Мутация jak2: КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ЭССЕНЦИАЛЬНОГО ТРОМБОЦИТОЗА И ПЕРВИЧНОГО МИЕЛОФИБРОЗА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ МУТАЦИОННОГО СТАТУСА ГЕНОВ JAK2 И CALR1

Содержание

КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ЭССЕНЦИАЛЬНОГО ТРОМБОЦИТОЗА И ПЕРВИЧНОГО МИЕЛОФИБРОЗА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ МУТАЦИОННОГО СТАТУСА ГЕНОВ JAK2 И CALR1 | Лисина

1. Baxter E.J., Scott L.M., Campbell P.J. et al. Acquired mutation of the tyrosine kinase JAK2 in human myeloproliferative disor-ders. Lancet 2005;365:1054–1056. DOI: 10.1016/S0140-6736(05)71142-9. PMID: 15781101.

2. James C., Ugo V., Le Couedic J.P. et al. A unique clonal JAK2 mutation leading to constitutive signaling causes polycythaemia vera. Nature 2005;434(7037):1144–1148. DOI: 10.1038/nature03546. PMID: 15793561.

3. Levine R.L., Wadleigh M., Cools J. et al. Activating mutation in the tyrosine kinase JAK2 in polycythemia vera, essential thrombocythemia, and myeloid metaplasia with myelofibrosis. Cancer Cell 2005;7(4):387–397. DOI: 10.1016/j.ccr.2005.03.023. PMID: 15837627.

4. Kralovics R., Passamonti F., Buser A.S. et al. A gain-of-function mutation of JAK2 in myeloproliferative disorders. N Engl J Med 2005;352(17):1779–1790. DOI: 10.1056/NEJMoa051113. PMID: 15858187.

5. Levine R.L., Belisle C., Wadleigh M. et al. X-inactivation-based clonality analysis and quantitative JAK2V617F assessment reveals a strong association between clonality and JAK2V617F in PV but not ET/MMM, and identifies a subset of JAK2V617F-negative ET and MMM patients with clonal hema-topoiesis. Blood 2006;107(10):4139–4141. DOI: 10.1182/blood-2005-09-3900. PMID: 16434490.

6. Antonioli E., Guglielmelli P., Pancrazzi A. et al. Clinical implications of the JAK2 V617F mutation in essential thrombocythe-mia. Leukemia 2005;19:1847–1849. DOI: 10.1038/sj.leu.2403902. PMID: 16079890.

7. Campbell P.J., Scott L.M., Buck G. et al. Definition of subtypes of essential thrombocythaemia and relation to polycythaemia vera based on JAK2 V617F mutation status:a prospective study. Lancet 2005;366:1945–1953. DOI: 10.1016/S0140-6736(05)67785-9. PMID: 16325696.

8. Jones A.V., Kreil S., Zoi K. et al. Widespread occurrence of the JAK2 V617F mutation in chronic myeloproliferative disorders. Blood 2005;106(6):2162–2168. DOI: 10.1182/blood-2005-03-1320. PMID: 15920007.

9. Wolanskyj A.P., Lasho T.L., Schwager S.M. et al. JAK2 mutation in essential thrombocythaemia: clinical associations and longterm prognostic relevance. Br J Haematol 2005;131(2):208–213. DOI: 10.1111/j.1365-2141.2005.05764.x. PMID: 16197451.

10. Campbell P.J., Griesshammer M., Dohner K. et al. V617F mutation in JAK2 is associated with poorer survival in idiopathic myelofibrosis. Blood 2006;107:2098–2100. DOI: 10.1182/blood-2005-08-3395. PMID: 16293597.

11. Tefferi A., Lasho T.L., Schwager S.M. et al. The JAK2(V617F) tyrosine kinase mutation in myelofibrosis with myeloid metaplasia: lineage specificity and clinical correlates. Br J Haematol 2005;131(3):320–328. DOI: 10.1111/j.1365-2141.2005.05776.x. PMID: 16225651.

12. Passamonti F., Elena C., Schnittger S. et al. Molecular and clinical features of the myeloproliferative neoplasm associated with JAK2 exon 12 mutations. Blood 2011;117(10):2813–6. DOI: 10.1182/blood-2010-11-316810. PMID: 21224469.

13. Kisseleva T., Bhattacharya S., Braunstein J., Schindler C.W. Signaling through the JAK/ STAT pathway, recent advances and future challenges. Gene 2002;285(1–2):124. PMID: 12039028.

14. Sandberg E.M., Wallace T.A., Godeny M.D. et al. Jak2 tyrosine kinase: a true jak of all trades? Cell Biochem Biophys 2004;41(2):207–232. PMID: 15475610.

15. Zhao R., Xing S., Li Z. et al. Identification of an acquired JAK2 mutation in polycythemia vera. J Biol Chem 2005;280(24):22788–22792. DOI: 10.1074/jbc.C500138200. PMID: 15863514.

16. Staerk J., Lacout C., Sato T. et al. An amphipathic motif at the transmembrane-cytoplasmic junction prevents autonomous activation of the thrombopoietin receptor. Blood 2006;107(5):1864–1871. DOI: 10.1182/blood-2005-06-2600. PMID: 16249382.

17. Pikman Y., Lee B.H., Mercher T. et al. MPLW515L is a novel somatic activating mutation in myelofibrosis with myeloid metaplasia. PLoS Med 2006;3(7):e270. DOI: 10.1371/journal.pmed.0030270. PMID: 16834459.

18. Pardanani A.D., Levine R.L., Lasho T. et al. MPL515 mutations in myeloproliferative and other myeloid disorders: a study of 1182 patients. Blood 2006;108(10):3472–6. DOI: 10.1182/blood-2006-04-018879. PMID: 16868251.

19. Klampfl T., Gisslinger H., Harutyunyan A.S. et al. Somatic Mutations of Calreticulin in Myeloproliferative Neoplasms. N Engl J Med 2013;369(25):2379–2390. DOI: 10.1056/NEJMoa1311347. PMID: 24325356.

20. Nangalia J., Massie C.E., Baxter E.J. et al. Somatic CALR Mutations in Myeloproliferative Neoplasms with Nonmutated JAK2. N Engl J Med 2013;369(25):2391–2405. DOI: 10.1056/NEJMoa1312542. PMID: 24325359.

21. Rumi E., Pietra D., Ferretti V. et al. Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro Gruppo Italiano Malattie Mieloproliferative Investigators. JAK2 or CALR mutation status defines subtypes of essential thrombocythemia with substantially different clinical course and outcomes. Blood 2014;123(10):1544–1551. DOI: 10.1182/blood-2013-11-539098. PMID: 24366362.

22. Cabagnols X., Defour J.P., Ugo V. et al. Differential association of calreticulin type 1 and type 2 mutations with myelofibrosis and essential thrombocytemia: relevance for disease evolution. Leukemia 2015;29:249–252. DOI: 10.1038/leu.2014.270. PMID: 25212275.

23. Chachoua I., Pecquet C., El-Khoury M. et al. Thrombopoietin receptor activation by myeloproliferative neoplasm associated calreticulin mutants. Blood 2016;127(10):1325–35. DOI: 10.1182/blood-2015-11-681932. PMID: 26668133.

24. Araki M., Yang Y., Masubuchi N. et al. Activation of the thrombopoietin receptor by mutant calreticulin in CALR-mutant myeloproliferative neoplasms. Blood 2016;127(10):1307–1316. DOI: 10.1182/blood-2015-09-671172. PMID: 26817954.

25. Abdel-Wahab O., Manshouri T., Patel J. et al. Genetic analysis of transforming events that convert chronic myeloproliferative neoplasms to leukemias. Cancer Res 2010;70(2):447–452. DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-09-3783. PMID: 20068184.

26. Delhommeau F., Dupont S., Della Valle V. et al. Mutation in TET2 in myeloid cancers. N Engl J Med 2009;360(22):2289–2301. DOI: 10.1056/NEJMoa0810069. PMID: 19474426.

27. Zhang S.J., Rampal R., Manshouri T. et al. Genetic analysis of patients with leukemic transformation of myeloproliferative neoplasms shows recurrent SRSF2 mutations that are associated with adverse outcome. Blood 2012;119(19):4480–4485. DOI: 10.1182/blood-2011-11-390252 PMID: 22431577.

28. Tefferi A., Lasho T.L., Finke C.M. et al. CALR vs JAK2 vs MPL-mutated or triplenegative myelofibrosis: clinical, cytogenetic and molecular comparisons. Leukemia 2014;28(7):1472–1477. DOI: 10.1038/leu.2014.3. PMID: 24402162.

29. Rampal R., Ahn J., Abdel-Wahab O. et al. Genomic and functional analysis of leukemic transformation of myeloproliferative neoplasms. Proc Natl Acad Sci USA 2014;111(50):E5401–E5410. DOI: 10.1073/pnas.1407792111. PMID: 25516983.

30. Skoda R.C., Duek A., Grisouard J. Pathogenesis of myeloproliferative neoplasms. Exp Hematol 2015;43(8):599–608. DOI: 10.1016/j.exphem.2015.06.007. PMID: 26209551.

31. Arber D.A., Orazi A., Hasserjian R. et al. The 2016 revision to the World Health Organization classification of myeloid neoplasms and acute leukemia. Blood 2016;127(20):2391–2405. DOI: 10.1182/blood-2016-03-643544. PMID: 27069254.

32. Rumi E., Pietra D., Pascutto C. et al. Clinical effect of driver mutations of JAK2, CALR, or MPL in primary myelofibrosis. Blood 2014;124(7):1062–9. DOI: 10.1182/blood-2014-05-578435. PMID: 24986690.

33. Tefferi A., Wassie E.A., Lasho T.L. et al. Calreticulin mutations and longterm survival in essential thrombocythemia. Leukemia 2014;28(12):2300–3. DOI: 10.1038/leu.2014.148. PMID: 24791854.

34. Andrikovics H., Krahling T., Balassa K. et al. Distinct clinical characteristics of myeloproliferative neoplasms with calreticulin mutations. Haematologica 2014;99(7):1184–1190. DOI: 10.3324/haematol.2014.107482. PMID: 24895336.

35. Roques M., Park J.H., Minello A. et al. Detection of the CALR mutation in the diagnosis of splanchnic vein thrombosis. Br J Haematol 2015;169(4):601–603. DOI: 10.1111/bjh.13235. PMID: 25413838.

36. Turon F., Cervantes F., Colomer D. et al. Role of calreticulin mutations in the aetiological diagnosis of splanchnic vein thrombosis. J Hepatol 2015;62(1):72–74. DOI: 10.1016/j.jhep.2014.08.032. PMID: 25173966.

37. Sazawal S., Singh N., Mahapatra M. et al. Calreticulin mutation profile in Indian patients with primary myelofibrosis. Hematology 2015;20(10):567–570. DOI: 10.1179/1607845415Y.0000000018. PMID: 25959795.

38. Tefferi A., Lasho T.L., Finke C. et al. Type 1 vs type 2 calreticulin mutations in primary myelofibrosis: differences in phenotype and prognostic impact. Leukemia 2014;28(7):1568–1570. DOI: 10.1038/leu.2014.83. PMID: 24569778.

39. Tefferi A., Wassie E.A., Guglielmelli P. et al. Type 1 versus Type 2 calreticulin mutations in essential thrombocythemia: a collaborative study of 1027 patients. Am J Hematol 2014;89(8):E121–E124. DOI: 10.1002/ajh.23743. PMID: 24753125.

40. Tefferi A., Vardiman J.W. Classification and diagnosis of myeloproliferative neoplasms: the 2008 World Health Organization criteria and point-of-care diagnostic algorithms. Leukemia 2008;22(1):14–22. DOI: 10.1038/sj.leu.24049550. PMID: 17882280.

41. Cervantes F., Dupriez B., Pereira A. et al. New prognostic scoring system for primary myelofibrosis based on a study of the International Working Group for Myelofibrosis Research and Treatment. Blood 2009;113(13):2895–901.

42. Passamonti F., Cervantes F., Vannucchi A.M. et al. A dynamic prognostic model to predict survival in primary myelofibrosis:a study by the IWG-MRT (International Working Group for Myeloproliferative Neoplasms Research and Treatment). Blood 2010;115(9):1703–8.

43. Al Assaf C., Van Obbergh F., Billiet J. et al. Analysis of phenotype and outcome in essential thrombocythemia with CALR or JAK2 mutations. Haematologica 2015;100(7):893–897. DOI: 10.3324/haematol.2014.118299. PMID: 25934766.

ЧАСТОТА ОБНАРУЖЕНИЯ МУТАЦИИ ГЕНА JAK2 СРЕДИ ДОНОРОВ КРОВИ | Ольховский

1. Jelinek J, Oki Y, Gharibyan V et al. JAK2 mutation 1849G>T is rare in acute leukemias but can be found in CMML, Philadelphia chromosome-negative CML, and megakaryocytic leukemia. Blood 2005; 106:3370—3373.

2. Tefferi A, Vardiman JW. Classification and diagnosis of myeloproliferative neoplasms: The 2008 World Health Organization criteria and point-of-care diagnostic algorithms. Leukemia 2008; 22:14—22.

3. Xu X, Zhang Q, Luo J et al. JAK2V617F: prevalence in a large Chinese hospital population. Blood 2007; 109:339—342.

4. Orloff K, Tierney B. Community Health Screening Report, 2010. Доступно в интернете по адресу: http://www.atsdr.cdc.gov/HAC/pha/CommunityHealthScreeninginPA2010/CommunityHealthScreeningReport.pdf (по состоянию на25 июня2016 г.).

5. Nielsen C, Bojesen SE, Nordestgaard BG et al. JAK2 V617F somatic mutation in the general population: myeloproliferative neoplasm development and progression rate. Haematologica 2014; 99:1448—1455.

6. Titmarsh GJ, Duncombe AS, McMullin MF et al. How common are myeloproliferative neoplasms? A systematic review and meta-analysis. Am J Hematol 2014: 89:581—587.

7. Ольховский И. А., Столяр М. А. Особенности агрегационной активности тромбоцитов у пациентов с мутацией в генеJAK2: гендерные отличия и эффект аспирина. Гематология и трансфузиология2014; 59:11—14.

8. Schwarz J, International Hematology Expert Meeting 2014 Hermagor/ Austria. Доступно в интернете по адресу: http://xn-80aajeesum3a.xn-p1ai/pdf/Myeloproliferative.pdf (по состоянию на25 июня2016 г.).

9. Dentali F, Ageno W, Rumi E et al. Cerebral venous thrombosis and myeloproliferative neoplasms: results from two large databases. Thromb Res 2014; 134:41—43.

10. Passamonti SM, Biguzzi E, Cazzola M et al. The JAK2 V617F mutation in patients with cerebral venous thrombosis. J Thromb Haemost 2012; 10:998—1003.

11. Xavier SG, Gadelha T, Rezende SM et al. JAK2V617F mutation in patients with thrombosis: to screen or not to screen? Int J Lab Hematol 2011; 33:117—124.

12. Smalberg JH, Arends LR, Valla DC et al. Myeloproliferative neoplasms in Budd—Chiari syndrome and portal vein thrombosis: a meta-analysis. Blood 2012; 120:4921—4928.

13. Ольховский И. А., Карапетян Г. Э., Горбенко А. С. и др. Выявляемость пациентов с онкогенной соматической мутацией янускиназы-2 (V617F JAK2) в рамках программ диспансерного и профилактического осмотров. Клиническая лабораторная диагностика2016; 61:275—278.

14. Muendlein A, Gasser K, Kinz E et al. Evaluation of the prevalence and prospective clinical impact of the JAK2 V617F mutation in coronary patients. Am J Hematol 2014; 89:295—301.

15. Hinds DA, Barnholt KE, Mesa RA et al. Germ line variants predispose to both JAK2 V617F clonal hematopoiesis and myeloproliferative neoplasms. Blood 2016; 128:1121—1128.

16. Vassiliou GS. JAK2 V617F clonal disorders: fate or chance? Blood 2016; 128:1032—1033.

17. Sidon P, El Housni H, Dessars B et al. The JAK2V617F mutation is detectable at very low level in peripheral blood of healthy donors. Leukemia 2006; 20:1622.

18. Tagariello G, Di Gaetano R, Sartori R et al. The JAK2V617F tyrosine kinase mutation in blood donors with upper-limit haematocrit levels. Blood Transfusion 2009; 7:111—116.

19. Magnussen K, Hasselbalch H, Ullum H et al. Characterization of blood donors with high haemoglobin concentration. Vox Sang 2013; 104:110—114.

20. Edgren G, Reilly M, Hjalgrim H et al. Donation frequency, iron loss, and risk of cancer among blood donors. J Natl Cancer Inst 2008; 100:572—579.

21. Edgren G, Nyren O, Hultcrantz M et al. Blood donation and risk of polycythemia vera. Transfusion 2016; 56:1622—1627.

22. Khudhair MA. Detection of JAK2V617F mutation and estimation of serum erythropoietin among blood donors with high hematocrit. University of Baghdad, 2014. Доступно в интернете по адресуhttp://www.comed.uobaghdad.edu.iq/uploads/Thesis%202015/May%20Ahmed%20 Khudhair.pdf (по состоянию на25 мая2016 г.).

23. Горбенко А. С., Столяр М. А., Субботина Т. Н. и др. Разработка метода определения аллельной нагрузки соматической мутацииV617F в генеJAK2 (янускиназы2) в пулах проб венозной крови. Лабораторная служба2016; 1:19—25.

24. Krichevsky S, Prus E, Perlman R et al. The JAK2V617F mutation in normal individuals takes place in differentiating cells. Blood Cells Mol Dis 2017; 63:45—51.

25. Nemer W, De Grandis M, Brusson M. Abnormal adhesion of red blood cells in polycythemia vera: a prothrombotic effect? Thromb Res 2014; 133:S107—111.

26. Kubota Y, Tanaka T, Ohnishi H et al. Constitutively activated phosphatidylinositol 3-kinase primes platelets from patients with chronic myelogenous leukemia for thrombopoietin-induced aggregation. Leukemia 2004; 18:1127—1137.

27. Falanga A, Marchetti M, Vignoli A et al. Leukocyte-platelet interaction in patients with essential thrombocythemia and polycythemia vera. Exp Hematol 2005; 33:523—530.

28. Falanga A, Marchetti M. Thrombotic disease in the myeloproliferative neoplasms. Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2012; 2012:571—581.

29. Hirsch P, Mamez AC, Belhocine R et al. Clonal history of a cord blood donor cell leukemia with prenatal somatic JAK2 V617F mutation. Leukemia 2016; 30:1756—1759.

Ген Янус-киназы 2 (JAC 2) – что это такое? Свойства и показания

№ анализа в базе «Науки»: 572.

Янус-киназа-тирозинкиназа — фермент, который синтезируется в печени. Играет важную роль в регуляции нормальной выработки гемопоэтических клеток. Изменение активности киназы обуславливает склонность к увеличению числа клеток одного или нескольких ростков кроветворения.

Выявление JAK2 V617F мутации в гене — генетический анализ, который позволяет определить риск развития миелопролиферативных заболеваний, полицитемии, риск прерывания беременности, образования тромбозов.

Синонимы

Определение JAK2 V617F мутации в гене; JAK2 полиморфизм, ДНК-диагностика мутации гена JAK2 V617.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (real-time ПЦР).

Биоматериал для анализа

Венозная кровь.

Подготовка

Кровь желательно сдавать натощак.

Описание

Название гена: JAK2.

Мутации гена JAK2:

мутация гена JAK2 V617F,

определение наличия делеций в 12 экзоне гена JAK2 киназы,

мутации в гене MPL-1, приводящие к заменам в 515 положении белка MPL.

Функция гена JAK2: кодирует регуляторные белки, обладающие тирозинкиназной активностью.

Янус-киназа — это тирозинкиназа, фермент подкласса протеинкиназ, группы киназ. Синтезируется в печени. Тирозинкиназы ускоряют перенос фосфатного остатка от АТФ на тирозиновый остаток специфических клеточных белков-мишеней. Регулируют клеточный рост и дифференцировку, апоптоз. Эти тирозинкиназы получили название Янус-киназиз-за наличия двух активных участков (доменов), сходных по строению, но противоположных по функциям.

Фермент Янус-киназа служит промежуточным звеном между рецепторами на мембране клетки и сигнальными молекулами (например, факторы роста, пролактин, интерферон, интерлейкины). Когда определенные цитокины или факторы роста (эритропоэтин, тромбопоэтин, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор и др.) связываются с рецепторами JAK-киназ на поверхности клетки, JAK-киназы активируются (фосфорилируются). Далее происходит последовательное активирование белков семейства STAT (Signal Transducers and Activators of Transcription). Белки STAT соединяются и проникают в ядро. Там они сами или с участием других белковых факторов передают сигналы о размножении, дифференцировки клеток гемопоэтического ряда (клеток-предшественников), тем самым влияя на кроветворную систему человека.

При появлении мутации JAK2 V617F происходит усиление сигнала от JAK2, что приводит к избыточному образованию клеток. При соматической мутации JAK2 V617F в позиции 617 валин заменен на фенилаланин. Появляется эта мутация в гемопоэтических клетках-предшественниках. Фермент JAK2 всё время активирует белки сигнальных путей, которые воздействуют на образование и дифференцировку клеток-предшественников, что ведет к увеличению числа клеток одного или нескольких ростков кроветворения. Морфологически это проявляется в виде увеличения числа клеток костного мозга.

Для чего используется анализ

Анализ позволяет достоверно определить мутацию в гене JAK2.

Когда назначается

Установка или подтверждение диагноза истинной полицитемии, эссенциальной тромбоцитемии или идиопатического миелофиброза.

Определение риска развития тромбозов.

Определение риска прерывания беременности.

Исследование рекомендуется проводить в комплексе: цитогенетическое и гистологическое исследование костного мозга.

Референсные значения (норма)

Для данного маркёра не существует понятия «норма» и «патология», т. к. исследуется полиморфизм гена.

Литература:

Зарайский М. И. Уровень экспрессии гена теломеразы (hTERT) у пациентов с хроническим миелолейкозом на фоне монотерапии Гливеком / Д. И. Бутлицкий, И. Ю. Сабурова, В. Л. Эмануэль // Клинико-лабораторный консилиум. — 2008. — Т. 21, № 2. — С. 26–29.

Сабурова И. Ю. Определение мутации V617F в гене Jak2 у пациентов с хроническими миелопролиферативными заболеваниями / Я. В. Оникичук, И. И. Зотова, Г. Н. Сологуб, М. И. Зарайский // Ученые записки. — 2008. — Т. 4. — С. 32–35.

Сабурова И. Ю. Детекция мутации V617F в гене Jak2 — основа диагностики хронических миелопролиферативных заболеваний / Я. В. Оникичук, И. И. Зотова, Г. Н. Сологуб, М. И. Зарайский // Клинико-лабораторный консилиум. — 2008. — Т. 25, № 6. — С. 23–26.

Сабурова И. Ю. Определение мутации V617F в гене Jak2 у пациентов с неверифицированными хроническими миелопролиферативными заболеваниями / Я. В. Оникичук, И. И. Зотова, Г. Н. Сологуб, М. И. Зарайский // Онкогематология. — 2008. — Т. 4. — С. 71.

KDL. Онкогематология. Анализы и цены

Алергология. ImmunoCAP. Индивидуальные аллергены, IgE

Аллергокомпоненты ImmunoCAP

Аллергокомпоненты деревьев

Аллергокомпоненты животных и птиц

Аллергокомпоненты плесени

Аллергокомпоненты трав

Пищевые аллергокомпоненты

Аллергология. ImmunoCAP. Комплексные исследования IgE (результат по каждому аллергену)

Аллергология. ImmunoCAP. Панели аллергенов IgE, скрининг (результат СУММАРНЫЙ)

Аллергология. ImmunoCAP. Фадиатоп

Аллергология. Immulite. Индивидуальные аллергены

Аллергены гельминтов, IgE

Аллергены грибов (кандида и плесневых), IgE

Аллергены деревьев, IgE

Аллергены животных и птиц, IgE

Аллергены клещей домашней пыли, IgE

Аллергены лекарств и химических веществ, IgE

Аллергены насекомых, IgE

Аллергены пыли, IgE

Аллергены ткани, IgE

Аллергены трав, IgE

Бактериальные аллегены (стафилококк), IgE

Пищевые аллергены, IgE

Пищевые аллергены, IgG

Аллергология. Immulite. Комплексы аллергенов, IgE (результат по каждому аллргену)

Аллергология. Immulite. Панели аллергенов, скрининг (результат СУММАРНЫЙ)

Аллергены деревьев, IgE (панель)

Аллергены животных и птиц, IgE (панель)

Аллергены трав, IgE (панель)

Ингаляционные аллергены, IgE (панель)

Пищевые аллергены, IgE (панель)

Аллергология. Immulite. Панели пищевых аллергенов IgG (результат СУММАРНЫЙ)

Аллергология. ImmunoCAP. Индивидуальные аллергены, IgE

Аллергены деревьев, IgE

Аллергены животных и птиц, IgE

Аллергены пыли, IgE

Аллергены трав, IgE

Пищевые аллергены, IgE

Аллергология. RIDA. Комплексы аллергенов, IgE

Аллергология. RIDA. Комплексы аллергенов, IgE (результат по каждому аллргену)

Аллергология. Местные анестетики, IgE

Биохимические исследования крови

Диагностика анемий

Липидный обмен

Обмен белков

Обмен пигментов

Обмен углеводов

Специфические белки

Ферменты

Электролиты и микроэлементы

Биохимические исследования мочи

Разовая порция мочи

Суточная порция мочи

Витамины, аминокислоты, жирные кислоты

Гематология

Гемостаз (коагулограмма)

Генетические исследования

HLA-типирование

Исследование генетических полиморфизмов методом пиросеквенирования

Исследование генетических полиморфизмов методом ПЦР

Молекулярно-генетический анализ мужского бесплодия

Гистологические исследования

Гистологические исследования лаборатории UNIM

Гормоны биологических жидкостей

Гормоны гипофиза и гипофизарно-адреналовой системы

Гормоны крови

Гормоны гипофиза и гипофизарно-адреналовой системы

Маркеры остеопороза

Пренатальная диагностика

Ренин-альдостероновая система

Тесты репродукции

Функция органов пищеварения

Функция щитовидной железы

Гормоны мочи

Диагностика методом ПЦР

COVID-19

Андрофлор, иследование биоценоза (муж)

Вирус герпеса VI типа

Вирус Варицелла-Зостер (ветряной оспы)

Вирус герпеса VI типа

Вирус простого герпеса I, II типа

Вирус Эпштейна-Барр

Вирусы группы герпеса

Возбудитель туберкулеза

ВПЧ (вирус папилломы человека)

Грибы рода кандида

Листерии

Парвовирус

Респираторные инфекции

Стрептококки (вкл. S.agalactie)

Токсоплазма

Урогенитальные инфекции, ИППП

Урогенитальные инфекции, комплексные исследования

Урогенитальные инфекции, условные патогены

Фемофлор, исследование биоценоза (жен)

Флороценоз, иследование биоценоза (жен)

Цитомегаловирус

Диагностика методом ПЦР, кал

Кишечные инфекции

Диагностика методом ПЦР, клещ

Клещевые инфекции

Диагностика методом ПЦР, кровь.

Вирус Варицелла-Зостер (ветряной оспы)

Вирус герпеса VI типа

Вирус краснухи

Вирус простого герпеса I, II типа

Вирус Эпштейна-Барр

ВИЧ

Возбудитель туберкулеза

Гепатит D

Гепатит G

Гепатит А

Гепатит В

Гепатит С

Листерии

Парвовирус

Токсоплазма

Цитомегаловирус

Жидкостная цитология

Изосерология

Иммуногистохимические исследования

Иммунологические исследования

Иммунограмма (клеточный иммунитет)

Интерфероновый статус, базовое исследование

Интерфероновый статус, чувствительность к препаратам

Оценка гуморального иммунитета

Специальные иммунологические исследования

Исследование абортуса

Исследование мочевого камня

Исследование парапротеинов. Скрининг и иммунофиксация

Исследования слюны

Комплексные исследования

Лекарственный мониторинг

Маркеры аутоиммунных заболеваний

Антифосфолипидный синдром (АФС)

Аутоиммунные заболевания легких и сердца

Аутоиммунные неврологические заболевания

Аутоиммунные поражения ЖКТ и целиакия

Аутоиммунные поражения печени

Аутоиммунные поражения почек и васкулиты

Аутоиммунные эндокринопатии и бесплодие

Диагностика артритов

Пузырные дерматозы

Системные ревматические заболевания

Эли-тесты

Микробиологические исследования (посевы)

Посев крови на стерильность

Посев на гемофильную палочку

Посев на грибы (Candida)

Посев на грибы (возбудители микозов кожи и ногтей)

Посев на дифтерию

Посев на микоплазмы и уреаплазмы

Посев на пиогенный стрептококк

Посев на стафилококк

Посевы кала

Посевы мочи

Посевы на микрофлору (конъюнктива)

Посевы на микрофлору (отделяемое)

Посевы на микрофлору (урогенитальный тракт женщины)

Посевы на микрофлору (урогенитальный тракт мужчины)

Посевы на микрофлору ЛОР-органы)

Ускоренные посевы с расширенной антибиотикограммой

Неинвазивная диагностика болезней печени

Программы неинвазивной диагностики болезней печени

Неинвазивный пренатальный ДНК-тест (НИПТ)

Неинвазивный пренатальный тест (пол/резус плода)

Общеклинические исследования

Исследование назального секрета

Исследование секрета простаты

Исследования кала

Исследования мочи

Исследования эякулята

Микроскопическое исследование биологических жидкостей

Микроскопия на наличие патогенных грибов и паразитов

Микроскопия отделяемого урогенитального тракта

Онкогематология

Иммунофенотипирование при лимфопролиферативных заболеваниях

Миелограмма

Молекулярная диагностика миелопролиферативных заболеваний

Цитохимические исследования клеток крови и костного мозга

Онкогенетика

Онкомаркеры

Пищевая непереносимость, IgG4

Полногеномные исследования и панели наследственных заболеваний

Пренатальный скрининг

Серологические маркеры инфекций

Аденовирус

Бруцеллез

Вирус HTLV

Вирус Варицелла-Зостер (ветряной оспы)

Вирус герпеса VI типа

Вирус Коксаки

Вирус кори

Вирус краснухи

Вирус эпидемического паротита

Вирус Эпштейна-Барр

Вирусы простого герпеса I и II типа

ВИЧ

Гепатит D

Гепатит А

Гепатит В

Гепатит Е

Гепатит С

Грибковые инфекции

Дифтерия

Кишечные инфекции

Клещевые инфекции

Коклюш и паракоклюш

Коронавирус

Менингококк

Паразитарные инвазии

Парвовирус

Респираторные инфекции

Сифилис

Столбняк

Токсоплазма

Туберкулез

Урогенитальные инфекции

Хеликобактер

Цитомегаловирус

Специализированные лабораторные исследования.

Дыхательный тест

Микробиоценоз по Осипову

Тяжелые металлы и микроэлементы

Тяжелые металлы и микроэлементы в волосах

Тяжелые металлы и микроэлементы в крови

Тяжелые металлы и микроэлементы в моче

Услуги

Выезд на дом

ЭКГ

Установление родства

Химико-токсикологические исследования

Хромосомный микроматричный анализ

Цитогенетические исследования

Цитологические исследования

Чекап

Мутация Янус-киназы 2 JAK2 Val617Phe

Для чего это нужно

Миелопролиферативные заболевания (МПЗ, хронические миелоидные опухоли) – группа заболеваний, характеризующихся избыточной пролиферацией одного или нескольких ростков кроветворения. Это группа Ph-негативных хронических лейкозов, обусловленных нарушениями на уровне гемопоэтических стволовых клеток. К самым распространенным заболеваниям этой группы относятся истинная полицитемия (эритремия), эссенциальная тромбоцитемия и первичный (идиопатический) миелофиброз. Частота встречаемости этих заболеваний составляет от 1 до 2,3 на 100 тыс. населения.

Истинная полицитемия характеризуется возрастанием количества циркулирующих эритроцитов (6–8 х 10¹²/л), в меньшей степени нейтрофилов и тромбоцитов, повышением гематокрита и спленомегалией (увеличение размеров селезенки).

Эссенциальная тромбоцитемия характеризуется увеличением количества тромбоцитов (> 450 x 10⁹/л), нарушением агрегационной способности тромбоцитов, развитием внутрисосудистого свертывания крови.

Первичный миелофиброз характеризуется фиброзом костного мозга, экстрамедуллярным гемопоэзом и спленомегалией.

В развитии хронических миелоидных опухолей выявлено более 20 соматических мутаций, из которых мутация JAK 2 Val617Phe в 14 экзоне локуса 9q24 гена янус-киназы 2 является наиболее распространенной. Она обнаруживается в 96% случаев у пациентов с истинной полицитемией, в 55% случаев при эссенциальной тромбоцитопении и примерно в 45-68% случаев при первичном миелофиброзе. Однако мутация может встречаться и при острой миелоидной лейкемии, миелодиспластическом синдроме, хронической миеломоноцитарной лейкемии. Мутация не передается по наследству. Частота встречаемости в мире составляет 4 на 10 тыс. человек.

Янус-киназа 2 (JAK 2) – это цитоплазматическая тирозинкиназа, которая является промежуточным звеном в JAK-STAT сигнальном пути, приводящему к активации генов посредством транскрипции. Замена в 1849-м положении G на T в гене янус киназы 2 приводит к замене валина (Val, V) на фенилаланин (Phe, F) в положении 617, итогом которой является изменение структуры белка и повышение его активности, приводя к активации пролиферации клетки и накоплению клеток зрелого миелоидного ряда.

Согласно ВОЗ (2015г.) наличие мутации является одним из диагностических критериев для постановки диагноза хронических миелоидных опухолей. Своевременное обнаружение мутации JAK 2 V617F позволяет назначить эффективную терапию для предотвращения развития миелопролиферативного заболевания и его осложнений.

Одним из основных осложнений таких заболеваний является тромбофилия, которая характеризуется предрасположенностью к тромбозам у пациента, и тем самым повышая риск антенатальной гибели плода во время беременности. Для исключения повышения риска тромбозов рекомендуется также провести обследование на наличие аутоиммунных антител (антифосфолипидный синдром) и генетические анализы на тромбофилию. Наличие МПЗ нередко служит фактором риска развития синдрома Бадда-Киари, поэтому для исключения гематологического заболевания назначают анализ на выявление мутации JAK 2 V617F. В некоторых исследованиях также отмечается связь данной мутации с уровнем липопротеинов высокой плотности, низкой плотности и общего холестерина. Однако корреляция еще не до конца изучена.

Анализ на выявление мутации JAK2 V617F имеет диагностическое значение и показан для:

установки и подтверждения диагноза истинной полицитемии, эссенциальной тромбоцитопении или первичного миелофиброза

дифференциальной диагностики миелопролиферативных заболеваний и вторичного эритроцитоза, реактивного тромбоцитоза и других форм МПЗ

дополнительный анализ к цитологическому и гистологическому исследованию костного мозга

Определение мутации V617F в гене Jak2 у пациентов с хроническими миелопролиферативными заболеваниями Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

УЧЕНЫЕ ЗАПИСКИ СПбГМУ ИМ. АКАД. И. П. ПАВЛОВА • ТОМ XV • №4 • 2008

УДК 616.155.392.8-036.12-008.434.59

И. Ю. Сабурова, Я. С. Оникичук, И. И. Зотова, Г. Н. Салотуб, М. И. Зарайский

ОПРЕДЕЛЕНИЕ МУТАЦИИ

В ГЕНЕ Jak2 У ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКИМИ МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ

Кафедра клинической лабораторной диагностики с курсом молекулярной медицины, кафедра факультетской терапии, 31 поликлиника Санкт-Петербургского государственного медицинского университета имени академика И. П. Павлова

ВВЕДЕНИЕ

Хронические миелопролиферативные заболевания (МПЗ) представляют собой группу клональных нарушений гемопоэтической стволовой клетки, характеризующихся пролиферацией одной или более миелоидных линий в косном мозге и повышенным количеством зрелых и незрелых клеточных форм в крови [1].9;22). Это позволило не только разработать высокоспецифичный метод диагностики, но и развить таргетную терапию и разработать методики мониторинга минимальной остаточной болезни. С тех пор перечень молекулярных маркеров, ассоциированных с гематологической патологией, постоянно расширяется.

Одним из наиболее диагностически значимых критериев для МПЗ является наличие мутации V617F в гене Jak2 [6]. Мутация V617F в гене Jak2 определяется в 9095 % случаев истинной полицитэмии, 50-70 % случаев эссенциальной тромбоцитэмии и 40-50 % случаев мие-лофиброза [3]. Ген Jak2 экспрессирован в ранних предшественниках гемопоэза и кодирует нерецепторную ти-розинкиназу, участвующую в передаче сигнала от рецепторов цитокинов и факторов роста к ядру клетки. Мутация

V617F вызывает конститутивную активацию рецептора без участия лиганда, что приводит к активации пролиферации клетки и блокаде процессов апоптоза.

Таким образом, основной целью данного исследования явилась разработка простого метода детекции мутации V617F в гене Jak2, пригодной как для первичной диагностики данных патологий, так и для полуколичественной оценки минимальной остаточной болезни на фоне терапии.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Характеристика групп пациентов

В исследование были включены 58 пациентов, обследованных на базе Центра лабораторной диагностики СПбГМУ им. акад. И. П. Павлова. Из них 6 человек обследовались с предварительным диагнозом «идеопатичес-кий миелофиброз», 8 человек — с диагнозом «истинная полицитэмия», 7 человек — с диагнозом «эссенциальная тромбоцитэмия» и 35 человек с диагнозом «невирифи-цированная хроническая миелопролиферация». Средний возраст пациентов составил 55 лет. До обследования пациенты не получали специфической терапии. В качестве группы сравнения использовались 10 стандартных доноров крови.

Клеточная линия

В качестве положительного контроля использовалась клеточная линия ЦКЕ1, любезно предоставленная профессором Борисом Фезе (Германия). Данная клеточная линия несет гомозиготный генотип мутированного гена Jak2 в позиции G1849T экзон 14 (мутация V617F).

Преаналитический этап

Кровь: забор образцов производился в стерильных условиях из периферической вены или центрального катетера в вакуумный контейнер, содержащий в качестве антикоагулянта раствор ЭДТА. Объем крови составлял 10 мл.

Костный мозг: забор аспирата костного мозга производился в стерильных условиях путем пункции грудины или крыла подвздошной кости. Образец переносился в вакуумный контейнер, содержащий в качестве антикоагулянта раствор ЭДТА. Объем пробы составлял 1 мл.

Полученные образцы доставлялись в лабораторию не позже 1 ч после их получения.

Выделение ДНК

ДНК выделяли из 200 мкл костного мозга или 1 мл цельной крови, используя наборы «ДНК-ГС» (ДНК-Технология, Россия). В результате получали 100 мкл водного раствора, содержащего от 3 до 10 мкг ДНК. После выделения образцы ДНК хранились при температуре -20 оС до исследования.

Проведение ПЦР-анализа

Амплификация проводилась на приборе «Терцик» («ДНК-технология», Россия) с использованием двух обратных и одного прямого праймеров. Последователь-

ОРИГИНАЛЬНЫЕ

РАБОТЫ

ности используемых праймеров: прямой (общий для дикого и мутантного аллелей) праймер Jak2-F: 5′-GGGTTTCCTCAGAACGTTGA-3′ и 2 обратных праймера: Jak2-RW: 5′-TTTACTTACTCTCGTCTCCACArAC-3′ на дикий тип и Jak2-RM: 5′-TTTACTTACTCTCGTCTCCACATAA-3′ на мутантный тип.

Амплификация проводилась по стандартной двухпрай-мерной схеме в конечном объеме 10 мкл. Реакционная смесь содержала 2 мкл ДНК, 14 рМол каждого праймера, смесь дНТФ в конечной концентрации 240 мкМол и 2,5 единицы термостабильной Taq ДНК-полимеразы (Helicon, Россия) в стандартном ПЦР буфере с содержанием Mg2+15 мМол. Типовая программа амплификации состояла из начальной денатурации (96 оС, 3 мин), 40 циклов, включавших денатурацию (94 оС, 20 с), отжиг праймеров (61 оС, 30 с), элонгацию (72 оС , 40 с) и заключительной элонгации (72 оС, 1 мин).

Амплификация в «реальном времени» (RealTime) проводилась на приборе ДТ-96 («ДНК-технология», Россия) с использованием тех же праймеров и амплификацион-ной смеси для ПЦР в реальном времени с красителем SYBR GREEN («Синтол», Россия). Типовая программа амплификации состояла из начальной денатурации (96 оС, 3 мин), 40 циклов, включавших денатурацию (95 оС, 15 с) и отжиг праймеров с элонгацией (61 оС, 40 с).

Постамплификационный этап

ПЦР-продукт амплификации без предварительной обработки наносился на 2 % агарозный гель. Электрофорез проводился в стандартном трис-ЭДТА-боратном буфере при напряженности электрического поля 10 В/см в течение 20 мин. Визуализация и фотографирование элек-трофореграммы проводилось после окраски геля водным раствором бромистого этидия в УФ-свете на трансиллюминаторе. Гели анализировались с помощью устройства для фотографирования и анализа гелей «Gel Imager, 08-111» («ДНК-технология», Россия).

Расчет цикла выхода пробы при амплификации в реальном времени осуществлялся прибором ДТ-96 автоматически по «threshold». По окончании амплификации в реальном времени проводился анализ кривой плавления с целью исключения неспецифического продукта.

Оценка результатов исследования

Для проверки специфичности методики была использована клеточная линия UKE1. В качестве отрицательного контроля было использовано 10 образцов ДНК, выделенных из периферической крови стандартных доноров.

Качественная оценка аналитических характеристик проводилась путем исследования данных электрофоре-граммы продуктов амплификации. Каждая проба оценивалась по наличию электрофоретического сигнала в двух дорожках: дорожка № 1 (амплификация с праймерами для «дикого» типа гена Jak2) и дорожка № 2 (амплификация с праймерами для мутантного типа гена Jak2). Наличие электрофоретического сигнала в дорожке № 2 указывало на наличие данной мутации в исследуемом образ-

1 2 3 4

Панель а — «дикий» тип гена; панель б — мутантный тип гена.

Образцы: 1 — донор, 2 и 3 — пациенты, 4 — клеточная линия (UKE1). Проба 1 и 2 — гомозиготы по дикому типу гена Jak2, проба 3 — гетерозигота, проба 4 — гомозигота по мутантному типу гена Jak2

це. Положительным контролем служила клеточная линия UKE1; отрицательным контролем служили образцы доноров (рисунок).

Полуколичественная оценка результатов исследования проводилась с помощью компьютерной программы GelPro Analyzer 3.1.

В процессе работы программа выдает количественную оценку уровней свечения сигнала в пробах в относительных единицах интенсивности (ОЕ). Суммарный сигнал с обеих дорожек (для мутированного и дикого типа гена Jak2) для каждой пробы приравнивался к 100 %. Относительная интенсивность сигнала мутированного варианта гена указывала на процентное содержание клеток опухолевого клона в пробе.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Выявление у пациентов мутации V617F гена Jak2 является достоверным диагностическим маркером наличия хронического миелопролиферативного заболевания [6]. Общепризнанной является методика раздельной амплификации ДНК пациента с праймерами, специфичными для мутированного и дикого типа гена Jak2. В настоящей статье мы предлагаем один из адаптированных вариантов данной методики.

УЧЕНЫЕ ЗАПИСКИ СПбГМУ ИМ. АКАД. И. П. ПАВЛОВА • ТОМ XV • N04 • 2008

Для отладки методики были использованы клеточная линия иКЕ 1, в 100 % клеток которой определяется гомозиготная мутация V617F гена Jak2. В качестве контрольной группы использовалась ДНК от 10 стандартных доноров, у которых данная мутация отсутствовала. При сравнительном анализе данных, полученных с помощью стандартной ПЦР и ПЦР в «реальном времени», была показана высокая сходимость результатов. Использование анализа «кривой плавления» при ПЦР в реальном времени показало высокую специфичность и воспроизводимость данной методики.

Проспективное исследование наличия мутации V617F в гене Jak2 было проведено в группе из 58 пациентов с предварительным диагнозом «хроническое миелопроли-феративное заболевание» (ХМПЗ). Встречаемость данной мутации составила 29,3 %. При анализе распределения встречаемости данной мутации по нозологическим формам были получены следующие результаты (таблица).

Полученные результаты частично совпали с литературными данными [2]. Расхождения могут быть связаны с малой выборкой. Причиной расхождения с литературными данными может также являться то, что данное обследование являлось проспективным, а диагноз пациентов предварительным.

Jak2 является нерецепторной тирозинкиназой, расположенной на цитоплазматическом домене многих рецепторов цитокинов, гормонов и факторов роста. Jak2 представляет собой сложную белковую структуру, в которой наибольший интерес, с точки зрения клиники, представляют киназный и псевдокиназный домены [7]. В норме псевдокиназный домен предотвращает сближение и спонтанную самоактивацию двух киназных доменов. После связывания лиганда с рецептором в псевдокиназном домене происходят конформационные изменения, приводящие к сближению киназных доменов и их активации за счет перекрестного фосфорилирования тирозиновых оснований.личество пациентов Положите льная Отрицательная %

Гиперэозино-фильный синдром 2 0 2 0

Идеопатический миелофиброз 6 3 3 50

Истинная 8 3 5 37,5

полицитэмия

Эссенциальная тромбоцитэимя 7 2 5 28,6

Хроническое миелопролифератив-ное заболевание 35 9 26 25,7

ной структуры тирозинкиназы, сближение киназных доменов, их спонтанную самоактивацию и появление конститутивной активности тирозинкиназы Jak2. Фенотипи-чески это проявляется активацией пролиферации и блокированием процессов апаптоза. Все эти механизмы лежат в основе патогенеза ХМПЗ, и даже гетерозиготная мутация может привести к запуску миелопролиферации. Таким образом, выявление мутации у первичных больных может служить надежным диагностическим критерием.

Представленная методика в основном ориентирована на скрининг первичных пациентов с подозрением на ХМПЗ. Дальнейшее совершенствование данной методики с введением количественной оценки опухолевого клона может быть использовано для мониторинга МОБ при проведении стандартной химиотерапии и трансплантации гемопоэтических стволовых клеток.

ЛИТЕРАТУРА

1. Dameshek, W. Some speculations on the myeloproliferative syndromes / W. Dameshek // Blood. — 1951. — № 6. — Р. 372-375.

2. McLornan, D. Melanie Percy, Mary Frances McMullin JAK2 V617F : A Single Mutation in the Myeloproliferative Group of Disorders / D. McLorman [et al] // Ulster. Med. J. — 2006. — № 75 (2). -Р. 112-119.

3. Ross, L. Role of JAK-STAT Signaling in the Pathogenesis of Myeloproliferative Disorders / L. Ross // Hematology. — 2006. — P. 233-239.

4. Tefferi, А. Classification and diagnosis of myeloproliferative neoplasms : the 2008 World Health Organization criteria and point-of-care diagnostic algorithms / A. Tefferi, J. W. Vardiman // Leukemia. -2008. — № 22. — Р. 14-22.

5. Tefferi, А. Classification, Diagnosis and Management of Myeloproliferative Disorders in the JAK2V617F Era / A. Tefferi // Hema-tology. — 2006. — P. 240-245.

6. Wolanskyj, A. P. JAK2V617F mutation in essential thrombocy-thaemia : clinical associations and long-term prognostic relevance / A. P. Wolanskyj [et al] // Br. J. Haematol. — 2005. — № 131 (2). -Р. 208-213.

7. Yamaoka, K. The Janus kinases (Jaks) / K. Yamaoka [et al] // Genome Biology. — 2004. — № 5. — Р. 253.

РЕЗЮМЕ

И. Ю. Сабурова, Я. С. Оникичук, И. И. Зотова,

Г. Н. Салотуб, М. И. Зарайский

Определение мутации V617F в гене Jak2 у пациентов с хроническими миелопролиферативными заболеваниями

Миелопролиферативные заболевания (МПЗ) представляют собой гетерогенную группу нарушений гемопоэза, сопровождающихся множественной гиперплазией клеток костного мозга. Их диагностика сложна и часто основывается на критериях исключения. Одним из наиболее диагностически значимых критериев для МПЗ является наличие мутации V617F в гене Jak2. Основная цель данной статьи — описание скринингового метода детекции V617F в гене Jak2, пригодного для первичной диагностики. Геномная ДНК от 58 пациентов с невирифицированным миелопролифера-тивным заболеванием выделялась по стандартной технологии. Детекция наличия мутации V617F в гене Jak2 проводилась с использованием двух пар праймеров, специфичных для мутантного и «дикого» типов генов Jak2. Использовалась клеточная линия UKE1 (Б. Фезе, Германия). Представляемая методика выявляет наличие мутации V617F в гене Jak2 с диагностически значимой чувствительностью и специфичностью. Частота мутации в общей

ОРИГИНАЛЬНЫЕ

РАБОТЫ

группе составила 29,3 %. Процент встречаемости мутации V617F в гене Jak2 в группе первичных пациентов с невирифицирован-ным диагнозом МПЗ составил 25,7 %. Таким образом, разработанный нами метод определения мутации V617F в гене Jak2 может быть использован в качестве скрининговой диагностики у пациентов с невирифицированными хроническими миелопролифератив-ными заболеваниями.

Ключевые слова: миелопролиферативные заболевания, мутация V617F в гене Jak2, ПЦР.

S UMMARY

I. Y. Saburova, Y. S. Onikichuk, I. I. Zotova,

G. N. Salogub, MI. I. Zarayskiy

Detection of JAK2V617F mutation in Patients with Myeloproliferative Disorders

Myeloproliferative disorders (MPD) represent a heterogeneous group of hematopoietic disturbances accompanied by multiple

hyperplasia of bone marrow cells. They are rather difficult to be diagnosed and are often revealed by excluding other conditions. One of the most valuable diagnostic criteria for MPD is JAK2V617F mutation. The main object of the study was to develop a routine technique for detection of JAK2V617F mutations to be of help in primary diagnosis. The genomic DNA was substracted from 58 patients by standard technique. The V617F mutation of Jak2 gene was detected with 2 pairs of primers specific to mutated and wild-type Jak2. The JAK2V617F mutation was detected with two pairs of primers specific to mutated and wild types of JAK2 gene on the UKE1 cell line (donated by Professor Boris Fehse, Germany). The suggested method proved to be rather sensitive in JAK2V617F mutation detection. The mutation rate in the combined group was 29.3 %. The frequency of JAK2V617F mutations in newly diagnosed patients with non-verified MPD was 25.7 %. Consequently the newly developed method for detection of JAK2V617F mutations can be used as a screening diagnostic method in patents with myeloproliferative disorders.

Key words: myeloproliferative disorders, JAK2V617F mutation, PCR.

Д. В. Дзадзуа, А. С. Захарова, Л. Н. Новикова, В. А. Воинов, К. С. Карчевский, Р. В. Чеминава, О. Э. Бакланова

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПЛАЗМАФЕРЕЗА У БОЛЬНЫХ ИДИОПАТИЧЕСКИМ ФИБРО-ЗИРУЮЩИМ АЛЬВЕОЛИТОМ

НИИ пульмонологии Санкт-Петербургского государственного медицинского университета имени академика И. П. Павлова

Интерстициальные заболевания легких (ИЗЛ) составляют 10-15 % в структуре всех болезней легких. К ним относятся более 200 нозологий известной и неизвестной этиологии [7]. Одним из наиболее распространенных и прогностически неблагоприятных заболеваний является идиопатический фиброзирующий альвеолит. Идиопа-тический фиброзирующий альвеолит (ИФА) (синонимы: криптогенный фиброзирующий альвеолит, идиопатический фиброз легких, болезнь Хаммена-Рича и др.) представляет собой своеобразный патологический процесс в легких неясной природы, характеризующийся нарастающей дыхательной недостаточностью вследствие развития преимущественно в интерстициальной ткани легких небактериального воспаления, ведущего к прогрессирующему интерстициальному фиброзу [3].

ИФА — заболевание, в развитии которого определенную роль играют иммунные механизмы, о чем свидетельствует присутствие активированных лимфоцитов, макрофагов, нейтрофилов и эозинофилов в легких.

Существенные отклонения от нормы определяются и в системе Т-клеточного иммунитета.

В связи с тем, что степень отклонения иммунологических показателей от нормы зависит от особенностей течения болезни, в литературе описаны существенные различия в оценке иммунологической реактивности больных ИФА. Исследования, проведенные Т. П. Сесь и соавт. (2000), свидетельствуют о том, что при ИФА наиболее информативными являются изменения следующих показателей: повышение общего числа эффекторных клеток в жидкости бронхоальвеолярного лаважа (ЖБАЛ) — альвеолярных макрофагов, нейтрофилов, лимфоцитов, увеличение числа Т-лимфоцитов (Т-хелперов), повышение активности интер-лейкинов (ИЛ-1Р, ИЛ-2), пролиферативной активности Т-лимфоцитов, активности протеолитических ферментов -эластазы и коллагеназы. Отклонение показателей гуморального иммунитета — иммуноглобулины трех основных классов (А, G и М) и циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) — служит критерием интенсивности аутоиммунных процессов в организме [3]. Поэтому оценка иммунологического статуса при ИФА имеет важное значение в решении вопросов лечебной тактики.

Для лечения больных ИФА используются кортикосте-роиды, иногда в сочетании с иммунносупрессантами и антифибротическими препаратами ф-пеницилламин и др.). Наряду с медикаментами, применяются и эфферентные методы лечения, главным образом плазмаферез (ПФ). Положительный эффект ПФ заключается в элиминации аутоантител и циркулирующих в крови иммунных комплексов, которые играют важную роль в развитии ИФА. ПФ повышает чувствительность к кортикостерои-дам [4], удаляя аутоантитела и ЦИК, улучшает микроциркуляцию, способствует нормализации основных метаболических процессов [1].

Однако до настоящего времени эффективность эфферентных методов при ИФА вызывает сомнения, не дока-

Гематологи исследовали редкое сочетание драйверных мутаций

Группа ученых из Национального медицинского исследовательского центра гематологии исследовала мутации, характерные для миелопролиферативных новобразований (МПН). Впервые на значительной выборке пациентов подтверждена возможность сочетанного возникновения драйверных мутаций более чем в одном из генов, кодирующих компоненты последовательных стадий передачи пролиферативного сигнала. Такие мутации вызывают превращение нормальной клетки в раковую. Статья с результатами исследования опубликована в журнале Genes.

Обычный протокол молекулярной диагностики МПН включает поиск мутаций в гене JAK2 и, если мутации не найдены, то исследование гена CALR и, наконец, гена MPL. Таким образом, пациенты с обнаруженными мутациями гена JAK2 в рамках рутинной диагностики не исследуются на мутации генов CALR и MPL. Новая работа интересна тем, что обнаруженное явление не явилось результатом запланированного научного исследования, а стало следствием случайных «находок» с последующим анализом накопленных лабораторных и клинических данных.

Исследование включает образцы ДНК 1958 пациентов с клиническими признаками МПН, поступивших в НМИЦ гематологии для генетического анализа в период с 2016 по 2019 год. В 315 из 1402 случаев (22,6%) были обнаружены мутации CALR. В 23 из этих 315 случаев (7,3%) в дополнение к мутации CALR была обнаружена мутация JAK2 V617F. В 16 из 24 (69,6%) случаев с сочетанными мутациями CALR и JAK2 аллельная нагрузка V617F была ниже 1%. Комбинация JAK2 V617F с MPL W515L/K также наблюдалась только в 1 из 1348 случаев. Аллельная нагрузка JAK2 в этом случае также была ниже 1%. В некоторых из исследованных случаев зафиксирована разнонаправленная динамика нагрузки сочетанных мутаций под влиянием терапии. Это свидетельствует о том, что по крайней мере в некоторых случаях эти мутации могут быть представлены разными клонами злокачественных клеток. Для оценки роли дополнительных мутаций в прогнозе МПН и определения тактики терапии (в том числе таргетной) необходимы дальнейшая идентификация, мониторинг и проспективное исследование таких пациентов.

«В научных проектах в области гематологии, в которых участвуют специалисты разных специальностей, существуют определенные организационно-информационные сложности,— говорит один из авторов исследования, заведующий информационно-аналитическим отделом НМИЦ гематологии Сергей Куликов.— Необходимо не только собрать для анализа данные из разных источников, но и организовать совместную работу экспертов: врачей, биологов, лабораторных специалистов, математиков. Если это получается, то результат может быть значимым. Самые интересные открытия возникают на стыках разных специальностей».

Публикация: Tatiana V. Makarik, Adhamjon O. Abdullaev, Elena E. Nikulina, Svetlana A. Treglazova, Elena E. Stepanova, Irina N. Subortseva, Alla M. Kovrigina, Anait L. Melikyan, Sergei M. Kulikov and Andrey B. Sudarikov. Low JAK2 V617F Allele Burden in Ph-Negative Chronic Myeloproliferative Neoplasms Is Associated with Additional CALR or MPL Gene Mutations / /Genes. 2021, 12, 559. https://doi.org/10.3390/genes12040559

Соматическая мутация JAK2 V617F, смертность и риск рака в общей популяции

Резюме

JAK2 V617F присутствует у большинства пациентов с миелопролиферативным раком; однако его распространенность и клиническое значение среди населения в целом неизвестны. Мы проверили наличие мутации у 10 507 участников Копенгагенского городского исследования сердца с периодом наблюдения до 17,6 лет.

Распространенность мутации составила 0,2% (n = 18).Все 18 положительных мутаций умерли во время наблюдения, что соответствует многофакторному скорректированному отношению рисков ранней смерти 3,0 (95% ДИ: 1,9–4,9). Соответствующие коэффициенты риска для мужчин по сравнению с женщин и увеличение возраста за 1 год составили 1,4 (1,1–1,9) и 1,1 (1,1–1,1). Многофакторно скорректированные отношения рисков для любого рака, гематологического рака и миелопролиферативного рака составили 3,7 (1,7–8,0), 58 (13–261) и 161 (12–2,197) соответственно. Соответствующие коэффициенты опасности составили 1,2 (0,8–2,0), 2,3 (0,2–25), 1.3 (0,3–5,4) для мужчин по сравнению с женщин и 1,0 (1,0–1,1), 1,1 (0,9–1,2), 0,9 (0,8–1,1) для возрастных групп до 1 года. В общей популяции JAK2 V617F ассоциируется с повышенной заболеваемостью и смертностью, хотя присутствует только у 18 из 10 507 (0,2%).

Ключевые слова: JAK2 V617F, смертность, риск рака

Введение

Мутация JAK2 V617F является приобретенной соматической мутацией, присутствующей у большинства пациентов с миелопролиферативным раком (миелопролиферативными новообразованиями) i.е. почти у 100% пациентов с истинной полицитемией и примерно у 50% пациентов с эссенциальным тромбоцитозом и первичным миелофиброзом. ¹ ^— ⁵ Мутация JAK2 V617F также может преобладать у людей без явных признаков миелопролиферативного рака. ⁶ ^— ⁹ Однако значение мутации в этой ситуации неизвестно, что заставляет нас исследовать, связано ли присутствие мутации JAK2 V617F у людей из общей популяции с плохим здоровьем.

Мы измерили распространенность мутации JAK2 V617F и проверили гипотезу о том, что наличие мутации связано с общей смертностью, риском любого рака, гематологического рака и миелопролиферативного рака у людей в общей популяции. С этой целью мы провели скрининг ДНК, выделенной из образцов цельной крови 10 507 участников Копенгагенского городского исследования сердца, за которыми наблюдали в течение 17,6 лет после отбора образцов крови. После скрининга наличие мутации было подтверждено двумя независимыми анализами с использованием различных аналитических методов.

Дизайн и методы

Исследование было одобрено датским научно-этическим комитетом (KF V.100 2039/91, KF 01-144 / 01) и больницей Херлев университетской больницы Копенгагена. Популяция исследования включала 10 507 участников Копенгагенского городского исследования сердца. Это постоянное популяционное исследование, начатое в 1976 году, с участием людей в возрасте 20–95 лет. Более 99% были кавказцами датского происхождения. Даты смерти были получены из национальной системы регистрации актов гражданского состояния Дании.¹⁰ Даты постановки диагноза и диагнозы любого рака были получены из Датского онкологического реестра. ¹¹ ^, ¹² Диагнозы были классифицированы в соответствии с Международной классификацией болезней (МКБ) Всемирной организации здравоохранения. ¹³ ^, ¹⁴

Мы количественно оценили мутацию JAK2 V617F с помощью анализа Taqman на основе ПЦР (ABI PRISM® 7900 Sequence Detection System) на ДНК, выделенной из периферической крови у всех 10 507 участников.Последовательности праймеров и зондов, а также условия реакции доступны по запросу. 1% участников (n = 107) с самым высоким сигналом от скринингового анализа также были протестированы с помощью аллель-специфической полуколичественной ПЦР, описанной Baxter et al. ¹ и, кроме того, высокочувствительным количественным анализом ПЦР в реальном времени, основанным на ранее опубликованном анализе, ¹⁵, последний количественно оценивает бремя мутаций.

Чтобы уменьшить вероятность искажения результатов анализа риска из-за пола и возраста во время отбора проб крови, мы отобрали 30 участников с отрицательными мутациями, сопоставимых по полу и возрасту при заборе крови для каждого из 18 субъектов с положительными мутациями.Анализы были выполнены в подобранной подгруппе, а также во всех положительных мутациях по сравнению со всеми отрицательными. Более подробная информация о конструкции и методах описана в дополнительном онлайн-приложении .

Результаты и обсуждение

Среди 10 507 прошедших скрининг участников мы обнаружили 18 человек, которые были положительными на соматическую мутацию JAK2 V617F в 3 независимых анализах с использованием различных аналитических методов. Это соответствует распространенности 0,2% в данной выборке от общей популяции со средним возрастом 59 лет на момент забора крови.В настоящее время распространенность JAK2 V617F пациентов значительно ниже, чем предполагаемая распространенность в 1% в единственном другом крупном исследовании, в котором последовательно обследовали 3935 пациентов китайских больниц с различными диагнозами. ⁸

Среди всех участников наличие мутации было положительно связано с увеличением возраста ( P <0,0001), мужским полом ( P = 0,02) и совокупным курением ( P = 0,005) ( Дополнительная онлайн-таблица S1 ).В подобранной подгруппе факторы риска рака, то есть возраст, текущее и совокупное потребление табака, потребление алкоголя и индекс массы тела, были сходными у лиц с положительной и отрицательной мутациями ( Дополнительная онлайн-таблица S1 ).

Для общей выживаемости с периодом наблюдения до 17,6 лет 18 положительных мутаций по сравнению с отрицательными имели более низкую совокупную выживаемость (логарифмический ранг, P = 0,00003). Это соответствует многофакторному скорректированному соотношению рисков ранней смерти для положительных мутаций против отрицательных 3.0 (95% ДИ: 1,9–4,9) (). Соответствующие коэффициенты риска для мужчин по сравнению с женщин и увеличение возраста за год составили 1,4 (1,1–1,9) и 1,1 (1,1–1,1).

Таблица 1.

Смертность и заболеваемость в общей популяции согласно JAK2 V617F статус соматической мутации, пол и возраст на момент забора крови.

Соматическая мутация JAK2 V617F, смертность и риск рака у населения Дании в целом. (A) Кумулятивная выживаемость как функция времени после забора крови.(B) Кумулятивная заболеваемость раком как функция времени после забора крови. (C) Кумулятивная заболеваемость гематологическим раком как функция времени после забора крови. (D) Кумулятивная заболеваемость миелопролиферативным раком как функция времени после забора крови. Число подверженных риску в момент времени = 0 варьируется из-за разного количества участников, заболевших до момента забора крови.

Для любого рака у 11 положительных мутаций без какого-либо рака до момента забора крови совокупная частота любого рака была выше, чем у соответствующих отрицательных результатов (логарифмический ранг, P = 0.0001,), что соответствует многофакторному скорректированному коэффициенту опасности 3,7 (1,7–8,0). Соответствующие коэффициенты риска для мужчин против женщин и увеличение возраста за год составили 1,2 (0,8–2,0) и 1,0 (1,0–1,1).

Для гематологического рака 15 положительных мутаций без гематологического рака до момента забора крови имели более высокую совокупную заболеваемость, чем совпадающие отрицательные мутации (логарифмический ранг, P = 2 * 10 ⁻³²,), что соответствует коэффициент риска, скорректированный на основе нескольких факторов, равный 58 (13–261).Соответствующие коэффициенты риска для мужчин против женщин и увеличение возраста за год составили 2,3 (0,2–25) и 1,1 (0,9–1,2).

Для миелопролиферативного рака (миелопролиферативные новообразования) 15 положительных мутаций без миелопролиферативного рака до момента забора крови имели более высокую совокупную заболеваемость, чем соответствующие отрицательные мутации (логарифмический ранг, P = 7 * 10 ⁻²² ,), что соответствует соотношению рисков, скорректированному по возрасту и полу, равному 161 (12–2,197). Соответствующие соотношения рисков для мужчин и женщин не могли быть рассчитаны в подобранной подгруппе, так как ни у одной женщины не развился миелопролиферативный рак после забора крови; однако, когда были включены все участники, отношение рисков для мужчин против женщин составило 1.3 (0,3–5,4). Для увеличения возраста на год коэффициент риска составил 0,9 (0,8–1,1). Оценки риска для всех четырех конечных точек оставались стабильными после включения в расчет всех отрицательных мутаций.

Мутантный белок JAK2 V617F проявляет свое действие в гемопоэтических стволовых клетках костного мозга и вызывает автономную экспансию нескольких гематологических линий. ¹⁶ Таким образом, в зависимости от природы положительных стволовых клеток JAK2 V617F, у пациента наблюдается истинная полицитемия, эссенциальный тромбоцитоз или первичный миелофиброз, ¹⁶ i.е. три заболевания, которые в этой рукописи называются миелопролиферативным раком.

Смертность и заболеваемость раком до и после взятия крови для каждого из 18 положительных мутаций показаны в. У четырнадцати развился какой-либо рак, у 7 развился гематологический рак, у 5 развился миелопролиферативный рак, и все 18 умерли во время наблюдения. Четверо из 18 не заболели раком за всю свою жизнь, хотя они были положительными по мутации в течение как минимум 2–12 лет.Для 2 участников бремя мутаций было даже очень высоким — 83% (Пациент 4) и 94% (Пациент 1). Ни один подтип негематологического рака, по-видимому, не имел более высокой частоты положительных мутаций по сравнению с отрицательными, чем ожидалось в исследовательских post hoc анализах . Эти результаты подтверждают, что в некоторых случаях наличие мутации предшествует клиническому диагнозу миелопролиферативного рака.

Таблица 2.

Характеристики положительных соматических мутаций JAK2 V617F из общей популяции (18 из 10 507 проверенных).

У нас не было достаточных статистических данных, чтобы определить единственную причину смерти как ответственную за наблюдаемую трехкратную смертность, но она, вероятно, в основном вызвана лежащим в основе, иногда скрытым, миелопролиферативным раком, а не общим эффектом JAK2 Мутация V617F и / или любая ассоциированная генетическая предрасположенность, связанная с локусом JAK2 .

Наше исследование имеет несколько ограничений: во-первых, небольшая статистическая мощность, обеспечиваемая 18 положительными мутациями из 10 507 участников.Это, однако, не ослабляет выводы о смертности и заболеваемости раком, поскольку увеличение мощности в этом случае, вероятно, будет способствовать только сужению доверительных интервалов наших результатов, но не к изменениям в точечных оценках. Во-вторых, наши конечные точки основаны на данных реестра, а не собираются с конкретной целью изучения миелопролиферативного рака. Кроме того, посещения терапевта, которые не привели к гистологическому диагнозу, не регистрируются в Датском реестре рака, используемом в настоящем исследовании.Неудивительно, что даже с учетом пожилого возраста многие из 18 положительных мутаций фактически не были диагностированы / неправильно диагностированы, учитывая, что многие миелопролиферативные формы рака могут иметь довольно гладкое течение и различные проявления, связанные со многими другими причинами. Тем не менее, это потенциальное ошибочное отнесение пациентов к здоровым участникам будет иметь тенденцию только к снижению оценок риска и, следовательно, не может объяснить наблюдаемые оценки риска. В-третьих, к сожалению, гематологический фенотип 18 участников с положительной мутацией на момент забора крови неизвестен.Эта информация была бы очень интересной и могла бы выявить любые непосредственные клинические последствия этого исследования. В-четвертых, смещение выживаемости до забора крови может исказить оценки, особенно с учетом того, что мы обнаружили связь с повышенной смертностью во время последующего наблюдения. Такое смещение выживаемости привело бы к занижению наших оценок риска, потому что для большей доли положительных мутаций по сравнению с отрицательными не были бы взяты образцы крови. Соответственно, истинная смертность и заболеваемость раком могут быть даже выше, чем указанные здесь.Наконец, поскольку мы изучали только кавказцев, наши результаты не обязательно применимы к другим этническим группам.

Перспективы, основанные на огромном размере оценки риска при положительных мутациях по сравнению с отрицательными, эффективность нынешнего лечения миелопролиферативного рака, очевидный латентный период до девяти лет и относительно простая диагностика заставляют задуматься о том, действительно ли скрининг для этой мутации в общей популяции будет обеспечен разумный анализ эффективности затрат / выгод.Это было бы еще более актуально, если бы трехкратное увеличение смертности среди положительных мутаций по сравнению с отрицательными в этом исследовании было вызвано, главным образом, невыявленным / неправильно диагностированным миелопролиферативным раком. Однако есть несколько аргументов против такого скрининга: распространенность миелопролиферативного рака очень мала, и наши выводы о том, что не у всех людей с положительной мутацией JAK2 V617F разовьются миелопролиферативные или другие виды рака, не подтверждены другими исследованиями. В любом случае, будущие исследования клинической значимости скрининга мутации JAK2 V617F в общей популяции должны также включать измерение гематологического фенотипа.

В заключение, в этом исследовании с участием 10 507 человек распространенность мутации JAK2 V617F в общей популяции была очень низкой, но положительные мутации по сравнению с отрицательными имели повышенную смертность и повышенный риск любого рака, гематологического рака, и миелопролиферативный рак.

Соматическая мутация JAK2 V617F, смертность и риск рака в общей популяции

Резюме

JAK2 V617F присутствует у большинства пациентов с миелопролиферативным раком; однако его распространенность и клиническое значение среди населения в целом неизвестны.Мы проверили наличие мутации у 10 507 участников Копенгагенского городского исследования сердца с периодом наблюдения до 17,6 лет.

Распространенность мутации составила 0,2% (n = 18). Все 18 положительных мутаций умерли во время наблюдения, что соответствует многофакторному скорректированному отношению рисков ранней смерти 3,0 (95% ДИ: 1,9–4,9). Соответствующие коэффициенты риска для мужчин по сравнению с женщин и увеличение возраста за 1 год составили 1,4 (1,1–1,9) и 1,1 (1,1–1,1). Многофакторно скорректированные отношения рисков для любого рака, гематологического рака и миелопролиферативного рака составили 3.7 (1,7–8,0), 58 (13–261) и 161 (12–2,197) соответственно. Соответствующие соотношения рисков составляли 1,2 (0,8–2,0), 2,3 (0,2–25), 1,3 (0,3–5,4) для мужчин против женщин и 1,0 (1,0–1,1), 1,1 (0,9–1,2), 0,9 (0,8–1,2). 1.1) для 1-летнего возраста увеличивается. В общей популяции JAK2 V617F ассоциируется с повышенной заболеваемостью и смертностью, хотя присутствует только у 18 из 10 507 (0,2%).

Ключевые слова: JAK2 V617F, смертность, риск рака

Введение

Дизайн и методы

Результаты и обсуждение

Таблица 1.

Для гематологического рака 15 положительных мутаций без гематологического рака до момента забора крови имели более высокую совокупную частоту, чем совпадающие отрицательные мутации (логарифмический ранг, P = 2 * 10 ⁻³²,), что соответствует коэффициент риска, скорректированный на основе нескольких факторов, равный 58 (13–261).Соответствующие коэффициенты риска для мужчин против женщин и увеличение возраста за год составили 2,3 (0,2–25) и 1,1 (0,9–1,2).

Таблица 2.

Характеристики положительных соматических мутаций JAK2 V617F из общей популяции (18 из 10 507 проверенных).

Мутация JAK2 и фенотип заболевания: двойная мутация L611V / V617F в цис-мутации JAK2 связана с изолированным эритроцитозом и повышенной активацией AKT и ERK1 / 2, а не STAT5.

Характеристика двойной мутации L611V / V617F JAK2.( a ) Локализация и конфигурация в цис- мутаций L611V и V617F в экзоне 14 JAK2. Экзон 14 JAK2 амплифицировали с помощью ПЦР из геномной ДНК пациента с использованием мастер-микса iProof HF (Biorad, Hercules, CA, USA). Продукты ПЦР клонировали в векторе секвенирования pCR4 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) и трансформировали в бактерии TOP10 (Invitrogen). Отдельные бактериальные колонии собирали и выращивали в течение ночи при 37 ° C в 96-луночных планшетах со средой с ампициллином (100 мкг мл ^-1) без встряхивания.Всего 2 мкл бактериальных культур использовали в качестве матрицы для ПЦР с праймерами JAK200F и JAK200Rbio (последовательности см. В дополнительной таблице 1). После ПЦР биотинилированную цепь захватывали гранулами стрептавидин-сефарозы (Amersham Biosciences, Упсала, Швеция) и отжигали с праймером для пиросеквенирования JAK1831S. Пиросеквенирование проводили с использованием реагентов PSQ HS 96 Gold SNP и аппарата для пиросеквенирования PSQ HS 96 (Qiagen, Валенсия, Калифорния, США). ¹⁰ Мутационный статус нуклеотидов 1831 T> G и 1849 G> T анализировали с помощью пиросеквенирования PSQ HS 96A1.2 программное обеспечение. В отобранных клонах плазмидную ДНК очищали, и результаты пиросеквенирования были подтверждены секвенированием в центре ДНК центра MD Anderson Cancer Center с использованием химии цикла терминатора ABI Big Dye. ( b ) Доля эритроидных колоний с мутацией JAK2, выращенных из крови предшественников PV пациентов, несущих двойную мутацию JAK2-L611V / V617F. Анализы колоний проводили в средах на основе метилцеллюлозы (h5531, Stem Cell Technologies, Ванкувер, Британская Колумбия, Канада) с использованием замороженных мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC), высеянных в количестве 50 000 на мл.Культуры инкубировали при 37 ° C без эритропоэтина (Epo) в течение 7 дней для получения Epo-независимых эритроидных колоний (EEC). Между 7 и 10 днями к культурам ЕЕС добавляли Epo для получения колоний достаточного размера для анализа ДНК. На 14 день после идентификации колоний под микроскопом эритроидные колонии отбирали одну за другой и анализировали аллель-специфическими количественными ПЦР-анализами (AS-qPCR) после экстракции ДНК. Все колонии с мутацией JAK2, составляющие 12% (Na249), 30% (Na382) и 0% (Di362) колоний, были гетерозиготными по двойной мутации L611V / V617F.GRA% mut:% JAK2-L611V / V617F-мутированных аллелей в геномной ДНК гранулоцитов. Nbr: количество одиночных эритроидных колоний, проанализированных для каждого пациента. ( c ) Временная экспрессия и функциональный анализ мутантных форм L611V, V617F и L611V / V617F JAK2 в клетках BaF-3 / Epo-R. Плазмиды pCR2.1, содержащие кДНК JAK2-WT и (подарок от доктора Яна Коулса) и JAK2-V617F, служили матрицами для L611V- и L611V / V617F-направленного мутагенеза. ПЦР проводили с соответствующими праймерами L611 или V611 (см. Дополнительную таблицу 1) с использованием ДНК-полимеразы Pfu Ultra (Stratagene, La Jolla, CA, USA).Мутагенез проверяли секвенированием, затем проводили еще одну ПЦР с Pfu для извлечения кДНК JAK2 (WT, L611V, V617F и L611V / V617F). Очищенные продукты ПЦР клонировали в вектор экспрессии pcDNA3.1. Для функционального анализа 10 ⁷ мышиных клеток BaF-3 / Epo-R, выращенных в RPMI с 2% фетальной телячьей сывороткой (FCS) и 1 МЕ мл ^-1 Epo, трансфицировали 25 мкг pcDNA3.1, содержащей JAK2- WT и мутантная кДНК с использованием устройства Amaxa Nucleofector. После трансфекции клетки выращивали в среде RPMI с добавлением 2% FCS и 1 МЕ мл ^-1 Epo в течение 24 часов.Затем трансфицированные клетки промывали, лишали Epo в течение 5 часов, затем стимулировали Epo (25 IU мл ^-1) в течение 10 минут при 37 ° C. Затем клетки собирали, дважды промывали PBS и лизировали в буфере RIPA. Успешную экспрессию мРНК одинарных и двойных мутантных кДНК JAK2 проверяли с помощью RT-qPCR в аликвотах трансфицированных клеток. Для исследований внутриклеточной передачи сигналов 25 мкг белков загружали в 10% полиакриламидный SDS-PAGE и переносили на мембраны из поливинилиденфторида (PVDF). Мембраны инкубировали с антителами, специфичными к p-JAK2, p-STAT5, p-ERK1 / 2 и p-AKT (Cell Signaling, Danvers, MA, США) или β-актину (Millipore Corporation, Billerica, MA, США), затем очищены и повторно зондированы антителами, специфичными к общему JAK2 (Millipore Corporation, Биллерика, Массачусетс, США), STAT5 (BD Bioscience, Сан-Хосе, Калифорния, США), ERK1 / 2 и AKT (Cell Signaling, Дэнверс, Массачусетс, США) .Блоты выявляли с использованием субстрата BM Chemiluminescence Blotting Substrate (Roche, Mannheim, Germany). Показанные результаты являются репрезентативными для четырех серий временных трансфекций.

OMIM Запись — * 147796

Арранц, Л., Санчес-Агилера, А., Мартин-Перес, Д., Изерн, Дж., Ланга, X., Цанков, А., Лундберг, П., Мунтион, С., Ценг, Й.-С ., Лай, Д.-М., Шваллер, Дж., Шкода, Р.С., Мендес-Феррер, С. Невропатия ниши гемопоэтических стволовых клеток важна для миелопролиферативных новообразований.
Nature 512: 78-81, 2014.

[PubMed: 25043017]

[Полный текст: https: // doi.org / 10.1038 / nature13383]

Бакстер, Э. Дж., Скотт, Л. М., Кэмпбелл, П. Дж., Ист, К., Фуруклас, Н., Суантон, С., Василиу, Г.С., Бенч, А. Дж., Бойд, Э. М., Кертин, Н., Скотт, М. А., Эрбер, В. Н., Проект генома рака, Грин, А. Р.
Приобретенная мутация тирозинкиназы JAK2 при миелопролиферативных заболеваниях человека.
Lancet 365: 1054-1061, 2005. Примечание. Опечатка: только Lancet 366: 122, 2005.

[PubMed: 15781101]

[Полный текст: https: // linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0140-6736(05)71142-9]

Беркович, Д., Гэнмор, И., Скотт, Л. М., Вайнреб, Г., Биргер, Ю., Элимелех, А., Shochat, C., Cazzaniga, G., Biandi, A., Basso, G., Cario, G., Schrapper, M., и 17 других.
Мутации JAK2 при острой лимфобластной лейкемии, связанной с синдромом Дауна.
Ланцет 372: 1484-1492, 2008.

[PubMed: 18805579]

[Полный текст: https: // linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0140-6736(08)61341-0]

Брукс, А.Дж., Дай, В., О’Мара, М.Л., Абанква, Д., Чхабра, Ю., Пелеканос, Р.А., Гардон, О., Танни, К. А., Блюхер, К. М., Мортон, К. Дж., Паркер, М. В., Серецки, Э., Гамбин, Ю., Гомес, Г. А., Александров, К., Уилсон, И. А., Доксастакис, М. ., Марк, AE, Уотерс, MJ
Механизм активации протеинкиназы JAK2 рецептором гормона роста.
Science 344: 1249783, 2014. Примечание: Электронная статья.

[PubMed: 24833397]

[Полный текст: https: / www.science.org/doi/10.1126/science.1249783?url_ver=Z39.88-2003&rfr_id=ori:rid:crossref.org&rfr_dat=cr_pub%3dpubmed]

Кэмпбелл, Г.С., Аргетсингер, Л. С., Иле, Дж. Н., Келли, П. А., Риллема, Дж. А., Картер-Су, К.
Активация тирозинкиназы JAK2 рецепторами пролактина в клетках Nb2 и эксплантатах молочных желез мышей.
Proc. Nat. Акад. Sci. 91: 5232-5236, 1994.

[PubMed: 7515493]

[Полный текст: http: // www.pnas.org/cgi/pmidlookup?view=long&pmid=7515493]

Кэмпбелл, П. Дж., Скотт, Л. М., Бак, Г., Уитли, К., Восток, К.Л., Марсден, Дж. Т., Даффи, А., Бойд, Е. М., Бенч, Эй-Джей, Скотт, Массачусетс, Василиу, Г. С., Миллиган, Д. У., Смит, С. Р., Эрбер, В. Н., Бэрфорд, Д., Уилкинс, Б. С., Рейли , JT, Харрисон, CN, Грин, AR
Определение подтипов эссенциальной тромбоцитемии и связь с истинной полицитемией на основании статуса мутации JAK2 V617F: проспективное исследование.
Ланцет 366: 1945-1953, 2005.

[PubMed: 16325696]

[Полный текст: https: // linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0140-6736(05)67785-9]

Чанг, Р. Т., Яфрат, А. Дж., Амрейн, П. К., Сахани, Д. В., Мисдраджи, Дж. Случай 15-2006: женщина 46 лет с внезапным вздутием живота.
Новый англ. J. Med. 354: 2166-2175, 2006.

[PubMed: 16707754]

[Полный текст: https: // www.nejm.org/doi/10.1056/NEJMcpc069006?url_ver=Z39.88-2003&rfr_id=ori:rid:crossref.org&rfr_dat=cr_pub%3dpubmed]

Дахабре, И.Дж., Джонс, А.В., Вулгарелис, М., Джаннулли, С., Зои, К., Алафакис-Цаннатос, К., Варла-Лефтериоти, М., Мутсопулос, Х.М., Лукопулос, Д., Фотиу, С., Кросс, НКП, Зои, К.
Нет доказательств повышенной распространенности JAK2 V617F у женщин с повторным выкидышем в анамнезе. (Письмо)
Брит. J. Haemat. 144: 802-803, 2008.

[PubMed: 1

91]

[Полный текст: https: // doi.org / 10.1111 / j.1365-2141.2008.07510.x]

Доусон, М.А., Баннистер, А.Дж., Готтгенс, Б., Фостер, С.Д., Бартке, Т., Грин, А.Р., Кузаридес Т.
JAK2 фосфорилирует гистон h4Y41 и исключает HP1-альфа из хроматина.
Nature 461: 819-822, 2009.

[PubMed: 19783980]

[Полный текст: https: // doi.org / 10.1038 / nature08448]

Digicaylioglu, M., Lipton, S.A.
Эритропоэтин-опосредованная нейрозащита включает перекрестные помехи между сигнальными каскадами Jak2 и NF-kappa-B.
Nature 412: 641-647, 2001.

[PubMed: 11493922]

[Полный текст: https://doi.org/10.1038/35088074]

Гоф, Н.М., Ракар, С., Харпур, А., Уилкс, А. Ф.
Локализация генов двух членов семейства протеинтирозинкиназ JAK в хромосомах 4 и 19 мыши.
Геном млекопитающих 6: 247-248, 1995.

[PubMed: 7613027]

[Полный текст: https: // dx.doi.org/10.1007/BF00352409]

Хуанг, Л. Дж., Константинеску, С. Н., Лодиш, Х. Ф.
N-концевой домен киназы Janus 2 необходим для процессинга Гольджи и экспрессии рецептора эритропоэтина на поверхности клетки.
Molec. Cell 8: 1327-1338, 2001.

[PubMed: 11779507]

[Полный текст: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S1097-2765(01)00401-4]

Джеймс, К., Ugo, V., Le Couedic, J.-P., Staerk, J., Delhommeau, F., Lacout, C., Garcon, L., Raslova, H., Berger, R., Bennaceur-Griscelli, A ., Виллеваль, Дж. Л., Константинеску, С. Н., Касадеваль, Н., Вайнченкер, В.
Уникальная клональная мутация JAK2, приводящая к конститутивной передаче сигналов, вызывает истинную полицитемию.
Nature 434: 1144-1148, 2005.

[PubMed: 15793561]

[Полный текст: https: // doi.org / 10.1038 / nature03546]

Джеймисон, К. Х. М., Готлиб, Дж., Дюроше, Дж. А., Чао, М. П., Мариаппан, М. Р., Лэй, М., Джонс, К., Zehnder, J.L., Lilleberg, S.L., Weissman, I.L.
Мутация JAK2 V617F встречается в гемопоэтических стволовых клетках при истинной полицитемии и предрасполагает к дифференцировке эритроидов.
Proc. Nat. Акад. Sci. 103: 6224-6229, 2006.

[PubMed: 16603627]

[Полный текст: http: // www.pnas.org/cgi/pmidlookup?view=long&pmid=16603627]

Джонс, А. В., Чейз, А., Сильвер, Р. Т., Осьер, Д., Зои, К., Ван, Ю.Л., Карио, Х., Пал, Х. Л., Коллинз, А., Рейтер, А., Гранд, Ф., Кросс, Н. С. П.
Гаплотип JAK2 является основным фактором риска развития миелопролиферативных новообразований.
Nature Genet. 41: 446-449, 2009.

[PubMed: 19287382]

[Полный текст: https: // doi.org / 10.1038 / ng.334]

Килпиваара, О., Мукерджи, С., Шрам, А. М., Уодли, М., Маллалли, А., Эберт, Б. Л., Басс, А., Марубаяши, С., Хеги, А., Гарсия-Манеро, Г., Кантарджян, Х., Оффит, К., Стоун, Р. М., Гиллиланд, Д. Г., Кляйн, Р. Дж., Левин, Р. Л.
SNP JAK2 зародышевой линии связан с предрасположенностью к развитию JAK2 (V617F) -положительных миелопролиферативных новообразований.
Nature Genet. 41: 455-459, 2009.

[PubMed: 19287384]

[Полный текст: https: // doi.org / 10.1038 / ng.342]

Kralovics, R., Cazzola, M., Skoda, R.C.
Ответ Tefferi et al.(Письмо)
Новый англ. J. Med. 353: только 1417, 2005.

Kralovics, R., Passamonti, F., Buser, A. S., Teo, S.-S., Tiedt, R., Пассвег, Дж. Р., Тичелли, А., Каццола, М., Шкода, Р. К.
Мутация увеличения функции JAK2 при миелопролиферативных заболеваниях.
Новый англ. J. Med. 352: 1779-1790, 2005.

[PubMed: 15858187]

[Полный текст: https: // www.nejm.org/doi/10.1056/NEJMoa051113?url_ver=Z39.88-2003&rfr_id=ori:rid:crossref.org&rfr_dat=cr_pub%3dpubmed]

Лакроник, В., Boureux, A., Della Valle, V., Poirel, H., Quang, C.T., Mauchauffe, M., Berthou, C., Lessard, M., Berger, R., Ghysdael, J., Bernard, O.A.
Слитый белок TEL-JAK2 с конститутивной киназной активностью при лейкемии человека.
Science 278: 1309-1312, 1997.

[PubMed: 9360930]

[Полный текст: https: / www.science.org/doi/10.1126/science.278.5341.1309?url_ver=Z39.88-2003&rfr_id=ori:rid:crossref.org&rfr_dat=cr_pub%3dpubmed]

Ли, Дж.W., Kim, Y.G., Soung, Y.H., Han, K.J., Kim, S.Y., Rhim, H.S., Min, W.S., Nam, S.W., Park, W.S., Lee, J.Y., Yoo, N.J., Lee, S.H.
Мутация JAK2 V617F при острых миелогенных лейкозах de novo.
Онкоген 25: 1434-1436, 2006.

[PubMed: 16247455]

[Полный текст: https: // doi.org / 10.1038 / sj.onc.1209163]

Мид, А.Дж., Руглесс, М.Дж., Якобсен, С.Э.У.
Щу, А.: Мутация JAK2 зародышевой линии в семье с наследственным тромбоцитозом. (Письмо)
Новый англ. J. Med. 366: 967-969, 2012.

[PubMed: 22397670]

[Полный текст: https: // www.nejm.org/doi/10.1056/NEJMc1200349?url_ver=Z39.88-2003&rfr_id=ori:rid:crossref.org&rfr_dat=cr_pub%3dpubmed]

Мендес-Феррер, С., Лукас, Д., Баттиста, М., Френетт, П.С.
Высвобождение гемопоэтических стволовых клеток регулируется циркадными колебаниями.
Nature 452: 442-447, 2008.

[PubMed: 18256599]

[Полный текст: https: // doi.org / 10.1038 / nature06685]

Мендес-Феррер, С., Мичурина, Т. В., Ферраро, Ф., Мазлум, А. Р., Макартур, Б. Д., Лира, С.А., Скэдден, Д. Т., Мааян, А., Ениколопов, Г. Н., Френетт, П. С.
Мезенхимальные и кроветворные стволовые клетки образуют уникальную нишу костного мозга.
Nature 466: 829-834, 2010.

[PubMed: 20703299]

[Полный текст: https: // doi.org / 10.1038 / nature09262]

Мерсье, Э., Лиссальд-Лавин, Г., Гри, Ж.-К.
JAK2 Мутация V617F при необъяснимой потере первой беременности.(Письмо)
Новый англ. J. Med. 357: 1984-1985, 2007.

[PubMed: 17989398]

[Полный текст: https://www.nejm.org/doi/10.1056/NEJMc071528?url_ver=Z39.88-2003 & rfr_id = ori: rid: crossref.org & rfr_dat = cr_pub% 3dpubmed]

Маллиган, К.Г., Коллинз-Андервуд, Дж. Р., Филлипс, Л.A. A., Loudin, M. G., Liu, W., Zhang, J., Ma, J., Coustan-Smith, E., Harvey, R. C., Willman, C. L., Michael, F. M., Meyer, J. и 12 других.
Перестройка CRLF2 при остром лимфобластном лейкозе, ассоциированном с B-предшественником и синдромом Дауна.
Nature Genet. 41: 1243-1246, 2009.

[PubMed: 19838194]

[Полный текст: https: // doi.org / 10.1038 / ng.469]

Нойбауэр, Х., Кумано, А., Мюллер, М., Ву, Х., Хаффштадт, У., Пфеффер, К.
Дефицит Jak2 определяет важную контрольную точку развития в окончательном гематопоэзе.
Cell 93: 397-409, 1998.

[PubMed: 95

]

[Полный текст: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0092-8674(00)81168-X]

Олчайду, Д., Арутюнян, А., Ягер, Р., Берг, Т., Гисслингер, Б., Пабингер, И., Гисслингер, Х., Кралович, Р.
Общий гаплотип JAK2 придает восприимчивость к миелопролиферативным новообразованиям.
Nature Genet. 41: 450-454, 2009.

[PubMed: 19287385]

[Полный текст: https: // doi.org / 10.1038 / ng.341]

Ортманн, К. А., Кент, Д. Г., Нангалия, Дж., Зильбер, Ю., Ведж, Д. К., Гринфельд, Дж., Бакстер, Э. Дж., Massie, C. E., Papaemmanuil, E., Menon, S., Godfrey, A. L., Dimitropoulou, D., и 9 других.
Влияние порядка мутаций на миелопролиферативные новообразования.
Новый англ. J. Med. 372: 601-612, 2015.

[PubMed: 25671252]

[Полный текст: https: // www.nejm.org/doi/10.1056/NEJMoa1412098?url_ver=Z39.88-2003&rfr_id=ori:rid:crossref.org&rfr_dat=cr_pub%3dpubmed]

Парганас, Э., Wang, D., Stravopodis, D., Topham, DJ, Marine, J.-C., Teglund, S., Vanin, EF, Bodner, S., Colamonici, OR, van Deursen, JM, Grosveld, G. , Ihle, JN
Jak2 необходим для передачи сигналов через множество рецепторов цитокинов.
Cell 93: 385-395, 1998.

[PubMed: 95

]

[Полный текст: https: // linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0092-8674(00)81167-8]

Патель, Р. К., Ли, Н. К., Хенеган, М. А., Вествуд, Н. Б., Милойкович, Д., Танигаикумар, М., Яллоп, Д., Арья, Р., Паглюка, А., Гакен, Дж., Вендон, Дж., Хитон, Н. Д., Муфтий, Г. Дж.
Распространенность активирующей мутации тирозинкиназы JAK2 V617F при синдроме Бадда-Киари.
Гастроэнтерология 130: 2031-2038, 2006.

[PubMed: 16762626]

[Полный текст: https: // linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0016-5085(06)00745-1]

Петерс, П., Рейно, С. Д., Коулс, Дж., Влодарска, И., Гросджордж, Дж., Филип П., Монпу Ф., Ван Ромпей Л., Баенс М., Ван ден Берге Х., Маринен П.
Слияние TEL, гена ETS-варианта 6 (ETV6) с рецептор-ассоциированной киназой JAK2 в результате t (9; 12) в лимфоиде и t (9; 15; 12) при миелоидном лейкозе.
Кровь 90: 2535-2540, 1997.

[PubMed: 9326218]

[Полный текст: https: // linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0006-4971(20)57963-9]

Причард, М.А., Бейкер, Э., Каллен, Д.Ф., Сазерленд, Г.Р., Уилкс, А.Ф.
Два члена семейства протеинтирозинкиназ JAK картируются в хромосомах 1p31.3 и 9p24.
Геном млекопитающих 3: 36-38, 1992.

[PubMed: 1581631]

[Полный текст: https: // dx.doi.org/10.1007/BF00355839]

Зальцман, А., Стоун, М., Фрэнкс, К., Сирфосс, Г., Манро, Р., Джей, М., Иващенко, Ю. Клонирование и характеристика киназы Jak-2 человека: высокая экспрессия мРНК в иммунных клетках и мышечной ткани.
Biochem. Биофиз. Res. Commun. 246: 627-633, 1998.

[PubMed: 9618263]

[Полный текст: https: // linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0006-291X(98)98685-5]

Шваллер, Дж., Парганас, Э., Ван, Д., Каин, Д., Астер, Дж. К., Уильямс, И.Р., Ли, Ч.-К., Гертнер, Р., Китамура, Т., Францве, Дж., Анастасиаду, Э., Ло, М. Л., Леви, Д. Э., Иле, Дж. Н., Гиллиланд, Д. Г.
Stat5 необходим для миело- и лимфопролиферативного заболевания, вызванного TEL / JAK2.
Molec. Cell 6: 693-704, 2000.

[PubMed: 11030348]

[Полный текст: https: // linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S1097-2765(00)00067-8]

Скотт, Л. М., Тонг, В., Левин, Р. Л., Скотт, М. А., Бир, П. А., Страттон, М.Р., Футреал, П. А., Эрбер, В. Н., Макмаллин, М. Ф., Харрисон, К. Н., Уоррен, А. Дж., Гиллиланд, Д. Г., Лодиш, Х. Ф., Грин, А. Р.
Мутации экзона 12 JAK2 при истинной полицитемии и идиопатическом эритроцитозе.
Новый англ. J. Med. 356: 459-468, 2007. Примечание: Erratum: New Eng. J. Med. 357: только 1457, 2007.

[PubMed: 17267906]

[Полный текст: https: // www.nejm.org/doi/10.1056/NEJMoa065202?url_ver=Z39.88-2003&rfr_id=ori:rid:crossref.org&rfr_dat=cr_pub%3dpubmed]

Созер, С., Фил, М. И., Скиано, Т., Сюй, М., Маскареньяс, Дж., Хоффман, Р.
Наличие мутации JAK2V617F в эндотелиальных клетках печени пациентов с синдромом Бадда-Киари.
Кровь 113: 5246-5249, 2009.

[PubMed: 19293426]

[Полный текст: https: // linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0006-4971(20)39102-3]

Теффери А., Лашо Т. Л., Гиллиланд Г.
Мутации JAK2 при миелопролиферативных заболеваниях.(Письмо)
Новый англ. J. Med. 353: 1416-1417, 2005.

[PubMed: 16192494]

[Полный текст: https://www.nejm.org/doi/10.1056/NEJMc051878?url_ver=Z39.88-2003 & rfr_id = ori: rid: crossref.org & rfr_dat = cr_pub% 3dpubmed]

Уотлинг Д., Гущин Д., Мюллер М., Сильвеннойнен О., Witthuhn, B.A., Quelle, F. W., Rogers, N.C., Schindler, C., Stark, G.R., Ihle, J. N., Kerr, I.M.
Комплементация протеинтирозинкиназой JAK2 мутантной клеточной линии, дефектной по пути передачи сигнала интерферон-гамма.
Nature 366: 166-170, 1993.

[PubMed: 76]

[Полный текст: https: // doi.org / 10.1038 / 366166a0]

Вилмес, С., Хафер, М., Вуорио, Дж., Такер, Дж. А., Винкельманн, Х., Лохте, С., Стэнли, Т. А., Пульгар Прието, К.Д., Пуджари, К., Шарма, В., Рихтер, К. П., Курре, Р., Хаббард, С. Р., Гарсия, К. К., Морага, И., Ваттулайнен, И., Хичкок, И. С., Пилер, Дж.
Механизм активации и нарушения регуляции гомодимерных цитокиновых рецепторов онкогенными мутациями.
Наука 367: 643-652, 2020.

[PubMed: 32029621]

[Полный текст: https: / www.science.org/doi/10.1126/science.aaw3242?url_ver=Z39.88-2003&rfr_id=ori:rid:crossref.org&rfr_dat=cr_pub%3dpubmed]

Два случая тяжелой гипертензии при миелопролиферативных новообразованиях с положительной мутацией JAK2

Предпосылки .Миелопролиферативные новообразования представляют собой гетерогенную группу заболеваний, возникающих в результате аномальной пролиферации одной или нескольких терминальных миелоидных клеток — установленные осложнения включают тромбоз и геморрагические события; однако есть ограниченные данные, позволяющие предположить связь с артериальной гипертензией. Здесь мы сообщаем о двух независимых случаях тяжелой гипертензии в миелопролиферативных новообразованиях с положительной мутацией JAK2. Презентации кейсов . Случай 1: 39-летний мужчина был направлен в наше специализированное отделение гипертонии с повышенным артериальным давлением (АД) (200/120 мм рт. Ст.), Эритромелалгией и головными болями.Мы зафиксировали повышенный уровень креатинина в сыворотке (146 мк М) и панмиелез. Биопсия костного мозга подтвердила истинную полицитемию с положительной мутацией JAK2. Визуализация почек выявила стеноз почечной артерии. При лечении применялись аспирин, нифедипин пролонгированного действия, интерферон-альфа 2А и ангиопластика почечной артерии. АД опустилось ниже целевого уровня в среднем до 119/88 мм рт. Ст. Параметры почек постепенно нормализовались вместе с АД. Случай 2: мужчина 45 лет с высоким АД (208/131 мм рт. Ст.), Акроцианозом, (васкулитом) кожной сыпью и длительно незаживающими язвами.Фундоскопия показала размытость диска зрительного нерва в левом глазу, а общий анализ крови выявил тромбоцитоз. Биопсия костного мозга подтвердила эссенциальный тромбоцитоз с положительной мутацией JAK2. Стеноза почечной артерии не выявлено. Сердечный выброс был измерен со скоростью 5 л / мин с использованием метода обратного дыхания инертным газом, что обеспечило оценочное периферическое сосудистое сопротивление 1840 дин / с / см ⁵. АД хорошо контролировалось (достигало 130/70 мм рт. Ст.) С помощью БКК. Выводы . Эти презентации подчеркивают полезность полного анализа крови у пациентов с тяжелой гипертензией.Гипервязкость и конститутивная активация JAK-STAT входят в число предлагаемых патофизиологий, связывающих миелопролиферативные новообразования и гипертензию. Необходимы дальнейшие экспериментальные и клинические исследования для выявления и понимания возможных взаимодействий между АД и миелопролиферативными новообразованиями.

1. Введение

Миелопролиферативные новообразования (MPN) — это клональные нарушения, возникающие в компартменте гемопоэтических стволовых клеток. МПН чаще всего диагностируются в возрастном диапазоне от 50 до 60 лет; однако предрасположенности могут возникать и у более молодых пациентов, особенно с семейной предрасположенностью.

Наиболее распространенным геном-драйвером MPN является Янус-киназа 2 (JAK2), родственная тирозинкиназа для рецепторов как эритропоэтина, так и тромбопоэтина. MPN с положительной мутацией JAK2 связаны с более высокой частотой сосудистых осложнений. К ним относятся тромботические явления и окклюзионные сосудистые заболевания. На данный момент существует ограниченное количество доказательств потенциальной связи с артериальной гипертензией. Однако было описано несколько форм сосудистых осложнений MPN, включая легочную гипертензию [1], портальную гипертензию [2] и реноваскулярную гипертензию [3].

Ретроспективный анализ, опубликованный в 2018 г., изучающий 1010 пациентов с MPN в Малайзии, продемонстрировал значительную связь между MPN с положительной мутацией JAK2 V617F и артериальной гипертензией [4]. Совсем недавно исследование, включавшее 10 пациентов с эссенциальным тромбоцитозом и венозным тромбозом, показало, что во всех случаях была сопутствующая артериальная гипертензия [5]. Мы сообщаем о двух случаях острой тяжелой гипертензии, связанной с MPN с положительной мутацией JAK2 V617F. Раннее выявление МПН у молодых пациентов с тяжелой гипертензией может помочь в выборе правильной стратегии лечения, ведущей к эффективному контролю артериального давления (АД).

2. Представления случаев

Краткие сведения о случаях 1 и 2 показаны в таблице 1.

BP (мм рт. , длительно незаживающая язва на пальце ноги

906 76

экран

906Денопластия слева Исследования газового дыхания (клинический исследовательский центр)


	Случай 1	Случай 2
			Начальный
История болезни	Спондилолистез	Мигрень с аурой
Семейный анамнез	Отец: Вазовагальный обморок, инфаркт миокарда
90-668 Социальный анамнез		Не примечательный	4 20 единиц алкоголя в неделю
Исследования и результаты
Осмотр глазного дна	Папиллоэдема с размытием края носа	Артериовенозный зажим с размытием края носа
Тест-полоска для определения мочи	Незаметно	Незаметно 9066–7 РБК-; Hct -0.534 л / л PLT; Количество нейтрофилов	PLT -1096 x10 ⁹ / л
Тесты функции печени	Не указано	Общий билирубин — 38 мк моль / л; АЛТ — 42 Ед / л; Gamma GT — 94 U / L
Электрокардиограмма	Синусовый ритм 70 ударов в минуту, отклонение оси влево, двухфазные зубцы T в отведениях V5 и V6	Ничем не примечательные
Эхокардиограмма	Умеренная общая левожелудочковая гипертрофия 1.Толщина стенки 4 см	Легкая дилатация аорты
Креатинин	146 μ M	88 μ M
Ренин	107 mU / L			Отрицательный	Отрицательный
Биопсия васкулитной кожной сыпи	Н / Д	Ничем не примечательная
Контрастная КТ брюшной полости	НЕТ	Н / Д	Сопротивление периферических сосудов -1840 дин / сек / см ⁵
Вмешательства	Ангиопластика почечной артерии, аспирин 75 мг, интермиттирующая венесекция 2A	Аспирин 75 мг, нифедипин пролонгированного действия
Результаты	Нормальные снижение АД и почечных параметров, незначительные побочные эффекты от терапии интерфероном (снижение либидо и сообщения об истончении волос), теперь купируются однократной дозой нифедипина пролонгированного действия	Нормализация АД, неблагоприятных исходов не сообщалось, язвы на пальцах стопы зажили

2.1. Случай 1 Вера полицитемии

Подробное описание случая 1 представлено в таблице 1.

Представление: 39-летний мужчина был направлен в наше специализированное отделение гипертонии с высоким АД (200/120 мм рт. Ст.), Эритромелалгией. , и головные боли.

Исследования: Мы зарегистрировали повышенный уровень креатинина в сыворотке (146 мк M), панмиелез с повышенным гематокритом (0,534 л / л), количество лейкоцитов (WBC) () и тромбоцитов (PLT) (). Биопсия костного мозга подтвердила истинную полицитемию с положительной мутацией JAK2.Визуализация почек показала стеноз почечной артерии (рис. 1 (а)).

Исходы и наблюдение. В лечении применялись аспирин, нифедипин, интерферон-альфа 2А (циторедуктивная терапия — при гематологии) и ангиопластика почечной артерии (рис. 1 (b)). АД опустилось ниже целевого уровня в среднем до 119/88 мм рт. Ст. (Рисунок 2 (а)). Почечные параметры постепенно нормализовались вместе с АД (рис. 2 (б)).

2.2. Случай 2 Эссенциальный тромбоцитоз

Представление: 45-летний мужчина поступил с высоким АД (208/131 мм рт.

Исследования: Фундоскопия показала размытость диска зрительного нерва в левом глазу, а полный анализ крови (FBC) выявил тромбоцитоз (PLT -). Биопсия костного мозга подтвердила эссенциальный тромбоцитоз с положительной мутацией JAK2.

Результаты и наблюдение — в отличие от нашего пациента из Случая 1, стеноза почечной артерии не было обнаружено. АД хорошо контролировалось (достигало 130/70 мм рт. Ст.) С помощью нифедипина.

3. Обсуждение

Сильно повышенное АД (> 180/120 мм рт. Ст.), Сопровождающееся новой или прогрессирующей дисфункцией органа-мишени, представляет собой ускоренную гипертензию.Текущая практика игнорирует анализ FBC при оценке артериальной гипертензии. Эффективный контроль АД был достигнут в случаях 1 и 2 с частично совпадающими терапевтическими вмешательствами, что свидетельствует о некотором сходстве между двумя патофизиологиями.

Оба случая продемонстрировали хорошие клинические ответы на БКК (по сравнению с ингибитором АПФ в случае 1), которые вызывают прямое расширение сосудов за счет ингибирования притока ионов кальция в гладкие мышцы сосудов. Этот механизм действия может быть благоприятным в контексте гипервязкости и повышенного сосудистого сопротивления, как показано на рисунке 4.В случае 2 периферическое сосудистое сопротивление (PVR) рассчитывалось на основе измерений сердечного выброса и ударного объема с использованием метода обратного дыхания инертным газом (Innocor) [6]. Это дало оценку 1840 дин / с / см ⁵, что значительно превышает нормальный диапазон 900–1440 дин / с / см ⁵, и это обычно наблюдается при гипертонии.

Повышенный PVR вместе с незаживающей язвой может убедительно предположить, что в основе гипотез лежат вазоконстрикция и разрежение микрососудов.Ряд механизмов может объяснить это у пациентов с эссенциальным тромбоцитозом и истинной полицитемией. Повышенный гематокрит и агрегация тромбоцитов приводят к повышенной вязкости цельной крови, что может способствовать как гуморальным, так и гемодинамическим изменениям. Повышенный гематокрит увеличивает вероятность столкновения адгезивных стенок, опосредованного тромбоцитами. Тромбоциты синтезируют и выделяют гемостатические медиаторы, включая тромбоксан А2, PGF2 альфа и серотонин, все из которых являются сильнодействующими вазоконстрикторами.Это может привести к активации эндотелиальных клеток, что приводит к увеличению экспрессии молекул адгезии и секреции тромбогенных и ангиогенных пептидов местными воспалительными клетками и прокоагулянтными факторами, включая фактор фон Виллебранда (vWF). Было высказано предположение, что повреждение / дисфункция эндотелия является одним из механизмов, с помощью которого повышенный гематокрит предрасполагает к тромботическим осложнениям [7]. Опосредованная потоком дилатация (FMD), маркер эндотелиальной функции, была обнаружена в небольшом исследовании у пациентов с MPN, демонстрируя роль дисфункции эндотелия [8].Повреждение эндотелия далее приводит к артериальной недостаточности и разрежению капилляров, особенно в микроциркуляции, где эндотелиальная дисфункция наиболее высока. Это приводит к порочному кругу повреждения эндотелия, что и объясняет хронические изъязвления, обнаруженные нашим пациентом.

Известно, что гемодинамические эффекты ингибиторов АПФ и БКК различаются. В то время как ингибиторы АПФ противодействуют ренин-ангиотензиновой системе и снижают симпатический выброс, БКК опосредуют дилатацию крупных проводящих и резистентных артерий.Эти различия могут объяснить предпочтительную отзывчивость, проявляемую в обоих случаях. Однако истинное значение для пациентов с МПН остается неясным, особенно в связи с противоречивыми доказательствами, демонстрирующими прямую корреляцию между вязкостью крови и давлением у субъектов с нормальным и гипертензивным давлением [9, 10].

Случай 1 указывает на дополнительный реноваскулярный компонент в представлении пациента. Несколько факторов, вероятно, способствовали стенотическому поражению, включая повышенный гематокрит, нарушение коагуляции и аномальные функции эндотелия сосудов.Эти механизмы обсуждались Tamura et al. в предыдущем описании двух пациентов с артериальной гипертензией, вторичной по отношению к стенозу почечной артерии, с JAK2 V617F-положительными MPN, оба из которых были успешно вылечены с помощью ангиопластики [11]. Считается, что полезность ангиопластики в значительной степени зависит от патогенеза стеноза почечной артерии. У пациентов с атеросклеротическим стенозом ангиопластика не демонстрирует значительных преимуществ по сравнению с медикаментозным лечением в регуляции АД [12]. Для сравнения, реноваскулярная гипертензия, связанная с MPN, хорошо поддается лечению.Считается, что большая степень неразрешенной ишемии при атеросклеротической патофизиологии объясняет это различие, а это означает, что пациенты с МПН с сопутствующим реноваскулярным атеросклерозом могут получить ограниченную пользу от почечной ангиопластики [13]. Однако тот факт, что оба пациента ответили на сосудорасширяющие препараты, может означать, что стеноз здесь является сторонним наблюдателем или действительно побочным продуктом, а не основной причиной резкого повышения артериального давления.

Было высказано предположение, что конститутивная активация JAK-STAT увеличивает активацию тромбоцитов и рекрутирование тромбоцитов и лейкоцитов в сочетании с ускоренной гиперплазией сосудистых клеток [7].Кроме того, известно, что активированный путь JAK-STAT способствует локальному синтезу ангиотензина II (Ang II) и, в свою очередь, прогрессированию Ang II-зависимой гипертензии [14]. Ang II-активированный JAK2 вызывает фосфорилирование Arhgef1 в гладкомышечных клетках сосудов [15]; следовательно, Arhgef1 стимулирует ось киназы RhoA-Rho, что приводит к увеличению АД. В поддержку этих открытий было показано, что фармакологическое ингибирование JAK2 снижает гипертензию на животных моделях, вводимых Ang-II [16, 17].Передача сигналов JAK-STAT также участвует в повреждении почек, причем гипергликемия индуцирует этот путь через Ang II в мезангиальных клетках клубочков [18]. В соответствии с этим наблюдением, ингибирование JAK2 в моделях на крысах предотвращало протеинурию и гипертензию при диабетической нефропатии, вызванной стрептозотоцином [19], а также улучшало реперфузионное повреждение почек [20].

Необходимо дальнейшее изучение взаимосвязи между гемореологией, гемодинамикой и ролью эндотелиальной дисфункции в МПН.

4. Заключение

В этом отчете подчеркивается важность простого анализа FBC при тяжелой гипертензии и потенциальная терапевтическая роль CCB. Повышенное количество тромбоцитов, повышенная вязкость, разрежение сосудистой сети и, как следствие, высвобождение сосудосуживающих медиаторов входят в число предлагаемых патофизиологий, связывающих MPN и гипертензию. Сопутствующие сосудистые осложнения, такие как артериальный и венозный тромбоз, могут увеличивать бремя повреждения сосудов. Дальнейшие экспериментальные и клинические данные необходимы для определения механизмов взаимодействия между функцией JAK2 и АД.

Аббревиатуры

кровь

белые клетки

JAK2:	Янус киназа 2
MPN:	Миелопролиферативные новообразования
BP:
BP:	BPBC	Тромбоциты
FBC:	Полный анализ крови
CT:	Компьютерная томография
RBC:	Красные кровяные тельца
JAK-трансус	JAK-сигнал STAT и активатор транскрипции
ACE:	Ангиотензин-превращающий фермент
PVR:	Сопротивление периферических сосудов
Ang II:	Ангиотензин II.

Согласие

Письменное информированное согласие было получено от пациентов на публикацию их индивидуальных данных и сопроводительных изображений в этой рукописи. Форма согласия находится у авторов и доступна для просмотра главным редактором.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Вклад авторов

РР и СК подготовили рукопись. СК принимала участие в уходе за пациентами.IBW несла общую ответственность за уход за пациентами, предоставляла клиническую экспертизу и курировала разработку. Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.

Мутация JAK2 — Лабораторные тесты онлайн AU

Как это используется?

Тест на мутацию JAK2 может использоваться вместе с другими тестами, такими как эритропоэтин, для диагностики заболеваний костного мозга, которые приводят к перепроизводству клеток крови. Эти состояния известны как миелопролиферативные новообразования (МПН).

MPN, наиболее часто связанные с мутацией JAK2 : истинная полицитемия (PV), при которой костный мозг производит слишком много красных кровяных телец; эссенциальная тромбоцитемия (ЭТ), при которой в костном мозге слишком много тромбоцитов; и первичный миелофиброз (PMF), также известный как хронический идиопатический миелофиброз или агногенная миелоидная метаплазия, при котором слишком много тромбоцитов и клеток, которые продуцируют рубцовую ткань в костном мозге.Тест на мутацию JAK2 обычно назначается в качестве последующего теста, если у человека значительно повышен гемоглобин и / или количество тромбоцитов и практикующий врач подозревает, что у человека может быть MPN.

JAK2 V617F назван в честь a в определенном месте в JAK2 и является первичным генетическим тестом на мутации JAK2 , которые приводят к MPN. JAK2 мутации приобретаются, а не наследуются, и приводят к изменению пары нуклеотидных оснований, что называется точечной мутацией.Это изменение приводит к тому, что белок JAK2 постоянно «включен», что приводит к неконтролируемому росту клеток крови.

Мутации в других кодирующих частях (называемых экзонами; они кодируют белок) гена JAK2 также связаны с MPN. Существует также тест для обнаружения изменений в экзоне 12 JAK2 . От двух до пяти процентов людей с PV имеют мутацию экзона 12.

Наличие мутации JAK2 помогает практикующему врачу поставить окончательный диагноз MPN (PV, ET или PMF), но отсутствие мутации JAK2 не исключает MPN.В 2008 году Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) пересмотрела свои диагностические критерии для PV и ET, добавив в качестве критерия наличие мутации JAK2 . Однако пока не удалось достичь консенсуса в отношении оптимальных диагностических критериев ПВ.

Когда это требуется?

Тест JAK2 V617F может быть заказан вместе с другими тестами, когда практикующий врач подозревает, что у человека есть заболевание крови, известное как миелопролиферативное новообразование (MPN), особенно истинная полицитемия (PV), эссенциальная тромбоцитемия (ET) или первичная миелофиброз (ПМФ).Многие стандартные лабораторные результаты, такие как полный анализ крови (FBC), выявляют аномальные результаты, связанные с этими MPN, а у кого-то также могут быть и предположения, что MPN.

Иногда у людей с МПН могут отсутствовать симптомы или проявляться несколько относительно легких симптомов, которые могут присутствовать в течение многих лет, прежде чем они будут признаны МПН, часто во время обычного медицинского осмотра. Однако при появлении определенных признаков и симптомов врач может заподозрить, что у кого-то есть один из этих номеров MPN. У них много общих признаков и симптомов, например:

Слабость и утомляемость
Одышка при физической нагрузке
Потеря аппетита и похудание
Увеличенная селезенка (спленомегалия)
Кровотечение и синяки из-за низкого и / или аномального тромбоцитов
Ночная одежда
Кость и боль
Бледность из-за анемии (когда эритроциты уменьшаются)
Частые инфекции

Истинную полицитемию (PV) можно также заподозрить при появлении таких симптомов, как головные боли, головокружение, искажение зрения, зуд и (ненормальное ощущение кожи, такое как щекотание, покалывание или онемение).При PV наблюдается избыточное количество эритроцитов, и возникающее в результате сгущение крови может привести к таким осложнениям, как язва желудка, камни в почках, венозный тромбоз, инсульт, а в редких случаях — застойная сердечная недостаточность. Поскольку симптомы ПВ могут проявляться медленно, их часто обнаруживают во время обычных анализов крови.

Пациенты с эссенциальной тромбоцитемией (ЭТ) обычно не имеют симптомов, но у некоторых могут развиться несоответствующие сгустки крови () или кровотечение (), поскольку вырабатывается повышенное количество тромбоцитов, которые могут не функционировать должным образом.Сгусток крови также может вызвать временное прерывание кровотока в части мозга (временная ишемическая атака) или инсульт. Другие симптомы от сгустков крови или чрезмерного кровотечения могут включать покалывание в руках и ногах, головные боли, головокружение, кровотечение из носа и легкие синяки.

Первичный миелофиброз (ПМФ) — серьезное заболевание, которое приводит к рубцеванию костного мозга и может в конечном итоге перерасти в другие, более серьезные формы лейкемии. Однако у некоторых людей с PMF симптомы отсутствуют в течение многих лет.У людей, у которых есть симптомы, могут быть те, которые связаны с тяжелой анемией, например утомляемость и слабость. Тест на мутацию JAK2 может быть выполнен, если обычные лабораторные тесты предполагают наличие PMF.
Тест JAK2 экзона 12 может быть назначен, если тест JAK2 V617F отрицательный, и врач все еще подозревает PV.

Что означает результат теста?

Если мутация JAK2 V617F обнаружена и у человека есть другие подтверждающие клинические данные, то, вероятно, у человека есть MPN.Возможно, потребуется провести другие исследования, такие как биопсия костного мозга, чтобы определить, какой MPN есть у человека, и оценить его тяжесть.

Если тест JAK2 V617F отрицательный, но обнаружена мутация JAK2 экзона 12 и у человека есть подтверждающие клинические признаки, то вполне вероятно, что у человека истинная полицитемия.

Если человек отрицательный по всем мутациям JAK2 , у человека все еще может быть MPN. У человека мог быть JAK2 -отрицательный MPN, или его мутация JAK2 не была обнаружена во время тестирования.Тесты JAK2 выполняются на генетическом материале, обнаруженном в (из крови или) и эритроцитах (из костного мозга), но не все гранулоциты и предшественники эритроцитов будут обладать мутациями JAK2 . Доля пораженных клеток будет варьироваться от человека к человеку и может меняться со временем. Если в анализируемом образце крови присутствует небольшое количество, то возможно, что мутация не будет обнаружена.

Что еще мне следует знать?

Несколько лабораторий предлагают оба теста и тесты JAK2 V617F .Некоторые практикующие врачи могут назначить количественный тест для отслеживания изменения количества клеток с мутацией JAK2 V617F с течением времени. Однако количественный тест обычно не проводится в качестве стандартной практики, и его клиническая полезность еще не доказана.

СЛЕДУЮЩИЕ ШАГИ В РАЗРАБОТКЕ ЦЕЛЕВЫХ ПРОЦЕДУР ДЛЯ ФЭ, ЭТ И МФ — Исследовательский фонд MPN

Интервью с Д.Гэри Гиллиланд, доктор медицины,

Член Медицинского консультативного совета, Фонд MPD
Профессор медицины Гарвардской медицинской школы
Исследователь, Медицинский институт Говарда Хьюза
Директор программы по лейкемии, Дана-Фарбер / Гарвардский онкологический центр

Введение
Положительное определение мутации каузального гена
Как работает Гливек
Почему мутация не всегда проявляется
Следующие шаги в разработке лекарств
Сотрудничество vs.Конкуренция среди исследователей
Как сообщество MPD может помочь
Новые возможности для участия в клинических испытаниях
Последнее слово предостережения

Введение

Доктор Гэри Гиллиланд — руководитель бостонской группы, которая опубликовала «Активирующую мутацию тирозинкиназы JAK2 при истинной полицитемии, эссенциальной тромбоцитемии и миелоидной метаплазии с миелофиброзом» в Cancer Cell, Vol 7, Issue 4, 24 марта 2005 г. текст их статьи доступен бесплатно на сайте http: // www.Cancecell.org/

На простом английском языке новость — это открытие генетической мутации, вызывающей PV, ET и MF. Об открытии было объявлено почти одновременно командами из Великобритании и Франции, а другие группы, как сообщается, близки к публикации аналогичных результатов.

Доктор Гиллиланд разговаривал с Робертом Розеном, президентом Фонда MPD, и членами Совета Фонда MPD 5 апреля 2005 года. Вот что сказал нам доктор Гиллиланд с несколькими пояснениями, добавленными для ясности.

Положительная идентификация причинной мутации гена

Мы определили генную мутацию, которая, по нашему мнению, является причиной этих заболеваний. Это фермент тирозинкиназа, называемый JAK2 или Янус-киназа 2.

Киназы — это ахиллесова пята для атаки на рост опухоли, о чем свидетельствует то, как Gleevec выключает киназу, вызывающую хронический миелогенный лейкоз.

Организм обычно регулирует производство клеток. В MPD выключатель — тирозинкиназа JAK2 — застрял в положении «включено».Если мы сможем подавить эту одну тирозинкиназу, мы сможем разработать целевые методы лечения всех трех заболеваний. После того, как вы выключите выключатель, все остальное будет относительно несущественным.

Конечно, наша работа пока не дает ответов на все вопросы. Мы до сих пор не понимаем, как одна мутация может вызвать три разных заболевания. Сейчас мы работаем над ответом на этот вопрос.

Как работает Гливек

Киназы действуют как сигналы остановки и движения. Тирозинкиназа переключает передачу сигналов клеткам.Мутация постоянно включает переключатель.

Киназы и клетки получают энергию от аденозинтрифосфата (АТФ). Он действует как батарея и передает энергию клеткам. Гливек выглядит как АТФ, но вместо того, чтобы активировать киназу Abl, отвечающую за ХМЛ, он ее выключает.

Мы все еще пытаемся определить продолжительность ремиссии. Гливек — подавляющее средство, а не лекарство. Пациентам необходимо принимать его каждый день. Но добавление других агентов может дать лекарство.

Мы думаем, что таким же образом можно нацелить мутацию JAK2.

Почему мутация не всегда проявляется

Мутация — лучший биомаркер. Если он есть у пациента, у него ЭТ, ЛВ или МФ.

В нашем исследовании мы обнаружили мутацию у 74% пациентов с PV. Мы сильно подозреваем, что более чувствительные тесты дадут более высокий процент.

Частота в ET составила 35%. Мы почти уверены, что это занижает истинную частоту, потому что наше секвенирование ДНК не включало предшественников тромбоцитов, которые являются ключевыми для ET. Мы проанализировали образцы крови, которые присылали нам добровольцы, с использованием периферических нейтрофилов, которые являются циркулирующими лейкоцитами.Чтобы быть более точным, мы должны проанализировать стремления костного мозга, которые мы не смогли получить для этого исследования. Сейчас мы планируем изучить пациентов с инопланетянами, желающих сдать образцы костного мозга.

То же самое и с МФ: получить аспират костного мозга сложно, а циркулирующие клетки все еще могут быть нормальными. Доктор Аялев Теффери из клиники Майо в Рочестере говорит, что у 50% пациентов с МФ есть мутация. Но нам нужно это подтвердить.

Следующие шаги в разработке лекарств

Мы уже работаем с парой крупных фармацевтических компаний.Они думают, что это будет важный продукт для них. И это будет становиться все более важным по мере старения населения.

Фармацевтические компании имеют библиотеки потенциальных соединений. Мы будем работать с ними над разработкой проб. Мы знаем, как лучше всего проверять соединения.

Чтобы внедрить новый препарат в клиническую практику, мы будем работать с любыми фармацевтическими компаниями, которые хотят принять участие. Мы не будем заключать эксклюзивных сделок. В конце концов, мы знаем, что только одно из 10 новых лекарств проходит через конвейер.Мы хотим, чтобы каждая крупная фармацевтическая компания занималась этим и занималась этим. Чем больше людей пытается выполнить эту работу, тем выше вероятность успеха.

Мы предоставляем экраны, они предоставляют соединения, мы проводим тестирование. У нас уже есть мышиная (мышиная) модель ПВ. У нас также есть один для ET и многообещающий для перепросмотра MF. Таким образом, мы можем протестировать эти соединения на нашей модельной системе мыши. Затем перспективные возвращаются в компании, где их подкрашивают и проводят доклинические и клинические испытания.После того, как соединения пройдут доклинические токсикологические исследования, мы работаем с фармацевтическими компаниями над разработкой клинических протоколов. Мы настаиваем на том, чтобы участвовать в разработке протокола.

Сотрудничество и конкуренция между исследователями

Мы связались со всеми группами, которые опубликовали статьи о мутации JAK2, и обменялись данными со всеми из них. У нас хорошие отношения со многими другими исследователями: доктором Тефферри, Роном Хоффманом из Университета Иллинойса в Чикагском онкологическом центре, Йозефом Прчалом из Консультационной клиники по миелопролиферативным заболеваниям Медицинского колледжа Бейлора.

Мы также работаем с Консорциумом MPD в поиске гранта NIH на исследования. Мы добавим наши системы моделей мышей в качестве аргумента для получения гранта.

Мы рады сотрудничать со всеми, кто разделяет нашу цель — как можно скорее предоставить более эффективное лечение пациентам с MPD. Под «скоро» я имею в виду в течение трех лет. Я думаю, мы сможем это сделать.

Как сообщество MPD может помочь

Если когда-либо в истории MPD было время, если когда-либо была сияющая звезда, которую можно было бы показать людям, то это она.У нас есть мутация гена. У нас есть большая популяция пациентов с MPD, проходящих лечение, которое, кажется, подавляет симптомы более или менее эффективно, но некоторым из них уже 40 лет. И они часто вызывают неприятные побочные эффекты. Это абсурд.

У нас есть хорошая возможность действовать прямо сейчас. MPD Foundation должен стараться нацеливаться на группы, которые, по вашему мнению, имеют наибольший шанс на успех, и где грант может дать им толчок.

Сейчас я говорю как член Медицинского консультативного совета MPD Foundation, а не как исследователь, ищущий грант.Поставьте перед исследователями конкретную цель — ввести соединение в клинические испытания в течение трех лет и посмотрите, какие предложения они выдвигают. Вам нужно найти проворную и быструю группу, которая знает, куда идет.

Вы можете поддержать отдельную лабораторию с помощью гранта в размере 100 000–200 000 долларов в год в течение двух-трех лет или гранта для нескольких центров, работающих вместе, примерно на 1,5 миллиона долларов в год.

Новые возможности для участия в клинических испытаниях

Стратегия набора пациентов через Интернет впечатляет.Для этого испытания мы привлекли добровольцев через Интернет. Пятьсот восемьдесят шесть (586) пациентов проявили интерес к исследованию, и 345 отправили биологические образцы для тестирования. По мере того, как мы начинаем разрабатывать многообещающие соединения, мы организуем самые широкие клинические испытания, какие только сможем, и сделаем их географически доступными для как можно большей части населения. Мы в основном хотим сделать пробную версию доступной для всех, кто имеет доступ в Интернет. Мы уже знаем конечные точки, необходимые для утверждения FDA.

Последнее слово предостережения

Мы надеемся, что через три года что-нибудь появится на улице.Именно столько времени потребовалось для разработки Super Gleevec, второго поколения этого продукта. Но, возможно, подавление JAK2 плохо по другим причинам. Мы не знаем. Но практически беспрецедентно, что существует только одна мутация. Нам нужно поразить мутацию и игнорировать нормальный JAK2.

Еще никогда не было такого захватывающего времени для исследований MPD.

КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ЭССЕНЦИАЛЬНОГО ТРОМБОЦИТОЗА И ПЕРВИЧНОГО МИЕЛОФИБРОЗА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ МУТАЦИОННОГО СТАТУСА ГЕНОВ JAK2 И CALR1 | Лисина

ЧАСТОТА ОБНАРУЖЕНИЯ МУТАЦИИ ГЕНА JAK2 СРЕДИ ДОНОРОВ КРОВИ | Ольховский

Ген Янус-киназы 2 (JAC 2) – что это такое? Свойства и показания

Синонимы

Метод исследования

Биоматериал для анализа

Подготовка

Описание

Для чего используется анализ

Когда назначается

Референсные значения (норма)

Литература:

KDL. Онкогематология. Анализы и цены

Мутация Янус-киназы 2 JAK2 Val617Phe

Для чего это нужно

Определение мутации V617F в гене Jak2 у пациентов с хроническими миелопролиферативными заболеваниями Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

Гематологи исследовали редкое сочетание драйверных мутаций

Соматическая мутация JAK2 V617F, смертность и риск рака в общей популяции

Резюме

Введение

Дизайн и методы

Результаты и обсуждение

Таблица 1.

Таблица 2.

Соматическая мутация JAK2 V617F, смертность и риск рака в общей популяции

Резюме

Введение

Дизайн и методы

Результаты и обсуждение

Таблица 1.

Таблица 2.

Мутация JAK2 и фенотип заболевания: двойная мутация L611V / V617F в цис-мутации JAK2 связана с изолированным эритроцитозом и повышенной активацией AKT и ERK1 / 2, а не STAT5.

OMIM Запись — * 147796

Два случая тяжелой гипертензии при миелопролиферативных новообразованиях с положительной мутацией JAK2

1. Введение

2. Представления случаев

2.1. Случай 1 Вера полицитемии

2.2. Случай 2 Эссенциальный тромбоцитоз

3. Обсуждение

4. Заключение

Аббревиатуры

Согласие

Конфликт интересов

Вклад авторов

Мутация JAK2 — Лабораторные тесты онлайн AU

Как это используется?

Когда это требуется?

Что означает результат теста?

Что еще мне следует знать?

СЛЕДУЮЩИЕ ШАГИ В РАЗРАБОТКЕ ЦЕЛЕВЫХ ПРОЦЕДУР ДЛЯ ФЭ, ЭТ И МФ — Исследовательский фонд MPN

Введение

Положительная идентификация причинной мутации гена

Как работает Гливек

Почему мутация не всегда проявляется

Следующие шаги в разработке лекарств

Сотрудничество и конкуренция между исследователями

Как сообщество MPD может помочь

Новые возможности для участия в клинических испытаниях

Последнее слово предостережения

Добавить комментарий Отменить ответ