо глиоксалем, для денатурации белков обычно используют кипячение пробы в буфере, содержащем сильный ионный детергент (обычно додецилсульфат натрия) и агент, разрушающий четвертичную структуру белка за счёт разрушения дисульфидных мостиков между глобулами белка и внутри полипептидной цепи — бета-меркаптоэтанолом). В процессе денатурирующего ПААГ-электрофореза молекулы сохраняются в денатурированном состоянии за счёт наличия в геле хаотропных агентов (обычно мочевины) в случае ПААГ-электрофореза нуклеиновых кислот и белков и наличия ионных (например додецилсульфата натрия, цетилтриметиламмоний бромида) и неионных (например tween-20) детергентов.

• В случае электрофореза белков в полиакриламидном геле метод обычно используют в модификации Леммли (Laemmli)^[1]
• Также электрофорез в полиакриламидном геле применяют для разделения коротких фрагментов нуклеиновых кислот, например, ДНК-электрофорез, например, при секвенировании по Сэнгеру. Кроме этого, ПААГ-электрофорез применяют для визуализации в методах ПДРФ и ПЦР методе.
• Различают также т. н. диск-электрофорез (от англ. discontinious), при котором в геле в процессе электрофоретического разделения белков на границе между концентрирующим и разделяющим гелями создаётся градиент pH, за счёт чего достигается лучшее разделение белковых молекул.

См. также

Примечания

Бромид натрия — обзор

Бромид калия

Бромид калия (KBr) — безопасное и эффективное противосудорожное средство у собак. Его можно использовать отдельно или вместе с PB. ¹⁵⁷ У собак с первичной эпилепсией, резистентной к фенобарбиталу, добавление KBr снижает частоту приступов примерно у 50–70% собак, получавших лечение, и примерно от 21% до 26% достигает статуса отсутствия приступов. ^125,158,159 Бромид калия также может применяться у собак с неприемлемыми побочными эффектами или у собак, у которых наблюдается гепатотоксичность, связанная с PB. ¹⁵⁷ Примерно 20% собак, получающих KBr, в конечном итоге могут прекратить прием PB при сохранении контроля над приступами. ¹⁵⁹ В сочетании с PB у 72% собак наблюдается снижение дозировки PB на 50% или более. ¹⁵⁹ У 45% процентов этих собак судороги не наблюдались при концентрациях PB ниже 20 мкг / мл, что значительно снижает возможность гепатотоксичности PB. ¹⁵⁹

Начальная доза KBr составляет от 22 до 40 мг / кг перорально в день.Однако, учитывая обратимость побочных эффектов, верхний предел дозировки определяется способностью животного и хозяином переносить побочные эффекты. ¹¹⁷ У собаки t _1/2 KBr составляет приблизительно 25 дней (диапазон от 15 до 45 дней). ^117,160-162 Из-за длинного t _1/2 дозу можно вводить один раз в сутки. Бромид калия следует принимать во время еды, чтобы избежать тошноты. Если возникает тошнота, дневную дозу можно разделить и назначать дважды в день. У некоторых собак из-за тошноты может потребоваться переход на бромид натрия, который может вызывать меньшее раздражение слизистой оболочки желудка. ¹⁵⁷ В таких случаях дозировка бромида натрия должна быть на 15% меньше, чем бромида калия. ¹⁵⁷ Бромид калия не продается как лекарство. Вместо этого можно получить KBr химической (аналитической) чистоты и приготовить его в виде раствора. При приготовлении в соответствующих стерильных условиях бромид натрия можно вводить внутривенно. Стандарты для ветеринаров и аптек можно получить в Фармакопее США на сайте www.usp.org.

KBr выводится в неизмененном виде с мочой преимущественно за счет клубочковой фильтрации.В почечных канальцах происходит интенсивная конкуренция между бромидом и хлоридом. Следовательно, скорость выведения бромида напрямую зависит от потребления хлорида. Чем больше поступление хлоридов, тем выше скорость выведения бромида почками. ^161,163 В результате диета играет важную роль в поддержании соответствующих концентраций в сыворотке крови. ^161,164 Рацион с низким содержанием соли (NaCl) может предрасполагать к токсичности. Следовательно, собак следует поддерживать на постоянной диете, чтобы предотвратить колебания концентрации бромида в сыворотке крови.Что еще более важно, следует избегать применения KBr у собак с почечной дисфункцией, чтобы предотвратить токсичность, связанную со снижением почечной элиминации. ¹⁶⁵ Если необходима терапия KBr, собак с почечной дисфункцией сначала следует лечить по крайней мере половиной рекомендованной дозировки с тщательным мониторингом побочных эффектов и частым измерением концентраций в сыворотке. ¹⁵⁷

Вследствие длительного t _1/2 , установившиеся концентрации могут быть достигнуты не раньше, чем примерно через 120 дней.Хотя измерение концентрации KBr в сыворотке не следует проводить до достижения устойчивого состояния, 75% и 95% уровней устойчивого состояния достигаются через 30 и 60 дней соответственно. ¹⁶² Терапевтический диапазон сывороточной концентрации KBr составляет от 100 до 300 мг / дл. ^157,160,166 В одном исследовании средняя концентрация в сыворотке для собак, достигших контроля над приступами с помощью PB и KBr, составила 162 мг / дл (в диапазоне от 50 до 288 мг / дл). ¹⁵⁹ Средняя концентрация в сыворотке была выше, примерно 200 мг / дл, для тех собак, у которых PB в конечном итоге можно было отменить. ¹⁵⁹ Аналогичным образом, у собак, контролируемых только с помощью KBr, для достижения контроля над приступами требовалась средняя сывороточная концентрация 190 мг / дл. ¹⁵⁹ Следовательно, собакам, получавшим только KBr, могут потребоваться концентрации в сыворотке от 200 до 350 мг / дл для достижения адекватного контроля. ^157,159,162 При использовании в сочетании с PB, дозировка от 30 до 40 мг / кг перорально один раз в день должна достичь стабильной концентрации от 100 до 200 мг / дл; при использовании в качестве единственного агента может потребоваться дозировка 30 мг / кг перорально дважды ежедневно для достижения средней концентрации 245 мг / дл. ¹⁶² Как и в случае с фенобарбиталом, если частота приступов не высока, начало терапии следует начинать с нижнего предела диапазона доз. Увеличение дозировки должно основываться на контроле судорог и концентрации в сыворотке. После достижения контроля над приступами при стабильной дозировке каждые 6 месяцев следует контролировать концентрацию KBr для предотвращения токсичности. ^125,167

Подобно PB, побочные эффекты включают полифагию, полидипсию и полиурию. ^{117,125,157,168} Токсичность (бромизм) связана со слабостью тазовых конечностей. ¹⁵⁷ Наблюдались тетрапарез и парапарез с характеристиками верхнего двигательного нейрона или слабости нижнего двигательного нейрона. ¹⁶⁷ Возможны также изменения в мышлении, от седативного действия до ступора. У сильно пораженных животных могут наблюдаться расширенные зрачки с неполными зрачковыми световыми рефлексами. ¹⁶⁷ Факторы риска развития токсичности включают развитие почечной дисфункции, неадекватный мониторинг и ятрогенные ошибки дозирования. ¹⁶⁷ В случае легких признаков токсичности дозировку KBr следует уменьшить на 25–50%.При токсичности от умеренной до тяжелой используют диурез с 0,9% NaCl для снижения концентрации в сыворотке; Следует проявлять осторожность при быстром снижении концентрации в сыворотке, так как может произойти повторение судорог.

Сообщалось о связи между терапией KBr и панкреатитом. ^125,169-171 Согласно одному отчету, распространенность панкреатита оценивается примерно в 10%. ¹⁷⁰ Неизвестно, является ли панкреатит прямым результатом KBr или связан с неосмотрительностью в питании, вызванной полифагией, связанной с использованием противосудорожных средств. ¹²⁵ Однако, учитывая трудность установления окончательного диагноза панкреатита, риск развития панкреатита из-за введения KBr остается неизвестным.

Сообщается о пигментации, эритематозном дерматите и узловых / пустулезных поражениях кожи у людей. ^125,157 Дерматологическая токсичность редко наблюдается у собак. Мегаэзофагус также наблюдался у собак, получавших KBr. В большинстве случаев дисфункция пищевода разрешается после прекращения приема KBr.

Псевдогиперхлоридемия может возникать в зависимости от аналитического метода, используемого для измерения концентрации хлорида в сыворотке. В некоторых методах используется общая концентрация галогенидов, хлорид и бромид по сравнению с одним только хлоридом, что ложно увеличивает измерения хлоридов. К сожалению, степень псевдогиперхлоридемии не может быть использована для прогнозирования концентрации бромида в сыворотке крови. ¹⁷²

KBr нельзя использовать для кошек. В одном исследовании у кошек, получавших KBr, развился кашель, бронхиальный паттерн на рентгенограммах грудной клетки и эозинофильное воспаление отдельно или в сочетании с нейтрофильным воспалением в образцах бронхоальвеолярного лаважа. ¹⁷³ У восьми из 17 обработанных кошек развилась токсичность, в то время как только у 7 из 14 обработанных кошек наблюдались припадки. ¹⁷³

Бромид натрия — обзор

Бромид

Бромид (бромид калия [KBr] или бромид натрия [NaBr]) — галогенидный противосудорожный препарат, используемый в ветеринарии для лечения эпилепсии. KBr впервые был использован для лечения эпилепсии у людей в 1857 году, но с тех пор был заменен более новыми противосудорожными средствами с меньшим количеством побочных эффектов. ¹⁶ Однако KBr все еще используется в качестве основного или дополнительного противосудорожного средства у собак. Предполагаемый механизм действия бромидных противосудорожных средств — гиперполяризация нейрона за счет движения ионов бромида внутриклеточно через хлоридные каналы. Бромид вводят в виде комбинированного продукта с KBr или NaBr. Бромид не метаболизируется и выводится с мочой в неизмененном виде. KBr с успехом используется в ветеринарии, снижая частоту приступов у 72–74% собак с эпилепсией. ^16,17 Бромид не рекомендуется для кошек из-за риска развития потенциально смертельного пневмонита.

Рекомендуемая доза обслуживания KBr составляет от 20 до 40 мг / кг / день; при использовании состава NaBr дозировка снижается примерно на 15%. Пациентам с кластерными припадками или эпилептическим статусом при поступлении можно назначить ударную дозу KBr от 400 до 600 мг / кг перорально или внутрь, разделенную на равные дозы и вводимые в течение от 1 до 5 дней. Ректальное введение может вызвать преходящие желудочно-кишечные расстройства.Рекомендуемый уровень бромида в сыворотке составляет от 0,8 до 3,0 мг / мл, когда бромид используется отдельно, и от 0,8 до 2,4 мг / мл, когда он используется в сочетании с фенобарбиталом. ¹⁶ Однако дозирование должно основываться на клинической эффективности и признаках токсичности, а не только на уровне сыворотки. Период полувыведения KBr у собак составляет примерно 25 дней, тогда как у кошек он составляет примерно 12 дней и может зависеть от почечной недостаточности или снижения скорости клубочковой фильтрации. ^6,16 Кроме того, поскольку бромид реабсорбируется в почечных канальцах через хлоридные каналы, изменение количества хлорида в пище может повлиять на выведение бромида из организма.Поэтому обычно рекомендуется, чтобы пациенты, получающие бромид в качестве противосудорожного средства, поддерживали относительно постоянную диету (с точки зрения потребления хлоридов).

Побочные эффекты, связанные с терапией бромидом, включают неврологический дефицит (седативный эффект, возбуждение или возбудимость, каудальный парез, атаксия, уменьшение оттока сгибателей тазовых конечностей), полифагию, полиурию, полидипсию и рвоту, а использование бромида может быть связано с развитием панкреатита. . Термин бромизм используется для обозначения токсичных концентраций бромида в сыворотке крови.Клинические признаки бромизма включают измененное мышление, атаксию и парез верхнего или нижнего мотонейрона. Не существует четкого порогового значения концентрации в сыворотке, при котором возникает бромизм, но одно исследование показало, что средняя концентрация бромида в сыворотке составляет 3,7 мг / дл у собак с бромизмом по сравнению с 1,7 мг / дл у контрольных собак. ¹⁸ Однако у некоторых собак без клинических признаков бромизма уровни были выше, чем 3,7 мг / дл, и точно так же у некоторых пораженных собак были более низкие значения. Лечение бромизма включает снижение дозировки или внутривенное введение 0.9% NaCl. Еще одно возможное последствие введения KBr — панкреатит. Значительное увеличение средней иммунореактивности липазы поджелудочной железы в сыворотке крови было отмечено у собак, получавших только KBr или вместе с KBr и фенобарбиталом, по сравнению со здоровыми собаками. ¹⁵ Однако многие собаки, получающие терапию с использованием KBr, являются полифагами, что может привести к употреблению жирной пищи и последующему панкреатиту. Кроме того, KBr может вызывать раздражение желудка, что приводит к клиническим симптомам, аналогичным симптомам панкреатита.Использование KBr у кошек было связано с развитием потенциально смертельного пневмонита у 35–42% кошек, получающих бромид, и поэтому не рекомендуется для этого вида. ¹⁹

Обнаружение липополисахаридов окрашиванием бромистым этидием после электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия.

J Бактериол. 1990 Feb; 172 (2): 1145–1147.

Кафедра бактериологии, Медицинский факультет Нагойского университета, Айти, Япония.

Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Abstract

Описан быстрый и простой метод окрашивания липополисахаридов бромистым этидием. Липополисахариды можно было визуализировать с помощью бромистого этидия с почти такой же чувствительностью, что и при окрашивании серебром, менее чем за 30 минут. Метод окрашивания бромистым этидием особенно подходит для окрашивания липополисахаридов, содержащих кислые О-специфические полисахариды, которые плохо визуализируются при окрашивании серебром.

Полный текст

Полный текст доступен в виде отсканированной копии оригинальной печатной версии.Получите копию для печати (файл PDF) полной статьи (787K) или щелкните изображение страницы ниже, чтобы просмотреть страницу за страницей. Ссылки на PubMed также доступны для Избранные ссылки .

Изображения в этой статье

Щелкните изображение, чтобы увидеть его в увеличенном виде.

Избранные ссылки

Эти ссылки находятся в PubMed. Это может быть не полный список ссылок из этой статьи.

• Дмитриев Б.А., Бачковский Л.В., Львов В.Л., Кочетков Н.К., Хофман И.Л.Соматический антиген Shigella dysenteriae типа 3. Структурные особенности специфической полисахаридной цепи. Eur J Biochem. 1975, 15 января; 50 (3): 539–547. [PubMed] [Google Scholar]
• Дмитриев Б.А., Книрель Ю.А., Шеремет О.К., Шашков А.А., Кочетков Н.К., Хофман И.Л. Соматические антигены шигелл. Структура специфического полисахарида липополисахарида Shigella newcastle (Sh. Flexneri type 6). Eur J Biochem. Июль 1979 г.; 98 (1): 309–316. [PubMed] [Google Scholar]
• Goldman RC, Leive L. Неоднородность длины антигенной боковой цепи в липополисахариде из Escherichia coli 0111 и Salmonella typhimurium LT2.Eur J Biochem. 1980. 107 (1): 145–153. [PubMed] [Google Scholar]
• Hitchcock PJ, Brown TM. Морфологическая гетерогенность хемотипов липополисахаридов сальмонелл в окрашенных серебром полиакриламидных гелях. J Bacteriol. 1983 апр; 154 (1): 269–277. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Янн Б., Реске К., Янн К. Гетерогенность липополисахаридов. Анализ длин полисахаридных цепей электрофорезом в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия. Eur J Biochem. 1 декабря 1975 г.; 60 (1): 239–246.[PubMed] [Google Scholar]
• Kido N, Ohta M, Iida K, Hasegawa T., Ito H, Arakawa Y, Komatsu T, Kato N. Частичная делеция клонированного гена rfb Escherichia coli O9 приводит к синтезу нового О-антигенный липополисахарид. J Bacteriol. Июль 1989 г .; 171 (7): 3629–3633. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Kontrohr T. Идентификация 2-амино-2-дезокси-L-альтруроновой кислоты как составляющей липополисахарида фазы I Shigella sonnei. Carbohydr Res. Октябрь 1977 г., 58 (2): 498–500.[PubMed] [Google Scholar]
• Munford RS, Hall CL, Rick PD. Размерная неоднородность липополисахаридов Salmonella typhimurium в наружных мембранах и фрагментах мембран супернатанта культуры. J Bacteriol. 1980, ноябрь; 144 (2): 630–640. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Palva ET, Mäkelä PH. Гетерогенность липополисахаридов в Salmonella typhimurium проанализирована электрофорезом в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия. Eur J Biochem. 1980. 107 (1): 137–143. [PubMed] [Google Scholar]
• Реске К., Янн К.Антиген O8 кишечной палочки. Структура полисахаридной цепи. Eur J Biochem. 1972 г. 4 декабря; 31 (2): 320–328. [PubMed] [Google Scholar]
• Рассел Р.Р., Джонсон К.Г. Электрофорез липополисахаридов в SDS-полиакриламидном геле. Может J Microbiol. 1975 декабрь; 21 (12): 2013–2018. [PubMed] [Google Scholar]
• Tsai CM, Frasch CE. Чувствительный серебряный краситель для обнаружения липополисахаридов в полиакриламидных гелях. Анальная биохимия. 1 января 1982 г.; 119 (1): 115–119. [PubMed] [Google Scholar]

Статьи из журнала бактериологии предоставлены здесь с разрешения Американского общества микробиологов (ASM)

Бромид этидия — лабораторная безопасность

Бромид этидия (EtBr), темно-красный, кристаллический нелетучий порошок, умеренно растворимый в воде, широко используется в исследовательских лабораториях в качестве визуализирующего агента для нуклеиновых кислот.Порошок используется для приготовления основного раствора с концентрацией 10 мг / мл, а рабочая концентрация для окрашивания геля составляет 1 мкг / мл. Поскольку EtBr может связываться с ДНК, он считается высокотоксичным мутагеном. Он потенциально может вызывать канцерогенные или тератогенные эффекты, хотя никаких научных доказательств, свидетельствующих об их влиянии на здоровье, обнаружено не было. Пути воздействия EtBr: вдыхание, проглатывание и всасывание через кожу. Острое воздействие EtBr вызывает раздражение рта, верхних дыхательных путей, кожи и глаз.

Бромистый этидий не считается опасными отходами; однако политика колледжа Св. Олафа требует, чтобы при использовании или обращении с этим химическим веществом соблюдались следующие меры предосторожности и процедуры.

Средства индивидуальной защиты

• Химические брызгозащитные защитные очки и перчатки ДОЛЖНЫ использоваться при работе с чистым EtBr, приготовлении растворов бромистого этидия, окрашивании гелей или визуализации нуклеиновых кислот в гелях.

Особые процедуры обращения

Первичная и вторичная изоляция; Этикетка

• Порошок EtBr плотно закрывается и хранится в холодильнике RNS 395B.
• Исходный раствор 10 мг / мл должен храниться в плотно закрытом и маркированном контейнере во вторичном лотке с маркировкой.
• Контейнеры для рабочих растворов с концентрацией 1 мкг / мл должны иметь четкую маркировку, иметь крышки и помещаться во вторичный лоток с маркировкой.
• Все первичные и вторичные контейнеры должны иметь этикетку «Предназначены только для использования бромистого этидия».
• Обязательно укажите концентрацию EtBr на всех этикетках.

Процедура окрашивания гелем

• Надев все СИЗ, как указано выше, поместите гель в один из лотков для окрашивания, содержащих EtBr в концентрации 1 мкг / мл.
• Закройте крышку лотка; вы можете прополоскать, снять перчатки и оставить их на станции окрашивания до тех пор, пока гель не будет готов для просмотра (около 10-15 минут).
• Снова наденьте перчатки и СИЗ и с помощью специального шпателя удалите гель с ванночки для окрашивания.
• Поместите гель в емкость с дистиллированной водой (оставьте на несколько минут, если требуется обесцвечивание).
• Используйте специальный шпатель, чтобы нанести гель на световой короб, и верните шпатель в колпак.
• Для работы с клавиатурой компьютера при работе с изображениями необходимо снять перчатки; , клавиатура должна оставаться не-EtBr пространством для всех пользователей .
• По окончании просмотра и / или фотографирования геля поместите его в специальный желтый металлический контейнер для отходов с надписью «отходы бромистого этидия».
• Промойте лоток для визуализации Li-Cor EtBr деионизированной водой, затем промойте 70% этанолом и высушите с помощью Kimwipe; салфетки и перчатки следует безопасно утилизировать вместе с обычным мусором (выверните перчатки наизнанку).

Небольшие разливы; Обеззараживание прилавков или оборудования

• Перед дезинфекцией обесточьте все электрическое оборудование, которое может нуждаться в очистке, и наденьте соответствующие СИЗ.
• Раствор для дезактивации готовят путем добавления 20 мл 50% фосфорной кислоты к раствору 4,2 г нитрита натрия в 300 мл воды. Этот раствор будет кислым; носить перчатки.
• Вымойте пораженный участок бумажным полотенцем, смоченным в дезинфицирующем растворе.Затем вымойте еще пять раз пропитанными бумажными полотенцами, используя каждый раз свежее полотенце.
• Поместите все использованные полотенца в большой контейнер и замочите их в свежем дезинфицирующем растворе как минимум на один час. Используя ультрафиолетовый свет, проверьте полноту дезактивации.
• Отрегулируйте pH использованного (и кислого) дезактивирующего раствора и полотенец до 5-9 с помощью бикарбоната натрия. Полотенца затем можно выбросить в мусор, а раствор можно смыть в канализацию под сильной струей проточной воды.

Методы утилизации / уничтожения: Растворы бромистого этидия

• Водные растворы EtBr, содержащие ≤ 10 мкг / мл.
  • Эти рабочие / окрашивающие растворы можно вылить в лабораторную раковину сильной струей воды.
• Водные растворы EtBr, содержащие> 10 мкг / мл. Эти исходные растворы необходимо либо вылить в подходящий контейнер с завинчивающейся крышкой и утилизировать как опасные отходы, либо эти растворы можно обезвредить (и вылить в раковину) с помощью одной из трех лабораторных процедур обработки:
  • Сумка для разрушения AMRESCO.
    • Поместите в раствор пакет для мусора. Позвольте мешку оставаться в растворе в течение отведенного времени (прочтите инструкции).
    • Снимите пакет и поместите его в желтый металлический контейнер для отходов EtBr.
    • Вылейте оставшийся фильтрат в лабораторную раковину под сильной струей проточной воды.
  • Метод разрушения бромида этидия Ланна и Сансоне (Ланн, Джордж и Сансон, Эрик Б. 1994. Уничтожение опасных химических веществ в лаборатории.John Wiley and Sons, Inc., с. 185).
    • Выполните следующие действия в вытяжном шкафу и соблюдайте все лабораторные меры безопасности, включая надлежащую защитную одежду.
    • Разбавьте растворы, содержащие EtBr, до концентрации <0,05% мас. / Об. (50 мг / 100 мл).
    • На каждые 100 мл раствора EtBr добавьте 20 мл свежей 5% -ной гипофосфористой кислоты и 12 мл свежего 0,5 М раствора нитрита натрия. Убедитесь, что pH раствора <3,0. Коротко перемешайте.
    • После прохождения реакции в течение не менее 20 часов доведите pH до 5-9 с помощью бикарбоната натрия, затем слейте раствор в раковину лаборатории сильной струей проточной воды.
  • Armor Метод разрушения бромида этидия (Kaufman, James A. ed. 1990. Удаление отходов в академических учреждениях. Lewis Publishers. Стр. 127-8)
    • Выполните следующие действия в вытяжном шкафу и соблюдайте все лабораторные меры безопасности, включая надлежащую защитную одежду.
    • Разбавьте растворы, содержащие EtBr, до концентрации <0,034% мас. / Об. (34 мг / 100 мл).
    • Добавьте 10 мл свежего отбеливателя на каждый 1 мг EtBr.
    • Перемешивать при комнатной температуре не менее 4 часов.
    • EtBr превращается в физиологически неактивный продукт 2-карбоксибензофенон. Затем раствор можно вылить в лабораторную раковину под сильной струей проточной воды.

Утилизация острых предметов, гелей, перчаток, посуды, пакетов для уничтожения и т. Д.

• Твердые отходы, включая загрязненные наконечники пипеток, перчатки, пакеты для удаления пятен и все использованные гели, должны быть помещены в специальный контейнер для отходов из желтого металла в RNS 395.Следуйте инструкциям на контейнере для отходов.
• Иглы, скальпели, пипетки Пастера и другие острые предметы, загрязненные EtBr, следует утилизировать непосредственно в контейнер для острых предметов.
• Мерные пипетки или пипетки для переноса, а также другую одноразовую стеклянную посуду, загрязненную EtBr, следует утилизировать в специально предназначенном для этого стеклянном контейнере. Сильно загрязненная (явно загрязненная) стеклянная посуда должна быть вымыта отбеливателем перед утилизацией в предназначенном для этого контейнере.
• Пробирки и центрифужные пробирки, загрязненные EtBr, следует сначала опорожнить, а жидкость утилизировать в соответствии с процедурами, приведенными выше.Пустые пробирки можно выбросить в мусор. Сильно загрязненные (явно загрязненные) пробирки перед утилизацией следует промыть отбеливателем.
• Большую часть другой одноразовой лабораторной посуды (например, пробирок для образцов, одноразовых стаканов и т. Д.), Загрязненной EtBr, можно утилизировать вместе с обычным мусором. Сильно загрязненную (явно загрязненную) одноразовую лабораторную посуду перед утилизацией следует промыть отбеливателем.

Порядок действий при ликвидации разливов и аварий

В случае попадания в глаза немедленно промойте глаза большим количеством воды в течение не менее 15 минут.В случае попадания на кожу немедленно промыть кожу большим количеством воды с мылом. При вдыхании вывести пострадавшего на свежий воздух. Обратитесь к специалисту по химической гигиене (Пэт Сеас, X-3560; 507-321-0379).

Благодарности

Большая часть приведенной выше информации была изменена из «Проекта протоколов по обращению с бромистым этидием и аналогичными соединениями и их утилизации», подготовленным Университетом Джеймса Кука. Другая информация была получена от:

http://dehs.umn.edu/hazwaste_chemwaste_umn_cwmgbk_sec5.htm # eb

https://ehs.research.uiowa.edu/ethidium-bromide

Бромид этидия | Здоровье и безопасность окружающей среды

ИНФОРМАЦИОННЫЙ ЛИСТ № 23
Март 2004 г.
РЕДАКЦИЯ: ВТОРАЯ

ПРОЦЕДУРА СЕВЕРО-ВОСТОЧНОГО УНИВЕРСИТЕТА ПО ОБРАЩЕНИЮ И УТИЛИЗАЦИИ БРОМИДА ЭТИДИЯ

Общая информация:
Бромид этидия (EtBr) — широко используемый краситель для визуализации нуклеиновых кислот в агарозных гелях. Он широко используется учеными благодаря высокой чувствительности, быстрому окрашиванию и очень недорогой цене.Хотя это специально не регламентируется как опасные отходы, мутагенные свойства могут представлять опасность, если с ними не обращаться должным образом в лаборатории.

Более безопасная альтернатива:
Теперь существует более безопасная, удобная и чувствительная альтернатива EtBr. Посетите веб-сайт Molecular Probes для получения дополнительной информации.

Персональная защита:
При обращении с EtBr всегда надевайте лабораторный халат, нитриловые перчатки и очки для защиты от брызг химикатов. При использовании источника ультрафиолетового (УФ) света при работе с EtBr необходима надлежащая защита кожи и глаз.Избегайте воздействия интенсивных источников УФ-излучения на незащищенную кожу и глаза. Надевайте защитную маску, если источник УФ-излучения направлен вверх. При длительной работе с источником ультрафиолета оберните рукава лабораторного халата лентой или другим средством, где может быть обнажено запястье.

УТИЛИЗАЦИЯ БРОМИДА ЭТИДИЯ:

Гели для электрофореза:
Следы EtBr (менее 0,1%) в гелях для электрофореза не представляют серьезной опасности, поэтому их можно выбросить вместе с мусором, если они правильно упакованы и закреплены.Если гели содержат более 0,1% EtBr, их следует поместить в соответствующий контейнер для утилизации опасных отходов. В компании Environmental Health and Safety (EH&S) имеется множество емкостей для сбора и утилизации гелей.
Водные растворы:
Их можно обеззараживать или дезактивировать, используя следующие методы.

Фильтрация древесным углем:
Фильтрация водных растворов отработанного EtBr (без других загрязняющих веществ) через слой активированного угля является относительно простым и эффективным методом удаления EtBr.Фильтрат можно слить в канализацию. Доступны два набора для угольной фильтрации.

Набор воронок:
Доступны коммерческие комплекты фильтровальных воронок, в которых используется упакованный угольный диск с градуировкой, чтобы легко отслеживать количество водного раствора, которое может быть пропущено через него. Это особенно полезно для лабораторий, которые одновременно создают большое количество решений. Набор (экстрактор ETBR Waste Reduction System) можно приобрести у Sigma-Aldrich или Thomas Scientific.

• Отфильтруйте раствор EtBr через угольный фильтр.
• Слейте фильтрат в канализацию.
• Поместите угольный фильтр в герметичный контейнер (банку для майонеза) и отметьте его как опасные отходы.

Комплект Greenbag:

Еще один простой метод фильтрации с использованием древесного угля — это Green Bag, производимый BIO 101; Комплект Green Bag® позволяет быстро и без проблем концентрировать EtBr из больших объемов растворов в небольшой «чайный» пакетик, содержащий активированный уголь, который затем удобно утилизируется вместе с другими твердыми (загрязненными обломками) опасными отходами.Один набор позволяет удалить 500 мг бромистого этидия из растворов (10 мг EtBr / мешок).

• Поместите зеленый пакет в раствор EtBr.
• Дать посидеть отведенное время.
• Слейте фильтрат в канализацию.
• Утилизируйте зеленый пакет в запечатанном контейнере (банке для майонеза) и пометьте его как опасные отходы.

ХИМИЧЕСКАЯ ДЕАКТИВАЦИЯ:
Растворы, содержащие EtBr, можно деактивировать и сделать безопасными с помощью одного из трех методов.Деактивацию можно подтвердить с помощью УФ-света для обнаружения флуоресценции. Эти три метода заключаются в следующем:

Метод брони:
Это самый простой метод, но он несколько противоречивый. Одно исследование обнаружило следы мутагенных реакционных смесей с использованием этого метода. (Лунн, Г. и Э. Сансон, Аналитическая биохимия, том 162, стр. 453-458, 1987)

• Смешайте равные количества раствора EtBr и бытового отбеливателя.
• Постоянно перемешивать в течение четырех часов или дать настояться 2-3 дня.
• Довести pH до 4-9 с помощью гидроксида натрия.
• Вылейте в канализацию большое количество воды.

Метод Ланна и Сансона: На каждые 100 мл раствора EtBr:

• Добавьте 5% фосфорную кислоту.
• Добавьте 12 мл 0,5 М нитрита натрия.
• Коротко перемешайте и дайте постоять 20 часов.
• Отрегулируйте pH до 4-9 с помощью гидроксида натрия.
• Вылейте в канализацию большое количество воды.

Метод Килларде и Хоффнунга:
В этом методе используется 0,5 М перманганат калия и 2,5 М соляная кислота. Поскольку газообразный хлор может выделяться в значительной концентрации, EH&S не рекомендует использовать этот метод.

Кристаллы и порошки:
Этикетируйте контейнеры, содержащие кристаллы и порошки, как опасные отходы. Когда материал будет готов к вывозу, следует связаться с EH&S.

Загрязненный мусор:
Загрязненный мусор включает перчатки, лабораторную бумагу и другие предметы, не относящиеся к лабораторным.Поместите загрязненный мусор в подходящие контейнеры для утилизации опасных отходов. Все контейнеры, используемые для сбора, должны иметь крышку или крышку, которая может быть закрыта. Необходимо использовать этикетки с опасными отходами и связаться с EH&S, когда материал будет готов к утилизации. Мешки нельзя использовать, если они не сложены вдвое и не закрыты.

Загрязненная лабораторная посуда:
Загрязненная лабораторная посуда включает иглы, пипетки, пробирки и т. Д., Загрязненные EtBr. В зависимости от отходов, которые вы производите, следуйте приведенным ниже процедурам.

Иглы, скальпели, пипетки Пастера и другие острые предметы, загрязненные EtBr, следует утилизировать непосредственно в контейнер для острых предметов. Они будут утилизированы, как и другие острые отходы.

Мерные пипетки или пипетки для переноса, а также другую одноразовую стеклянную посуду, случайно загрязненную EtBr, следует утилизировать в контейнере для острых предметов. Сильно загрязненную (явно загрязненную) стеклянную посуду следует промыть отбеливателем перед тем, как выбросить ее в контейнер для острых предметов.

Пробирки и центрифужные пробирки, загрязненные EtBr, следует сначала опорожнить, а жидкость утилизировать в соответствии с процедурами, указанными выше.Пустые случайно загрязненные пробирки можно выбросить в мусор. Сильно загрязненные (явно загрязненные) пробирки следует собирать вместе с другим лабораторным мусором, маркировать и утилизировать как опасные отходы.

Большую часть другой одноразовой лабораторной посуды (например, флаконов для образцов, одноразовых стаканов и т. Д.), Случайно загрязненных EtBr, можно утилизировать вместе с обычным мусором. Сильно загрязненная (явно загрязненная) одноразовая лабораторная посуда должна быть маркирована и утилизирована как опасные отходы.

Порядок действий при несчастных случаях:
Будьте очень осторожны при использовании EtBr.Позвоните в EH&S по телефону 373-2769, чтобы получить помощь при разливе. Ниже приведены процедуры, которым необходимо следовать в случае контакта:
В случае попадания в глаза промывать глаза водой в течение не менее 15 минут, периодически приподнимая верхние и нижние веки.

При попадании на кожу снимите загрязненную одежду и немедленно промойте кожу водой с мылом.

При вдыхании паров EtBr вывести на свежий воздух.

При проглатывании немедленно обратиться за медицинской помощью.

Удаление разлива:
В случае небольшого разлива слить жидкость, оставшуюся без присмотра.Используйте ультрафиолетовый свет, чтобы определить местонахождение разлива. Затем приготовьте дезактивирующий раствор, смешав 4,2 г нитрита натрия и 20 мл гипофосфористой кислоты (50%) в 300 мл воды. Чтобы обеззаразить место разлива, промойте его бумажным полотенцем, смоченным в дезактивирующем растворе. Промойте место разлива влажными бумажными полотенцами (смоченными дезинфицирующим раствором) еще 5 раз (каждый раз используя свежее бумажное полотенце). После уборки поместите все использованные полотенца в дезинфицирующий раствор на 1 час.Проверяйте полноту дезактивации с помощью ультрафиолета. Если вас устраивает, поместите весь дезактивирующий раствор в бутылку, пометьте ее этикеткой с опасными отходами и позвоните в EH&S для вывоза отходов.

В случае большого разлива известить всех людей в лаборатории. Немедленно покиньте лабораторию. Позвоните в EH&S для помощи в уборке. Разместите предупреждающие знаки на дверях всех лабораторий, чтобы предупредить других о разливе. Не допускайте ненужного проникновения в комнату до прибытия персонала EH&S.Объясните все детали персоналу EH&S. Загрязненное оборудование:
Лабораторное оборудование (например, трансиллюминаторы, лабораторные полы и столешницы и т. Д.), Загрязненное водными растворами EtBr с концентрацией более 10 мг / л (0,01%), следует обеззараживать с использованием процедур очистки от разливов, перечисленных выше.

Минимизация отходов:
Конгресс США сделал минимизацию отходов национальной политикой и целью каждого производителя отходов. Вы, как производитель EtBr, несете ответственность за минимизацию отходов, которые вы производите.Сведение к минимуму отходов имеет такие преимущества, как уменьшение воздействия опасных веществ, защита окружающей среды и снижение стоимости утилизации, которая может во много раз превышать первоначальную стоимость материала. Всегда следует учитывать минимизацию отходов EtBr. Ниже приведены предложения по минимизации отходов.

Замена менее или неопасных материалов опасными.

Использование разбавленных, а не концентрированных растворов.

Использование микро- или полумикро-техники.

Использование компьютерного моделирования / симуляции, фильмов, видеозаписей или демонстраций вместо проведения индивидуальных экспериментов.

Используйте имеющиеся в продаже фильтрующие пылесосы или экстракторы EtBr для удаления EtBr из буферов и других разбавленных водных растворов.

Если у вас есть какие-либо вопросы или вам нужна помощь в минимизации отходов, обращайтесь в Управление охраны окружающей среды, здоровья и безопасности по телефону x2769.

Электрофорез РНК в агарозном геле | Thermo Fisher Scientific

Связанная информация о продукте

Общее качество препарата РНК можно оценить с помощью электрофореза на денатурирующем агарозном геле; это также даст некоторую информацию о выходе РНК.Предлагается денатурирующая гелевая система, потому что большая часть РНК образует обширную вторичную структуру за счет внутримолекулярного спаривания оснований, и это предотвращает ее миграцию строго в соответствии с ее размером. Не забудьте добавить РНК положительного контроля в гель, чтобы необычные результаты можно было отнести к проблеме с гелем или к проблеме с анализируемой РНК. Для этой цели можно использовать маркеры молекулярной массы РНК, образец РНК, который, как известно, не поврежден, или и то, и другое.

Реагенты Ambion NorthernMax® для нозерн-блоттинга включают все необходимое для денатурирующего электрофореза в агарозном геле.Эти продукты оптимизированы для простоты использования, безопасности и низкого уровня фона, и они включают подробные инструкции по применению.

Альтернативой использованию реагентов NorthernMax является использование процедуры, описанной ниже. Этот метод денатурирующего агарозного геля для РНК-электрофореза модифицирован из «Current Protocols in Molecular Biology», раздел 4.9 (Ausubel et al., Eds.). Это требует больше времени, чем метод NorthernMax, но дает аналогичные результаты.

Все растворы для загрузки геля Ambion проходят тщательную проверку на неспецифическую эндонуклеазную активность, экзонуклеазную активность, активность РНКаз и функциональность.Это те же решения, которые мы используем внутри компании и в наших наборах.

Буфер для загрузки геля II — Денатурирующая страница

1-2X раствор 95% формамида, 18 мМ EDTA и 0,025% SDS, ксилолцианола и бромфенолового синего.

Раствор для загрузки геля — Универсальная нативная агароза

10-кратный раствор 40% сахарозы, 0,17% ксилолцианола и 0,17% бромфенолового синего.


NorthernMax Formaldehyde Load Dye
Этот готовый к использованию раствор добавляют к образцу РНК (3 части раствора: 1 часть образца) и быстро нагревают.После этого образцы готовы к загрузке. При желании к образцам можно добавить бромид этидия.


Краска для загрузки образцов NorthernMax-Gly
Улучшенный состав, используемый для денатурации образцов РНК в любом протоколе глиоксального геля. Объемное отношение раствора к образцу ниже, чем в опубликованных протоколах, поэтому осаждение образца перед загрузкой геля обычно не требуется. Бромид этидия предварительно примешивают к раствору.

AM8546G, AM8547, AM8556, AM8552, AM8551

1. Приготовьте гель.
   
   • Нагрейте 1 г агарозы в 72 мл воды до растворения, затем охладите до 60 ° C.
   • Добавьте 10 мл рабочего буфера 10X MOPS и 18 мл 37% формальдегида (12,3 M).

   ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ: Формальдегид токсичен при контакте с кожей и при вдыхании паров. Манипуляции с формальдегидом следует проводить в химическом вытяжном шкафу.

   Рабочий буфер 10X MOPS:

   0,4 ​​M MOPS, pH 7,0
   0,1 M ацетат натрия
   0,01 M EDTA

   • Вылейте гель с помощью гребешка, чтобы сформировать лунки, достаточно большие, чтобы вместить не менее 25 мкл.
   • Соберите гель в резервуар и добавьте рабочий буфер 1X MOPS, чтобы покрыть гель на несколько миллиметров. Затем снимите гребешок.
2. Подготовьте образец РНК.

   а. К 1-3 мкг РНК добавьте 0,5-3X объемов красителя формальдегида.

   • Чтобы просто проверить РНК на денатурирующем геле, можно использовать краситель с 0,5-кратной загрузкой формальдегида, но для полной денатурации РНК, например для нозерн-блотов используйте 3-кратные объемы красителя для загрузки формальдегида.
   • Бромид этидия может быть добавлен к красителю с формальдегидом до конечной концентрации 10 мкг / мл. Для визуализации некоторых маркеров размера может потребоваться значительно более 10 мкг / мл бромистого этидия. Однако для точного определения размера вашей РНК важно использовать одинаковое количество бромистого этидия во всех образцах (включая маркер размера), поскольку концентрация бромида этидия влияет на миграцию РНК в агарозных гелях.

   б. Нагревают денатурирующие образцы при 65-70 ° С в течение 5-15 мин.

   • Денатурации в течение 5 минут обычно достаточно для простой оценки РНК на геле, но рекомендуется 15-минутная денатурация при запуске РНК для Нозерн-блоттинга. Для полной денатурации РНК может потребоваться более длительная инкубация.
3. Электрофорез

   Загрузите гель и проведите электрофорез при 5-6 В / см до тех пор, пока бромфеноловый синий (более быстро мигрирующий краситель) не переместится в гель минимум на 2-3 см или на 2 / 3 длины геля.

4. Результаты

   Визуализируйте гель на УФ-трансиллюминаторе.(Если бромид этидия не был добавлен к красителю для формальдегидной нагрузки, гель необходимо будет подвергнуть последующему окрашиванию и обесцвечиванию.)

   Анализ интактной общей РНК на денатурирующем геле будет иметь четкие полосы 28S и 18S рРНК (эукариотические образцы). Полоса 28S рРНК должна быть примерно в два раза интенсивнее, чем полоса 18S рРНК (рис. 1, дорожка 3). Это соотношение 2: 1 (28S: 18S) является хорошим показателем того, что РНК не повреждена. Частично деградированная РНК будет иметь размытый вид, не будет иметь острых полос рРНК или не будет иметь соотношение 2: 1.Полностью разложившаяся РНК будет выглядеть как мазок с очень низким молекулярным весом (рис. 1, дорожка 2). Включение маркеров размера РНК на гель позволит определить размер любых полос или мазков, а также послужит хорошим контролем для обеспечения правильного растекания геля (рис. 1, дорожка 1). Примечание. Образцы, выбранные Poly (A), не будут содержать сильных полос рРНК и будут выглядеть как мазок размером примерно от 6 т.п.н. до 0,5 т.п.н. (в результате популяции мРНК и в зависимости от времени воздействия и условий) с площадью между 1.5 и 2 т.п.н. являются наиболее интенсивными (этот мазок иногда виден и в образцах тотальной РНК).

Как правило, не менее 200 нг РНК должны быть загружены в денатурирующий агарозный гель для визуализации с помощью бромистого этидия.Некоторые препараты РНК, например, полученные из игольчатой ​​биопсии или микродиссектированных образцов с лазерным захватом, дают очень низкие урожаи. В этих случаях может оказаться невозможным выделить 200 нг РНК для оценки целостности. Альтернативные окрашивания нуклеиновых кислот, такие как окрашивание гелем РНК SYBR® Gold и SYBR® Green II от компании Molecular Probes, обеспечивают значительное повышение чувствительности по сравнению с бромидом этидия. Используя трансиллюминатор 300 нм (6 ламп по 15 Вт) и специальный фильтр, с помощью красителей РНК SYBR Gold и SYBR Green II можно обнаружить всего лишь 1 нг и 2 нг РНК соответственно.

Электрофорез РНК в нативном агарозном геле

Электрофореза в нативном агарозном геле может быть достаточно, чтобы судить о целостности и общем качестве препарата тотальной РНК путем проверки полос 28S и 18S рРНК. Вторичная структура РНК изменяет характер миграции в нативных гелях, так что она не будет мигрировать в соответствии со своим истинным размером. Полосы обычно не такие острые, как в денатурирующих гелях, и один вид РНК может мигрировать в виде множества полос, представляющих разные структуры.

• Обычно мы загружаем образцы 1 мкг и 2,5 мкг на 1% агарозный гель в TBE (89 мМ трис-HCl pH 7,8, 89 мМ борат, 2 мМ EDTA) с добавлением к гелю 0,5 мкг / мл бромистого этидия.
• Добавьте 10X нативный буфер для загрузки геля агарозы (15% фиколла, 0,25% ксилолцианола, 0,25% бромфенолового синего) к образцам РНК до конечной концентрации 1X.
• В нативные гели образцы можно загружать напрямую, без нагревания.
• Аликвоту интактной РНК всегда следует использовать в качестве положительного контроля, чтобы исключить необычные результаты из-за гелевых артефактов.
• Запустите гель при 5-6 В / см, измеренной между электродами.

TOP

LT026

Электрофоретическая подвижность изотопов хлорид- и бромид-ионов в водном растворе при 25 ° C и бесконечном разбавлении