Электрофорез как правильно делать: Инструкция процедур электрофореза с карипаином

Методика электрофореза карипаин сухой бальзам – Карипаин

Подготовка электродов

Смочить многоразовые фланелевые прокладки теплой водой 37-39 °C и отжать. Фланелевые прокладки с токопроводящей углеродной тканью следует использовать совместно с резиновыми токопроводящими электродами, которыми оснащены все современные физиотерапевтические аппараты гальванизации и электрофореза. Для старых аппаратов с свинцовыми электродами необходимо использовать гидрофильные прокладки без токораспределительного слоя углеродной ткани.

Подготовка раствора

Ввести шприцом во флакон «Карипаин сухой бальзам» 10 мл. физраствора. Физраствор желательно предварительно подогреть до температуры 36-37°C.

Нанесение раствора на положительный электрод

Открыть колпачок флакона «Карипаин сухой бальзам» и добавить в него пипеткой две капели «Димексид» или шприцом 0,5 мл. После чего вылить подготовленную субстанцию на одну из фланелевых прокладок. В случает отсутствия в наличии «Димексид» – можно исключить его из процедуры.

Нанесение «Эуфиллин 2,4%» на отрицательные электроды

На другие прокладки нанести шприцом 10 мл. «Эуфиллин 2,4%». В случае отсутствия «Эуфиллин», вместо него допускается использование 10 мл. физраствора.

Подготовка к процедуре электрофореза

Вставить резиновые электроды в технический разрез прокладок соблюдая полярность. Два резиновых электрода с красным проводом в одну прокладку с растровом «Карипаин сухой бальзам», и по одному резиновому электроду с синим проводом в прокладки с растровом «Эуфиллин».

Установка времени и силы тока

Установить таймер процедуры на 15-20 минут и регулятором тока выставить значение в диапазоне от 0,5 мА до 15 мА. в зависимости от ощущений пациента. Повышать ток необходимо плавно, опираясь исключительно на ощущения пациента (повышать ток до легкого покалывания). Прокладки должны плотно прилегать к телу пациента, это поможет исключить точечный контакт, в области которого могут появиться микроожоги.

Курсовое лечение

Процедуры лекарственного электрофореза необходимо делать ежедневно и систематически. Количество курсов зависит от степени тяжести заболевания (чаще всего 2-3 курса). Количество процедур лекарственного электрофореза в одном курсе лечения зависит от локализации заболевания. Заболевания позвоночника (протрузия, межпозвоночная грыжа) – курс 30 процедур. Заболевания суставов (артроз, артрит) – курс 10 процедур.

Общие рекомендации

Процедуры выполняются ежедневно, без пропуска. Процедуры электрофореза желательно проводить вечером за 1-2 часа до сна. После процедуры электрофореза необходимо протереть кожу водно-спиртовым раствором или влажной гигиенической салфеткой. Нанести массирующим движением 2-3 г. «Карипаин ультра гель» на зону, где располагалась прокладка с «Карипаин сухой бальзам», после чего отдохнуть 10-15 минут в расслабленном состоянии в тепле. Утром необходимо также нанести 2-3 г. «Карипаин ультра гель». На случай пропуска процедур электрофореза, необходимо продолжать лечение «Карипаин ультра гель». 2 раза в день. (утром и вечером).

Схемы расположения электродов

Электрофорез с карипазимом | Нейрон Клиник в Щелково

На основе изученных данных литературы и собственного опыта работы, в нашей клинике в дополнение к методике доктора Мубина добавили высокоэффективный метод, которая называется ЭЛЕКТРОФОРЕЗ С КАРИПАЗИМОМ.

Эту методику можно пройти курсами отдельно, но в сочетании с легкой мануальной терапией, иглорефлексотерапией, вытяжение+вибромассаж и при необходимости нестероидными противовоспалительными средствами или лечебными блокадами эффективность методики возрастает в несколько раз.

Назначение электрофореза с карипазимом отдельно или в комплексе с другими методами решает квалифицированный специалист который прошел курс обучения и знаком с методикой лечения данным препаратом на практике.

Предусматривается назначение 2-3 курса лечение, 20-30 процедур в каждом курсе, с перерывом между курсами 1-3 месяца. При введении раствора карипазима грыжа начинает размягчаться, освобождая защемленное нервное окончание. Лекарство благотворна влияет и на весь позвоночный диск в целом- он становится менее хрупким.

Учитывается эффективность после первого курса и клиническое состояние пациента. В зависимости от этого предусматривается сроки очередного этапа лечение.

Карипазим – это уникальный лекарственный препарат растительного происхождения, предназначенный для лечения неврологического проявление остеохондроза и межпозвоночной грыжи.

Карипазим, в качестве лекарства от остеохондроза и межпозвоночной грыжи был впервые предложен доктором медицинских наук, профессором, заведующим отделением Нейрореабилитации НИИ Нейрохирургии им. Н.Н. Бурденко В.Л.Найдиным и им же разработана технология применения препарата.

Обращаем Ваше внимание, что препарат Карипазим 350ПЕ является зарегистрированным лекарственным средством, сертифицирован на территории РФ и производится в соответствии с международными стандартами (GMP).

Основное активное вещество средства представляет собой фермент, добываемый из млечного сока папайи – папаин. Помимо него в состав Карипазима входят другие ферменты – пептидазы папайи А и Б, лизоцим папайи, химопапаины А и Б, ряд аминокислот и углеводов, а также соли натрия, кальция, магния и калия. Фармакологическое действие Карипазим обладает выборочной протеолитической активностью.

Это означает, что при применении Карипазима затрагиваются только некротизированные участки, однако при этом ферменты лекарственного средства не воздействуют на здоровые ткани. Проникая в ткани, препарат создает в области пораженных межпозвоночных дисков депо, оказывая воздействие на соединительную ткань, а также на ткань межпозвоночных дисков и ткань грыжевого выпячивания. Применение Карипазима обеспечивает умеренное рубцевание оболочки диска и его восстановление, а также способствует повышению эластичности диска. Помимо этого, препарат обладает выраженным противовоспалительным и противоотечным действием, стимулирует процессы фагоцитоза, кровообращения и регенерации тканей, а также подавляет активность фермента гиалуронидазы. Карипазим при наружном применении не всасывается в кровь и не оказывает системного влияния на организм.

При электрофорезе с Карипазимом обеспечивается накопительный терапевтический эффект, так как препарат обладает свойством селективно накапливаться в пораженных участках межпозвоночных дисков.

Почему электрофорез с карипазиомом:

• до 80% помогает избежать операцию
• лечит первопричину
• легкое и безболезненное
• в любом возрасте

Показания к применению:

• Межпозвонковые грыжи
• Невриты, невралгии
• Церебральный и спинальный арахноидит
• Остехондрозы

Лечение Карипазимом осуществляется только через проведение тока (не внутривенно или внутримышечно).

В медицинском центре «НЕЙРОН КЛИНИК» Вы можете пройти курс электрофореза с карипазимом.

Электрофорез с карипаином

Электрофорез как метод физиотерапии заключается в переносе ионов раствора лекарственного средства с помощью слабого электрического тока. Ионы равномерно покрывают поверхность кожи и глубоко проникают в ткани. Метод хорош тем, что это представляет собой местное воздействие (кровь, лимфа, другие органы не контактируют с препаратом), которое позволяет равномерно и глубоко ввести в ткани эффективные дозы действующего вещества в форме ионов. Кроме того, на организм также положительно влияют слабые электрические токи, используемые при электрофорезе.

Что такое Карипаин

Карипаин (или карипазин) – лекарственное средство растительного происхождения, основное действующее вещество которого – папаин – добывается из сока дынного дерева, или папайи. Основным показанием для применения Карипаина являются ожоги III степени. Папаин хорошо справляется с очищением гранулирующих ран, ускоряет отторжение струпов.

Также последнее время в физиотерапии стали использовать электрофорез с Карипаином при лечении остеохондроза, артритов и других заболеваний опорно-двигательного аппарата. Лечебное действие основано на умеренных противовоспалительных и обезболивающих свойствах папаина. А слабый постоянный ток ускоряет регенерацию тканей. Однако следует помнить, что масштабных клинических испытаний для выявления эффективности электрофореза с Карипаином при лечении ортопедических и неврологических заболеваний не проводилось.

Карипаин: применение

Как применяется карипаин для электрофореза в клинике? Сначала порошок растворяют, в качестве растворителя обычно используют физраствор. Дозировку и концентрацию препарата, а также продолжительность, кратность и частоту процедур определяет лечащий врач. Ионы действующего вещества, образовавшиеся в растворе, заряжены положительно. Поэтому карипаин вводится с анода – положительного электрода. В раствор нужно добавить 2-3 капли димексида.

Способ наложения электродов при электрофорезе с карипаином может быть как продольным, так и поперечным. При продольном расположении электроды располагаются вдоль тела: например, на шейный и поясничный отдел спины. При поперечном расположении электроды ставятся друг напротив друга, например, на поясничном отделе спины и животе пациента.

Сеанс электрофореза обычно продолжается около 20 минут. Курс лечения, как правило, состоит из 20-30 ежедневных процедур (допускается перерыв 1-2 дня. После курса необходимо сделать перерыв, как минимум, на месяц. Усиливает эффект электрофореза применение на пораженной области геля и крема с карипаином.

Противопоказания к электрофорезу с карипаином

Карипаин – местный препарат растительного происхождения, поэтому список противопоказаний к нему небольшой. В него входят:

• аллергические реакции на препарат или его компоненты;
• период беременности и кормления грудью;
• острое воспаление ткани сустава;
• разрушение межпозвоночных дисков.

Наши клиники в Санкт-Петербурге

Медицентр Юго-Запад

Пр.Маршала Жукова 28к2
Кировский район

• Автово
• Проспект Ветеранов
• Ленинский проспект

Получить подробную информацию и записаться на прием Вы можете по телефону
+7 (812) 640-55-25

Лидаза инструкция по применению: показания, противопоказания, побочное действие – описание Lydase лиофилизат д/пригот.

р-ра д/инъекц. и местн. прим. 64 УЕ: фл. 5 или 10 шт. (4383)

При рубцовых поражениях п/к (под рубцово-измененные ткани) или в/м (вблизи места поражения) вводят по 64 УЕ (1 мл) ежедневно или через день (всего 10-20 инъекций).

При травматических поражениях нервных сплетений и периферических нервов вводят п/к в область пораженного нерва (64 УЕ в растворе прокаина) через день; на курс — 12-15 инъекций. Курс лечения при необходимости повторяют.

При использовании в офтальмологической практике содержимое флакона растворяют в 20 мл воды для инъекций (0.1% раствор). Препарат вводят субконъюнктивально — 0.3 мл, парабульбарно — 0.5 мл, а также методом электрофореза.

Пациентам с туберкулезом легких с продуктивным характером воспаления назначают в комплексной терапии для повышения концентрации антибактериальных лекарственных средств в очагах поражения в виде инъекций и/или ингаляций. Ингаляции проводят ежедневно 1 раз/сут. Для проведения одной ингаляции содержимое флакона (64 УЕ) растворяют в 5 мл 0. 9% раствора натрия хлорида. Курс лечения состоит из 20-25 ингаляций. При необходимости проводят повторные курсы с промежутками 1.5-2 мес.

Наружно, в виде повязок, пропитанных раствором препарата. Для приготовления раствора каждые 64 УЕ растворяют в 10 мл стерильного 0.9% раствора натрия хлорида или кипяченой воды комнатной температуры. Этим раствором смачивают стерильную повязку, сложенную в 4-5 слоев, накладывают ее на пораженный участок, покрывают вощеной бумагой и фиксируют мягкой повязкой. Повязку накладывают ежедневно на 15-18 ч в течение 15-60 дней. При длительном применении через каждые 2 недели делают перерыв на 3-4 дня.

При применении методом электрофореза 1 флакон препарата (64 УЕ) растворяют в 60 мл дистиллированной воды, добавляют 2-3 капли 0.1% раствора хлористоводородной кислоты и вводят с анода на пораженный участок в течение 20-30 мин. Курс лечения — 15-20 сеансов.

Аппликационный режим дозирования можно чередовать с электрофорезом.

Приготовленный раствор должен быть использован в течение 24 ч.

Только спокойствие

Физиотерапевтическое отделение поликлиники для взрослых на Талнахской разительно отличается от других отделений: мягкие кресла, цветы, волнистые попугайчики — всё это успокаивает и настраивает на положительный лад. Приветливый и внимательный персонал вселяет уверенность в скорейшем выздоровлении. Портят же настроение и вызывают раздражение просьбы медсестёр отключить сотовый телефон, снять металлические украшения, соблюдать режим выполнения процедур и так далее. Сразу приходит на ум: правила созданы для того, чтобы их нарушать… Однако эти правила — не прихоть медработников, а необходимость, обусловленная спецификой лечения. Попробуем это доказать.

Правило первое. Не принимайте физиопроцедуры в день рентгенологического обследования.

При совмещении физиопроцедур и рентгена слишком велика лучевая нагрузка на организм, особенно на кровеносную систему. В день рентгена безопасны лишь ингаляции.

Правило второе. Сначала физиопроцедуры, а потом — уколы.

Аппараты воздействуют на организм в целом, расширяя сосуды, снижая давление и усиливая кровообращение. Если до этого сделать инъекции, обладающие тем же действием, во время приёма физиопроцедур самочувствие может ухудшиться. Также после некоторых уколов может бросить в жар, начнётся усиленное потоотделение, что ухудшит эффект от физиотерапии.

Правило третье. Отключайте мобильные телефоны.

Во–первых, если телефон не отключить, электрические токи, поля и электромагнитные излучения, применяемые в физиотерапии, могут вывести его из строя. (Кстати, в некоторых паспортах к сотовым есть рекомендация не использовать телефон в отделениях физиотерапии). Во–вторых, телефон даёт электромагнитные излучения радиодиапазона — такое же, как и аппараты. Таким образом, мы получим двойную энергию, которая в таком случае становится вредной. При разговоре по телефону рядом с физиоаппаратами идёт большая нагрузка на головной мозг.

Правило четвёртое. Снимите украшения и металлические предметы.

Это нужно сделать, чтобы не получить электрический ожог и электрический удар. К тому же из–за металлических предметов изменяется контур электрического поля аппарата, что снизит эффективность процедуры.

Правило пятое. Перед физиопроцедурами следует поесть.

Реакция «голодного» организма на воздействие любого аппарата непредсказуема: может резко снизиться давление, начаться головокружение и потемнеть в глазах. Потеря сознания в физиокабинете может случиться именно по этой причине. Но и сразу после приёма пищи не стоит идти лечиться. Лучшее время для процедур — минут через 40 после завтрака или часа через полтора–два после обеда.

Правило шестое. Настройтесь на процедуру.

Перед процедурой обязательно посидите в отделении минут 15–20. Отдохните. Кресла, цветы и попугаи в холле предназначены для успокоения и хорошего настроения. Когда человек спешит с работы либо приходит взвинченный после долгого ожидания у кабинета лечащего врача, его нервная система находится в стадии возбуждения. Во время процедуры наступает успокоение, и тогда токи начинают действовать на организм по–другому: восприятие усиливается, порог чувствительности повышается — эффект от физиотерапии будет другим. Поэтому перед процедурой старайтесь успокоиться, чтобы принимать её в стабильном состоянии.

Правило седьмое. Не выходите на улицу сразу после процедур.

И опять же — отдыхайте. После лечения посидите в кресле, расслабьтесь. Если процедура тепловая (парафинозокерит, ванна) — то 40 минут, если другая — то минут 15–20. Это нужно для того, чтобы нагретый организм остыл до своей обычной температуры. Эффект после процедуры (усиление кровообращения, выброс гормонов, снижение давления) сохраняется в течение двух часов — имейте это в виду и воздержитесь от физических нагрузок или прочей активности.

Правило восьмое. Соблюдайте режим приёма физиопроцедур.

Проводить процедуры ежедневно или через день — зависит от того, как вы переносите нагрузку. Но надо делать это в одно и то же время, что очень важно. После первого сеанса в центральной нервной системе возникает очаг ожидания процедуры. И на следующий день организм ждёт в течение трёх часов: за полчаса до того, как мы сделали процедуру, и спустя 1,5 часа после. Например, в первый день процедура была в 12.00. С 10.30 до 13.30 следующего дня организм ждёт приёма процедуры. Затем реакция ожидания начинает угасать. На второй день после лечения она ещё есть. Но уже слабая. А на третий день полностью исчезает.

В субботу и воскресенье, когда физиотерапевтическое отделение не работает, приходится делать перерыв. Но это нестрашно — минимальный курс пять дней, и два дня выходных допустимы.

Бывает так: назначили больному семь процедур, например ДДТ. Задача — снять острую боль и дальше применять другие методы лечения. Пациент курс физиотерапии до конца не прошёл, а через три недели вспомнил об этом и решил всё–таки его завершить. Смысла в этом уже нет. Если болит, то нужно опять проходить курс.

Правило девятое. При назначении физиопроцедур сообщите о всех своих диагнозах.

Физиотерапевт должен знать о ваших заболеваниях, чтобы выбрать наиболее эффективный и безопасный для вас метод лечения. Например, если у вас онкозаболевание или вы входите в группу риска по онкологии, то применение некоторых аппаратов в таком случае противопоказано, потому что рост онкоклеток может усилиться.

Также с осторожностью нужно принимать физиопроцедуры ВИЧ–инфицированным. От воздействия некоторых аппаратов может снизиться иммунитет. В таком случае подбираются менее мощные факторы, так как восприятие у ВИЧ–положительных изменено, и во время и после процедуры им может стать плохо. В основном такие больные скрывают свой статус, боясь, что к ним будут предвзято относиться. Это чревато неправильно подобранным лечением. Знать о заболевании врачу–физиотерапевту необходимо в первую очередь для вашей же безопасности. Так что даже при лечении, например, насморка врач должен учесть все ваши диагнозы.

Мнение Натальи Скачковой о фитобочках, которых в физиотерапевтических отделениях Норильска нет, но во многих салонах красоты они установлены и активно рекламируются:

– Фитобочка — это полезно. Рекомендую использовать её курсами, не больше 10 сеансов. Посещать стоит через день или два раза в неделю. Но только когда нет обострения заболеваний. В поликлиниках фитобочек нет потому, что мы не имеем финансовых возможностей для их приобретения. Для них необходимо специальное помещение, а также кабинет для медсестры, душ, который требуется по окончании процедуры. А мы в кабинетах стеснены.

Кроме аппаратных методов лечения, есть ещё и водолечение. Во втором центре (Солнечный проезд, 7а) есть жемчужные, скипидарные ванны, гидромассаж, подводный душ-массаж и душевая установка. В поликлинике на Котульского вам также сделают подводный массаж душем. К сожалению, ванны больными в полном объёме не востребованы, хотя они очень полезны для здоровья. Когда пациентам, которые лечатся в поликлинике, например на Талнахской, назначают процедуры, которые предлагаются в других центрах, они отказывается, ссылаясь на то, что «далеко ходить». Хотя наш город настолько мал, что такие отговорки звучат более чем странно. Некоторые отказываются из–за страха простудиться. Но зимой в отделении тепло: пролечился, посидел–отдохнул и пошёл домой. Поверьте, это того стоит.

Врач–физиотерапевт Наталья Михайловна Скачкова, МУЗ «Городская поликлиника №1», центр №1, Талнахская, 72, кабинет № 210. Часы приёма: понедельник, среда, пятница — с 8 до 13; вторник, четверг — с 16 до 19, тел. 34–63–83.

Назначает процедуры лечащий врач или физиотерапевт. Если лечащий врач физиотерапию не назначил, но вы считаете, что она вам нужна или не согласны с назначением врача, приходите на консультацию к физиотерапевту, взяв в регистратуре амбулаторную карту. Приём у врача физиотерапевтического отделения без записи и без направлений.

Имея хроническое заболевание, обращайтесь к врачу–физиотерапевту, не дожидаясь обострения. Для предупреждения острого состояния следует приходить на процедуры раз в полгода. Чтобы получать физиопроцедуры, необязательно находиться на больничном. Отделение работает с 8.00 до 19.00 — любой может выкроить удобное время и подлечиться. Процедуры в основном отпускаются по талонам, в талоне указано время, к которому следует подойти. УФО и УВЧ отпускаются в порядке живой очереди, но больше 10 минут сидеть не придётся.

Надежда САВЕЛЬЕВА

Фото Владимира МАКУШКИНА

Лечение остеохондроза

1. Главная
2. Медицинская деятельность
3. Лечение остеохондроза

Физиотерапия при остеохондрозе в зависимости от состояния больного применяется как в комплексе с медикаментозной терапией, так и самостоятельно. При остеохондрозе применяют следующие виды физиотерапии: Лазеротерапия, Детензор – терапия, Электротерапия, Ударно-волновая терапия, Магнитотерапия, Грязелечение и Бальнеотерапия, Ультразвуковая терапия, Ультрафиолетовое облучение (УФО). После успешного снятия обострения показаны массаж и лечебная физкультура.

УФО: под воздействием УФО в коже образуется витамин D, который помогает усваиваться кальцию. Метод проводится с помощью облучателей, которые обладают бактерицидным, противовоспалительным и болеутоляющим действием.

Ультразвуковая терапия и ультрафонофорез:при ультразвуковой терапии на организм осуществляется воздействие высокочастотными звуками (от 20 кГц и более). Благодаря своему воздействию метод снимает боли различной локализации. Этот метод сочетают с введением противовоспалительных и обезболивающих лекарственных средств (ультрафонофорез) для лучшего их проникновения в пораженные ткани.

Ударно-волновая терапия: метод заключается в передаче акустической волны на болезненный участок тела. Этот вид: устраняет боль, улучшает микроциркуляцию, улучшает обмен веществ.

Детензор-терапия: метод заключается в вытяжении позвоночника при помощи массы тела больного.

Лазеротерапия: метод оказывает оздоровляющий эффект при помощи гелий-неоновых лазеров. Благодаря активизации биоэлектрических процессов в тканях нервной системы, лазеротерапия обладает противовоспалительными и обезболивающими свойствами. Излучение лазером проводится по ходу воспаленных спиномозговых корешков. При остеохондрозе применяют воздействие на околопозвоночные зоны пораженного отдела позвоночника.

Электротерапия: Электротерапия оказывает на организм многогранное воздействие: устраняет боль и дискомфортные ощущения, улучшает питание и трофику поражённых тканей. Очень эффективным лечебным действием обладают импульсные токи. Их механизм воздействия на организм определяется влиянием на нервные рецепторы. Низкочастотные импульсы способствуют угасанию острой боли и назначаются как средство первой помощи при выраженном болевом синдроме. Используются следующие виды токов: диадинамотерапия (ДДТ), амплипульстерапия (СМТ), интерференцтерапия, чрезкожная электрическая нейростимуляция (ЧЭНС), электрическое поле УВЧ.

Магнитотерапия: Физиолечение при остеохондрозе включает в себя применение магнитотерапии, которая оказывает противоотёчное, противовоспалительное, спазмолитическое действие. Индукторы располагаются на пораженный отдел позвоночника и конечности.

Бальнеотерапия и Грязелечение: бальнеотерапия при остеохондрозе заключается в использовании минеральных вод (местные и общие ванны, бассейны, души) с целью лечения и реабилитации. Минеральные вещества во время процедуры проникают через кожу и действуют на рецепторы и нервные центры.

При лечении грязями воздействие на организм происходит под влиянием температуры и химического состава целебной грязи. Грязи применяют в виде аппликаций. Бальнеотерапия стимулирует обмен веществ, улучшает кровообращение и снимает воспаление и боль. Комбинированные методы физиотерапии: наиболее часто назначают комбинированные методы физиотерапии остеохондроза. Например, при сильных болях используют диадинамотерапию и электрофорез (диадинамофорез) с применением новокаина. Для одномоментного воздействия на биологические активные точки применяют метод иглорефлексо-лазеропунктуры. Действие его заключается в активации точек акупунктурными иглами и лазерным излучением. Грязелечение часто используют с электротерапией (электрофорез с грязевым раствором, индуктотермия с грязью, гальваногрязелечение).

Лечение суставов

Все заболевания суставов можно разделить на две основные группы – это поражения суставов, которые возникают из-за нарушений обменных процессов, и воспаления суставов. Разумеется, в каждом случае лечение суставов проходит по своей особой программе.

Лечение суставов, будь то артрит, артроз, ревматизм или другой недуг, обязательно должно быть комплексным, а главная задача, на решение которой направлено лечение – это устранение причины заболевания, и, следовательно, болезненных симптомов. Лечение современными методиками направлено на устранение или максимальное уменьшение боли, признаков локального или общего воспаления, восстановление пораженных суставов. Комплексное лечение обычно начинается с лекарственной терапии. Пациенту назначают обезболивающие и противовоспалительные средства, препараты, способствующие восстановлению суставного хряща, укреплению иммунной системы. Лечение суставов на этом этапе позволяет снять болевые симптомы. Нередко оно включает внутрисуставное введение лекарств, чтобы лечебное вещество в нужной концентрации попало непосредственно в полость больного сустава. Благодаря этому повышается эффективность медикаментозного лечения. Далее, когда основные симптомы острой стадии благополучно устранены, лечение продолжается с помощью комплекса физиотерапевтических процедур, упражнений лечебной физкультуры, массажа. В частности, лечение суставов физиотерапевтическими методами сегодня нашло очень широкое применение. Так, в ЕМНЦ применяют импульсные токи (ДДТ, СМТ), магнитотерапию, КВЧ-терапию, лазеротерапию, электрофорез с лекарственными веществами, ультразвук и ультрафонофорез. При стихании обострения подключаются бальнеотерапия (различные виды ванн) и грязелечение. Назначается лечебная физкультура и массаж.

Лечение боли в спине

Причин у этих болей множество. В первую очередь мучительная боль может появиться по причине грыжи (выпячивания) межпозвонкового диска, остеохондроза, патологии нервной системы. Чаще всего боли в спине появляются у тех людей, которые длительно находятся в одном и том же положении.

И все же самая частая причина — недостаток двигательной активности! Это уменьшает кровоток в связках, суставах и межпозвонковых дисках, из-за чего образующие их хрящи начинают разрушаться. Именно ослабление связочного аппарата и является причиной всех заболеваний позвоночника. При появлении боли нужно сразу же обращаться к врачу, который определит ее причину, поставит правильный диагноз и назначит лечение. Для того чтобы снизить риск появления болей в спине, надо больше двигаться, следить за весом и делать хотя бы минимальную гимнастику (достаточно 15 минут в день). Правильное питание также очень важно — ведь это один из ключей к хорошему здоровью и долголетию, а позвоночнику нужны белки для поддержания гибкости и кальций — для прочности. Кальций в больших количествах содержится в твердом сыре, печени, орехах, твороге, яйцах, а белок — в мясе и молочных продуктах. Кости и связки позвоночника нуждаются и в микроэлементах: фосфоре (его много в отрубях, горохе, рыбе), магнии и марганце (они содержатся в морской рыбе, луке, картошке), а также в жирных кислотах — их источником являются грецкие орехи, жирная морская рыба и оливковое масло.

При обострении болей в спине лечение начинается с лекарственных средств — обычно это обезболивающие препараты, мочегонные и лекарства, которые снимают судорожные спазмы мышц. Однако лекарств без побочных действий не бывает, они применяются только ограниченное время, и самое главное — не устраняют причину болей в спине и не предупреждают рецидив заболевания. В остром периоде применяют также такие методы лечения, как вытяжение, а также ношение воротников и корсетов, что позволяет разгрузить больной отдел позвоночника.

Помимо средств неотложной помощи — лекарственных препаратов, снимающих мышечные спазмы и боли, важнейшим средством лечения остеохондроза являются физиотерапия, которая помогает уменьшить боли в остром периоде заболевания, улучшить кровообращение в тканях, предупредить нарушения питания связок, мышц и суставов и предотвратить двигательные расстройства.

Современная физиотерапия — это раздел медицины, обладающий мощным арсеналом средств лечения, в нем выделяют два больших блока — лечебную физкультуру с массажем и электролечение. Лечебный массаж — это один из самых эффективных методов лечения остеохондроза и болей в спине, так как он улучшает кровообращение в глубоких тканях и ликвидирует мышечные блоки («зажимы»), которые являются основной причиной сильных болей.

Одним из самых эффективных методов электролечения считается лекарственный электрофорез — это средство адресной доставки лекарственных препаратов к больному органу, улучшающее кровоснабжение в тканях. Выраженным обезболивающим, спазмолитическим и трофическим действием обладают импульсные токи – ДДТ, СМТ. Также для лечения болей в спине используется лазер, магнитолазер. Этот метод позволяет быстро снять отек, сопутствующий воспалению, и соответственно, боль, возникающую в отечных и сдавленных тканях. Магнитотерапия применяется в виде постоянного или переменного магнитных полей, она также способна быстро купировать отек и болевой синдром. Эффективны токи Д’арсонваля — это «озонированные» токи, применяемые для снятия болезненных мышечных спазмов, ультразвуковые колебания высокой частоты, которые устраняют воспаление и помогают рассасываться рубцам, повышая эластичность тканей. Особая роль в физиотерапии принадлежит лечебной физкультуре. Ее важность часто недооценивают, а ведь без полноценного мышечного корсета невозможно излечение от болей в спине и профилактика рецидивов остеохондроза. Особое значение лечебная физкультура приобретает при травмах и в послеоперационном периоде. Её использование поможет предупредить возобновление болей в спине, которые возникают из-за так называемых «двигательных стереотипов». Например, у офисного работника, который проводит весь рабочий день, сидя за компьютером, или у продавца, основная нагрузка у которого приходится на ноги. Очень эффективным способом борьбы с «двигательными автоматизмами» может стать и обычная оздоровительная гимнастика,йога, пилатес и другие виды упражнений.

Лечение боли в шее

Боль может быть вызвана различными причинами, начиная от спазма мышц и заканчивая грыжами межпозвонковых дисков в шейном отделе позвоночника. Если боль в шее появилась однажды (в связи с резким поворотом головы, неудобной позой во время сна), то, скорее всего, она, пройдет сама собой через несколько дней. Чтобы уменьшить болевые ощущения, вам нужно лишь снизить статическую нагрузку на мышцы шеи (не держать голову наклоненной в течение длительного промежутка времени), не увлекаться чрезмерными физическими нагрузками, не делать резких движений шеей.

Если же боль в шее носит постоянный или часто повторяющийся характер, сопровождается головной болью, онемением верхних конечностей, необходимо пройти полноценное обследование.

Физиотерапия боли в шее направлена на купирование болевого синдрома, улучшение кровообращения и микроциркуляции в пораженном сегменте, оказание противовоспалительного и противоотечного действия, устранение метаболических и дистрофических нарушений, уменьшение двигательных расстройств. Физические факторы используются на этапах стационарного лечения и амбулаторно, после выписки больного из стационара, а также в ранней послеоперационной реабилитации. В остром периоде: через 4-5 дней (по мере стихания остроты процесса) назначаются – лазеротерапия, импульсные токи (СМТ, ДДТ, интерференционные токи), магнитотерапия, УФО сегментарной зоны, дарсонвализация шейно – воротниковой зоны позвоночника и затылочной области головы, электрофорез веществ местноанестизирующего, ганглиоблокирующего действия на зоны болей

В подостром периоде:применяют ультрафонофорез с лекарственными веществами, магнитотерапию, электрофорез лекарственных препаратов, электромагнитные поля СВЧ (СМВ, ДМВ), лазерную терапию.

В стадии ремиссии: подключают теплолечение, в том числе озокерит и грязелечение на шейно-воротниковую зону, бальнеолечение (йодобромные, скипидарные ванны, ванны с лавром, бишофитные), подводный душ–массаж, массаж лечебный.

Лечение боли в пояснице

Ощущение боли внизу спины появляется из-за дисбаланса мышечно-связочного аппарата. При этом происходит микротравматизация мягких тканей, вследствие чего в избытке высвобождаются химические раздражители (медиаторы боли). Они обусловливают мышечный спазм и развитие боли в спине. Происхождение люмбалгии связано в основном с остеохондрозом, который локализован в области поясницы. Люмбалгию характеризует ноющая боль внизу спины с умеренно или Травматические факторы люмбалгии: физическое переутомление систематическое или чрезмерное физическое усилие; резкие движения; постоянная работа в «нефизиологической» или длительное пребывание в неудобной позе; ушиб поясницы, переохлаждение, простуда и др. Программа лечения боли в пояснице включает следующие основные моменты: 1)Постельный режим в течение восьми — десяти дней. Постель при этом должна быть ровной и твердой. «Отдых» на такой поверхности позволяет мышцам спины расслабиться. 2)Медикаментозное лечение люмбаго предполагает прием успокаивающих и обезболивающих препаратов и использование новокаиновых блокад (при сильной нарастающей боли). Из методов физиотерапии можно использовать электрофорез анальгетиков, импульсные токи, УФО сегментарных зон. В острый период пациенту могут назначить нестероидные противовоспалительные средства в виде таблеток, инъекций, свечей или мазей, которые снимают мышечный спазм. Разогревающие крема можно использовать только в период реабилитации (на третий день обострения). В остром периоде они могут спровоцировать отек и усилить боль. 3)После устранения острой боли лечение люмбаго продолжают с помощью ЛФК, массажа и мануальной терапии. Основная задача на данном этапе – укрепить мышечный корсет и уменьшить сжатие нервных корешков. Специальные упражнения при люмбаго способствуют нормализации обмена веществ, улучшают кровообращение и питание межпозвоночных дисков, позволяют снять мышечное напряжение, увеличить межпозвоночное пространство и разгрузить позвоночник. Дополнительно на этапе ремиссии назначают иглорефлексотерапию, гидромассаж, минеральные ванны, грязелечение и другие физиопроцедуры (см. Лечение болей в спине). Благодаря этому улучшается кровообращение, обеспечивается противовоспалительный и рассасывающий эффект.

Лечение бронхиальной астмы

Физиотерапию применяют как для купирования приступов бронхиальной астмы, так и в межприступном периоде, а также для ее профилактики при предастме. Для купирования приступов бронхиальной астмы применяют ингаляции бронхолитических и противовоспалительных (ингаляционные стероидные гормоны) средств как через ингаляторы-небулайзеры, так и индивидуальные аэрозольные баллончики. После купирования приступа и в межприступном периоде необ­ходимо проводить ингаляции лекарственных средств, разжижающих мокроту, с целью более свободного ее удаления. С целью стимуляции нарушенной глюкокортикоидной функции надпочечников, а также воздействия на воспалительный процесс и измененную реактивность бронхов назначают электромагнитотерапию. В зависимости от особенностей течения бронхиальной астмы и со­путствующих заболеваний воздействия могут ограничиваться толь­ко областью надпочечников или же включать и область легких. Применяют индуктотермию с легким ощущением тепла на область надпочечников. Назначают электромагнитные волны (ДМВ), электрическое поле УВЧ, магнитотерапию на область нижних и средних отделов легких с охватом проекции надпочечников. В тех случаях, когда явления бронхоспазма выражены нерезко, но имеются плевральные наслоения, пока­зано применение ультразвука. При выраженном бронхоспазме, когда од­ного воздействия ультразвука недостаточно, проводят фонофорез гидрокортизона на область грудной клетки. Больным бронхиальной астмой с нервно-психическим вариантом преимущественно легкого течения показано применение электросна. Для подавления аллергической реактивности и улучшения функционального состояния нервной системы больным в качестве вспомогательных средств назначают электрофорез кальция, магния или брома, ультрафиолетовое эритемное облучение передней и задней поверх­ности грудной клетки. Больным бронхиальной астмой при отсутствии активного вос­палительного процесса показано лечение «сухи­ми» углекислыми ваннами. Больным в фазе затухающего обострения и ремиссии бронхи­альной астмы с успехом назначают лечебную гимнастику с акцен­том на дыхательные индивидуально подобранные упражнения, заня­тия в бассейне (температура воды 37-38°С), а также различные виды лечебного массажа. После стихания обострения больным с нетяжелым течением заболевания показано лечение в галокамере (спелеокамере).

Лечение хронического бронхита

Методом выбора при лечении болезней органов дыхания и хронического бронхита, в частности, является ингаляционная терапия. При помощи ингаляторов вводятся лекарственные препараты – антибактериальные препараты, бронхолитики, муколитики, отхаркивающие травы и др.. Одновременно с медикаментозной терапией назначаются физиотерапевтические процедуры (УФО грудной клетки, ультразвук, индуктотермия, УВЧ, магнитотерапия, магнитолазеротерапия и др.), массаж грудной клетки, дыхательная гимнастика.

Из физиотерапевтических процедур также назначается бальнеолечение (лечебные ванны и души). Эффективны углекислые (водные и «сухие») ванны. Нормобарическая гипокситерапия (лечение «горным воздухом») — позволяет не только существенно уменьшить частоту и выраженность приступов одышки за счет перестройки гемодинамики и газообмена, а также снижения чувствительности рецепторов бронхов и облегчения эвакуации мокроты, но и снизить суммарную дозу бронхолитиков. Кроме того, доказано, что после прохождения курса гипокситерапии снижается восприимчивость больных к респираторным вирусным инфекциям, что является немаловажным условием продления ремиссии заболевания. Спелеотерапия или галотерапия (лечение природным или искусственно созданным микроклиматом соляных пещер и шахт). Лечение в природных соляных, а также в искусственно созданных спелеоклиматических кабинетах (галотерапия) позволяет стимулировать мукоцилиарный транспорт, стимулирует систему местного бронхолегочного иммунитета, обеспечивает бактерицидный, противовоспалительный, муколитическии, бронхоспазмолитический эффекты. Этот вид терапии показан больным с легкой и средней степенью тяжести течения заболевания. Иглорефлексотерапия назначается при наличии бронхоспастического синдрома. Наиболее общим принципом применения рефлексотерапии следует признать сочетание в одном назначении воздействия на точки общего, центрального и сегментарного действия. Аэрофитотерапия (ароматерапия) — лечение путем насыщения воздуха парами эфирных масел. Способствует снижению восприимчивости больных к ОРВИ, улучшает психоэмоциональное состояние больных.

Физиотерапия после переломов

Физиотерапия после перелома играет решающую роль как в предупреждении осложнений после перелома, так и в полном и скором функциональном восстановлении. Важную роль в излечении больного играет правильно проводимая реабилитация физиотерапевтическими средствами. Ее следует проводить одновременно с хирургическими и ортопедическими мероприятиями и осуществлять до полного излечения. Начинать физиотерапию следует уже на 2–5 день после травмы. В первый период (первые 10 дней после травмы) после репозиции и иммобилизации в клинической картине преобладают боли, отек и спазм мышц. Для обезболивания, ликвидации отека, рассасывания кровоизлияний и ускорения регенерации кости применяют следующие методы физиотерапии. 1.Интерференционные токи. Они действует болеутоляюще, ускоряют рассасывание отека и гематом и быстро регулируют нарушенные трофические процессы 2.Ультрафиолетовые эритемные облучения в сегментарной зоне или на симметричной непораженной конечности. 3.Электрофорез брома в виде гальванического воротника или трусов по Щербаку – рекомендуется для больных с резко выраженным болевым синдромом и повышенной раздражительностью.

Облучение лампой соллюкс или Минина, всего 5–6 сеансов (если невозможно применить указанные выше методы). 5.Лечебная гимнастика: ее начинают на 3-й день после травмы в виде упражнений для симметричной непораженной конечности и небольших подвижных суставов, расположенных ниже перелома; Второй период охватывает в среднем время от 10-го до 30-45-го дня после травмы, т. е. образования соединительнотканной и первичной костной мозоли. Цель физиотерапии – стимулировать ее образование и предупредить функциональные нарушения (тугоподвижность суставов, атрофию мышц и др.). Применяются следующие методы. 1.Интерференционные токи постоянной частоты.

Электрическое поле УВЧ – электроды располагаются поперечно в области перелома. 3.Общие (субэритемные дозы) или местные (эритемные дозы) ультрафиолетовые облучения, а в летние месяцы – воздушные и солнечные ванны. 4.Лечебный массаж (сначала симметрично здоровой конечности, а затем пораженной, выше и ниже места перелома) и лечебная физкультура. Третий период охватывает в среднем время от 30-го дня до 2,5 месяца после травмы, когда происходит окончательное образование костной мозоли. Главная цель физиотерапии – улучшить трофику тканей и предупредить появление осложнений (мышечной атрофии, тугоподвижности суставов, контрактур и др.). Этому помогают интерференционные токи, электрофорез 5%-ного раствора кальция хлорида на пораженной конечности или в виде гальванического воротника, ультрафиолетовое облучение, электростимуляция, грязевые аппликации, массаж, лечебная физкультура. Лучшее действие оказывает подводная гимнастика; упражнения (активные и пассивные движения пораженной конечностью) проводятся осторожно, без причинения боли, при постепенно нарастающей дозировке. Проводится и гигиеническая гимнастика, которая направлена на устранение последствий травмы, как, например, атрофии мышц, контрактур и пр. Применяются активные движения с нагрузкой, трудотерапия, игры и др.

Физиотерапевтическое лечение

Физиотерапия (от греч. physis – природа и терапия), раздел медицины, изучающий лечебные свойства физических факторов и разрабатывающий методы их применения с лечебно-профилактической целью. В современной физиотерапии применяют магнитные, электрические и электромагнитные поля низких, высоких, ультравысоких и сверхвысоких частот, искусственные световые излучения (от инфракрасного до ультрафиолетового и монохроматического когерентного), механические колебания (от инфразвуковых до ультразвуковых) и др. Физические факторы воздействовали на человека на протяжении всей его эволюции, поэтому физиотерапевтические процедуры оказывают на организм большее физиологическое влияние, чем многие лекарственные средства. Физиотерапевтическое лечение может применяться как самостоятельно, так и в комплексе с лекарственной терапией, мануальной терапией, массажем, лечебной физкультурой. Многообразие факторов и методик, применяемых в физиотерапии, определяет возможности индивидуального воздействия на организм и направленного влияния на патологический процесс без отрицательного побочного эффекта. Применение физиотерапии возможно практически во всех областях медицины: отоларингологии, гастроэнтерологии, гинекологии, урологии, пульмонологии, ортопедии и травматологии, неврологии, хирургии, кардиологии и других. В ЕМНЦ имеется достаточно широкий спектр физиотерапевтического лечения, а именно грязелечение, водолечение (различные минеральные и ароматические ванны, подводный душ-массаж), магнитотерапия, лазеротерапия, различные виды токов (гальванический, импульсные, высокой частоты), электромагнитные волны УВЧ, СВЧ, КВЧ, ингаляции лекарственных трав, галотерапия, аппарат вибротракции, кабинет лечебной физкультуры, штат квалифицированных массажистов. Также в отделении физических методов лечения проводятся лечебные методики иглорефлексотерапии, электростимуляции при различных неврологических заболеваниях. Всё физиотерапевтическое лечение назначается врачом-физиотерапевтом отделения с учётом заболевания и общего состояния пациента.

Реабилитация

Медицинская реабилитация — это комплекс лечебных и профилактических мероприятий, который направлен на максимально возможное восстановление утраченных способностей пациента после различных заболеваний. Реабилитация также направлена на восстановление мышечной силы пациента, а также предупреждение повторного заболевания или возникновения осложнений. Сегодня медицинская реабилитация – это не просто назначение каких-либо упражнений после выписки из больницы или курс физиотерапии в конце стационарного периода. Реабилитация – это комплекс мероприятий, которые включают в себя участие врачей разных сфер – физиотерапевтов, массажистов, психологов, логопедов и других. В итоге, именно комплексная реабилитация позволяет пациенту выздороветь полностью, а не частично. Успех лечения зависит как от правильно установленного диагноза, так и от оптимально подобранного и проведенного лечения, а также правильной и своевременной реабилитации пациента. Реабилитация имеет одну единственную цель – по возможности максимально полное восстановление утраченных функций у пациента, исходя из имеющихся последствий травмы или заболевания, и проведенного лечения. В зависимости от области применения, реабилитация может быть: Ортопедическая– она проводится после травм и операций по поводу заболеваний костно-мышечной системы, переломах, пороках развития позвоночника и нарушениях осанки. Неврологическая и нейрохирургическая – это один из серьезных видов реабилитации, так как в ее проведении участвует самое большое число специалистов – неврологи, физиотерапевты, массажисты, психологи и психиатры, логопеды, трудотерапевты и др. Эта реабилитация требуется после травм и операций на нервной системе (головном, спинном мозге), при заболеваниях периферической нервной системы (нервных пучках), инсультах, парезах и параличах. Кардиологическая реабилитация – реабилитация после острого инфаркта, при заболеваниях сердца и сосудов. Целью реабилитации является быстрая регенерация мышц при их атрофиях, связанных с длительной гиподинамией, с целью восстановления силы и тонуса конечности, восстановление полного объема движений в суставах после иммобилизации (после переломов), ускорения регенерации ткани хрящей, улучшение трофики тканей органов и костей, увеличение подвижности при спайках в брюшной полости после полостных операций, повышение общего тонуса пациента и улучшения психоэмоционального состояния, снятие болей и отеков после травм суставов, восстановление физической активности после инсультов, парезов и параличей, а также в послеоперационном периоде у пациентов после операций связанных с заболеваниями и травмами опорно-двигательного аппарата (после травм, переломов, ушибов и растяжений). Стоит отметить, что сам процесс реабилитации основан на стимуляции собственных возможностей организма пациента под внешним воздействием. Физические упражнения, современная аппаратура помогают стимулировать местный и общий иммунитет, улучшать процессы репарации тканей, восстанавливать крово — и лимфообращение.

К методам медицинской реабилитации относятся следующие методы: лечебная гимнастика, массаж, кинезитерапия, физиотерапевтическое лечение, мануальная терапия, электромиостимуляция (она заключается в улучшении проведения нервных импульсов к скелетным мышцам), психологическая помощь, логопедическая помощь. Стоит отметить, что одним из ключевых моментов в любой реабилитации являются физиотерапевтические методы, которые направлены на восстановление утраченных функций и стимулирование движений у пациента, ускорение репаративных процессов в тканях и органах, особенно в опорно-двигательном аппарате, нервной системе и системе кровообращения. Одним из преимуществ физиотерапевтических методов является то, что при этом не используются медикаменты, а, значит, и нет риска аллергических реакций и побочных эффектов, не развивается лекарственная зависимость, и используемые методы лечебного воздействия, как правило, не инвазивны. Правильно подобранный комплекс реабилитационной программы поможет пациенту максимально быстро восстановиться после перенесенной болезни, травмы или операции, вернет ему ощущение свободы движений и возможность общения с окружающими людьми без каких-либо ограничений.

Применение препарата Карипаин | Сыч Сергей ЕвгеньевичСыч Сергей Евгеньевич Применение препарата Карипаин

Карипаин – уникальное средство от остеохондроза и межпозвонковых грыж, полученное из латекса папайи. Эффективность лечения препаратом при остеохондрозе и многих (даже осложненных) грыжах диска достигает 82! Более 10 тыс. больных прошли успешное лечение препаратом. Примерно 40-45% больных, назначенных на операцию, получив лечение Карипаином, в оперативном вмешательстве не нуждаются.

Препарат также применяется для лечения суставных контрактур (посттравматических и постинсультных), келоидных рубцов различного происхождения, артрозо-артритов крупных суставов, плече-лопаточного периартрита, церебрального (в том числе оптохиазмального) и спинального арахноидита, некоторых форм невритов лицевого нерва, туннельного синдрома.

Механизм возникновения заболевания.

Причиной «боли в спине» в 90% случаев является остеохондроз позвоночника — дегенеративное изменение межпозвонковых дисков и, как крайнее проявление – грыжа межпозвонкового диска.

Межпозвонковой грыжей страдают в той или иной степени около четверти всего населения. Она затрагивает те «амортизаторы», которые обеспечивают подвижность позвоночного столба, его защиту от нагрузок. Чаще всего болезнь вызывается нарушением обмена веществ, наследственными причинами, травмами, инфекциями. Обычный остеохондроз увеличивает риск появления грыжи.

Сам диск, который состоит из жесткой внешней оболочки и студнеобразного внутреннего ядра, со временем диск «стареет», становится менее упругим, эластичным, пропитывается кальцием. И в какой-то момент под влиянием сильной нагрузки плотная внешняя оболочка выбухает в спинномозговой канал (протрузия), а затем лопается, и внутреннее содержимое начинает через трещину постепенно выходить наружу. Так образуется грыжа.

Проблемы возникают, когда выпуклость направлена в сторону спинного мозга или его нервных окончаний. Нервный корешок и кровеносные сосуды сдавливаются грыжей, и это вызывает острую боль.

Область поясничного отдела позвоночника страдает в большинстве случаев. Ведь на поясницу ложится основная нагрузка, и подвижность здесь наибольшая. Боли могут быть в пояснице, по ходу седалищного нерва — по задней поверхности ноги, включая пятку и стопу. Кроме того, страдают и другие функции — исчезают ахиллов и коленные рефлексы, нога слабеет, атрофируются мышцы, человек хромает и теряет трудоспособность.

Вертебробазилярная недостаточность часто возникает при грыже шейного отдела. При этом нарушается мозговое кровообращение. Те отделы мозга, которые отвечают за координацию движений, не получают достаточного количества крови. Это приводит к головокружениям, головным болям, нарушению памяти, шаткости походки.

При шейно-грудном радикулите появляются боли в плече и руке, наблюдается онемение пальцев, снижается мышечная сила.

Диагноз ставится на основании клинических признаков и результатов магнитно-резонансной томографии и рентгенографии. Изменения диска видны на снимках.

Лечение

Сейчас существует 2 подхода к лечению межпозвонковых грыж – хирургический и консервативный.
Оперативное лечение заключается в отсечении (резекции) того участка грыжи, который сдавливает корешок нерва. Хирургическое удаление грыжи дает быстрое избавление от боли, но проводится в тех случаях, когда другие (нехирургические) возможности лечения исчерпаны.

Консервативное лечение (массаж, лечебная гимнастика, мануальная терапия, физиотерапия, грязелечение, медикаментозная терапия) уменьшает отек и напряжение окружающих тканей, укрепляет мышцы, ответственные за стабилизацию позвоночника, улучшает кровообращение, за счет этого устраняя болевой синдром, но эффект от обычного консервативного лечения в большинстве случаев кратковременный — в среднем 1 — 4 месяца. Кроме того, эти способы лечения не останавливают прогрессирование дегенеративных изменений в межпозвонковых дисках.
Существует еще один неоперативный метод патогенетического лечения — лечения причины, а не только последствия — лечение Карипаином. Данный препарат очень эффективен при хроническом течение болезни, т.е. при длительном сдавлении грыжей корешка спинного мозга и/или сосуда.

Лечение межпозвонковых грыж Карипаином

Методика лечения Карипаином разработана доктором медицинских наук, профессором, заведующим Отделением Нейрореабилитации НИИ Нейрохирургии им. Н.Н.Бурденко (г.Москва) Найдиным В.Л. и применяется в медицинской практике более 5 лет.

В состав Карипаина входят биологически активные вещества растительного происхождения (Папаин, Лизоцим и др.), которые положительно влияют на коллагеновые хрящевые ткани. Из этих тканей состоят межпозвонковые диски и, соответственно грыжа.

В определенной концентрации Карипаин, введенный методом электрофореза, влияет на саму грыжу. Она начинает постепенно уменьшаться, становится мягкой. Этого порой бывает достаточно, чтобы освободить нервное окончание, которое она защемляет, и боли в позвоночнике постепенно проходят.

В меньшей степени лекарство действует на весь межпозвонковый диск. Он становится более эластичным, «упругим», увеличивает высоту, как бы «омолаживается». Препарат усиливает регенерацию тканей диска, который восстанавливает свою нормальную форму и свою функцию амортизатора. Вводимый Карипаин воздействует на несколько соседних межпозвонковых дисков, восстанавливая целый отдел позвоночника.

Лечение курсовое – от 1-го до 3-х курсов по 20 — 30 процедур каждый, между курсами интервал от 1-го до 2-х месяцев. Препарат может использоваться в любом медицинском учреждении, где есть аппарат для электрофореза (например «Поток-1») или фонофореза. Методика специально адаптирована для удобного применения в поликлинике, МСЧ, больнице и даже дома. Дополнительным компонентом комплексного лечения является специальная лечебная гимнастика, укрепляющая мышцы спины, живота, шеи, конечностей, создающая «мышечный корсет» и стабилизирующая позвоночник, что позволяет больному легче переносить физические нагрузки. Кроме того, при необходимости применяется массаж, мягкое вытяжение, осторожная мануальная терапия, противовоспалительная медикаментозная терапия. Между курсами больным рекомендуются занятия в бассейне.

Однако есть формы заболевания — секвестрированные грыжи, с фораменальным ущемлением нервов, с грубым нарушением кровообращения в этой зоне и нестерпимыми, жесточайшими болями, которые требуют безусловного оперативного вмешательства.

Вообще же тактика лечения выбирается исключительно врачами и обязательно согласовывается с больным.

Инструкция по применению Карипаина для физиокабинетов
Карипаин — протеолитический ферментный препарат прямого действия растительного происхождения, полученный из латекса папайи, в медицинской практике используется раствор его лиофилизированного порошка белого цвета. Единицы активности выражаются по классификации международной федерации фармацевтики (1фл Карипаина соответствует 350 Fip-ПЕ).

Фармакологические свойства
Карипаин характеризуется протеолотической активностью широкого спектра. В состав препарата входят три протеолотических фермента (Папаин, Химопапаин, Протеиназа) и муколотический фермент — Лизоцин, содержащие в своих активных центрах сульфгидрильные группы.

Оптимальные условия действия Карипаина pH 5-7, температура 37°С.

Показания к применению
Карипаин — высокоэффективный препарат, применяемый в ортопедической, травматологической, нейрохирургической и неврологической клиниках. Особенно эффективен при остеохондрозе позвоночника в том числе при различных формах грыж межпозвонковых дисков и дискогенных радикулитах, грыжах Шморля, посттравматических сгибательных контрактурах пальцев, при келоидных рубцах различного происхождения, артрозо-артритах крупных суставов, плече-лопаточном периартрите, церебральном (в том числе оптохиазмальном) и спинальном арахноидитах, невритах лицевого нерва, туннельных синдромах.

Побочные действия и меры их предупреждения. При применении Карипаина возможны аллергические реакции. При повышенной чувствительности, проявляющейся зудом и повышением температуры, проводится антигистаминная терапия (тавегил, супрастин, диазолин и др. местная обработка гидрокортизоном или мазью «Линин»).

Между 5-й и 8-й процедурами возможно временное обострение основного заболевания.

Противопоказания
Не применять — внутривенно и внутримышечно, при острых воспалительных процессах в тканях, при секвестрации грыжи диска и фораменальном расположении секвестра.

Форма выпуска
Карипаин выпускается во флаконах 1г (10мл) №10 пач.картон.

Условия хранения
Препарат хранят в сухом защищенном от света месте при температуре +0 — +20°С препарат применяют в стационарных и амбулаторных условиях.

Способ применения и дозы. Карипаин вводится методом электрофореза с положительного полюса!
Лечение курсовое — 1 курс от 20 до 30 процедур. Допускаются перерывы в 1-2 дня между процедурами. При необходимости — повторные курсы через 30-60 дней.

1 флакон Карипаина разводятся в 5-10 мл физиологического раствора непосредственно перед процедурой. В раствор добавляется 2-3 капли Димексида. Раствор наносится на фильтровальную бумагу белого цвета, размещенную на прокладках электрода. Размеры электрода-прокладки 10х15 см.

Варианты расположения прокладок-электродов:
Продольно

• Карипаин на область шеи (+) Эуфиллин на область поясницы (-)
• Карипаин на область шеи (+ )Эуфиллин на оба плеча раздвоенным электродом (-)
• Карипаин на область поясницы (+) Эуфиллин на область бедер раздвоенным электродом

Поперечно

• Карипаин на область поясницы (+) Эуфиллин на область живота

Температура прокладок — строго 37-39°С. Контролируется водяным градусником.

Сила тока до 10-15 мА (в начале каждой процедуры увеличивается постепенно).

Время экспозиции от 10 до 20 минут также увеличивается постепенно.

Несоблюдение данных параметров приводит к резкому снижению эффективности препарата!!!

Возможен вариант сочетанного введения Карипаина с хлористым литием (в виде 3% раствора). Лекарства размещаются на одной прокладке, но на разных фильтрованных бумагах. Условия введения прежние, однако, лечение литием не должно сочетаться с терапией вольтареном.

Электрофорез Карипаина на область келлоидных рубцов:

• Карипаин непосредственно на рубец (+) Эуфиллин или йодистый калий на противоположную поверхность, т.е. поперечно (-)
• Карипаин непосредственно на рубец (+) Эуфиллин продольно на расстоянии 15-20 см от 1-й прокладки (-)

Электрофорез при некоторых формах неврита лицевого нерва:

Сила тока от 1 до 5 мА

Карипаин на лицо в виде полумаски Берганье (+) Эуфиллин на межлопаточную область или на противоположном плече (-)

Электрофорез карипаина при арахноидите головного мозга: (в т.ч. оптохиазмальном)

Сила тока от 1 до 2 мА

Карипаин эндоназально (+) Эуфиллин на нижнешейный-верхнегрудной отдел позвоночника(-)

Инструкция по введению Карипаина методом фонофореза
Фонофорез (ультразвуковое введение) ферментных препаратов, в том числе и Карипаина может проводиться по следующей методике.

Флакон с Карипаином растворяют в 5 или 10 мл 1% раствора новокаина (в зависимости от площади озвучивания). Содержимое наносится (шприцем) каплями на пораженную область с последующим растиранием. Затем кладется небольшой слой вазелинового масла, чтобы обеспечить нужный контакт для передачи тканям ультразвуковых колебаний. При лечении поврежденного позвоночника излучателем водят вдоль позвоночного столба, но не по середине, а отступив на 1,5-2 см от центральной оси по так называемым паравертебральным линиям. Ультразвуковая головка передвигается медленно при помощи круговых и продольных движений одновременно по поврежденным областям, где нанесен Карипаин, покрытый слоем вазелинового масла.
Конкретно, применяют ультразвук частотой 800 – 1000 кГц на сегментарные зоны паравертебрально с двух сторон, интенсивность 0,3-0,5 Вт/см², режим непрерывный, продолжительность 8-10 мин на поле, при этом площадь одного поля не должна превышать 150-250 см². На один курс лечения назначается 15-30 процедур, процедуры желательно делать ежедневно. Необходимое количество процедур определяет врач. Количество курсов от 1 до 3, определяет также врач, перерыв между курсами 30-60 дней.

Назначение процедуры фонофореза производит врач. Но непосредственно выполняет процедуры медицинская сестра.

Addgene: Протокол — как очистить ДНК из агарозного геля

Как работает электрофорез | Sciencing

Гель-электрофорез, часто также называемый электрофорезом ДНК или просто электрофорезом, — это метод, который используется для разделения фрагментов ДНК (и других заряженных молекул) по размеру. Обычно это делается с использованием геля агарозы и электрического заряда, чтобы отделить фрагменты друг от друга.

У этого метода есть несколько приложений, включая исследование ДНК, снятие отпечатков пальцев ДНК, криминологию, а также различные медицинские приложения.

Что такое гель-электрофорез?

Гель-электрофорез — это метод, который позволяет ученым разделять заряженные молекулы по размеру. Это включает ДНК, РНК и белки.

Помните, что ДНК и РНК имеют небольшой отрицательный заряд благодаря отрицательно заряженным молекулам кислорода в сахарно-фосфатной основе молекулы. Белки могут иметь ряд зарядов в зависимости от аминокислот в полипептидной цепи.

Компоненты электрофореза

Для проведения электрофореза сначала необходимо приготовить гель.Это можно сделать практически в любой лаборатории; Наиболее распространены агарозные гели. Чтобы сделать гель, порошок агарозы смешивают со специальным буфером, называемым буфером для электрофореза. Затем эту смесь нагревают до растворения агарозы и полностью смешивают с буферным раствором.

Обратите внимание, что некоторые протоколы электрофореза требуют добавления бромистого этидия (Et-Br). Это окрашивает любую ДНК, используемую в электрофорезе, чтобы вы могли видеть положение фрагментов в УФ-свете.

Формование геля

Затем его выливают в прямоугольную форму, называемую лотком для заливки геля. Наряду с формой, которая создает прямоугольный гель, используемый для электрофореза, на одном из концов геля помещается гребешок. Эта гребенка создает лунки, в которые загружаются образцы, которые вы хотите разделить с помощью электрофореза. Вы можете увидеть картинку здесь.

После затвердевания геля гребенку лунок удаляют и гель помещают в специальный резервуар для электрофореза. Другой буфер заполняется в резервуар до тех пор, пока небольшой слой буфера полностью не покроет агарозный гель.

Этот резервуар вырабатывает электрический ток (от 50 до 150 В) через буферный раствор и, в свою очередь, через гель агарозы.Лунки с агарозным гелем помещают на отрицательном конце тока (катод ), а другой конец геля на положительном конце тока (анод ).

Как работает электрофорез?

Перед тем, как электрический ток будет пропущен через резервуар и гель, ваши образцы загружаются в лунки. Это делается с помощью микропипетки. «Маркерный» образец, также известный как «лестница ДНК», представляет собой образец с известным размером фрагментов ДНК, который может помочь вам сравнить ваши образцы и понять размеры исследуемого образца.

Часто трекинговый краситель (также называемый загрузочным красителем) добавляется к каждому образцу, чтобы помочь вам загрузить образец в лунки. Краситель также помогает отслеживать движение образцов через гель.

Так как же образцы на самом деле проходят через гель и разделяются по размеру? Это связано с электрическим током , который проходит через агарозный гель, а также с размером / структурой фрагментов и агарозного геля.

Заряд и размер Определите полосы ДНК

Помните, что в целом заряд ДНК составляет отрицательных .Таким образом, когда эти образцы помещаются в лунки, которые находятся рядом с отрицательным концом электрического тока, это приведет к тому, что отрицательно заряженная ДНК отодвинется на от катода (отрицательный заряд) и переместится на в сторону анода (положительный заряд). на противоположном конце.

Помимо этого движения образцов, электрофорез также разделяет образцы и фрагменты в этих образцах по размеру. Это связано с тем, что более мелких молекул и фрагментов могут двигаться быстрее и легче через гель, в то время как более крупных молекул и фрагментов перемещаются медленнее .Это означает, что маленькие фрагменты будут перемещаться к концу геля быстрее, чем более крупные, и, как следствие, разделяет каждый фрагмент по размеру.

После прохождения геля в течение примерно часа (в большинстве протоколов) заряд отключается и гель анализируется. Вы увидите отчетливую прямоугольную полосу, часто называемую полосой ДНК или полосой белка, в различных точках геля. Каждая полоса представляет собой один фрагмент, который двигался по гелю.

Применение и применение электрофореза

В лаборатории есть множество применений электрофореза. Вот лишь некоторые из них:

• ДНК-дактилоскопия для мест совершения преступлений и генетического тестирования
• Тестирование продуктов полимеразной цепной реакции
• Анализ генов для медицинских целей
• Сравнение ДНК между видами или потомками
• Анализ эволюционных и таксономических отношений между видами
• Понимание того, где ферментов рестрикции разрезают разные участки ДНК
• Тестирование отцовства
• Тестирование устойчивости к антибиотикам

Гелевый электрофорез: можно и нельзя

является важным этапом проверки в ABE Labs.Это позволяет учащимся определить размер продукта, сравнив его с лестницей ДНК. Чтобы научиться правильно выполнять процедуру и интерпретировать результаты, нужна практика; Ниже приведены несколько советов от наших учителей и лаборантов!

СОВЕТЫ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ГЕЛЕЙ СТУДЕНТАМ

• Убедитесь, что гель правильно расположен в коробке с гелем лицевой стороной вверх.
• Напомните учащимся направлять кончик пипетки в лунку недоминантной рукой, чтобы не проколоть дно геля.
• Напомните учащимся держать поршень пипетки в нажатом состоянии до тех пор, пока они не снимут наконечник, чтобы избежать всасывания буфера и нарушения целостности образцов.
• Заменяйте буфер между прогонами геля.

СОВЕТЫ ПО УСТРАНЕНИЮ ЛАРИ

• Попросите студентов выполнить предложенное упражнение по предсказанию геля, прежде чем пытаться интерпретировать гель.
• Предложите студентам фотографировать гели и манипулировать изображениями.
• Часто изменение контрастности, яркости, резкости или других настроек может сделать более слабые полосы более заметными.
• Иногда лучше всего подходят высококонтрастные черно-белые изображения!

СОВЕТЫ ОТ НАШЕЙ ЛАБОРАТОРИИ

• При приготовлении гелей используйте самые большие и широкие гребешки, чтобы ученикам было легче пипетировать лунки.
• Окрашенные гели нужно хранить в темноте. Храните их в ящике, коробке или другом месте вдали от света. При использовании MiniOne свет нагревает гель и вызывает фотообесцвечивание.
• Чтобы этого не произошло, включайте свет только каждые несколько минут, чтобы проверить гель.
• Повязки расплывутся через 24 часа, если их не хранить должным образом.

Гелей

• хватит на ночь в запечатанном пластиковом пакете в холодильнике с несколькими каплями буфера.
• Некоторые лаборанты обнаружили, что запуск геля при напряжении 50 В в течение 1–2 минут, а затем переход на 135 В позволяет получить самые резкие и чистые полосы.

Поделитесь своими любимыми советами и рекомендациями по использованию гелей, написав в Твиттере @ABEProgOffice!

Приготовление гелей из агарозы и проведение гель-электрофореза

Приготовление геля — это простой процесс, который часто сравнивают с приготовлением желе. Эти гели сделаны с лунками, поэтому раствор ДНК можно суспендировать и отделить с помощью процесса электрофореза.

Начнем с лотка, который идет в комплекте. Имеет 2 гребня.

Шаг 1:

Сделайте замкнутое пространство для заливки горячей жидкости.

• Оторвите кусок ленты длиной около 12 дюймов, клейкая лента отлично подойдет.
• Оберните ленту снаружи лотка, оставив достаточно, чтобы ее можно было сложить и приклеить ко дну.
• Убедитесь, что лента плотно прилегает к концам. Потрите ленту, чтобы предотвратить утечку

Шаг 2:

Смешайте агарозу

• Смесь требует 1% порошка агарозы в буфере TAE.
• Этот лоток вмещает около 40 мл на нужных уровнях.
• Правильная смесь: 40 мл TAE на 0,4 г порошка агарозы
• Разогревайте в микроволновой печи с короткими интервалами в секунды, помешивая, пока смесь полностью не растворится. Подержите смесь на свету, чтобы убедиться, что все гранулы полностью растворились. Будьте осторожны, чтобы не выкипеть!

Шаг 3:

Налейте жидкость и дайте остыть, чтобы получился гель

* Добавьте 4 мкл ДНК Safe Gel Stain после обработки в микроволновой печи и смешайте с жидкостью *

• Вылейте содержимое, приготовленное в микроволновой печи, в лоток с 1 или двумя гребнями в равновесии и на месте.
• Жидкость должна достичь уровня, показанного диагональной линией на фотографии.
• Поместите поднос с жидкостью в холодильник или дайте ему остыть на воздухе.
• Перед использованием подождите, пока гель полностью затвердеет. После полного высыхания гель будет немного непрозрачным.
• Удалите ленту, затем осторожно удалите гель из лотка и поместите в бокс для гель-электрофореза, расположив верхние лунки ближе всего к черной пробке.

Шаг 4:

Заполните коробку с образцами буфера и пипеткой

• Поместите гель в бокс для электрофореза с лунками, созданными гребенкой, ближайшей к черным электродам. В некоторых коробках нет цветных электродов. Просто подключите провод, идущий от черного гнезда блока питания, к стороне с колодцами, когда закончите загрузку.

• Заполните бокс для электрофореза буфером TAE, пока он слегка не покроет верхнюю часть геля.

• У лестницы ДНК уже есть загрузочный буфер. Вы должны смешать образцы с загрузочным буфером, чтобы образцы оставались в лунках.

• Добавьте буфер для загрузки (6x) в реакцию ПЦР, если нет необходимости сохранять его для дальнейшего использования.Добавьте 9 мкл 6x загрузочного буфера к 50 мкл реакции ПЦР или 5 мкл буфера загрузки к 25 мкл реакции ПЦР. В качестве альтернативы вы можете нанести нанесенный краситель на парафильм, алюминиевую фольгу или оберточный материал для каждого образца. Держите капли друг от друга, как на картинке.

• Пипеткой нанесите 10 мкл образца на каплю загрузочного буфера на парапленке или материале. Пипетируйте вверх и вниз, чтобы смешать вместе, затем повторно загрузите пипетку со смесью и перенесите в лунку с гелем. Повторите для всех образцов.

• Лестницу ДНК следует хранить в морозильной камере, и перед загрузкой ей потребуется время, чтобы оттаять. Просто прогрейте трубочки в руках до готовности. НЕ ИСПОЛЬЗУЙТЕ СВЧ-излучение И НЕ НАХОДИТЕ В ГОРЯЧУЮ ВОДУ

Шаг 5:

Подключите электроды к коробке и включите питание

• Подключите электроды к электрофорезу. Черные электроды должны находиться сбоку от лунок, и образец будет двигаться в сторону красных.

Классный факт:

Гель можно использовать повторно

ДНК исчезает в геле, и ее невозможно отследить

УБЕДИТЕСЬ, ЧТО ВАШ ИСТОЧНИК ПИТАНИЯ ВЫКЛЮЧЕН

• Вы также можете повторно использовать часть буферного раствора, но он будет электролизован, поэтому сделайте это только один раз.

• Вылейте половину буферного раствора и удалите твердый гель (осторожно, он может выскользнуть из ваших рук)
• Разбейте гель на части, достаточно маленькие, чтобы поместиться в сосуд, пригодный для микроволновой печи, используемый на этапах 2 и 3
• Повторите шаги 2 и 3
• Поместите гель обратно в бокс для электрофореза и наполните буфер, пока он снова не покроет гель.

Как проводить гель-электрофорез — GenoSensor Education

Гель-электрофорез — это простой, но эффективный метод, незаменимый в любой биотехнологической лаборатории. Ученые используют гель-электрофорез для разделения макромолекул, таких как ДНК, РНК и белки, в зависимости от размера и заряда. Клинические химики используют гель-электрофорез, чтобы сосредоточиться на белках, а молекулярные биологи и биотехнологи больше интересуются ДНК и РНК. Этот протокол посвящен гель-электрофорезу с ДНК.

ДНК имеет отрицательный заряд, поэтому, если она проходит через электрический ток, она будет двигаться в сторону положительного заряда и от отрицательного заряда. Ученые используют это преимущество в гель-электрофорезе, суспендируя ДНК в геле и пропуская ток через гелевый аппарат, заставляя ДНК двигаться. ДНК проходит через матрицу геля агарозы, и чем длиннее и сложнее ДНК, тем медленнее она проходит. Используя эту технику, биологи могут определить размер и длину пары оснований образцов ДНК.ДНК также может быть очищена для других лабораторий, таких как ПЦР, секвенирование ДНК или Саузерн-блоттинг.

Эта лабораторная работа является хорошей практикой для развития навыков математики, микропипетки и принятия решений. Ее можно разделить на два лабораторных занятия, если время не позволяет провести весь эксперимент за одно занятие.

Материалы:

· Порошок агарозы

· Лестница ДНК

· Образцы ДНК

· 50-кратный буфер для электрофореза (TAE или TBE)

· ДНК-гель для окрашивания (SYBR Safe или другие красители)

· Нанесение 6X электрофореза

Принадлежности:

· 1.Микроцентрифужные пробирки 5 мл

· Градуированный цилиндр 100 мл

· Колба Эрленмейера 250 мл

· Стакан 500 мл

· Аппарат для горизонтального гель-электрофореза

o Лоток для геля

o Гель для отливки Gates

o Гель Камера для электрофореза с крышкой

· Источник питания для гель-электрофореза

· Весы и весы бумаги или лодочки

· УФ-свет или УФ-осветитель

Протокол:

1. Поместите лоток для геля в камеру для гель-электрофореза так, чтобы выемки на обеих сторонах совпали. Вставьте литейные ворота в прорези на противоположных концах лотка для геля.

2. Поместите гребешок для геля в паз лотка для геля, ближайший к черному катоду. Он должен скользить в выемках лотка и камеры.

3. Подготовьте буфер для электрофореза. Для этого протокола требуется 500 мл буфера TAE, поэтому используйте градуированный цилиндр на 100 мл, чтобы отмерить 10 мл исходного раствора 50X TAE и добавить его в стакан на 500 мл.Добавьте 490 мл дистиллированной воды. См. Подробности в разделе расчетов ниже.

4. Приготовьте 40 мл 1,0% агарозы в 1X буфере TAE. См. Подробности в разделе расчетов ниже.

а. Взвесьте 0,40 г агарозы и добавьте ее в колбу Эрленмейера.

г. Добавьте 40 мл 1X TAE Buffer, приготовленного на шаге 3, и перемешайте встряхиванием.

г. Ваша агароза не растворяется при комнатной температуре, поэтому ее необходимо нагреть. Разогревайте агарозу в микроволновой печи с шагом 30 секунд, осторожно покачивая колбу между каждым нагреванием.

г. Продолжайте нагревать, пока вся агароза не растворится.

ВНИМАНИЕ:

· Колба Эрленмейера будет очень горячей! Используйте средства индивидуальной защиты, такие как очки и толстые перчатки или рукавицы для духовки, так как агароза может перегреться и закипеть.

· Перелив агарозы может вызвать ожоги.

· Подождите, пока агароза перестанет кипеть, прежде чем вынимать ее из микроволновой печи.

5. Подождите, пока раствор агарозы остынет до 55 ° C.

6. Добавьте краситель ДНК.Мы будем использовать 10 000-кратное окрашивание ДНК SYBR Safe. Используя микропипетку на 10 мкл, добавьте 4 мкл SYBR Safe в колбу Эрленмейера и осторожно встряхните, чтобы перемешать. См. Подробности в разделе расчетов ниже.

7. Вылейте гель агарозы в лоток для геля, созданный на шаге 1, пока агароза не окажется на расстоянии 2–4 мм от вершины зубцов гребня.

8. Дайте гелю остыть и затвердеть. Это займет около 20 минут. Он изменится с прозрачного на непрозрачный, а после застывания будет покачиваться, как желатин.

9. Снимите гребешок, осторожно потянув его вверх и вынув из лунок.

10. Снимите литниковые ворота, потянув их вверх.

ПРИМЕЧАНИЕ:

· Если ваш лабораторный период короткий, вы можете здесь остановиться. Оберните лоток для геля влажным бумажным полотенцем, закройте полиэтиленовый пакет и поместите в холодильник до следующего лабораторного периода.

11. Добавьте 1X TAE буфер в камеру для гель-электрофореза. Заполните оба резервуара на каждом конце камеры и покройте гель примерно на 2 мм.На этом этапе камера для гель-электрофореза будет очень заполнена, поэтому будьте осторожны, чтобы не пролить!

12. Вам необходимо покрасить образцы ДНК, чтобы вы могли видеть, как ДНК перемещается по гелю.

а. В чистую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл добавьте 10 мкл образца ДНК.

г. Добавьте 2 мкл красителя 6X в ту же пробирку для микроцентрифуги. Аккуратно перемешайте пипеткой вверх и вниз, чтобы тщательно перемешать.

13. Теперь, наконец, пора загрузить образцы.

а. В первую лунку добавьте от 5 до 10 мкл лестницы ДНК.

г. В следующие несколько лунок добавьте до 12 мкл образцов окрашенной ДНК из шага 12. Добавляемое количество может варьироваться, поскольку размер образца зависит от размера гребня, который вы использовали на шаге 2.

14. Закройте крышку. верх камеры с крышкой для гель-электрофореза, убедившись, что красный контакт взаимодействует с красным электродом, а черный контакт взаимодействует с черным электродом.

15. Подключите камеру для электрофореза к источнику питания, подключив провода к портам с цветовой кодировкой на передней панели источника питания: красный с красным и черный с черным.

16. Используя источник питания, установите его на 15–30 минутную работу при 100 В и нажмите кнопку работы. Как только на камеру для гель-электрофореза будет подано питание, вы должны увидеть завесу из пузырьков на черном электроде. Вы также можете увидеть гораздо более тонкую завесу пузырьков на красном электроде.

17. Следите за своим гелем, когда он течет. Возможно, вам придется преждевременно завершить цикл, если кажется, что полоски приближаются к концу геля. Если они упадут с геля, они исчезнут навсегда.Вы можете проверить гель в УФ-свете. Если они плохо разделились, поместите гель обратно в камеру и продолжайте работать.

18. После того, как гель перестанет течь, выключите источник питания, снимите электроды с источника питания и осторожно снимите крышку.

19. Извлеките гель и лоток для геля из камеры для гель-электрофореза. Не вынимайте его из лотка для геля. Это будет очень скользко из-за буфера TAE, поэтому будьте осторожны. Если он сломается или разорвется, проявите терпение — это может быть трудная техника, и вы учитесь!

20.Сдвиньте гель с лотка для геля на сухое бумажное полотенце или большую лодку для взвешивания. Поздравляю! Вы только что нанесли гель из агарозы!

21. Чтобы полосы были четко видны, направьте УФ-лучи на гель. Вы должны увидеть полосы лестницы и образцы ДНК, как только УФ-свет попадет на ДНК.

Результатов:

Теперь, когда у вас есть гель в руке, пора выяснить, что означают эти полосы. На первой дорожке вы добавили лестницу ДНК размером 1 т.п.н. Каждая полоса на лестнице — это отрезок ДНК.По мере того, как гель течет, разные длины проходят быстрее или медленнее, в зависимости от того, насколько велики нити ДНК. Чем больше ДНК, тем медленнее они будут работать. Посмотрите на документы производителя, которые вы получили при заказе лестницы ДНК — в этих документах будут указаны размеры каждой полосы на лестнице. Если вы не можете найти его или выбросили, он должен быть доступен на веб-сайте производителя — просто введите в Google название вашей ДНК-лестницы.

Сопоставьте свои неизвестные ДНК с «ступенькой» на лестнице, и это покажет вам, насколько велика цепь ДНК.Например, если ваша цепь ДНК совпадает с «ступенькой» из 200 пар оснований на лестнице, то длина вашей цепи ДНК составляет около 200 пар оснований. Используя эту технику, теперь вы можете оценить длину ваших цепей ДНК и создать лаборатории на основе этой концепции! (Многие старшеклассники и студенты колледжей любят проводить лабораторию CSI Murder Mystery. )

Устранение неполадок:

· Моя агароза протекает, когда я пытаюсь вылить ее в лоток для геля.

o Поместите литниковые заслонки в морозильную камеру и добавьте их в камеру непосредственно перед добавлением раствора агарозы.

o Сильно надавите на литниковые ворота.

o Замените кастинговые ворота на другой набор.

o Используйте ленту или парафильм вместо литниковых ворот. Не забудьте удалить ее перед бегом, иначе лента расплавится и испортит ваши результаты.

o Проверьте места утечек, добавив воду из-под крана в центр камеры и посмотрев, откуда она выходит.

· Я не могу покрыть свой гель буфером TAE.

o Ваш гель слишком высокий.Вам придется выбросить старый гель и попробовать еще раз, используя немного меньше раствора агарозы. Вам не нужно использовать все это. Буфер TAE не испортится, если вы дотронетесь до него (даже если вы не в перчатках), так что вы можете использовать его повторно, пока не включили питание камеры.

· Сложно достать пробы в лунки.

o Наберитесь терпения, изучая эту технику. Эта часть может быть сложной для опытных лабораторных работников. Тревога и неопытность сделают руки дрожащими, поэтому дышите и относитесь к себе с пониманием во время обучения.Со временем станет легче.

o Доступны специальные длинные наконечники, которые могут помочь вам легче загружать образцы. Найдите «Наконечники для микропипеток с загрузкой геля».

o Держите правое запястье неподвижно левым при внесении образцов. (Или наоборот, если вы левша.)

o Действуйте очень медленно. По мере того, как вы добавляете ее в гель, ДНК погружается, поэтому вам не нужно вводить всю лунку. Пока самый кончик наконечника находится в лунке, вы можете добавить образец ДНК.

o Практика, практика, практика!

· Я включил блок питания и запустил его, но пузырей не вижу.

o Похоже, ваш блок питания сломан или поврежден. Посоветуйтесь с коллегой, видят ли они пузыри. Подождите несколько минут, чтобы увидеть, мигрируют ли полосы ДНК. В противном случае обратитесь к производителю за дополнительной помощью.

· Мой блок питания не включается.

o Вы его подключили? Он не питается от батареи, и для работы его необходимо подключить к розетке.

· Камера нагревается после начала работы.

o Немного тепла — это нормально, но если становится жарко, у тебя проблемы.Немедленно завершите цикл, дождитесь, пока буфер немного остынет, и снова запустите его при более низком напряжении. Оставайтесь ниже 200 вольт и уменьшите на 25 вольт, если все еще нагревается.

· Гель наносится слишком долго.

o Попробуйте уменьшить количество агарозы, добавляемой на шаге 4. Сделайте 0,8% или 0,6% гель вместо 1,0% геля.

o Попробуйте увеличить напряжение на шаге 15 до 125 или 150 вольт. Будьте очень осторожны, так как повышенное напряжение может привести к расплавлению геля и нагреву камеры.

o Оба этих приема повлияют на конечный результат, создав более размытую линию на геле.

· Мои результаты слишком расплывчаты.

o Попробуйте увеличить количество агарозы, добавляемой на шаге 4. Сделайте 1,2% или 1,4% гель вместо 1,0% геля. Это означает, что гель растекется дольше, но линия будет более четкой.

· Моя ДНК бегала в обратном направлении и от геля.

o Вы перепутали электроды на крышке или на источнике питания. Помните, что красный всегда сочетается с красным, а черный всегда сочетается с черным.

· Моя ДНК очень быстро переместилась вперед и вышла из геля.

o Вы добавили 1X TAE Buffer в камеру или дистиллированную воду? Добавление дистиллированной воды заставит гель растекаться очень и очень быстро и смазывать все оставшиеся полосы.

· Я остановил пробежку слишком рано, и полосы расположены слишком близко друг к другу.

o Поместите лоток с гелем обратно в камеру и дайте ей поработать еще 15 минут. Не забывайте следить за своим гелем, чтобы резинки не упали с конца!

· Я остановил пробежку слишком поздно, и полосы отвалились от конца геля.

o Перезапустите лабораторию с шага 1. Иногда вы можете получить несколько полос, которые еще не отвалились, но если все полосы исчезли, вы не можете их вернуть.

· Я не вижу полос на геле.

o Вы забыли добавить краситель ДНК на шаге 6 или не дождались, пока агароза остынет достаточно долго, и окраска ДНК была разрушена нагреванием.

· Я вижу лестницу ДНК, но не свои образцы ДНК.

o Образцы ДНК слишком малы, чтобы их можно было увидеть на геле. Попробуйте еще раз с более высокой концентрацией ДНК или большим количеством образцов ДНК, чтобы увидеть, поможет ли это.

· Я попытался устранить неполадки, но проблема не исчезла.

o Вы можете обратиться к производителю за помощью или зайти в Интернет и погуглить свою проблему. ResearchGate — это онлайн-форум, наполненный профессионалами, которые готовы ответить на любые ваши вопросы или проблемы, которые могут возникнуть.

Видео:

Изготовление геля из агарозы — https://www. youtube.com/watch?v=wXiiTW3pflM

Запуск геля из агарозы — https://www.youtube.com/watch?v=U2-5ukpKg_Q

Расчеты:

Шаг 3 — Изготовление 1X буфера TAE с помощью уравнения разбавления C1V1 = C2V2

Мы хотим, чтобы наш буфер перешел от большой концентрации к концентрации 1x.Мы будем использовать запасы в 50 раз, поэтому измените переменные, если ваша концентрация запасов или окончательный объем отличаются.

C1 = 50X C2 = 1X

V1 =? мл V2 = 500 мл

1. 50X • x мл = 1X • 500 мл

2. (x мл = 500 X • мл) / 50X

3. x мл = 10 мл 50X TAE

4. 500 мл — 10 мл 50X TAE = 490 мл дистиллированной воды

Итак, раствор представляет собой 10 мл 50X TAE и 490 мл дистиллированной воды.

Шаг 4 — Приготовление 40 мл 1,0% агарозного геля.

Этот гель имеет вес 1,0% от объема. Измените переменные, если ваша целевая концентрация или конечный объем отличаются.

1. (1,0 г агарозы / 100 мл раствора) = (xg агарозы / 40 мл раствора)

2. Перемножьте крест-накрест, чтобы получить:

(1,0 г x 40 мл) / 100 мл = 0,40 г агарозы

Итак, мы ‘ повторно отвешиваем 0,40 г агарозы для нашего геля.

Шаг 6 — Разведение 10,000X SYBR Safe до 1X с помощью уравнения разведения C1V1 = C2V2

Для того, чтобы окраска ДНК SYBR Safe работала правильно, его необходимо разбавить до 1X.Другое окрашивание ДНК может иметь другую начальную концентрацию, и если вы не готовите 40 мл раствора агарозы, эти переменные будут другими.

C1 = 10,000X C2 = 1X

V1 =? мл V2 = 40 мл

1. 10 000X • x мл = 1X • 40 мл

2. x мл = (40 X • мл / 10 000 X)

3. x мл = 0,004 мл SYBR Safe

4. 0,004 мл • (1000 мкл / 1 мл) = 4 мкл SYBR Safe

Таким образом, мы добавляем 4 мкл SYBR Safe к 40 мл раствора агарозы

Электрофорез в геле 101: Электрофорез в агарозном геле и документация

Электрофорез в агарозном геле — это метод, используемый в биохимии и молекулярной биологии для разделения смешанной популяции фрагментов ДНК и РНК по длине, оценки размера фрагментов ДНК и РНК или разделения белков по заряду. [1] Молекулы нуклеиновой кислоты разделяются путем приложения электрического поля для перемещения отрицательно заряженных молекул через матрицу агарозы. Более короткие молекулы движутся быстрее и мигрируют дальше, чем более длинные, потому что более короткие молекулы легче мигрируют через поры геля. Это явление называется просеиванием. [2] Белки разделяются зарядом в агарозе, потому что поры геля слишком велики, чтобы просеивать белки.

Приложения

• Оценка размера молекул ДНК после расщепления рестриктазой, e.грамм. при рестрикционном картировании клонированной ДНК.
• Анализ продуктов ПЦР, например в молекулярно-генетической диагностике или генетическом дактилоскопировании
• Разделение рестриктированной геномной ДНК перед переносом по Саузерну или РНК перед переносом по Саузерну.

Гели агарозы легко отливаются и обрабатываются по сравнению с другими матрицами, а нуклеиновые кислоты не изменяются химически во время электрофореза. Образцы также легко восстанавливаются. После окончания эксперимента полученный гель можно хранить в полиэтиленовом пакете в холодильнике.

Мини-резервуар для электрофореза в геле Galileo Bioscience или Owl Scientific может использоваться для запуска гелей ДНК

Как приготовить 1% агарозный гель: в небольшом химическом стакане смешайте 32 мл очищенной h3O, 4 мл 10-кратного буфера TBE или 10-кратного любого буфера, который будет использоваться в электрофорезе, и 0,4 г порошка агарозы. Нагрейте на горячей плите или в микроволновой печи, пока раствор почти не закипит (около 98 градусов Цельсия). Немедленно вылейте раствор в форму для электрофореза или ванночку для заливки геля Galileo Bioscience с неповрежденным гребнем с выемками (углублениями), дайте отстояться примерно на 30 минут или пока он не станет твердым.Будьте осторожны: идеально отформованный гель все равно очень хрупкий. Удалите выемку (хорошо) расческой аккуратно, но быстро. Если гель не предназначен для немедленного использования, заверните в полиэтилен и поместите в холодильник.

Электрофоретические методы имеют ограничения. Поскольку прохождение тока через гель вызывает нагревание, гели могут плавиться во время электрофореза. Электрофорез проводится в буферных растворах, чтобы уменьшить изменения pH из-за электрического поля, что важно, потому что заряд ДНК и РНК зависит от pH, но слишком долгая работа может истощить буферную способность раствора.Кроме того, разные препараты генетического материала могут не мигрировать согласованно друг с другом по морфологическим или другим причинам. Гель-электрофорез можно проводить с использованием системы гель-электрофореза Galileo Bioscience или аналогичных систем горизонтального гель-электрофореза.

Факторы, влияющие на миграцию нуклеиновых кислот

Самый важный фактор — это длина молекулы ДНК, меньшие молекулы перемещаются быстрее. Но конформация молекулы ДНК также является фактором. Чтобы избежать этой проблемы, обычно разделяют линейные молекулы, как правило, фрагменты ДНК из рестрикционного гидролизата, линейные продукты ПЦР ДНК или РНК.

Увеличение концентрации агарозы в геле снижает скорость миграции и позволяет разделить более мелкие молекулы ДНК. Чем выше напряжение, тем быстрее движется ДНК. Но напряжение ограничено тем фактом, что он нагревает гель и в конечном итоге заставляет его плавиться. Высокое напряжение также снижает разрешение (от 5 до 8 В / см).

Конформации плазмиды ДНК, которая не была разрезана рестрикционным ферментом, будут двигаться с разной скоростью (от самой медленной до самой быстрой: разорванная или открытая кольцевая, линеаризованная или суперспиральная плазмида).

Визуализация: бромид этидия (EtBr) и красители

Наиболее распространенным красителем, используемым для того, чтобы сделать полосы ДНК или РНК видимыми для электрофореза в агарозном геле, является бромид этидия, обычно сокращенно EtBr. Он флуоресцирует в ультрафиолетовом свете при внедрении в ДНК (или РНК). Если пропустить ДНК через гель, обработанный EtBr, и визуализировать ее в УФ-свете, любая полоса, содержащая более ~ 20 нг ДНК, становится отчетливо видимой. Однако EtBr является известным мутагеном, поэтому доступны более безопасные альтернативы.

Даже кратковременное воздействие ультрафиолетового излучения на нуклеиновые кислоты приводит к значительному повреждению образца.Повреждение образца ультрафиолетом снижает эффективность последующих манипуляций с образцом, таких как лигирование и клонирование. Если ДНК будет использоваться после разделения на агарозном геле, лучше избегать воздействия ультрафиолетового света, используя источник возбуждения синего света, такой как ультратонкий трансиллюминатор синего света или ультрасветлый трансиллюминатор синего света от Syngene и доступные в Новой Англии. через New England BioGroup, LLC. Требуется синее возбудимое пятно, например, одно из красок SYBR Green или GelGreen.Гели с этим пятном можно визуализировать с помощью системы документации гелей Syngene, такой как U: Genius, InGenius, GENi и

.

Syngene, BioRad, UVP, Carestream Healthcare или другую систему документирования гелей можно использовать для документирования гелей и, если предлагается, анализа изображений.

G: КОРОБКА.

Синий свет также лучше подходит для визуализации, поскольку он безопаснее УФ (защита глаз не является таким важным требованием) и проходит через прозрачный пластик и стекло. Это означает, что окрашивание будет ярче, даже если возбуждающий свет проходит через стеклянные или пластиковые гелевые платформы.

SYBR Green I — еще один краситель дцДНК, производимый Invitrogen. Он более дорогой, , но в 25 раз более чувствительный и, возможно, более безопасный, чем EtBr, хотя нет данных, касающихся его мутагенности или токсичности для людей. [3] Гели с этим пятном можно визуализировать с помощью системы документации гелей Syngene, такой как U: Genius, InGenius, GENi и G: BOX.

SYBR Safe — это вариант SYBR Green, который, как было показано, имеет достаточно низкие уровни мутагенности и токсичности, чтобы считаться неопасными отходами в соответствии с U.S. Федеральные постановления. [4] Он имеет те же уровни чувствительности, что и EtBr, [4], но, как и SYBR Green, значительно дороже. Однако в странах, где безопасная утилизация опасных отходов является обязательной, затраты на утилизацию EtBr могут легко превысить начальную разницу в цене.

Поскольку ДНК, окрашенная EtBr, не видна в естественном свете, ученые смешивают ДНК с отрицательно заряженными загрузочными буферами перед добавлением смеси в гель. Буферы загрузки полезны, потому что они видны в естественном свете (в отличие от УФ-света для ДНК, окрашенной EtBr), и они осаждаются совместно с ДНК (что означает, что они движутся с той же скоростью, что и ДНК определенной длины).Ксилолцианол и бромфеноловый синий являются обычными загрузочными буферами; они работают примерно с той же скоростью, что и фрагменты ДНК длиной 5000 и 300 пар оснований соответственно, но точное положение зависит от процентного содержания геля. Другими менее часто используемыми маркерами прогресса являются Cresol Red и Orange G, длина которых составляет примерно 125 и 50 пар оснований.

Визуализации также можно добиться путем переноса ДНК на нитроцеллюлозную мембрану с последующим воздействием гибридизационного зонда. Этот процесс называется саузерн-блоттингом.

Процент агарозы и пределы разрешения

Электрофорез в агарозном геле в такой системе, как Galileo Bioscience или Thermo Owl Scientific, можно использовать для разделения фрагментов ДНК в диапазоне от 50 пар оснований до нескольких мегабаз (миллионов оснований) с использованием специализированного оборудования. Расстояние между полосами ДНК заданной длины определяется процентом агарозы в геле. Недостатком более высоких концентраций является длительное время работы (иногда дни).Вместо этого гели с высоким процентным содержанием агарозы следует обрабатывать с помощью электрофореза в импульсном поле (PFE) или электрофореза с инверсией поля.

Большинство агарозных гелей состоит из 0,7% (хорошее разделение или разрешение больших фрагментов ДНК размером 5–10 килобайт) до 2% (хорошее разрешение для небольших фрагментов 0,2–1 килобайт) агарозы, растворенной в буфере для электрофореза. Для разделения очень мелких фрагментов можно использовать до 3%, но в этом случае больше подходит вертикальный полиакриламидный гель. Гели с низким процентным содержанием очень непрочные и могут сломаться, когда вы попытаетесь их поднять.Гели с высоким процентным содержанием часто бывают хрупкими и не схватываются равномерно. 1% гели широко используются во многих областях.

Буферы

Существует ряд буферов, используемых для электрофореза в агарозе. Наиболее распространены: трис / ацетат / EDTA (TAE), трис / борат / EDTA (TBE) и борат лития (LB). TAE имеет самую низкую буферную емкость, но обеспечивает лучшее разрешение для большей ДНК. Это означает более низкое напряжение и больше времени, но более качественный продукт. LB является относительно новым и неэффективен для разрешения фрагментов размером более 5 кб; Однако из-за его низкой проводимости можно было использовать гораздо более высокое напряжение (до 35 В / см), что означает более короткое время анализа для обычного электрофореза.Разница в размере всего одной пары оснований может быть устранена в 3% агарозном геле с чрезвычайно низкой проводимостью среды (1 мМ бората лития) [5].

Анализ

После электрофореза гель освещают ультрафиолетовой лампой (обычно помещая ее в световой короб Syngene UV transilluminator, используя защитное снаряжение для ограничения воздействия ультрафиолетового излучения) для просмотра полос ДНК. Бромид этидия флуоресцирует красновато-оранжевым светом в присутствии ДНК. Полосу ДНК можно также вырезать из геля и затем растворить для извлечения очищенной ДНК.Затем гель обычно можно сфотографировать с помощью цифровой или поляроидной камеры. Хотя окрашенная нуклеиновая кислота имеет красновато-оранжевый цвет, изображения обычно отображаются в черно-белом цвете (см. Рисунки).

При исследовании гель-электрофореза

часто используются программные инструменты анализа изображений, такие как программное обеспечение для анализа изображений Syngene GeneTools, программное обеспечение Nonlinear Dynamincs TotalLab или Phoretix, NIH ImageJ, Bio-Rad Image Lab или программное обеспечение для анализа изображений Quantity One.

Типовой метод

Материалы

Обычно получают 10-30 мкл / образец фрагментов ДНК для разделения, а также смесь фрагментов ДНК (обычно 10-20) известного размера (после обработки с помощью маркеров размера ДНК из коммерческого источника или приготовленных вручную) .

• Буферный раствор, обычно буфер TBE или TAE 1.0x, pH 8,0
• Агароза
• Ультрафиолетовый флуоресцентный краситель, бромид этидия (5,25 мг / мл в h3O). Стандартный раствор будьте осторожны с этим. Можно использовать альтернативные красители, такие как SYBR Green.
• Перчатки из нитрилового каучука. Латексные перчатки плохо защищают от бромистого этидия
• Цветной маркер, содержащий краситель с низкой молекулярной массой, такой как «бромфеноловый синий» (для отслеживания хода электрофореза) и глицерин (чтобы сделать раствор ДНК более плотным, чтобы он погрузился в лунки геля).
• Штатив для геля, такой как беговая система для горизонтального гель-электрофореза Bio-Rad, Owl Scientific или Galileo Bioscience.
• А «гребешок»
• Блок питания
• УФ-лампа или УФ-лайтбокс, или система гель-документирования, такая как Syngene, Bio-Rad, UVP, Carestream Healthcare или другая система документации геля для визуализации ДНК в геле.

Препарат

Есть несколько методов приготовления гелей. Здесь показан общий пример. Другие методы могут отличаться используемой системой буферизации, размером загружаемого образца, общим объемом геля (обычно толщина остается постоянной, а длина и ширина меняются по мере необходимости).Большинство агарозных гелей, используемых в современной биохимии и молекулярной биологии, готовятся и работают в горизонтальном положении.

1. Сделайте 1% раствор агарозы в 100 мл TAE для типичных фрагментов ДНК (см. Рисунки). Раствор с концентрацией до 2–4% можно использовать, если вы анализируете небольшие молекулы ДНК, а для больших молекул можно использовать раствор с концентрацией всего 0,7%.
2. Осторожно доведите раствор до кипения, чтобы растворить агарозу, желательно в микроволновой печи.
3. Дайте раствору остыть примерно до 60 ° C при комнатной температуре или на водяной бане.Во время охлаждения перемешайте или покрутите раствор.

Носите перчатки отсюда, на , бромистый этидий — мутаген!

1. Добавьте 5 мкл бромистого этидия (из исходного раствора 10 мг / мл) на 100 мл раствора геля до конечной концентрации 0,5 мкг / мл. Будьте очень осторожны при обращении с концентрированным бульоном. Некоторые исследователи предпочитают не добавлять бромид этидия в сам гель, вместо этого вымачивая гель в растворе бромида этидия после работы, в этом случае раствор бромида этидия имеет конечную концентрацию 0.5 мкг / мл.
2. Перемешайте раствор для диспергирования бромида этидия, затем вылейте его в штатив для геля.
3. Вставьте гребешок с одной стороны геля на расстоянии примерно 5–10 мм от конца геля.
4. Когда гель остынет и станет твердым, осторожно снимите гребешок. Отверстия, которые остаются в геле, являются лунками или прорезями.
5. Поместите гель вместе со штативом в емкость с TAE. В буфер можно добавить бромид этидия той же концентрации. Гель должен быть полностью покрыт ТАЕ с прорезями на конце электрода, через которые будет проходить отрицательный ток.

Процедура

После приготовления геля с помощью микропипетки введите около 2,5 мкл окрашенной ДНК (также настоятельно рекомендуется использовать лестницу ДНК). Закройте крышку камеры для электрофореза и подайте ток (обычно 100 В в течение 30 минут с 15 мл геля). Цветной краситель в лестнице ДНК и образцах ДНК действует как «передняя волна», которая движется быстрее, чем сама ДНК. Когда «передняя волна» приближается к концу геля, ток прекращается. ДНК окрашивается бромидом этидия, после чего становится видимой в ультрафиолетовом свете.

1. Гель агарозы с тремя прорезями / лунками (S).
2. Введение лестницы ДНК (маркеров молекулярной массы) в первый слот.
3. ДНК-лестница введена. Ввод образцов во второй и третий слот.
4. Подается ток. ДНК движется к положительному аноду из-за отрицательных зарядов на ее фосфатной основе.
5. Маленькие нити ДНК движутся быстро, большие нити ДНК медленно движутся через гель. ДНК обычно не видна во время этого процесса, поэтому маркерный краситель добавляется к ДНК, чтобы избежать полного выхода ДНК из геля.Маркер-краситель имеет низкую молекулярную массу и мигрирует быстрее, чем ДНК, поэтому до тех пор, пока маркер не пройдет мимо конца геля, ДНК все еще будет в геле.
6. Добавьте цветной маркер на лестницу ДНК.

Список литературы

Крындушкин Д.С., Александров И.М., Тер-Аванесян М.Д., Кушниров В.В. (2003). «Агрегаты прионов [PSI +] дрожжей образованы небольшими полимерами Sup35, фрагментированными Hsp104». Журнал биологической химии 278: 49636. DOI: 10.1074 / jbc.M307996200.

Sambrook J, Russel DW (2001). Молекулярное клонирование: лабораторное руководство, 3-е изд. Лабораторный пресс Колд-Спринг-Харбор. Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк.

Гель-краситель на основе нуклеиновой кислоты SYBR Green I

4,0 4,1 SYBR Safe DNA Гель-краситель

↑ Brody, J.R., Kern, S.E. (2004): История и принципы проводящих сред для стандартного электрофореза ДНК. Анальная биохимия. 333 (1): 1-13. PMID 15351274 PDF

Информация об авторских правах

Эта статья распространяется под лицензией Creative Commons Attribution / Share-Alike License.Информацию об участниках см. В исходной статье в Википедии.

Он был адаптирован и модифицирован для коммерческого использования New England BioGroup, LLC в соответствии с Юридическим кодексом Creative Commons (Полная лицензия).

Об авторе

Электрофорез в агарозном геле — OpenWetWare

Электрофорез в агарозном геле используется для разделения молекул ДНК или РНК по размеру.Нуклеиновые кислоты заряжены отрицательно и перемещаются через матрицу агарозы под действием электрического поля (электрофорез). Более короткие молекулы движутся быстрее и мигрируют дальше.

Общие процедуры

1. Гель
2. Поместите его в контейнер с гелем в рабочий буфер
3. Загрузить образцы
4. Запустите гель
5. Изображение геля

Гели для литья

0,7% агарозный гель с лестницей 1kbp в УФ и белом свете, показывающий различные красители

Количество агарозы для использования в вашем геле зависит от рассматриваемой ДНК.Используйте следующую таблицу в качестве приблизительного руководства:

1. Отмерьте соответствующую массу агарозы в стакан с соответствующим объемом буфера (см. Ниже).Требуемый объем зависит от вашего гелевого бокса / литейной системы — из 50 мл получается хороший густой гель для гелевого бокса 7х10 см.
2. В микроволновой печи, пока агароза полностью не растает. Это сильно зависит от вашей микроволновой печи, но 90 секунд на полной мощности или 3 минуты на половинной мощности, кажется, обеспечивают достойные результаты. Пока вы не сжигаете агарозу и ничего не пузырится, этот шаг будет надежным.
3. Дайте агарозе остыть на скамейке, пока прикосновение к дну стакана голой рукой не приведет к ожогам (~ 5 минут для 50 мл геля).На этом этапе добавьте краситель ДНК, например, бромистый этидий. Стакан охлаждается неравномерно (сначала поверхность), поэтому будьте осторожны, чтобы не вызвать ряби и пузырей.
4. Пока раствор остывает, заклейте открытые края коробки с гелем по одному длинному куску малярной ленты с каждой стороны. Убедитесь, что он хорошо запечатан, иначе гель потечет.
5. Перелейте раствор агарозы в закрытый ящик для геля. Осторожно вытолкните или отодвиньте пузырьки в сторону, положите в гребень и дайте ему остыть примерно на 30 минут, пока гель не затвердеет.

Если ваш гель совсем пурпурный и вы используете бромистый этидий в качестве окрашивания ДНК, вам необходимо снизить концентрацию как минимум в десять раз.

Буферы

• TAE — лучшее разрешение фрагментов> 4кб;
• TBE — лучшее разрешение фрагментов 0,1-3кб; TBE лучше подходит для электрофореза под высоким напряжением (> 150 В), чем TAE, из-за его более высокой буферной емкости и более низкой проводимости;
• SB — Борат натрия — низкое тепловыделение с хорошим разрешением.Позволяет проводить электрофорез при более высоком напряжении (250-200 В) без плавления.

Загрузочные красители

краситель	0,5-1,5% агарозы	2,0-3,0% агарозы *
ксилолцианол	10’000-5000 п.н.	750 п. н.
бромфеноловый синий	400-500 п.н.	100 п.н.

* просеивание агарозы

рецепты см .: Краска для загрузки агарозного геля

Банкноты

• Если на геле появляются неожиданные полосы, возможно, стоит взглянуть на общие проблемы на странице электрофореза в агарозном геле.
• Если у вас нет опыта работы с гель-электрофорезом или вы объясняете это кому-то новичку, вот симпатичная демонстрация на java того, что происходит.
• Если ваша коробка с гелем не сделана из термочувствительных материалов, я счел этап охлаждения ненужным и рискованным, если вы легко отвлекаетесь.
• Часто количество используемого красителя можно значительно уменьшить, если добавить его непосредственно в образец ДНК, а не во весь гель. Так обстоит дело с зеленым SYBR.

См. Также

Специальные протоколы

Общие проблемы

Внешние ссылки

.