| Признаки | Муковисцидоз | Астма | Целиакия | Врожденые пороки легких |
| Начало заболевания | Вскоре после рождения | Позже | Чаще после 6 мес., до 2-3 лет | Чаще в период новорожденности и в первые месяцы жизни |
| Масса тела при рождении | Часто низкая | Нормальная | Нормальная | Средняя/ Ниже средней |
| Семейная предрасположенность | Часто подобное заболевание у двоюродных братьев и сестер | Наследственная отягощенность по аллергии, атопии. | Иногда наблюдается у родителей | Нет |
| Акушерский анамнез | Отягощенный акушерский анамнез: мертворождение, выкидыши, наличие больного с МВ в семье | Без особенностей | Без особенностей | Интеркуррентные заболевания матери в первом триместре беременности |
| Заболевания органов дыхания | Тяжелые поражения бронхолегочной системы, трудно поддающиеся лечению с момента рождения | Внезапно, связано с экспозицией аллергена. Быстрое облегчение симптомов самостоятельно или под воздействием терапии | Может быть вялотекущая пневмония, поддающаяся комплексному лечению | Характерно, поддается лечению |
| Аппетит | Хороший, повышен | Не изменен | Снижен | Не изменен |
| Поражение печени | Часто | Не характерно | Не характерно | Не характерно |
| Гипотрофия | С первых месяцев жизни, постепенно нарастая до II- III степени | Не характерно | Обычно со второго полугодия, быстро прогрессирует | Редко |
| Соленый привкус кожи | Характерно | Не характерно | Не характерно | Не характерно |
| Симптом «барабанных палочек» | Чаще в раннем возрасте | Не характерно | Не характерно | Развивается позже |
| Неврологический статус | Без отклонений | Без отклонений | Раздражительность, мышечная гипотония, судороги | Без отклонений |
| Лабораторно-диагностический тест | Повышение уровня хлоридов в поте, стеаторея с преобладанием нейтрального жира | Повышение Ig Е | Нарушение всасывания углеводов, жиров, белков, повышение IgA в крови | Не характерно |
| Белковый обмен | Гипопротеинемия | В норме | Тяжелая гипопротеинемия | В норме |
| IgA, Ig G, Ig M | В норме | В норме | Повышение IgA | В норме |
| Исследование кала | Жидкий, светло-желтый, глинистый, жирный, «зловонный» | Без особенностей | Обильный, разжиженный, светло-желтый, гнилостный | Без особенностей |
| Нейтральный жир | В большом количестве | Отсутствует | В небольшом количестве | Не характерен |
| Трипсин | Резко снижен до полного отсутствия | В норме | Умеренно снижен | Нормальный |
| Мутации гена CFTR | Да | Нет | Нет | Нет |
| Хлориды в потовой жидкости | Повышены | В норме | В норме | В норме |
| Рентгенологическое исследование грудной клетки и желудочно-кишечного тракта | Деформация бронхолегочного рисунка, ателектазы, пневмофиброз, бронхоэктазы в ранние сроки болезни | Признаки эмфиземы в поздних стадиях | Без особенностей | Подвижность и пролабирование задней стенки трахеи, признаки гипоплазии |
| Дискинезия тонкой кишки, рельеф слизистой оболочки грубый, «спикулы» псевдодивертикул, большое количество слизи в кишечнике | Без особенностей | Расширение петель кишечника, гипотония, дискинезия кишечника, горизонтальные уровни жидкости | Без особенностей | |
| Спирография | Смешанный тип нарушения вентиляции | Обструктивный тип нарушения вентиляции | Без особенностей | При малых пороках без особенностей, при больших — рестриктивный тип нарушения |
| Бактериологическое исследование мокроты | Стафилококковая, гемофильная, синегнойная инфекции с раннего возраста | Без особенностей | Без особенностей | Чаще пневмококк, м.б. микробные ассоциации, госпитальные штаммы |
| Прогноз | Тяжелый, часто погибают в детском возрасте от дыхательной недостаточности, поражения печени, инфекционных осложнений. | Благоприятный | Благоприятный | Благоприятный |
Признаки | Муковисцидоз | Астма | Целиакия | Врожденные пороки легких |
| Клинические | ||||
Начало заболевания | Вскоре после рождения | Позже | Чаще после 6 мес., до 2-3 лет | Чаще в период новорожденности и в первые месяцы жизни |
Масса тела при рождении | Часто низкая | Нормальная | Нормальная | Ниже средней |
| Семейная предрасположенность | Часто бывает подобное заболевание у двоюродных братьев и сестер | Наследственная отягощенность по аллергическим заболеваниям. Атопический дерматит, лекарственная и пищевая аллергия у сибсов | Иногда наблюдается у родителей | Нет |
| Акушерский анамнез | Отягощенный акушерский анамнез: мертворождение, выкидыши, наличие больного с МВ в семье | Без особенностей | Без особенностей | Итеркуррент-ные заболевания матери в первом триместре беременности |
| Склонность к заболеваниям органов дыхания | Тяжелые поражения бронхо-легочной системы, трудно поддающиеся лечению с момента рождения | Внезапно после и \или во время экспозиции аллергенов Быстрое облегчение состояние после приема сальбутамола | Может быть вялотекущая пневмония, поддающаяся комплексному лечению | Характерно, к лечению поддается |
Аппетит | Обычно хороший, чаще повышен | Не страдает | Снижен | Не снижен |
Поражение печени | Наблюдается часто | Не характерно | Не характерно | Не характерно |
| Гипотрофия | Отмечается с первых месяцев жизни, постепенно нарастая до II- III степени | Не характерно | Развивается во втором полугодии, но быстро прогрессирует до III степени | Редко |
Соленый привкус кожи | Характерно | Не характерно | Не характерно | Не характерно |
Симптом «барабанных палочек» | Чаще в раннем возрасте | Не характерно | Не характерно | Развивается позже |
Неврологическая симптоматика | Не характерна | Не характерно | Раздражительность, мышечная гипотония, иногда судороги | Не характерна |
| Лабораторно-диагностический тест | Повышение уровня хлоридов в поте, стеаторея с преобладанием нейтрального жира | Повышение ИГ Е в сыворотке крови | Универсальное нарушение всасывания углеводов, жиров, белков, повышение содержания IgA в сыворотке крови в период обострения | Не характерно |
| Лабораторные | ||||
Общий белок сыворотки крови | Гипопротеинемия | В норме | Тяжелая гипопротеинемия | В норме |
| IgA, Ig G, Ig M | В норме | В норме | Повышение содержания IgA в 2 раза при обострении | В норме |
| Исследование кала | Жидкий, светло-желтый, глинистый, жирный, «зловонный» | Без особенностей | Обильный, пышный, разжиженный, светло-желтый с гнилостным запахом, Рн>5 | Без особенностей |
Нейтральный жир | В большом количестве | Отсутствует | В небольшом количестве | Не характерен |
Трипсин | Резко снижен до полного отсутствия | В норме | Умеренно снижен | Нормальный |
| Исследование ДНК на мутации молекулярно-генетический методом на МВ | положительный | Отрицательный | Отрицательный | Отрицательный |
Хлориды в потовой жидкости | Повышены | В норме | В норме | В норме |
| Рентгенологическое исследование грудной клетки и желудочно-кишечного тракта | Деформация бронхолегочного рисунка, ателектазы, пневмофиброз, бронхоэктазы развиваются в ранние сроки болезни | Признаки эмфиземы в поздних стадиях | Без особенностей | подвижность и пролабирование задней стенки трахеи, признаки гипоплазии |
| Дискинезия тонкой кишки, рельеф слизистой оболочки грубый, «спикулы» или псевдодивертикулы, большое количество слизи в просвете кишечника | Без особенностей | Расширение петель кишечника, явления гипотонии, Дискинезии кишечника, горизонтальные уровни жидкости | Без особенностей | |
| Спирография | Смешанный тип нарушение вентиляции с доминированием рестрикции | Обструктивный тип нарушение вентиляции | Без особенностей | При малых пороках без особенностей, при больших пороках рестриктивный тип нарушение |
| Бактериологическое исследование мокроты | Хроническое носительство стафилококковой, гемофильной, синегнойной инфекции с 6 мес.жизни | Без особенностей | Без особенностей | Пневмококк |
| Прогноз | Тяжелый, чаще погибают в первые 3 года жизни | Благоприятный | Благоприятный | Благоприятный |
Об утверждении перечня медицинских и эпидемиологических показаний к размещению пациентов в маломестных палатах (боксах)
ПРИКАЗ от 15 мая 2012 г. N 535н МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
В соответствии со статьей 80 Федерального закона от 21 ноября 2011 г. N 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» (Собрание законодательства Российской Федерации, 2011, N 48, ст. 6724) приказываю:
Утвердить перечень медицинских и эпидемиологических показаний к размещению пациентов в маломестных палатах (боксах) согласно приложению.
И.о. Министра Т.А.ГОЛИКОВА
Приложение к приказу Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 15 мая 2012 г. N 535н
ПЕРЕЧЕНЬ МЕДИЦИНСКИХ И ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАНИЙ К РАЗМЕЩЕНИЮ ПАЦИЕНТОВ В МАЛОМЕСТНЫХ ПАЛАТАХ (БОКСАХ)
N п/п | Наименование показаний | Код диагноза по МКБ-10 <*> |
Медицинские показания к размещению пациентов в маломестных палатах (боксах) | ||
1. | Болезнь, вызванная вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) | B 20 — B 24 |
2. | Кистозный фиброз (муковисцидоз) | E 84 |
3. | Злокачественные новообразования лимфоидной, кроветворной и родственных тканей | C 81 — C 96 |
4. | Термические и химические ожоги | T 2 — T 32 |
5. | Заболевания, вызванные метициллин (оксациллин) — резистентным золотистым стафилококком или ванкомицинрезистентным энтерококком: |
|
5.1. | Пневмония | J 15.2, J 15.8 |
5.2. | Менингит | G 00.3, G 00.8 |
5.3. | Остеомиелит | M 86, B 95.6, B 96.8 |
5.4. | Острый и подострый инфекционный эндокардит | I 33.0 |
5.5. | Инфекционно-токсический шок | A 48.3 |
5.6. | Сепсис | A 41.0, A 41.8 |
5.7. | Недержание кала (энкопрез) | R 15, F 98.1 |
5.8. | Недержание мочи | R 32, N 39.3, N 39.4 |
5.9. | Заболевания, сопровождающиеся тошнотой и рвотой | R 11 |
Эпидемиологические показания к размещению пациентов в маломестных палатах (боксах) | ||
| Некоторые инфекционные и паразитарные болезни | A 00 — A 99, B 00 — B 19, B 25 — B 83, B 85 — B 99. |
———————————
<*> Международная статистическая классификация болезней и проблем, связанных со здоровьем, 10 пересмотра.
Современные возможности контроля синегнойной инфекции при муковисцидозе uMEDp
Pseudomonas aeruginosa является наиболее распространенным патогеном, вызывающим хроническую инфекцию при муковисцидозе. Эрадикация P. aeruginosa признана стандартом терапии в мире. Между тем вопрос об эффективных режимах остается дискутабельным. Сегодня на российском фармацевтическом рынке представлены различные формы ингаляционного тобрамицина, позволяющие успешно контролировать и лечить инфекцию P. aeruginosa при муковисцидозе. Применение тобрамицина улучшает легочную функцию, снижает количество высеваемых штаммов P. aeruginosa, количество госпитализаций и необходимость употребления других антибиотиков.
Таблица. Определение хронической инфекции P. aeruginosa
Муковисцидоз относится к редким (орфанным) болезням: в России встречается менее чем у 10 больных на 100 000 населения. Муковисцидоз, или кистозный фиброз поджелудочной железы (код по Международной классификации болезней 10-го пересмотра Е84.0–84.9), – это моногенное заболевание с аутосомно-рецессивным типом наследования, характеризующееся поражением всех экзокринных желез. Его частота варьирует в разных популяциях среди представителей белой расы от 1:377 новорожденных в ряде графств Англии до 1:90 000 у азиатов на Гавайях. В России частота муковисцидоза в среднем превышает 1:10 000 новорожденных в зависимости от географической принадлежности. Риск рождения больного муковисцидозом в семье гетерозиготных (здоровых) носителей составляет 25%. Гетерозиготным носителем является каждый двадцатый европеец [1].
В пульмонологических педиатрических стационарах больные муковисцидозом составляют обычно 10–15%. Повышение средней продолжительности жизни больных (более 35 лет в нашей стране) при ранней инвалидизации требует оптимизации постоянно проводимого лечения.
Достижения клинической практики за последние 40 лет позволили значительно увеличить продолжительность жизни пациентов с муковисцидозом [2]. Сегодня в ряде европейских стран медиана выживаемости таких пациентов колеблется между 30 и 40 годами [3].
Решающими факторами, предопределяющими прогноз заболевания, являются прежде всего контроль над легочной инфекцией и достижения в области питания. Однако 95% пациентов с муковисцидозом умирают вследствие дыхательной недостаточности.
Pseudomonas aeruginosa – наиболее распространенный патоген, вызывающий хроническую инфекцию при муковисцидозе. Хроническая инфекция P. aeruginosa развивается у большинства пациентов с муковисцидозом. К взрослому возрасту насчитывается порядка 80% таких больных, и хроническая инфекция P. aeruginosa является основной причиной повышения смертности [4].
Выявление хронической инфекции Pseudomonas aeruginosa
В настоящее время общепринятых способов выявления хронической инфекции P. aeruginosa не существует. Большинство используемых методов базируется на результатах микробиологического посева культур мокроты. Однако современная помощь пациентам с муковисцидозом, особенно успехи протоколов терапии ранней инфекции, лишают подобные методы актуальности.
Хроническая инфекция может быть определена как инфекция, которая персистирует несмотря на терапию и иммунный противовоспалительный ответ организма. Более того, в противоположность бактериальной хроническая колонизация характеризуется персистирующей патологией и ответом иммунной системы. Данный подход требует, в частности, измерения уровня антител к P. аeruginosa. Способы определения хронической инфекции P. aeruginosa при муковисцидозе, применяемые ранее как в практических, так и в исследовательских целях, приведены в таблице [5–7].
У пациентов с муковисцидозом хроническая эндобронхиальная инфекция P. aeruginosa ассоциирована с большей частотой легочного обострения, снижением функции легких и высоким процентом смертности [8].
Ранние штаммы P. aeruginosa высокочувствительны к антибиотикам и присутствуют в низких концентрациях. Таким образом, эрадикация P. aeruginosa возможна до того, как инфекция станет хронической [9].
Пионером в области терапии ранней инфекции P. aeruginosa является клиника муковисцидоза Дании. Наблюдения показали, что ранняя антибактериальная терапия улучшает долгосрочные исходы [10].
Последние 20 лет в мире с большим успехом применяются ингаляционные антибиотики, заменившие традиционные курсы парентеральной антибактериальной терапии при первом высеве P. aeruginosa и ставшие основными в базисной терапии хронической инфекции [11].
Ингаляционный путь введения позволяет создать высокие концентрации препарата непосредственно в очаге инфекции и преодолеть резистентность микроорганизмов при низком риске системных побочных эффектов.
На сегодняшний день антибиотики для ингаляционного введения представлены в первую очередь тобрамицином и полимиксином. За рубежом применяют также раствор азтреонама [12].
Эрадикация P. aeruginosa признана стандартом терапии в мире. Между тем вопрос об эффективных режимах остается дискутабельным. Например, во многих европейских странах широко распространена комбинация ингаляций раствора колистина и пероральной формы ципрофлоксацина (обычно в течение трех месяцев). В то же время в Северной Америке 28-дневный курс ингаляций раствором тобрамицина считается наиболее применимым антибиотиком в сочетании с ципрофлоксацином в пероральной форме или без такового [13].
Колистиметат натрия – циклический полипептидный антибиотик, производное Bacillus polymyxa varietas colistinus, относится к группе полимиксинов. Благодаря катионной природе полимиксиновые антибиотики повреждают клеточные мембраны и оказывают бактерицидное действие в отношении грамотрицательных бактерий. Важный момент: даже при длительном ингаляционном применении препарата к нему практически не развивается резистентность P. aeruginosa [11].
Тобрамицин. Аминогликозид тобрамицин – антибактериальный препарат, который ингибирует синтез белка, необратимо связываясь с бактериальной рибосомой 30S. Он эффективен в отношении большинства грамотрицательных бактерий. Применение тобрамицина для ингаляций у больных муковисцидозом оправдано с точки зрения доказательной медицины и рекомендовано международными руководствами по лечению инфекции легких, вызванной P. aeruginosa [14]. В настоящее время на российском рынке раствор тобрамицина для ингаляций представлен несколькими лекарственными формами.
Тоби Подхалер – инновационный препарат, обладающий всеми достоинствами классического варианта раствора тобрамицина. Тоби Подхалер представляет собой капсулы с порошком для ингаляций; 28 мг тобрамицина в виде активного вещества (ПульмоСферы) упакованы в капсулы и распыляются из портативного порошкового ингалятора Т-326. Рекомендованная доза для больных муковисцидозом – четыре капсулы два раза в день. То есть общая дневная доза составляет 224 мг тобрамицина.
В течение последних нескольких лет опубликованы результаты ряда важных клинических исследований, касающихся терапии ранней инфекции P. aeruginosa.
В ходе четырех исследований был сделан вывод: 28-дневный курс терапии ингаляционной формой тобрамицина в целом эффективен для эрадикации P. aeruginosa. Более длительные и повторные курсы терапии ингаляций тобрамицина с добавлением пероральной формы ципрофлоксацина или использование в течение трех месяцев ингаляций колистина в сочетании с пероральным ципрофлоксацином неэффективны.
1. В исследовании ELITE (сравнение 28- и 56-дневного курса ингаляционной формы тобрамицина для терапии ранней инфекции P. aeruginosa) применяли два режима терапии ингаляционной формой тобрамицина. Всего рандомизировано 88 пациентов, включено 65 человек. Результаты показали высокую эффективность ингаляционной формы тобрамицина в эрадикации P. aeruginosa при ее первом высеве как при 28-дневном, так и при 56-дневном курсе. Доказано преимущество короткого курса перед более длительным [15].
2. В исследовании EPIC сравнивали четыре режима, включая ингаляционную форму тобрамицина, терапии ранней инфекции P. aeruginosa. Цель исследования – сравнить лечение, назначаемое четыре раза в год независимо от результатов посева мокроты (culture-based), и терапию, назначаемую только при положительном высеве P. aeruginosa четыре раза в год (cycled therapy) в сочетании с системным (ципрофлоксацин) и ингаляционным (раствор тобрамицина для ингаляций) антибиотиком. 304 пациента были поровну рандомизированы на четыре группы:
- первая: циклический раствор тобрамицина для ингаляций и ципрофлоксацин перорально;
- вторая: циклический раствор тобрамицина для ингаляций и плацебо перорально;
- третья: раствор тобрамицина для ингаляций только при положительном высеве и ципрофлоксацин перорально;
- четвертая: раствор тобрамицина для ингаляций только при положительном высеве и плацебо перорально.
Циклическая терапия предусматривала применение раствора тобрамицина по 300 мг два раза в сутки в течение 28 дней и ципрофлоксацина по 15–20 мг/кг два раза в сутки или плацебо перорально первые 14 дней.
Исследование показало, что оба вида терапии одинаково эффективны в отношении таких клинических точек, как обострение, функция легких, а также в отношении результатов микробиологического мониторинга. Все режимы терапии оказались высокоэффективными. Добавление ципрофлоксацина к ингаляционной форме тобрамицина не отразилось на улучшении результата лечения. Монотерапия ингаляционным тобрамицином так же эффективна, как и более агрессивные схемы лечения ранней инфекции P. aeruginosa [16].
3. Исследование эффективности раствора тобрамицина для ингаляций совместно с пероральной формой ципрофлоксацина с эффективностью раствора колистина для ингаляций с пероральной формой ципрофлоксацина для терапии ранней инфекции P. aeruginosa. Исследование проводилось в 2008–1013 гг. Всего участвовало 223 пациента. Из них 105 составили группу колистина и ципрофлоксацина, 118 – группу тобрамицина и ципрофлоксацина. Около 50% пациентов каждой группы имели предшествующую инфекцию P. aeruginosa до начала курса. Эрадикация инфекции (три отрицательных анализа в течение последующих шести месяцев) составила 63% в группе колистина и ципрофлоксацина и 65% – в группе тобрамицина и ципрофлоксацина. Как показали результаты, 28-дневный курс ингаляций колистина и терапия тобрамицином совместно с пероральным ципрофлоксацином одинаково эффективны [17].
4. В исследовании с участием 58 пациентов (29 в каждой группе) сравнивали эффективность тобрамицина для ингаляций в течение 28 суток с таковой ингаляционного колистина и пероральной формы ципрофлоксацина в течение трех месяцев в терапии ранней инфекции P. aeruginosa. Эрадикация в конце курса лечения была схожей: 90% в группе ципрофлоксацина и колистина и 79% – в группе тобрамицина. Как показали результаты, трехмесячная терапия ингаляционным колистином вместе с пероральной формой ципрофлоксацина и 28-дневный курс монотерапии тобрамицином имеют высокую и схожую эффективность с 80–90%-ной эрадикацией P. aeruginosa по окончании курса лечения [18].
Исследования порошковой формы тобрамицина
Рандомизированное двойное слепое плацебоконтролируемое мультицентровое исследование эффективности и безопасности порошковой формы тобрамицина (TIP) EVOLVE. TIP сравнивали с плацебо в течение трех 28-дневных курсов лечения с 28-дневным интервалом. Дизайн первого курса: рандомизированное двойное слепое плацебоконтролируемое исследование. Дизайн последующих: открытые перекрестные исследования, в которых пациенты группы плацебо начинали получать активную терапию. В исследовании участвовало 140 больных муковисцидозом с хронической инфекцией P. aeruginosa. Конечной точкой являлся показатель объема форсированного выдоха за первую секунду (ОФВ1) на 28-й день терапии.
Показано, что ингаляции порошковой формы тобрамицина в дозе 112 мг были эффективны и хорошо переносились пациентами с инфекцией P. aeruginosa. Применение тобрамицина улучшало легочную функцию, снижало количество высеваемых штаммов P. aeruginosa, уменьшало количество госпитализаций и использования других антибиотиков (по сравнению с группой плацебо). Достигнутое повышение показателя ОФВ1 сохранялось при последующих циклах лечения [19].
Рандомизированное многоцентровое открытое исследование EAGER. Пациенты с муковисцидозом в соотношении 3:2 были рандомизированы на группу TIP (tobramycin inhalation solution) 112 мг и группу раствора тобрамицина для ингаляций TOBI 300 мг/5 мл. Длительность терапии составила три цикла по 28 дней каждый с последующим 28-дневным перерывом. Всего в исследовании участвовало 517 пациентов: 308 вошли в группу TOBI, 209 – в группу TIP. Как показали результаты исследования, TIP хорошо переносился пациентами и был схож с TOBI в терапии хронической инфекции P. aeruginosa у пациентов с муковисцидозом, профиль безопасности также схож с TOBI [20].
Брамитоб. Антибиотик предназначен для базисной терапии больных муковисцидозом с инфицированием дыхательного тракта P. aeruginosa. Один пластиковый флакон ингаляционной формы препарата содержит 300 мг тобрамицина в 4 мл (75 мг/мл) 0,45%-ного раствора хлорида натрия (рН = 5,5). Проведено несколько убедительных исследований эффективности и безопасности данной формы раствора тобрамицина.
Рандомизированное двойное слепое плацебоконтролируемое исследование эффективности и безопасности раствора тобрамицина. В исследовании участвовали 59 пациентов в возрасте ≥ 6 лет с муковисцидозом и инфекцией P. aeruginosa. Препарат назначали на четыре недели с последующим четырехнедельным периодом отмывки washout. Результаты показали статистически значимое улучшение ОФВ1 и микробиологических показателей, а также хорошую переносимость и безопасность препарата (по сравнению с плацебо) [21].
Рандомизированное двойное слепое плацебоконтролируемое исследование эффективности и безопасности препарата. В исследовании приняло участие 247 пациентов в возрасте ≥ 6 лет с муковисцидозом и хронической инфекцией P. aeruginosa. Пациенты получали ингаляции раствором тобрамицина в течение шести месяцев (три on-/off-цикла по 28 дней). Результаты показали улучшение показателей ОФВ1 и микробиологических параметров, уменьшение частоты госпитализаций, применения парентеральных антибиотиков и количества дней пропуска школы/рабочих дней, увеличение индекса массы тела (ИМТ) (по сравнению с плацебо) [22].
Рандомизированное открытое сравнительное исследование (CT-03, прямое сравнительное исследование vs Тоби). В исследование включено 324 пациента в возрасте ≥ 6 лет с муковисцидозом и хронической инфекцией P. aeruginosa. Пациенты получали четрехнедельную терапию с последующим четырехнедельным периодом отмывки washout. Результаты продемонстрировали улучшение ОФВ1, сопоставимое с Тоби (без статистически значимых различий). Снижение плотности обсемененности мокроты, сопоставимое с Tоби (без статистически значимых различий). Отмечался схожий профиль безопасности.
Открытое исследование (пациенты, включенные в исследование CT-03, продолжили терапию препаратом Брамитоб в течение 48-недель). В исследовании участвовали 209 пациентов в возрасте ≥ 6 лет с муковисцидозом и хронической инфекцией P. aeruginosa. Длительность – 48 недель (шесть дополнительных on-/off-циклов по 28 дней). Результаты: улучшение параметра ОФВ1, достигнутое в ходе исследования CT-03, сохранялось на фоне лечения в течение 48 недель (дополнительно) препаратом Брамитоб. Хороший профиль безопасности подтвержден в течение одногодичного исследования [23].
Имеются публикации, свидетельствующие об эффективном применении указанных форм тобрамицина и в Российской Федерации [24, 25].
Тобрамицин—Гобби. Раствор тобрамицина показан для терапии инфекции дыхательных путей, вызванной P. aeruginosa при муковисцидозе. Назначается пациентам в возрасте ≥ 6 лет в дозе 300 мг/5 мл два раза в сутки, курс – 28 дней. Проведена сравнительная оценка по спектру антибактериального действия лекарственных препаратов тобрамицина (растворы для ингаляций): Тобрамицин-Гобби («Гобби Новаг С.А.», Аргентина), Тоби (раствор для ингаляций 60 мг/мл) («Кардинал Хелс Инк», США). В работе были использованы 75 клинических изолятов микроорганизмов из коллекции Государственного научного центра по антибиотикам и эталонные штаммы Staphylococcus aureus АТСС 29213, Escherichia coli АТСС 25922, P. aeruginosa АТСС 27853. Показано, что лекарственные формы Тобрамицина-Гобби (раствор для ингаляций 60 мг/мл) и Тоби (раствор для ингаляций 60 мг/мл) идентичны по спектру антибактериального действия [26].
В отделении пульмонологии и аллергологии Научного центра здоровья детей раствор для ингаляций 60 мг/мл Тобрамицина-Гобби впервые был назначен в 2011–2012 гг. четырем детям (возраст 3–5 лет) с муковисцидозом и хронической инфекцией P. aeruginosa. Терапия включала в себя повторные курсы внутривенной антибактериальной терапии двумя препаратами: бета-лактамами и аминогликозидами (длительность 14 дней) в сочетании с ингаляциями раствора тобрамицина. Родители пациентов подписали информированное согласие на проведение терапии. Терапия раствором тобрамицина назначалась по общепринятой схеме: 28 дней – терапия, 28 дней – перерыв. Проведено шесть курсов терапии, то есть общий срок лечения составил 12 месяцев. Микробиологический мониторинг мокроты проводили после каждого курса терапии (каждые 56 дней). Один пациент прекратил терапию после второго курса из-за выраженного кашля, трое были пролечены в течение года с хорошей переносимостью препарата. Регулярный мониторинг мокроты показал, что эрадикация (отсутствие роста P. aeruginosa в образцах мокроты в течение 12 месяцев) достигнута у всех трех пациентов и длилась 27, 28 и 29 месяцев соответственно.
Заключение
Сегодня на российском фармацевтическом рынке представлены различные формы ингаляционного тобрамицина, позволяющие успешно контролировать и лечить инфекцию P. aeruginosa при муковисцидозе. Длительная ингаляционная терапия антисинегнойными препаратами входит в Стандарты терапии муковисцидоза, разработанные Европейским cообществом по муковисцидозу (ECFS – European Community Cystic Fibrosis) (пересмотр 2014 г.) [27], а также в Национальный консенсус по муковисцидозу (раздел «Антимикробная терапия») [28].
Медицинские показания и противопоказания для поступления в санаторий
18 декабря 2020
Перечень медицинских показаний для санаторно-курортного лечения детского населения
I. Медицинские показания для санаторно-курортного лечения детского населения при заболевании туберкулезом
(I класс по МКБ-10 1)
N п/п | Код заболевания по МКБ-10 | Наименование заболевания | Форма, стадия, фаза, степень тяжести заболевания | Курорты, санаторно-курортные организации |
1. | A15 | Туберкулез органов дыхания, подтвержденный бактериологически и гистологически | Активный туберкулез после прекращения бактериовыделения в результате проведения интенсивной фазы химиотерапии, при отсутствии или с наличием лекарственной устойчивости возбудителя, при отсутствии или с наличием осложнений туберкулеза, при отсутствии или с наличием сопутствующих заболеваний, в том числе после хирургического лечения | Специализированные санаторно-курортные организации. Климатические курорты |
| A17+ | Туберкулез нервной системы | ||
A19 | Милиарный туберкулез | |||
2. | A16 | Туберкулез органов дыхания, не подтвержденный бактериологически или гистологически | Активный туберкулез при отсутствии или с наличием осложнения туберкулеза, при отсутствии или с наличием сопутствующих заболеваний после окончания интенсивной фазы химиотерапии. Клинически излеченный туберкулез | Специализированные санаторно-курортные организации. Климатические курорты |
B90 | Последствия туберкулеза | |||
3. | R76.1 | Аномальная реакция на туберкулиновую пробу | Риск развития активного туберкулеза у детей из групп риска по туберкулезу | Специализированные санаторно-курортные организации. Климатические курорты |
Z20.1 | Контакт с больным или возможность заражения туберкулезом | |||
4. | A18 | Туберкулез других органов | Активный туберкулез любых органов и систем, кроме туберкулеза органов дыхания, нервной системы и милиарного туберкулеза, осложнения после введения вакцины против туберкулеза при отсутствии или с наличием осложнения туберкулеза, при отсутствии или с наличием сопутствующих заболеваний после окончания интенсивной фазы химиотерапии. Клинически излеченный туберкулез | Специализированные санаторно-курортные организации. Климатические курорты |
Перечень медицинских противопоказаний для санаторно-курортного лечения
1. Заболевания в острой и подострой стадии, в том числе острые инфекционные заболевания до окончания периода изоляции.
2. Заболевания, передающиеся половым путем.
3. Хронические заболевания в стадии обострения.
4. Бактерионосительство инфекционных заболеваний.
5. Заразные болезни глаз и кожи.
6. Паразитарные заболевания.
7. Заболевания, сопровождающиеся стойким болевым синдромом, требующим постоянного приема наркотических средств и психотропных веществ, включенных в списки I и II Перечня наркотических средств, психотропных веществ и их прекурсоров, подлежащих контролю в Российской Федерации 1, зарегистрированных в качестве лекарственных препаратов.
8. Туберкулез любой локализации в активной стадии (для санаторно-курортных организаций нетуберкулезного профиля).
9. Новообразования неуточненного характера (при отсутствии письменного подтверждения в медицинской документации пациента о том, что пациент (законный представитель пациента) предупрежден о возможных рисках, связанных с осложнениями заболевания в связи с санаторно-курортным лечением).
10. Злокачественные новообразования, требующие противоопухолевого лечения, в том числе проведения химиотерапии.
11. Эпилепсия с текущими приступами, в том числе резистентная к проводимому лечению.
12. Эпилепсия с ремиссией менее 6 месяцев (для санаторно-курортных организаций не психоневрологического профиля).
13. Психические расстройства и расстройства поведения в состоянии обострения или нестойкой ремиссии, в том числе представляющие опасность для пациента и окружающих.
14. Психические расстройства и расстройства поведения, вызванные употреблением психоактивных веществ.
15. Кахексия любого происхождения.
16. Неизлечимые прогрессирующие заболевания и состояния, требующие оказания паллиативной медицинской помощи.
Таблица 2. Клиническая классификация муковисцидоза
(предложена на основе Рабочей классификации муковисцидоза (Рачинский С.В., Капранов Н.И., 2000), рекомендаций ВОЗ и Европейской ассоциации муковисцидоза), опубликовано — https://mukoviscidoz.org/doc/konsensus/CF_consensus_2017.pdf
Форма | Характеристика бронхолегочных изменений | Проявления | Осложнения | ||
Клиническая | Фаза и активность процесса | Степень ДН <2> | |||
Классический муковисцидоз <1> Смешанная или легочно-кишечная форма заболевания (муковисцидоз с панкреатической недостаточностью — E84.8) Легочная форма заболевания (муковисцидоз с ненарушенной функцией поджелудочной железы — E84.0) | Хронический обструктивный бронхит Бронхоэктазы (локализованные и диссеминированные) с указанием локализации Пневмофиброз | Вне обострения Обострение Тип обострения: Обострение хронического бронхита Пневмония (с указанием локализации) Смешанный тип | I. ст. II. ст. III. ст. | Хронический (гнойный, полипозно-гнойный) риносинусит Синдром псевдо-Барттера Азооспермия Рецидивирующий панкреатит | Абсцессы, ателектазы, пневмо-пиопневмоторакс, кровохаркание, кровотечение (легочное, желудочное), аллергический бронхолегочный аспергиллез (АБЛА), легочная гипертензия, полипоз носа. Мекониевый илеус, эквиваленты мекониевого илеуса, выпадение прямой кишки Цирроз печени (без и с портальной гипертензией) ЖКБ Отставание в физическом развитии. Белково-энергетическая недостаточность Нарушение толерантности к углеводам Муковисцидоз-ассоциированный сахарный диабет Снижение минеральной плотности костной ткани Вторичный остеопороз Амилоидоз почек Сиалоаденит Витамин K-дефицитные состояния (геморрагическая болезнь) |
Генотип (мутации гена CFTR (МВТР)) | Указать согласно базе данных CFTR2.org и Консенсусу по клиническим эффектам генетических вариантов (база данных SeqDBhttp://seqdb.med-gen.ru/) | ||||
Микробиологический статус (указывается дата первичного высева (выявления) микробного патогена (патогенов) и, если есть, последнего) | Стафилококковая инфекция. Синегнойная инфекция. Инфекция, вызванная B. cepacia complex Другие инфекции. Микробные ассоциации | ||||
Другие формы: Неопределенный диагноз при положительном неонатальном скрининге на муковисцидоз <3> — E84.9. Заболевания, ассоциированные с геном CFTR (МВТР) <4>: — изолированная обструктивная азооспермия; — хронический панкреатит; диссеминированные бронхоэктазы | |||||
———————————
Примечания:
<1> Форма из классификации МВ Рачинского С.В., Капранова Н.И. (2000).
<2> Степень дыхательной недостаточности устанавливается согласно «Классификации дыхательной недостаточности» (Национальное руководство по болезням органов дыхания, 2010). Степень тяжести заболевания рекомендуется не указывать исходя из первично-хронического течения, полиорганного поражения и прогредиентного течения.
<3> Положительный неонатальный скрининг или неонатальная гипертрипсиногенемия не являются диагнозом и в классификацию не включены, пациентам с неонатальной гипертрипсиногенемией рекомендуется в 1 год провести повторно потовую пробу.
Используется новый диагноз — «неопределенный диагноз при положительном неонатальном скрининге на муковисцидоз».
<4> Код МКБ рекомендуется использовать из соответствующих разделов.
Тяжесть состояния устанавливается согласно Приложению к приказу Министерства труда и социальной защиты Российской Федерации «О классификациях и критериях, используемых при осуществлении медико-социальной экспертизы граждан федеральными государственными учреждениями медико-социальной экспертизы» (с 01 января 2019, см. раздел «Справочные материалы, включая соответствие показаний к применению и противопоказаний, способов применения и доз лекарственных препаратов, инструкции по применению лекарственного препарата»)
В будущем, по мере углубления знаний, эта классификация также потребует пересмотра.
АЦЦ инструкция по применению: показания, противопоказания, побочное действие – описание ACC гранулы д/пригот. р-ра д/приема внутрь 600 мг: пак. 6 шт. (3282)
Муколитическое средство, является производным аминокислоты цистеина. Оказывает муколитическое действие, увеличивает объем мокроты, облегчает ее отхождение за счет прямого воздействия на реологические свойства мокроты. Действие ацетилцистеина связано со способностью его сульфгидрильных групп разрывать внутри- и межмолекулярные дисульфидные связи кислых мукополисахаридов мокроты, что приводит к деполяризации мукопротеидов и уменьшению вязкости мокроты.
Снижает индуцированную гиперплазию мукоидных клеток, усиливает выработку поверхностно-активных соединений путем стимуляции пневмоцитов II типа, стимулирует мукоцилиарную активность, что приводит к улучшению мукоцилиарного клиренса.
Сохраняет активность при наличии гнойной, слизисто-гнойной и слизистой мокроты.
Увеличивает секрецию менее вязких сиаломуцинов бокаловидными клетками, снижает адгезию бактерий на эпителиальных клетках слизистой оболочки бронхов. Стимулирует мукозные клетки бронхов, секрет которых лизирует фибрин. Аналогичное действие оказывает на секрет, образующийся при воспалительных заболеваниях ЛОР-органов.
Оказывает антиоксидантное действие, обусловленное способностью его реактивных сульфгидрильных групп (SH-группы) связываться с окислительными радикалами и, таким образом, нейтрализовать их.
Ацетилцистеин легко проникает внутрь клетки, деацетилируется до L-цистеина, из которого синтезируется внутриклеточный глутатион. Глутатион — высокореактивный трипептид, мощный антиоксидант и цитопротектор, нейтрализующим эндогенные и экзогенные свободные радикалы и токсины. Ацетилцистеин предупреждает истощение и способствует повышению синтеза внутриклеточного глутатиона, участвующего в окислительно-восстановительных процессах клеток, способствуя детоксикации вредных веществ. Этим объясняется действие ацетилцистеина в качестве антидота при отравлении парацетамолом.
Предохраняет альфа1-антитрипсин (ингибитор эластазы) от инактивирующего воздействия HOCI — окислителя, вырабатываемого миелопероксидазой активных фагоцитов. Обладает также противовоспалительным действием (за счет подавления образования свободных радикалов и активных кислородсодержащих веществ, ответственных за развитие воспаления в легочной ткани).
О муковисцидозе | CF Foundation
Муковисцидоз — это прогрессирующее генетическое заболевание, которое вызывает стойкие инфекции легких и со временем ограничивает способность дышать.
У людей с МВ мутации в гене трансмембранного регулятора проводимости муковисцидоза (CFTR) приводят к нарушению функции белка CFTR.Когда белок работает неправильно, он не может помочь переместить хлорид — компонент соли — на поверхность клетки. Без хлорида, притягивающего воду к поверхности клетки,
слизь в различных органах становится густой и липкой.
В легких слизь закупоривает дыхательные пути и улавливает микробы, такие как бактерии, что приводит к инфекциям, воспалениям, дыхательной недостаточности и другим осложнениям. По этой причине сведение к минимуму контакта с микробами является главной заботой людей с МВ.
В поджелудочной железе накопление слизи предотвращает высвобождение пищеварительных ферментов, которые помогают организму усваивать
пища и основные питательные вещества, что приводит к недоеданию и плохому росту.В печени густая слизь может блокировать желчный проток, в результате чего печень
болезнь. У мужчин CF может повлиять на их способность иметь детей.
Симптомы CF
Люди с CF могут иметь различные симптомы, в том числе:
- Кожа с очень соленым привкусом
- Постоянный кашель, иногда с мокротой
- Частые легочные инфекции, включая пневмонию или бронхит
- Свистящее дыхание или затрудненное дыхание
- Плохой рост или прибавка в весе, несмотря на хороший аппетит
- Частый жирный, объемный стул или затрудненное опорожнение кишечника
- Мужское бесплодие
Джей, 6 лет с CF
Послушайте объяснения клиницистов CF:
- Какие части тела поражены CF
- Общие симптомы МВ
- Как лечить CF
Муковисцидоз — это генетическое заболевание.Люди с CF унаследовали две копии дефектного гена CF — по одной от каждого родителя. У обоих родителей должна быть хотя бы одна копия дефектного гена.
Людей, у которых есть только одна копия дефектного гена CF, называют носителями, но они не болеют. Каждый раз, когда у двух носителей CF появляется ребенок, вероятность:
- 25 процентов (1 из 4) ребенка будет иметь CF
- 50 процентов (1 из 2) ребенок будет носителем, но не будет иметь CF
- 25 процентов (1 из 4) ребенок не будет носителем и не будет иметь CF
Дефектный ген CF содержит небольшую аномалию, называемую мутацией.Известно более 1700 мутаций этого заболевания. Большинство генетических тестов проверяют только самые
общие мутации МВ. Следовательно, результаты теста могут указывать на то, что человек, являющийся носителем гена CF, не является носителем.
Диагностика муковисцидоза — это многоэтапный процесс, который должен включать обследование новорожденных,
тест пота, генетический тест или тест на носительство, а также клиническую оценку в аккредитованном CF Foundation
центр заботы. Хотя у большинства людей муковисцидоз диагностируется к 2 годам, некоторым ставят диагноз уже взрослым.Специалист CF может заказать тест пота и порекомендовать дополнительное тестирование для подтверждения
диагноз CF.
Ознакомьтесь с рекомендациями CF Foundation по клинической помощи для диагностики CF.
Согласно Реестру пациентов Фонда муковисцидоза в США:
- Более 30 000 человек живут с муковисцидозом (более 70 000 во всем мире).
- Ежегодно диагностируется около 1000 новых случаев CF.
- Более 75 процентов людей с МВ диагностируются к 2 годам.
- Более половины людей с МВ имеют возраст 18 лет и старше.
Знаете ли вы?
Более половина больных муковисцидозом — это человек старше 18 лет.
Муковисцидоз — сложное заболевание, и типы и тяжесть симптомов могут сильно различаться от человека к человеку.Многие факторы, такие как возраст постановки диагноза, могут повлиять на здоровье человека и течение болезни.
Посмотрите видео, которое дает представление о повседневной жизни Кейтлин Бродхерст, 25-летней женщины, страдающей муковисцидозом.
Огромные достижения в области специализированной помощи при МВ добавили годы и качество жизни людям с муковисцидозом.С 1950-х годов, когда ребенок с муковисцидозом редко дожил до сегодняшнего дня, произошли кардинальные улучшения, когда ребенок с муковисцидозом жил достаточно долго, чтобы реализовать свои мечты о поступлении в колледж, карьере, женитьбе и рождении детей.
Несмотря на значительный прогресс в лечении этой болезни, лекарства до сих пор нет, и слишком много жизней урезаются слишком быстро.
Тип и тяжесть симптомов МВ могут сильно различаться от человека к человеку.Поэтому, хотя планы лечения могут содержать многие из одних и тех же элементов, они адаптированы к уникальным обстоятельствам каждого человека.
Тре, 24 года с МВ, в жилете.
Люди с МВ и их семьи знают, как болезнь влияет на них и как условия их повседневной жизни влияют на их подход к лечению. Признавая соответствующие роли, люди с МВ, их семьи и медицинские бригады могут работать вместе над разработкой лечения.
планы, которые согласовывают личные жизненные цели с целями в отношении здоровья.
«Мой врач и я решили придумать план, который подойдет мне. Мы смогли договориться о сделке, так что я лечил больше, чем раньше, но я не просто сидел дома, подключенный к аппаратам ». –– Бетси Салливан, подросток с
CF, из блога сообщества CF
Фонд CF аккредитует более 130 медицинских центров, в которых работают преданные своему делу специалисты в области здравоохранения, которые предоставляют квалифицированную помощь при CF и специализированное лечение заболеваний.
Каждый день люди с CF проходят комбинацию из следующих терапий:
- Очистка дыхательных путей для разрыхления и избавления от густой слизи, которая может скапливаться в легких.
- Вдыхал лекарства, чтобы открыть дыхательные пути или разжижить слизь. Это жидкие лекарства, которые превращаются в туман или аэрозоль, а затем вдыхаются через
небулайзер и включают антибиотики для борьбы с легочными инфекциями и терапию, чтобы помочь очистить дыхательные пути. - Капсулы с добавками ферментов поджелудочной железы для улучшения усвоения жизненно важных питательных веществ. Эти добавки принимают каждый прием пищи и большинство перекусов. Люди с
CF также обычно принимает поливитамины. - Индивидуальный план фитнеса для улучшения энергии, функции легких и общего состояния здоровья
- Модуляторы CFTR для нацеливания на основной дефект в белке CFTR. Поскольку разные мутации вызывают разные дефекты в белке, разработанные до сих пор лекарства эффективны только для людей с определенными мутациями.
CF Foundation поддерживает исследования по открытию и разработке новых методов лечения CF и поддерживает ряд потенциальных методов лечения, направленных на болезнь со всех сторон.
Сегодня Фонд сосредоточен на разработке новых жизненно важных методов лечения для большего числа людей с МВ, в том числе с редкими и бессмысленными мутациями, и
смелость, новые возможности однажды разработать лекарство на всю жизнь.
Когда в 1955 году группа родителей основала Фонд муковисцидоза, лечения муковисцидоза не существовало.Эти родители поставили перед собой высокие цели — углубить понимание этой малоизвестной болезни, создать новые методы лечения и специализированный уход для своих детей, а также найти лекарство.
В последующие годы сбор средств и приверженность сообщества CF позволили Фонду поддержать фундаментальные исследования в лаборатории, которые привели к революционным открытиям, включая идентификацию гена и белка, ответственных за муковисцидоз.Расширяя наши знания о биологии заболевания и его влиянии на организм, исследователи проложили путь к созданию новых методов лечения.
Непоколебимая приверженность Фонда развитию исследований МВ помогла разработать более десятка новых методов лечения этого заболевания. Мы добились невероятных успехов, включая одобрение Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США (FDA) ивакафтора (Kalydeco ® ), люмакафтора / ивакафтора (Orkambi ® ), тезакафтора / ивакафтора ® ), элексакафтор / тезакафтор / ивакафтор (Trikafta ™), Cayston ® и тобрамицин (TOBI ® ).
Посмотрите это видео, чтобы увидеть, как клинические исследования повлияли на жизнь людей с МВ.
Исследования, проводимые преданными своему делу учеными и клиницистами из широкого круга дисциплин, ежедневно улучшают наше понимание муковисцидоза, помогая формировать клиническую практику лечения людей, живущих с этим заболеванием, на долгие годы. К ним относятся исследования, проведенные с использованием данных пациентов из реестра пациентов CF Foundation, которые помогают нам выявлять тенденции и отслеживать эффективность лечения.
От кабинета до постели Фонд поддерживает лучшие исследования здесь и за рубежом, чтобы улучшить качество жизни людей с МВ сегодня и ускорить инновационные исследования и разработку лекарств, чтобы добавить завтрашнего дня. Недавно были запущены две крупные инициативы, которые помогут нам в этой миссии.
В 2018 году Фонд объявил о выделении 100 миллионов долларов на Инициативу по исследованию инфекций — комплексный подход к улучшению результатов, связанных с инфекциями, за счет улучшения выявления, диагностики, профилактики и лечения.Фонд также активно разрабатывает и финансирует широкий спектр новых методов лечения других осложнений заболевания, таких как воспаление, чрезмерное выделение слизи, желудочно-кишечные проблемы и диабет, связанный с муковисцидозом.
Вторая крупная инициатива сосредоточена на людях с бессмысленными и редкими мутациями, которым не помогут только модуляторы CFTR, и которые нуждаются в эффективном лечении основной причины своего заболевания. К настоящему времени Фонд выделил более 72 миллионов долларов на Инициативу по исследованию бессмысленных и редких мутаций и терапии, многогранную инициативу, которая уже профинансировала более 60 проектов за последние несколько лет как в академических учреждениях, так и в фармацевтических компаниях.
Следуя этим и другим смелым стратегиям, CF Foundation продолжает создавать надежную линейку потенциальных новых методов лечения, которые борются с болезнью со всех сторон. Узнайте больше о ключевых исследовательских программах CF Foundation:
-
Обзор исследования: Широкий взгляд на то, как Фонд поддерживает фундаментальную науку, клинические исследования и исследования в реальном мире, чтобы расширить наши знания о муковисцидозе и преобразовать открытия и идеи в жизненно важные новые методы лечения и клиническую практику для людей, живущих с МВ. -
Исследования, которые мы финансируем: См. Снимок того, как Фонд CF финансирует исследования кистозного фиброза. -
Лаборатория CF Foundation Therapeutics: Базирующаяся в Лексингтоне, штат Массачусетс, терапевтическая лаборатория CF Foundation выявляет и тестирует потенциальные новаторские методы лечения CF, готовя их к дальнейшей разработке. -
Сеть разработки терапевтических средств: Сеть разработки терапевтических средств является крупнейшей в мире сетью клинических исследований МВ.Он предоставляет ресурсы и поддержку исследованиям, ведущим к новым важным методам лечения и более совершенным методам лечения. -
Новые достижения в клинических исследованиях: Посмотрите интервью с ведущими исследователями МВ, чтобы узнать о последних передовых исследованиях по таким вопросам, как инфекции, нетуберкулезные микобактерии (НТМ), питание и здоровье желудочно-кишечного тракта. -
Разработка лекарств: Лабораторные открытия превращаются в потенциальные лекарства, которые атакуют как симптомы CF, так и причину — дефектный ген, который производит дефектный белок. -
Исследовательские центры: Эти «мозговые центры» CF расположены в ведущих университетах и медицинских школах по всей Северной Америке, где ученые из многих дисциплин собираются вместе, чтобы объединить свои знания, чтобы найти лекарство от CF.
Диабет, связанный с муковисцидозом | CF Foundation
Есть два типа диабета у людей без муковисцидоза: тип 1 и тип 2.Диабет 1 типа — это аутоиммунное заболевание, которое возникает, когда иммунная система организма атакует и разрушает клетки поджелудочной железы, вырабатывающие инсулин (бета-клетки), который помогает организму поглощать и использовать энергию из пищи. Диабет 1 типа чаще всего диагностируется в детстве и требует, чтобы вы принимали инсулин, чтобы остаться в живых.
Диабет 2 типа, который чаще встречается у взрослых с избыточным весом или ожирением, возникает из-за отсутствия нормальной реакции на инсулин, а также из-за того, что поджелудочная железа не вырабатывает достаточно инсулина.
Диабет, связанный с муковисцидозом (CFRD), имеет некоторые общие черты с диабетом как 1, так и 2 типа. У людей с муковисцидозом характерная для этого заболевания густая липкая слизь вызывает рубцевание поджелудочной железы. Это рубцевание препятствует выработке поджелудочной железой нормального количества инсулина; Таким образом, как и люди с диабетом 1 типа, у них возникает дефицит инсулина. Их поджелудочная железа все еще вырабатывает инсулин, но его недостаточно, чтобы оставаться здоровым и поддерживать хорошее питание.
Кроме того, люди с CFRD могут не реагировать на инсулин должным образом, как люди с диабетом 2 типа, особенно когда они больны, принимают стероидные препараты или беременны.Это называется «инсулинорезистентностью».
Люди с CFRD могут не испытывать никаких симптомов. Некоторые симптомы диабета похожи на другие симптомы МВ, которые у вас уже могут быть. Многие люди с CFRD не знают, что у них есть CFRD, пока они не будут проверены на диабет.
Некоторые общие симптомы, такие как повышенная жажда и мочеиспускание, вызваны высоким уровнем сахара в крови, известным как гипергликемия.Другими симптомами CFRD являются чрезмерная утомляемость, потеря веса и необъяснимое снижение функции легких.
Руководящие принципы лечения CF для CFRD рекомендуют, чтобы люди с CF в возрасте 10 лет и старше ежегодно проходили тестирование на CFRD с помощью перорального теста на толерантность к глюкозе (OGTT). OGTT — лучший способ диагностировать CFRD и обычно проводится утром после восьмичасового голодания. Если вам поставили диагноз CFRD, вы получите соответствующее лечение, чтобы почувствовать себя лучше, набрать вес и улучшить функцию легких.
Важно отметить, что OGTT отличается от гемоглобина A1c (HbA1c). HbA1c не рекомендуется в качестве скринингового теста на CFRD, так как у людей с CF он часто бывает низким. Это отмечает еще одно важное отличие CFRD от других типов диабета.
Послушайте Андреа Келли, доктор медицины, расскажите о CFRD и о том, что изменилось с тех пор, как она начала заниматься CF.
Посмотрите эту интернет-трансляцию, чтобы узнать больше о диагностике и скрининге CFRD.
Целью лечения CFRD является поддержание уровня сахара (глюкозы) в крови на нормальном или почти нормальном уровне. Это поможет вам набрать вес, сохранить мышечную массу, почувствовать себя лучше и набраться энергии. Поддержание нормального уровня глюкозы также снижает риск проблем.
вызванный диабетом.
CFRD можно хорошо контролировать с помощью инсулина, наряду с мониторингом уровня сахара в крови, соблюдением обычной высококалорийной диеты,
и оставаться активным.
«Многие люди с CFRD не знают, что им есть, чтобы контролировать уровень сахара в крови. К счастью, могут помочь определенные приемы планирования еды ». — Гретхен Гарлоу, MS, RD, LDN, диетолог, из блога сообщества CF
Существует много типов инсулина, которые сгруппированы по тому, насколько быстро они действуют и как долго они остаются в организме. Инсулин вводится в организм и помогает клеткам вашего тела поглощать энергию (калории) из пищи, которую вы едите. Калории в пище поступают из углеводов,
белок и жир.Инсулин помогает клеткам тела усваивать эти три питательных вещества, чтобы вы могли достичь и поддерживать здоровую массу тела и хорошее питание.
Людям с CFRD по-прежнему необходимо есть такие же высококалорийные, высокобелковые,
диета с высоким содержанием жиров и соли для достижения и поддержания здоровой массы тела. Поскольку продукты с углеводами при употреблении в пищу превращаются в глюкозу в крови, людям с CFRD необходимо подсчитывать количество углеводов в продуктах, которые они едят, чтобы они могли себя съесть
нужное количество инсулина.Ваша бригада по лечению диабета поможет вам определить количество инсулина, необходимое для получения углеводов.
Физическая активность как
упражнения полезны для работы легких, а также могут улучшить реакцию организма на инсулин. Людям с CFRD рекомендуется заниматься не менее 150 минут умеренных
аэробные упражнения — занятия, которые требуют вдыхания кислорода, например бег трусцой или занятия спортом — каждую неделю. Мониторинг уровня сахара в крови позволит вам оставаться активным, поскольку упражнения могут вызвать снижение уровня сахара, когда мышцы используют
сахар для энергии.
«Если у вас CFRD, обязательно проверяйте уровень сахара в крови до и после тренировки». — Ли Деджоржио, взрослый с CF, из блога сообщества CF
Если вам поставили диагноз CFRD, в вашу команду по уходу за CF могут войти эндокринолог (врач со специальной подготовкой в области лечения диабета) и сертифицированные инструкторы по диабету. . Работая с вами, эта команда разработает план лечения, чтобы помочь
вы управляете диабетом, сохраняя при этом свое здоровье с помощью CF.
Загрузите руководство «Управление диабетом, связанным с кистозным фиброзом, руководство для пациентов и их семей».
Руководство также доступно на испанском языке:
«El Manejo de la Diabetes Relacionada con la Fibrosis Quística».
Узнайте, как управлять CFRD во время путешествий.
Фонд CF финансировал исследователей, изучающих влияние белка, регулирующего трансмембранную проводимость (CFTR) при муковисцидозе, на развитие CFRD, чтобы найти способы его лечения.
В этом видео группа экспертов-исследователей и члены сообщества обсуждают несколько исследований, направленных на улучшение диагностики и лечения CFRD.
Блог | Центр биологии и старения
Исследования старения в Brown
Изучение старения человека за прошедшие годы значительно продвинулось вперед, что привело к новым открытиям и методам того, как мы можем смягчить негативные последствия естественного старения на протяжении всей жизни.Теперь мы знаем, что старение происходит только через несколько эволюционно законсервированных биологических процессов, которые приводят к изменениям в функциях клеток и органов, способствуя широкому спектру возрастных заболеваний, потере жизнестойкости, слабости и, в конечном итоге, смерти. Из-за множества источников, которые в конечном итоге могут способствовать старению, междисциплинарные исследовательские подходы становятся все более популярными, часто сосредотачиваясь на конкретном компоненте старения, который может быть применен к более широким механизмам старения. Исследователи из Центра биологии старения Брауна приняли этот подход и добились значительных успехов с момента основания Центра.
Д-р Цянь Чен присоединился к Брауновскому университету в 2002 году и в настоящее время является заведующим кафедрой ортопедических исследований Майклом Г. Эрлихом, профессором медицинских наук и заместителем председателя по исследованиям в отделении ортопедии Медицинской школы Уоррена Альперта. Он также является директором Центра передового опыта биомедицинских исследований в области здоровья и восстановления скелета в больнице Род-Айленда, многопрофильного центра трансляционных исследований, созданного Национальными институтами здравоохранения.Группа доктора Чена добилась значительных успехов в исследованиях в области биологии хрящей и суставов, уделяя особое внимание остеоартриту и возможным вмешательствам. Его последняя статья, опубликованная в октябре 2020 года (Liu et al., DOI: 10.1096 / fj.202001448R), раскрывает новые механизмы прогрессирования остеоартрита, которые предполагают многоуровневое участие факторов роста в развитии и деградации хрящевого сустава. Эти результаты могут потенциально использовать существующее лекарство для лечения.
Остеоартроз и старение костной системы
Остеоартрит, наиболее распространенная форма артрита, представляет собой хроническое заболевание, связанное со старением, которое характеризуется деградацией суставного хряща, нарушенной регуляцией оссификации (формирование кости) и образованием остеофитов (костная шпора).Связанный с инвалидностью, заболеваемостью и смертностью, он поражает более 350 миллионов пациентов во всем мире, что делает его одним из наиболее распространенных заболеваний, связанных со старением. Группа доктора Чена активно занимается поиском лекарств, исследуя клетки пациентов с остеоартритом для возможных вмешательств.
В Лю и др., 2020 группа доктора Чена не только определила новый механизм боковой передачи сигналов для TGF-бета у пациентов с остеоартритом, но и реализовала это открытие в рамках существующего препарата, который может быть повторно использован для лечения остеоартрита.Это исследование было сосредоточено на роли хондроцитов и мезенхимальных стромальных клеток в развитии остеоартрита.
Исследователи впервые использовали РНК-секвенирование для оценки экспрессии генов в популяциях хондроцитов и мезенхимальных стромальных клеток, чтобы оценить изменения во время прогрессирования остеоартрита. Обычно хондроциты составляют 90% хряща, тогда как при остеоартрите мезенхимальных стромальных клеток становится больше. Они обнаружили неожиданный результат, связанный с патогенезом: стромальные клетки экспрессировали тот же уровень рецепторов морфогенетических белков кости, что и хондроциты, но только часть рецепторов трансформирующего фактора роста бета.Это различие приводит к латеральному сигнальному механизму, в котором трансформирующий фактор роста бета, который обычно запускает регенерацию хряща в хондроцитах, активирует дегенеративные эффекты в стромальных клетках хряща во время остеоартрита. Воспользовавшись этим открытием, группа доктора Чена предположила, что вместо нацеливания на трансформирующий фактор роста бета, который может давать смешанные результаты, следует нацелить его боковую сигнальную молекулу для лечения остеоартрита. Они определили лекарство-кандидат, которое изначально было разработано для подавления передачи сигналов конститутивного морфогенетического белка костной ткани во время гетеротопической оссификации.Их исследование продолжало демонстрировать, что это лекарство может быть повторно использовано для подавления дегенерации суставов на животной модели остеоартрита.
Междисциплинарные и переводческие приложения
Результаты Liu et al., 2020 имеют важное значение в области как остеоартрита, так и старения в целом, предполагая новые механизмы, которые характеризуют общую тему клеточной дегенерации: старение мезенхимальных стромальных (стволовых) клеток.
Старение может относиться к клеточному уровню или всему организму и представляет собой явление, которое со временем приводит к биологической дегенерации, когда системы в конечном итоге разрушаются и перестают функционировать. Клеточное старение стало основным игроком в исследованиях старения, что принесло с собой обширный междисциплинарный подход с использованием моделей заболеваний, таких как остеоартрит, нейродегенерация, эндокринные нарушения и генетические факторы. Это исследование было поддержано грантом NIH / NIAMS R61 / R33 для инновационных исследовательских проектов и грантом NIH / NIGMS P30 для поддержки Центра биомедицинского мастерства для здоровья и восстановления скелета.
На следующем этапе исследований группа доктора Чена планирует использовать свои результаты на мезенхимальных стромальных клетках в качестве модели для изучения клеточного старения. Поскольку старение происходит во многих тканях по-разному, мезенхимальные стромальные клетки обеспечивают превосходное представление о поведении старения в хряще, которое затем можно сравнить с другими тканями. В сотрудничестве с разноплановой группой исследователей из Центра биологии старения Брауна д-р.Цянь Чен и его коллеги надеются разработать более единое понимание старения в целом при старении человека.
диагностирован муковисцидоз | CF Foundation
Более 30 000 детей и взрослых в США страдают МВ (70 000 во всем мире).
Люди с CF
унаследовать две копии дефектного гена — по одной копии от каждого родителя — который производит дефектный белок, вызывая накопление густой слизи в легких,
поджелудочная железа и другие органы.
Когда слизь забивает легкие, человеку становится очень трудно дышать. Густая слизь также позволяет
микробы процветают и размножаются, что может привести к инфекциям и воспалениям и часто приводит к серьезным повреждениям легких и дыхательной недостаточности.
Муковисцидоз вызывает изменения во многих частях тела, включая легкие, поджелудочную железу, печень, кишечник, носовые пазухи, репродуктивную систему и потовые железы.
В поджелудочной железе скопление слизи препятствует высвобождению пищеварительного тракта.
ферменты, которые помогают организму расщеплять пищу и усваивать важные
питательные вещества.Люди с МВ часто страдают от недоедания и плохого роста.
Густая слизь также может блокировать желчные протоки в печени и, у некоторых людей с МВ, может вызывать заболевание печени.
У мужчин CF может повлиять на их способность иметь детей. Однако CF не влияет на
половое развитие у мужчин или женщин.
Младенцы с МВ растут, развиваются и делают то же, что и другие младенцы. Дети с МВ идут в
учебу, займитесь спортом и получите водительские права. Люди с МВ могут пойти в
колледж, сделать успешную карьеру и
иметь собственные семьи.
Сегодня, благодаря улучшенному лечению и уходу, более половины людей с МВ в возрасте 18 лет и старше. Многие люди с МВ могут рассчитывать на то, что будут жить здоровой и полноценной жизнью до 30-40 лет и старше.
Прочтите отчеты реестра пациентов фонда.
Посмотрите, как врачи CF обсуждают:
- Что такое CF
- Как диагностируется CF
- Скрининг новорожденных
Полная диагностическая оценка CF должна включать тест хлорида пота, генетический тест или тест на носительство, а также клиническую оценку в центре обслуживания, аккредитованном CF Foundation.
В настоящее время большинство детей проходят скрининг на CF при рождении посредством скрининга новорожденных, и большинству детей ставится диагноз к возрасту 2 лет. Однако некоторым людям с CF ставится диагноз «взрослые». Врач, который видит симптомы CF, назначит тест на пот и генетический тест для подтверждения диагноза.
У большинства людей с МВ диагноз ставится быстро, хотя в некоторых случаях диагноз не ясен, и могут быть рекомендованы последующие анализы.
«Я рос, удивляясь, почему я каждый день чувствую себя плохо. Поскольку врачи предполагали маловероятные заболевания, такие как гормональные нарушения, заболевание почек, волчанка и депрессия, я чувствовал, что был дальше от ответа.Затем мой ЛОР предложил МВ — болезнь, о которой я никогда не слышал. Когда он описал то, что знал о CF, он соответствовал всем моим симптомам и обещал ответ, который я искал всю свою жизнь ». — Кэти К., взрослый с CF, из блога сообщества CF
.
Посмотрите видео от Nemours, чтобы узнать больше о том, что должен знать ваш педиатр при тестировании на МВ.
Прочтите руководство Фонда по диагностике CF.
Людям с МВ лучше всего, когда лечение является комплексным, скоординированным и осуществляется в партнерстве с их бригадами по уходу.Фонд CF Foundation финансирует и аккредитует более 130 медицинских центров по всей стране, чтобы люди с CF могли получить высококачественную специализированную помощь.
Благодаря такому подходу здоровье людей с МВ продолжает улучшаться. Данные из реестра пациентов показывают устойчивый прогресс в ключевых показателях выживаемости, таких как улучшение функции легких и состояния питания, а также уменьшение присутствия вредных легочных бактерий.
Ключом к прогрессу в здоровье и благополучии людей с CF являются узкоспециализированные, многопрофильные группы медицинских специалистов в каждом центре, которые тесно сотрудничают с людьми с CF и их семьями, чтобы индивидуализировать лечение с учетом уникальных потребностей каждого человека. .
«После того, как мой сын получил положительный результат на инфекцию, все, о чем я мог думать, это о возможной госпитализации, если это было началом его спада, и все, что я знал, мой сын боялся упустить. Когда результаты принесли хорошие новости, мой сын выразил свое облегчение, на что наш врач ответил: «Я тоже». Эти слова передавали ощущение, что мы были партнерами, которые в конечном итоге хотят одного и того же: хороших новостей и крепкого здоровья ». — Мать подростка с CF
Эпигенетически регулируемая цифровая передача сигналов определяет эпителиальный врожденный иммунитет на уровне ткани
Одноклеточный анализ динамики NF-κB выявляет цифровую передачу сигналов в эпителиальных монослоях
Чтобы изучить, как эпителиальные ткани количественно определяют врожденные иммунные сигналы, мы создали линию эпителиальных клеток, которая позволяет одновременно измерения локализации NF-κB и экспрессии генов-мишеней в режиме реального времени и с одноклеточным разрешением.Мы выделили клон хромосомно нормальной линии эпителиальных клеток молочной железы человека, MCF10A, экспрессирующий флуоресцентно помеченный NF-κB (p65-mRuby), ядерный маркер (h3B-iRFP) и Venus-PEST 29 под контролем a синтетический промотор NF-κB (7x сайтов связывания NF-κB; рис. 1а). Для проверки репортерной системы мы обрабатывали клетки IL-1β в присутствии или в отсутствие ингибитора киназы IκBα (IKK), расположенной выше по течению. Как и ожидалось, добавление IL-1β приводило к ядерной транслокации NF-κB, а также к экспрессии репортера Венеры.Оба процесса эффективно блокировались ингибитором IKK (рис. 1б). Использование этой репортерной линии клеток и пользовательского программного обеспечения для анализа изображений позволило одновременно количественно оценить передачу сигналов NF-κB (ядерное / цитоплазматическое соотношение интенсивностей p65) и экспрессию генов (интенсивность Венеры) в отдельных клетках (рис. 1c и дополнительный фильм 1). Чтобы лучше понять корреляцию между концентрацией стимулов, передачей сигналов и экспрессией генов, мы использовали живую визуализацию репортерной системы для скрининга ответов на панель стимулов, которые активируют отдельные ветви сети NF-κB: флагеллин (TLR5), IL-1β. (IL1R), Poly (I: C) (TLR3), TNFα (TNFR) и Pam3CSK4 (TLRs 1/2; рис.1г). Мы обработали клетки лигандами в различных концентрациях, охватывающих четыре порядка величины, и собрали данные более чем с 18 000 клеток (рис. 1e). Примечательно, что клетки, обработанные 10- или 100-кратной разной концентрацией стимулов, показали значительное перекрытие по амплитуде ответа, что свидетельствует о плохой количественной дискриминации на уровне отдельных клеток (рис. 1e).
Рис. 1: Зондирование MAMP в эпителиальных монослоях показывает цифровые и аналоговые компоненты.
a Схема, подробно описывающая репортерную систему экспрессии NF-κB-зависимого гена.Сигнал врожденного иммунитета активирует IKK, который фосфорилирует IκBα и отправляет его на деградацию, освобождая флуоресцентно помеченную субъединицу NF-κB (p65-mRuby) для проникновения в ядро и транскрипции репортера Venus-PEST. b MCF10A Репортерные клетки NF-κB инкубировали в присутствии или в отсутствие IL-1β (10 нг / мл) и / или ингибитора IKK VII (10 мкМ). Показаны репрезентативные изображения из пяти повторов, сделанных в указанное время. Масштабная линейка 50 мкм. c Типичный след одиночной клетки.Средняя интенсивность ядерной / цитоплазматической NF-κB показана черным цветом, а репортер экспрессии гена средней ядерной + цитоплазматической интенсивности — зеленым. d Схема рецепторов врожденного иммунитета и входов, передающих сигнал NF-κB. Все TLR5, IL1R и TLR1 / 2 передают сигнал через MyD88. e Тепловая карта всех ячеек на экране MAMP. Линию моноклональных репортерных клеток MCF10A визуализировали в течение 50 мин, затем обрабатывали указанными вводом и концентрацией. Концентрации при 100-кратном увеличении составляли 1 мкг / мл (Флагеллин), 200 мкг / мл (Poly (I: C)), 1 мкг / мл (Pam3CSK4), 1 мкг / мл (TNFα) и 100 нг / мл (IL-1β). ).Тепловые карты упорядочены сверху вниз от наивысшего к наименьшему максимальному выражению Венеры. f (вверху) Swarmplots площади под кривой после первого пика транслокации NF-κB (стабильная AUC) в 200 клетках, отобранных случайным образом с указанными входными данными и концентрациями. (Внизу) Swarmplots 95-го процентиля экспрессии гена в 200 клетках, произвольно выбранных из указанного входа и концентрации. Значения R в квадрате модели линейной регрессии соответствуют ответам по логарифму трех концентраций. г Репрезентативные изображения клонального MCF10A после 8 ч инкубации с указанным стимулом (1 мкг / мл (Флагеллин), 100 нг / мл (IL-1β), 20 мкг / мл (Poly (I: C)), 100 нг. / мл (TNFα) и 1 мкг / мл (Pam3CSK4)). Ядерный маркер h3B-iRFP показан красным цветом, а репортер экспрессии гена Венеры показан голубым цветом. Масштабная линейка 200 мкм. ч MCF10A Репортерные клетки NF-κB, стимулированные 1 мкг / мл Pam3CSK4. Показаны следы транслокации NF-κB (серый) и экспрессии Венеры (зеленый) для пяти не отвечающих и отвечающих.
Для дальнейшей количественной оценки корреляции между передачей сигналов и экспрессией генов мы извлекли несколько параметров, описывающих ответ каждой отдельной клетки, и провели всесторонний корреляционный анализ (дополнительный рис. 1a). Результаты подтвердили, что передача сигналов и экспрессия генов плохо коррелируют на уровне отдельных клеток с использованием любого из этих параметров (макс. R = 0,328). Однако возникли два разных сигнальных паттерна. В то время как флагеллин (TLR5) и IL-1β (IL1R) быстро гасят ядерный NF-κB после начального пика и практически не проявляют стационарной активности, дцРНК (TLR3) и TNFα (TNFR) создают дозозависимую осцилляторную активность NF-κB. это продолжается часами (рис.1е). Стимулы, которые создают устойчивую осцилляторную активность NF-κB, также показывают более высокую корреляцию экспрессии гена с входной концентрацией (рис. 1f). Нокауты CRISPR промежуточных продуктов передачи сигналов TRADD, MyD88 и TRIFF подтвердили, что TLR5 и IL1R полагаются на MyD88 для передачи сигнала, тогда как TLR3 и TNFR зависят от TRIFF и TRADD соответственно (дополнительный рис. 1b). Следовательно, наши результаты подтверждают, что способность поддерживать высокую постоянную передачу сигналов NF-κB с течением времени коррелирует с входной концентрацией и промежуточными продуктами передачи сигналов.
Удивительно, хотя большинство стимулов приводило к равномерной экспрессии Венеры по всему монослою, TLR5 и агонисты TLR1 / 2 флагеллин и бактериальный липопептид Pam3CSK4 (Pam) вызвали реакцию только в подгруппе клеток (рис. 1g, h и Дополнительный фильм 2). Дальнейший анализ амплитуды передачи сигналов у респондеров показал, что стимуляция TLR5 генерировала континуум слабых амплитудных респондеров при высоких концентрациях, но стимуляция TLR1 / 2 демонстрировала бимодальное поведение (т.е.2а и дополнительный рис. 2а). Взятые вместе наши данные показывают, что, хотя отдельные клетки демонстрируют плохое количественное различение концентрации стимулов, на тканевом уровне активация различных групп клеток может способствовать более количественным врожденным иммунным ответам (дополнительный рис. 2b). Таким образом, мы решили изучить механизм, лежащий в основе передачи цифровых сигналов NF-κB, а также его потенциальную регуляцию.
Рис. 2: Pam3CSK4 запускает закрытый цифровой ответ в первичных эпителиальных клетках и органоидах.
— иммунофлуоресцентный краситель p65 MCF10A дикого типа, стимулированный средой (вверху) или 1 мкг / мл Pam3CSK4 (внизу) в течение 30 мин. Масштабная линейка 300 мкм. Гистограмма показывает ядерную / цитоплазматическую интенсивность p65 в логарифмической шкале. Клетки с ядерным / цитоплазматическим соотношением p65 выше, чем контрольная среда, считались отвечающими. b Кривая доза-ответ WT MCF10A с 30-минутным введением Pam3CSK4 (0,01, 0,1, 1, 10 мкг / мл), MALP (0,001, 0,01, 0,1, 1 мкг / мл) или PGN (0,01, 0,1, 1 , 10 мкг / мл).Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение для трех повторов. c Эпителиальные клетки предстательной железы человека (RWPE-1) культивировали, обрабатывали в течение 30 минут 10 мкг / мл Pam3CSK4, фиксировали и окрашивали, как описано в методах. Показаны репрезентативные изображения. Желтые и белые стрелки указывают примеры отвечающих и не отвечающих клеток соответственно. Масштабная линейка, 50 мкм. Процент клеток в монослое, реагирующих на увеличение концентрации Pam3CSK4. Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение для четырех повторов. d Первичные органоиды кишечника мыши культивировали, как описано в способах, обрабатывали в течение 30 минут 10 мкг / мл Pam3CSK4 и иммуноокрашивали.Показаны репрезентативные изображения. Масштабная линейка, 100 мкм. Гистограмма и гистограммы показывают количественную оценку процента отвечающих клеток в отдельных органоидах и ядерной / цитоплазматической амплитуды ответа NF-κB в комбинированных органоидах. и Первичные органоиды молочной железы мыши культивировали, как описано в способах, обрабатывали в течение 30 минут 10 мкг / мл Pam3CSK4 и иммуноокрашивали. Показаны репрезентативные изображения трех независимых повторов. Масштабная линейка 30 мкм. Гистограмма и гистограммы показывают количественную оценку, как на панели d .
Цифровая активация NF-κB происходит в изогенных клонах и первичных органоидах
Для изучения различий между отвечающими и не отвечающими в монослоях эпителия мы сначала спросили, лежит ли генетическая гетерогенность в основе цифровой передачи сигналов NF-κB. Чтобы ответить на этот вопрос, мы создали несколько субклонов нашей репортерной линии и определили долю респондентов. Даже в изогенных клонах доля Pam-отвечающих клеток была аналогична исходной клеточной линии (дополнительный рис.3а). Иммунофлуоресцентное окрашивание на NF-κB показало, что даже в клетках WT MCF10A без какого-либо репортера ответ сильно бимодален с ~ 15% респондеров (рис. 2a). Это число было значительно выше, чем у нашей репортерной линии клеток, что позволяет предположить, что лентивирусная трансдукция может влиять на устойчивую фракцию респондеров.
Помимо опосредования Pam-ответа, TLR2 способен образовывать гетеродимеры с другими TLR для обнаружения разнообразного спектра молекулярных паттернов, ассоциированных с микробами (MAMP), из бактерий, грибов, вирусов и сигналов опасности хозяина 30 .Поэтому мы спросили, генерируют ли другие агонисты TLR2 бимодальные ответы, и обнаружили, что как MALP, так и пептидогликан также могут запускать цифровую передачу сигналов NF-κB. Во всех случаях доля респондентов достигала ~ 15% (рис. 2б). Чтобы определить, представляют ли клетки, отвечающие на разные MAMP, одни и те же или разные субпопуляции, мы сравнили процент клеток, отвечающих на единичные и комбинированные входные данные, и обнаружили, что эта доля была сходной, что свидетельствует о почти полном перекрытии этих популяций (дополнительный рис.3б).
Затем мы спросили, наблюдается ли цифровой ответ, наблюдаемый в клетках MCF10A, в других клеточных линиях или первичных органоидах. Мы протестировали клеточные линии человека, происходящие из трех эмбриональных источников: эктодермального, мезенхимального и эндотелиального. Мы обнаружили, что в то время как типы мезенхимальных и эндотелиальных клеток (BJ и HUVEC соответственно) не демонстрируют какой-либо очевидной реакции (дополнительный рис. 4a), другие типы эпителиальных клеток, такие как линия клеток предстательной железы RWPE-1, демонстрируют надежную цифровую передачу сигналов в ответ на Pam ( Инжир.2в). Кроме того, мы хотели определить, происходит ли цифровая передача сигналов NF-κB также в эпителиальных органоидах, полученных от мышей. Мы культивировали кишечные энтероиды 31 и органоиды молочной железы 32 и проанализировали цифровую передачу сигналов с помощью иммунофлуоресценции. Интересно, что оба эпителиальных органоида обнаруживают цифровую передачу сигналов на разных уровнях (Fig. 2d, e и Supplementary Fig. 4b, c). Эти результаты предполагают, что цифровая передача сигналов NF-κB происходит во множестве эпителиальных тканей у млекопитающих.
Статус респондера поддерживается эпигенетически.
В наших попытках определить существовавшие ранее различия между отвечающими и не отвечающими клетками, мы отметили позиционное смещение для отвечающих в пределах монослоя.Клетки-респондеры в монослое, зафиксированном после 1 дня роста, были редко распределены, в то время как несколько дней роста приводили к формированию групп респондеров в монослое (рис. 3a). Соответственно, среднее расстояние от данного респондента до его отвечающих соседей было значительно ниже по сравнению с рандомизированным контролем (рис. 3b). Это наблюдение привело нас к предположению, что фенотип отвечающего может быть унаследован внутри клеточных клонов и, следовательно, с большей вероятностью будет пространственно сегрегирован.Мы проверили эту гипотезу с помощью визуализации в реальном времени и отслеживания клеточных клонов в течение трех дней до определения статуса респондера с помощью иммунофлуоресценции (рис. 3c). Мы отследили 273 деления в 58 клонах, охватывающих до пяти поколений (дополнительный рис. 5a), и подтвердили, что респондеры с большей вероятностью связаны друг с другом (рис. 3d, e). Однако вероятность переключения между отвечающим и не отвечающим состояниями была низкой (рис. 3f). Мы предположили, что фракция респондеров может контролироваться эпигенетическими механизмами.Чтобы проверить это, мы обработали эпителиальные монослои метилтрансферазой, гистондеацетилазой (HDAC), гистонацетилтрансферазой (HAT) и гистон-метилтрансферазой (HMT) и обнаружили, что ингибиторы метилтрансферазы 5-азацитидин и 5-аза-2′-дезоксицитидин значительно увеличивают дозу. доля респондеров до 60–70% респондеров (рис. 3ж). Кроме того, ядерная / цитоплазматическая амплитуда NF-κB респондеров была сопоставима между обработанными и необработанными ответными клетками (дополнительный рис.5б). Мы построили модель, основанную на стохастическом переключении между отвечающими и не отвечающими состояниями в сочетании с расширением клонов, где состояние материнской клетки наследуется дочерями. Систематическая подгонка модели к данным о происхождении выявила вероятности переключения 0,01 ± 0,005 (не отвечающий на респондента) и 0,055 ± 0,01 (отвечающий на неответившего) на поколение (± обозначает 95% доверительный интервал, рис. 3f; дополнительные примечания). Эти предполагаемые вероятности переключения предсказывают долю респондеров после удаления ингибитора DNMT, а экспериментальные данные резюмируют прогнозируемую скорость распада (рис.3ч). Эти результаты предполагают, что метилирование ДНК участвует в поддержании статуса респондента. Затем мы попытались идентифицировать эпигенетически регулируемый сигнальный компонент, участвующий в ответе на Pam и другие MAMP.
Рис. 3: Статус клеток-респондентов поддерживается в течение нескольких поколений с помощью эпигенетических механизмов.
Монослои WT MCF10A выращивали в течение 24 (слева) или 48 часов (справа), обрабатывали 1 мкг / мл Pam3CSK4 и иммуноокрашивали на NF-κB. Стрелки указывают группы отвечающих ячеек.Масштабная линейка, 100 мкм. Изображения представляют четыре реплики. b Монослои обрабатывали 1 мкг / мл Pam3CSK4 и иммуноокрашивали на ответ NF-κB. Гистограммы показывают количественную оценку среднего расстояния от каждой отвечающей клетки до ближайших пяти респондеров в монослое по сравнению с рандомизированными положениями респондентов. c Схема, описывающая рабочий процесс эксперимента по отслеживанию происхождения. Клеточные клоны контролировали в течение 60 часов путем отслеживания ядерной флуоресценции h3B-iRFP. После последней временной точки клетки обрабатывали 1 мкг / мл Pam3CSK4, фиксировали и иммуноокрашивали, как описано в разделе «Методы».Статус респондера измеряли в каждой конечной клетке, и предполагалось минимальное количество событий изменения статуса, чтобы реконструировать статус ответчика клонов. d Репрезентативные линии передачи получены, как описано на панели c (дополнительный рис. 5a). e С использованием данных отслеживания происхождения подсчитывалось количество отвечающих клеток, имеющих сестринскую, двоюродную или расширенную относительную клетку, которая является отвечающей (синий) или не отвечающей (серый цвет) клеткой, и сообщалась вероятность. f Схема для описания бистабильных скоростей переключения, полученная с помощью модели, построенной на основе данных отслеживания происхождения.Статус респондента и неответчика поддерживается с низкой вероятностью переключения для каждого поколения. Дополнительные сведения о модели см. В дополнительных материалах. г WT MCF10A культивировали с ингибиторами эпигенетических модификаторов (HDACi (SAHA, 800 нМ), HATi (A-485, 10 мкМ), HMTi (EPZ-6438, 5 мкМ), DNMTi (5-азацитидинC, 500 нМ или 5-аза-2′-дезоксицитидин (1 мкМ))) за 7 дней до обработки Pam3CSK4. Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение для четырех повторов. ч. Монослои, обработанные 5-азацитидином С, как на панели g, и культивированные в течение 30 дней после удаления лекарственного средства.В указанные моменты времени измеряли долю отвечающих клеток, как показано на фиг. 2а. Затенение серым цветом указывает 95% доверительный интервал прогноза модели. Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение для трех повторов.
Бимодальная экспрессия TLR2 создает цифровой ответ
Предыдущие сообщения показали, что промотор TLR2 человека гипометилирован при болезненных состояниях, которые включают чрезмерное воспаление, такое как муковисцидоз и пародонтит, увеличивая уровень экспрессии рецептора 33,34 .Кроме того, наши данные показывают, что агонисты TLR2 запускают MyD88-зависимый цифровой ответ (дополнительный рис. 6a), а другие MyD88-зависимые сигнальные молекулы врожденного иммунитета, такие как IL-1β, вызывают полностью пенетрантный ответ (рис. 4a). Следовательно, мы предположили, что бимодальная экспрессия TLR2 может участвовать в передаче цифровых сигналов. Чтобы ответить на этот вопрос, мы использовали индуцируемый доксициклином промотор для управления гетерологичной экспрессией рецептора TLR2 и обнаружили, что процент pam-отвечающих клеток увеличился почти до 100% (рис.4б). Мы пришли к выводу, что экспрессия TLR2 ограничивает сигнальные возможности не отвечающих клеток. Если экспрессия TLR2 требуется в ответных клетках, экспрессия белка на уровне популяции должна быть выше в сценариях, где большая часть монослоя отвечает, например, после обработки 5-азацитидином (рис. 3g). Соответственно, иммуноблоттинг для TLR2 показал, что экспрессия значительно выше после обработки (фиг. 4c). Эти результаты предполагают, что TLR2 может экспрессироваться в подмножестве клеток.Чтобы решить эту проблему, мы выполнили флуоресценцию одной молекулы мРНК in situ (smRNA FISH) в тандеме с иммунофлуоресценцией NF-κB в стимулированных и нестимулированных клетках. Наши результаты показали, что респондеры содержат значительно большее количество мРНК TLR2 по сравнению с неответчиками (рис. 4d). В качестве контроля количество мРНК Pol II было неотличимо для отвечающих и не отвечающих клеток (дополнительный рис. 6b, c). Важно отметить, что распределение количества мРНК TLR2 в стимулированных и нестимулированных клетках было эквивалентным (дополнительный рис.6г). Вместе эти данные подтверждают идею о том, что в монослое эпигенетически регулируемая бимодальная экспрессия TLR2 ограничивает количество клеток, способных отвечать на бактериальные липопептиды.
Рис. 4: Бимодальная экспрессия TLR2 ограничивает долю отвечающих клеток.
a MCF10A дикого типа стимулировали 1 мкг / мл Pam3CSK4 или 100 нг / мл IL-1β. Количественное определение иммунофлуоресцентного окрашивания ядер / цитоплазмы p65 показано на гистограммах в логарифмической шкале. Данные представляют собой три реплики.b Клетки трансдуцировали TLR2 под промотором Tet Responsive Element 3-го поколения (TRE3G) и инкубировали с доксициклином (2 мкг / мл) или без него в течение 24 часов. Затем клетки стимулировали 1 мкг / мл Pam3CSK4 и иммуноокрашивали для определения статуса респондера, как показано на фиг. 2а. Показаны репрезентативные изображения трех повторов. Масштабная линейка, 100 мкм. c Иммуноблоттинг против TLR2 в клетках, обработанных ингибитором DNMT или без него (5-азацитидин С, 500 нМ) или HDACi (SAHA 800 нМ). HSC70 использовали в качестве контроля загрузки.Данные представляют собой две реплики. d Двойная smRNA FISH-иммунофлуоресценция для TLR2 и NF-κB была выполнена, как описано в разделе «Методы». Пунктирная линия указывает границы ячеек, желтые квадраты выделяют зонды TLR2. Показаны репрезентативные изображения двух повторов. Масштабная линейка 10 мкм. Количественная оценка мРНК TLR2 у респондеров и не отвечающих, определяемых ядерной транслокацией NF-κB. N = всего 354 клетки (148 респондеров, 206 не отвечающих), p = 3,8e-19 на × 2 тест с 9 степенями свободы. e Вестерн-блоттинг клеток TRE3G :: TLR2, обработанных 4-часовым импульсом доксициклина (2 мкг / мл) и культивированных в течение указанного времени. Относительные количества нормализованы для контроля загрузки HSC70. Стандартное отклонение представляет собой два независимых эксперимента для каждого условия. Графики Swarmplots представляют собой технические копии процента отвечающих клеток (вверху) и амплитуды NF-B ядра / цитоплазмы (внизу) в одних и тех же клетках.
В то время как ингибирование эпигенетических модификаций влияет на долю респондеров, мы задались вопросом, может ли стабильность наследования статуса респондера быть объяснена нечастым взрывом транскрипции и высокой стабильностью мРНК или белка.Анализ происхождения показал, что в некоторых случаях статус ответа сохраняется в течение пяти поколений или 60 часов. Однако период полужизни белка TLR2 был определен как ~ 8 часов 35 (дополнительный рис. 6e). Кроме того, мы стремились имитировать всплеск транскрипции с помощью пульсации доксициклина в течение 4 часов в наших клетках TRE3G :: TLR2. После импульса процент отвечающих клеток быстро падал, и через 72 часа экспрессия TLR2 не определялась, как и в клетках WT (рис. 4e, c). Учитывая, что TLR2 недостаточно стабилен, чтобы сохраняться в течение пяти поколений, мы предполагаем, что эпигенетический контроль промотора TLR2 лицензирует транскрипцию для нескольких поколений.Этот дополнительный регуляторный уровень обеспечит пространственно-временной контроль над долей отвечающих за счет изменения вероятностей эпигенетического переключения на уровне отдельной ячейки.
Метилирование промотора TLR2 коррелирует с долей респондеров
Наши данные предполагают, что экспрессия TLR2 происходит посредством эпигенетического лицензирования. Недавние исследования использовали аллель-специфическое метилирование, чтобы показать, что метилирование ДНК происходит в метастабильных состояниях (например, полностью метилировано или полностью деметилировано) 24 .Таким образом, мы хотели определить, является ли метилирование промотора TLR2 бимодальным. Чтобы ответить на этот вопрос, мы использовали необработанные данные из бисульфита 36 или секвенирования нанопор в клетках MCF10A и извлекли отдельные чтения, выравнивающиеся с областью промотора TLR2 (от -120 п.н. до сайта начала транскрипции, TSS). Эта область содержит несколько сайтов CpG, которые, как было показано ранее, регулируют экспрессию TLR2 37,38 . Наш анализ подтвердил, что отдельные чтения TLR2 метилировались единым блоком между положениями -110 и -60 (рис.5а). Фактически, расчет общего количества неметилированных остатков в этой области показал четкое бимодальное распределение с в основном метилированными или неметилированными CpGs (Fig. 5b). Эти данные свидетельствуют о том, что метилирование промотора TLR2 существует в двух метастабильных состояниях. Затем мы спросили, проявляют ли другие цитокины или рецепторы распознавания образов аналогичные регуляторные элементы. В то время как большинство рецепторов не содержало CpG-островков, стартовые сайты TLR5, IL1R1 и TLR2 содержат метастабильные блоки из 10 или более сайтов CpG.Примечательно, что процент метилирования слабо отражает процент ответа NF-κB на их соответствующие лиганды (Fig. 5c и Supplementary Fig. 7).
Рис. 5: Метилирование промотора TLR2 бимодально.
a Бисульфит 36 и данные секвенирования нанопор на 130 п.н. перед сайтом начала транскрипции (TSS) TLR2 в MCF10A. Указаны местоположения консенсусных участков связывающей последовательности факторов транскрипции. b Количественная оценка гистограммы количества неметилированных CpG на одно чтение в диапазоне от -110 до -60. c Секвенирование метилирования нанопор 57 данные от 100 п.н. выше до 1000 п.н. ниже TSS для указанного рецептора. Процент неметилированных и метилированных CpG, а также процент отвечающих клеток, определенный с помощью иммунофлуоресценции p65 после стимуляции TLR5 (флагеллин), IL1R (IL-1B) и TLR2 (Pam). d Локус TLR2 нацелен на секвенирование нанопор геномной ДНК, выделенной из первичных эпителиальных клеток молочной железы мыши. e Дифференциально экспрессируемые гены, косегрегационные с TLR2-отрицательными и положительными клетками в общедоступных данных секвенирования одноклеточной РНК из эпителиальных тканей молочной железы человека 40 . f Процент TLR2-положительных клеток из данных секвенирования ScRNA, собранных из ткани груди семи женщин-доноров. Учитывались только клетки, экспрессирующие люминальные маркеры экспрессии (подробности см. В разделе «Методы»).
Известно, что гиперметилирование ДНК происходит в культивируемых и трансформированных клетках спонтанно 39 . Таким образом, мы спросили, встречаются ли бимодальные состояния также в первичных тканях, измеряя метилирование локуса TLR2 в ткани молочных желез мышей. Интересно, что большинство считываний секвенирования были неметилированными, что согласуется с тем фактом, что в первичных органоидах доля респондеров составляет 50–60% по сравнению с 10–20% в клеточных линиях (рис.2c – e). Тем не менее, часть метилированных считываний en bloc также присутствовала в первичных не культивируемых тканях (Fig. 2d). Эта тенденция указывает на то, что подобные переключателям эпигенетические модификации локуса TLR2 также происходят in vivo.
Затем мы хотели исследовать, имеют ли отвечающие клетки другие специализированные функции в эпителиальных тканях, помимо обнаружения агонистов TLR2. Мы исследовали данные секвенирования одноклеточной РНК из ткани молочной железы человека 40 , чтобы спросить, есть ли у экспрессирующих TLR2 клетки другие корегулируемые гены.Результаты показали, что TLR2-положительные клетки действительно корегулируют другие гены, которые связаны с выработкой цитокинов и иммунитетом в соответствии со стандартным анализом термина GO (рис. 5e и дополнительная таблица 1). Следует отметить, что все доноры тканей экспрессировали TLR2 в подмножестве клеток просвета, однако доля клеток сильно варьировала между донорами (~ 30%, макс. 93%, мин. 3%; рис. 5f). Затем мы решили продолжить изучение регуляции фракции респондеров на тканевом уровне при генетических нарушениях или воздействии окружающей среды.
Экологические и генетические изменения увеличивают процент респондентов
Одним из отличительных признаков онкогенной трансформации является широко распространенная эпигенетическая дисрегуляция 41 . В частности, было показано, что мутация BRAF V600E , присутствующая в 50–70% меланом, в значительной степени изменяет метилирование ДНК 42,43 . Мы спросили, изменяет ли экспрессия BRAF V600E долю отвечающих клеток, используя индуцибельный промотор. Результаты показали, что доля респондеров увеличилась только через 24 часа экспрессии BRAF V600E и достигла нового устойчивого состояния у ~ 70% респондеров через 72 часа (рис.6а, б). Этот переход зависел от активности ERK, поскольку добавление ингибитора ERK Ulixertinib 44 полностью отменяло изменение фракции отвечающих клеток (фиг. 6b). Соответственно, уровни экспрессии TLR2 и TLR1 были повышены в 72-часовых лизатах, подтверждая связь между процентом респондеров и TLR2 (фиг. 6c и S8a). Амплитуда ответа NF-κB между экспрессирующими и неэкспрессирующими клетками BRAF V600E аналогична, что позволяет предположить, что, хотя экспрессия лицензируется в более высокой фракции клеток, количество функций TLR2 на клетку сопоставимо (дополнительный рис.8б). Секвенирование нанопор локуса TLR2 до и после добавления доксициклина выявило снижение метилирования (рис. 6d). Хотя этот результат предполагает, что увеличение количества отвечающих клеток коррелирует со снижением метилирования, процент отвечающих действительно соответствует проценту метилированных считываний. Таким образом, мы заключаем, что, вероятно, будут задействованы дополнительные эпигенетические модификации или сложная временная динамика эпигенетических регуляторных событий.
Рис. 6. Эпигенетические модификации, вызванные онкогеном, увеличивают процент респондеров.
a Клональная линия клеток MCF10A, содержащая TRE3G :: BRAF V600E , была иммуноокрашена на p65 через 24 часа культивирования в присутствии или в отсутствие доксициклина (2 мкг / мл) после стимуляции Pam3CSK4 (1 мкг / мл) в течение 30 дней. мин. Показаны репрезентативные изображения. Масштабная линейка 50 мкм. b Монослои, обработанные только Pam3CSK4 (1 мкг / мл) или с увеличивающейся продолжительностью dox, или ERKi (5 мкМ уликсертиниб) перед обработкой Pam3CSK4. Данные представляют собой три реплики. c TLR2 иммуноблоттинг индуцибельных клеток BRAF V600E dox, как на панели b .HSC70 представляет собой контроль загрузки, относительные количества представлены со стандартным отклонением, представляющим два независимых эксперимента. d Локус TLR2 нацелен на секвенирование метилирования нанопор геномной ДНК, выделенной из клеток MCF10A человека со сверхэкспрессией (Plus Dox, 96 ч) или без (No Dox) BRAFV600E. e TRE3G :: BRAF V600E монослои культивировали с dox или ингибиторами (HATi, A-485 (10 мкМ) и RSKi, BI-D1870 (10 мкМ)) и рассчитывали процент респондеров Pam3CSK4 (1 мкг / мл). с помощью иммунофлуоресценции NF-κB.Планки погрешностей представляют собой три технических повторения.
Предыдущие исследования показали, что передача сигналов ERK вызывает эпигенетические изменения посредством p90 RSK и гистонацетилтрансферазы CBP / p300 45 . Чтобы выяснить, связано ли быстрое увеличение числа респондеров с ERK-опосредованными эпигенетическими изменениями, мы индуцировали экспрессию в присутствии ингибиторов RSK или гистонацетилтрансферазы CBP / p300. Оба ингибитора значительно блокировали переход не отвечающего на ответ (рис. 6e). В совокупности наши данные предполагают, что генетические нарушения, такие как онкогенные мутации, могут изменять вероятность эпигенетического переключения в отдельных клетках, что приводит к изменениям доли отвечающих клеток на тканевом уровне.
Как указывалось ранее, мы предположили, что ткань может регулировать свой ответ, изменяя долю респондеров (дополнительный рис. 2b). Поскольку популяционные анализы показывают, что на экспрессию TLR2 влияет хроническое воспаление 33,34,38 , мы предположили, что длительное воздействие цитокинов или MAMPs может повлиять на долю респондеров. Чтобы имитировать такой сценарий, мы культивировали клетки с панелью активаторов пути врожденного иммунитета в течение длительного периода времени, удалили лечение на 24 часа и стимулировали Pam для определения доли респондеров.Интересно, что мы обнаружили, что MyD88-независимая передача сигналов от Poly (I: C), TNFα, IFNγ и TGFβ значительно увеличивает верхний предел ответной фракции, в то время как MyD88-зависимая передача сигналов Flagellin, Pam и IL-1β нет (рис. . 7а). Эффект Poly (I: C) и TNFα представил интригующую возможность того, что пролонгированная базальная активность NF-κB вносит свой вклад в эту регулировку монослоя, в то время как единичный импульс активности, создаваемый такими входами, как флагеллин, Pam или IL-1β, делает это. нет. Мы проверили эту гипотезу, сравнив кратковременную стимуляцию с непрерывной стимуляцией (рис.7б). Мы обнаружили, что только клетки, которые стимулировались непрерывно, показали значительное увеличение доли отвечающих клеток (рис. 7c). Эти данные подтверждают идею, что устойчивая осцилляторная передача сигналов NF-κB, генерируемая рецепторами, которые не передают сигнал через MyD88, может увеличивать TLR2-чувствительную фракцию в эпителии. Таким образом, регулирование эпигенетического статуса TLR2 некоторыми цитокинами в пространственно-временном отношении регулирует верхний предел ответа ткани (рис. 7d).
Рис. 7: Высокая стабильная сигнализация NF-ĸB увеличивает процент респондентов.
a монослои WT обрабатывали указанным стимулом четыре раза в течение 9-дневного периода. Концентрации входов были: Poly (I: C) 1 мкг / мл, TNFα 100 нг / мл, Flagellin 1 мкг / мл, Pam3CSK4 1 мкг / мл, IL-1β 100 нг / мл, IFNγ 5 мк / мл и TGFβ. 5 нг / мл. Планки погрешностей представляют шесть технических повторов с n > 1000 клеток на реплику. Двухвыборочный t тест * p <0,05 и *** p <0,001. b Схема экспериментального рабочего процесса для данных на панели c .Монослои стимулировали вводом каждые 2 дня и промывали или нет через 30 мин. После последней стимуляции (день 8) все монослои промывали в течение 24 ч перед определением фракции респондеров с помощью Pam3CSK4, как показано на рис. 2а. c Монослои, обработанные, как показано на панели b , входные концентрации как на панели a . Две биологические повторы, пять технических повторов для каждого состояния, *** p <0,001; двухвыборочная т. -исп. d Краткое описание модели.Эпителиальная ткань содержит клетки, которые полностью или полностью не реагируют на агонисты липопептидов или не реагируют на них. Статус ответа определяется экспрессией TLR2, которая контролируется эпигенетическими модификациями промотора TLR2. В устойчивом состоянии доля респондентов низка; однако высокая воспалительная передача сигналов с участием типов клеток врожденного иммунитета (например, дендритных клеток, макрофагов) приводит к изменениям в скорости эпигенетического переключения, что увеличивает долю чувствительных клеток в ткани.
Муковисцидоз — NORD (Национальная организация по редким заболеваниям)
УЧЕБНИКИ
Kasper, DL, Fauci AS, Longo DL, et al. Ред. Принципы внутренней медицины Харрисона, 16-е изд. Компании McGraw-Hill. Нью-Йорк, штат Нью-Йорк; 2005: 419-420.
Behrman RE, Клигман RM, Дженсон HB. Ред. Учебник педиатрии Нельсона. 17-е изд. Elsevier Saunders. Филадельфия, Пенсильвания; 2005: 1437-1449.
Ямада Т., Альперс Д.Х., Капловиц Н., Лайне Л. и др. Ред. Учебник по гастроэнтерологии.4-е изд. Липпинкотт Уильямс и Уилкинс. Филадельфия, Пенсильвания; 2003: 2153-2159, 2636-2637.
Валлийский MJ, Ramsey BW, Accurso F, Cutting GR. Кистозный фиброз. В: Scriver CR, Beaudet AL, Sly WS, Valle D, eds. Метаболические и молекулярные основы наследственных заболеваний. 8-е изд. Vol. 3. Нью-Йорк: Макгроу-Хилл, 2001: 5121-5188.
СТАТЬИ В ЖУРНАЛЕ
Ong T, Ramsey BW. Модифицирующая болезнь при муковисцидозе: текущие и будущие методы лечения на горизонте. Curr Opin Pulm Med. 2013; 19: 645-651.
Констан MW, Wagener JS, Pasta DJ, et al. Клиническое использование дорназы альфа связано с более медленным снижением ОФВ1 при муковисцидозе. Педиатр Пульмонол 2011; 46: 545–553.
Флюм П.А., Могайзел П.Дж. младший, Робинсон К.А., Розенблатт Р.Л., Квиттелл Л., Маршалл Британская Колумбия; Комитет по клинической практике для легочной терапии; Комитет по легочной терапии Фонда кистозного фиброза. Муковисцидоз легких: легочные осложнения: кровохарканье и пневмоторакс. Am J Respir Crit Care Med.2010; 182: 298-306.
Моран А., Брунзель С., Коэн Р.К., Кац М., Маршалл Б.К., Онади Г., Робинсон К.А., Сабадоса К.А., Стеценко А., Словис Б. Комитет по руководствам CFRD. Руководство по клинической помощи при диабете, связанном с муковисцидозом: заявление о позиции Американской диабетической ассоциации и руководство по клинической практике Фонда кистозного фиброза, одобренное Детским эндокринным обществом. Уход за диабетом. 2010; 33: 2697-2708.
Боровиц Д., Робинсон К.А., Розенфельд М., Дэвис С.Д., Сабадоса К.А., Копье С.Л., Мишель С.Х., Парад РБ, Уайт ТБ, Фаррелл П.М., Маршалл BC, Аккурсо Ф.Дж.Основанные на доказательствах рекомендации Фонда кистозного фиброза по ведению младенцев с муковисцидозом. J Pediatr. 2009 декабрь; 155 (6 доп.): S73-93.
Флюм PA, Робинсон К.А., О’Салливан Б.П., Finder JD, Vender RL, Willey-Courand DB, White TB, Marshall BC; Комитет по клинической практике для легочной терапии. Муковисцидоз легких: методы лечения очищения дыхательных путей. Respir Care. 2009; 54: 522-537.
Фаррелл П.М., Розенштейн Б.Дж., Уайт Т.Б. и др. Рекомендации по диагностике муковисцидоза у новорожденных и пожилых людей: консенсусный отчет Фонда кистозного фиброза.Журнал Педиатр 2008; 153: S4-S14.
Flume PA, O’Sullivan BP, Robinson KA, Goss CH, Mogayzel Jr PJ, Willey-Courand DB, Bujan J, Finder J, Lester M, Quittell L, Rosenblatt R, Vender RL, Hazle L, Sabadosa K, Marshall B; Фонд кистозного фиброза, Комитет по легочной терапии. Рекомендации по лечению кистозного фиброза легких: хронические препараты для поддержания здоровья легких. Am J Respir Crit Care Med 2007; 176: 957-69.
Робертсон МБ, Чхве К.А., Джозеф П.М. Обзор абдоминальных проявлений муковисцидоза у взрослого пациента.Рентгенография. 2006; 26: 679-690.
Brigman C, Feranchak A. Поражение печени при муковисцидозе. Варианты лечения Curr Gastroenterol. 2006; 9: 484-496.
Ник Дж. А. и Родман Д. М.. Проявления муковисцидоза диагностируются в зрелом возрасте. Curr Opin Pulm Med. 2005; 11: 513-518.
Московиц С.М., Гибсон Р.Л., Эффманн Э.Л. Муковисцидоз легких: генетические влияния, микробные взаимодействия и радиологическая оценка. Pediatr Radiol. 2005; 35: 739-757.
Кон Дж. А., Митчелл Р. М., Джоуэлл П. С..Роль мутаций гена муковисцидоза в определении предрасположенности к хроническому панкреатиту. Гастроэнтерол Clin North Am. 2004; 33: 817-837.
ИНТЕРНЕТ
Sharma GD. Кистозный фиброз. Medscape. Последнее обновление 8 июня 2016 г. Доступно по адресу: http://www.emedicine.com/PED/topic535.htm По состоянию на 13 декабря 2016 г.
Московиц С.М., Хмиэль Дж.Ф., Стернен Д.Л. и др. Заболевания, связанные с CFTR. 26 марта 2001 г. [Обновлено 19 февраля 2008 г.]. В: Pagon RA, Adam MP, Ardinger HH, et al., Редакторы.GeneReviews® [Интернет]. Сиэтл (Вашингтон): Вашингтонский университет, Сиэтл; 1993-2016. Доступно по адресу: https://www.