Пробы дыхательные: Функции внешнего дыхания (ФВД) с лекарственными пробами платно в Центральной поликлинике Литфонда

Содержание

Спирометрия: показания, цели и расшифровка

Пульмонологические заболевания распространяются все шире, и с каждым годом увеличивается число людей с жалобами на нарушение дыхательной функции. Чтобы получить представление о характере, причине отклонений и собрать информацию для лечения, врачи назначают особое обследование — спирометрию, также называемую спирографией.

Это неинвазивное исследование, с помощью которого оценивают объем легких, определяют скорость вдоха-выдоха, выявляют вентиляционную недостаточность и обструкции. Проводят его на специальном аппарате — спирографе. Он может быть механическим, водным, но сегодня больше распространены компьютерные модели, точно регистрирующие данные. Самые инновационные приборы — плетизмографы, удобные кабины с сиденьями и сверхчувствительными датчиками. 

Стандартный и широко распространенный диагностический метод совершенно безболезненный и хорошо переносится пациентами. Процедура проводится быстро, достаточно комфортно, разрешена для взрослых и детей в возрасте от шести лет.

Цели исследования

Анализ должен в обязательном порядке проводиться при любых нарушениях дыхания, жалобах и проблемах. Его назначают в диагностических целях, для профилактики, своевременного выявления патологий. Это обязательная составляющая общеклинического обследования, которое должно проводиться раз в полгода-год, а для людей из группы риска и чаще. В нее входят курильщики, пациенты, живущие в регионах с загрязненным воздухом, работающие в запыленных помещениях, на вредных производствах, имеющие наследственную предрасположенность к пульмонологическим патологиям.

Чаще всего назначается спирометрия при бронхиальной астме и подозрениях на нее, но это не единственная цель исследования. Кроме нее, врач:

  • оценивает общее состояние дыхательных органов, сердечнососудистой системы и показатели, которые его характеризуют;
  • выявляет ХОБЛ (хроническое легочное заболевание), а также разнообразные пульмонологические, бронхиальные нарушения, анализирует их характер и тяжесть течения;
  • подтверждает или опровергает результаты иных исследований — например, рентгенографических;
  • отслеживает, насколько эффективна терапия, которая проводится на момент диагностики или назначалась в прошлом, делает прогноз течения заболевания и состояния пациента;
  • изучает реакцию пациента на провокационные пробы;
  • оценивает, насколько целесообразно хирургическое вмешательство и осуществляет послеоперационное наблюдение за пациентом в динамике;
  • собирает данные для медико-социальных экспертиз, готовит пациента к обследованиям и лечебным мероприятиям, которые должны проводиться в будущем, и т.д.

Также процедура полезна для обучения правильному дыханию, укреплению этого навыка.

Общие сведения о процедуре

Спирография широко используется в пульмонологии, аллергологии, а также кардиологии. Назначают ее профильные специалисты, к которым пациента направляет врач общей практики после базовой лабораторной диагностики.

Спирометрию проводят в медицинском кабинете, оборудованном спирографом. Два основных метода выполнения — бронхолитическая и провокационная пробы. В первом случае врач оценивает динамику до и после приема препарата, расширяющего бронхи. Во втором пациенту дают физическую нагрузку или средство, провоцирующее бронхиальный спазм, который наступает только у астматиков. Этот вариант проводится, если явных нарушений и жалоб не выявлено.

Это безопасное исследование, рисков отклонений от нормального проведения практически нет. Однако, необходимо исключить проявления волнения — тремор конечностей, учащенное дыхание, сердцебиение, они искажают показатели. Очень редко при проведении спирографии пациент переживает приступ сильного кашля, но его быстро купирует медперсонал, находящийся рядом.

Спирограф — диагностическое оборудование с мундштуком, который человек удерживает ртом, и датчиками, реагирующими на интенсивность потока воздуха при выдохе. Характеристики обрабатываются компьютерной системой прибора, которая преобразует их в цифровой формат. Врач снимает показатели на максимальном выдохе после максимального вдоха, делая выводы с поправкой на настройку оборудования, его погрешность и допущенные искажения. К ним приводят нарушения и ошибки пациента при проведении процедуры:

  • дыхание через нос и слабое обхватывание мундштука, отчего в рот попадает лишний воздух, искажая результат исследования;
  • неполный, недостаточно глубокий или преждевременный вдох;
  • поджатые губы, стиснутые зубы;
  • недостаточное усилие на выдохе, его непродолжительность;
  • кашель и другие ошибки, на которые укажет врач.

Результат исследования — спирограмма, по изображению на которой определяется состояние человека. Для простоты использования показатели отдельно расшифровываются и сравниваются с нормой.

Показания и противопоказания

Чаще всего спирографию назначают при жалобах пациента на одышку и кашель, другие отклонения от нормального дыхания. На обследование направляют и при выявлении нарушений в газообмене по результатам анализа крови — если содержание кислорода или СО2 в ней выходит за допустимые значения. Также проверку назначают при аллергическом рините, рестриктивной дыхательной недостаточности, обструктивных патологиях, связанных с легочными, бронхиальными заболеваниями — ларингитом, астмой, опухолями.

Как подготовительное мероприятие спирометрия информативна перед бронхоскопией, обследованиями для диагностики характера легочной патологии, определения вентиляционной способности легких. Ее регулярно назначают пациентам из группы риска, людям со склонностью к сезонным аллергиям. Также исследование проводят для оценки общего состояния здоровья.

У неинвазивного обследования немного противопоказаний и ограничений. Исключена спирография для пациентов, у которых выявлены:

  • инфаркт — спирометрию откладывают минимум на три месяца;
  • аневризма, расслоение аорты;
  • гипертонический криз, неконтролируемая артериальная гипертензия;
  • легочное кровотечение;
  • пневмоторакс, существенная недостаточность ножных венозных клапанов, инсульт и другие заболевания.

Обследование откладывают, если пациент за последнее время перенес операцию. При офтальмологическом или внутриполостном характере нужно подождать около шести недель, при вмешательствах на грудной клетке — не менее месяца.

Подготовка к спирометрии и проведение обследования

Подготовка важна для точности результата и возможности использовать его для правильной постановки диагноза, выбора метода лечения. Она должна проводиться после тщательного осмотра врачом, изучения больничной карты. Чтобы минимизировать погрешности в показателях, за сутки до манипуляций необходимо исключить активную физическую нагрузку, интенсивные кардиотренировки, силовые упражнения.

За 2-3 часа до начала процедуры нельзя принимать пищу, курить, пить кофе, чаи, энергетики и другие стимулирующие напитки. В день манипуляций рекомендуют отказаться от приема антигистаминных препаратов и лекарств, расширяющих бронхи, если это невозможно — сделать поправку на результат.

В процедурный кабинет желательно прийти за 20-30 минут, чтобы успокоить дыхание, расслабиться, согреться, если на улице холодно. Одежда рекомендуется свободная, не затрудняющая дыхание — без тугих галстуков и ремней, давящих украшений, деталей, перетягивающих грудную клетку. Перед спирографией пациент 15-20 минут расслабляется в кресле и прослушивает инструктаж.

Обычно обследование проводят сидя, но при плохом самочувствии, слабости, пожилом возрасте человек может лежать. Пациент выравнивает спину, приподнимает подбородок и кладет руки на подлокотники кресла. Далее:

  • на нос пациента надевают зажим, чтобы показатели снимались только с ротового дыхания, без лишнего воздуха;
  • врач располагает во рту пациента одноразовый загубник-мундштук, который нужно плотно обхватить губами и чуть прижать зубами;
  • к загубнику через трубку подсоединяют спирограф и включают прибор;
  • пациент некоторое время глубоко дышит, затем выполняет указания врача — вдох-выдох на максимуме, через определенные промежутки и т.д.;
  • если нужно манипуляции проводятся повторно, чтобы вывести точное среднее значение.

Обычно все манипуляции отнимают до получаса. После стандартной процедуры врач может провести вторую, с бронхолитиком или провоцирующей пробой, назначить пикфлуометрию — домашнюю проверку с помощью контролирующего портативного спирографа.

Показатели и расшифровка результатов спирометрии

Ключевые показатели спирометрии — это жизненная емкость легких, в том числе форсированная (ЖЕЛ и ФЖЕЛ). ЖЕЛ отражает максимальное количество воздуха, которое помещается в легких после выдоха до конца. В параметре три составляющие объема — дыхательная, резервная на вдохе и резервная на выдохе, с нормативными значениями 0,5 тыс. куб. см, 1,5 тыс. куб см и 1,5 тыс. куб. см соответственно. Характеристики измеряют на спокойном дыхании. В норме ЖЕЛ составляет около 3,5 тыс. куб. см для совершеннолетнего человека. ФЖЕЛ — это разница между объемом воздуха в начальной и конечной точке максимально быстрого и сильного выдоха.

Также важен объем форсированного выдоха в течение первой секунды обследования — ОФВ1. Если разделить ФЖЕЛ на этот показатель, получится процентный индекс Тиффно, характеризующий проходимость дыхательных путей. В норме он составляет от 70% до 75%. Другие значимые характеристики:

  • объем воздуха, который человек может вдохнуть после полного вдоха и выдохнуть после максимального выдоха — в первом случае нормой считают 1,-1,5 л, во втором 1-1,5 л;
  • частота дыхания за 60 сек. — нормально делать 10-20 движений;
  • общая емкость легких (в среднем 5-7 л) и т.д.

Расшифровывая показатели обследования, важно учесть возраст, состояние пациента и делать поправку на категорию и имеющиеся заболевания. Поэтому квалификация врачей и уровень диагностических приборов выходят на первый план. Центр диагностики семейной клиники «Здоровье» проводит спирометрию на современном оборудовании. Наши опытные врачи помогут правильно подготовиться к обследованию и грамотно оценят и интерпретируют его результаты.

Спирометрия

Описание темы:

Рекомендуем сначала ознакомится с материалом: Описание работы личного кабинета

При обращении указывайте ФИО+дата рождения или регистрационный номер из договора.

Обращения обрабатываются только по будним дням в течение 2-х суток.

При обращении обязательно указывайте лабораторный номер (6 цифр под штрих-кодом)!

Обращаем Ваше внимание, что рассылка результатов анализов по электронной почте осуществляется по готовности в районе 13.00 и 18.00.

Рассылка ответов ПЦР на коронавирус  — с 19.00 до 20.00.

Укажите, пожалуйста, свою специальность и контактный телефон (просьба не оставлять в данном сообщении своих полных персональных данных).

Здесь Вы можете задать краткий вопрос и получить краткий ответ врача-специалиста. Но поставить диагноз, назначить лечение, дать рекомендации по приёму лекарств и т.д. врач сможет только при Вашем личном посещении. Расшифровка результатов исследований,  проводится врачом вместе с другими клиническими данными и возможна только на приеме.

В поле «ваш вопрос» укажите телефон, на который вам может перезвонить оператор колл-центра.

Звонки выполняются в часы работы колл-центра: Будни: 8.00 — 21.00, Выходные: 8.00 — 20.00

 

Записаться на приемы врачей, УЗИ, ФГДС и мазок на коронавирус можно в соответствующих разделах или по кнопкам.

Чтобы отменить/перенести запись  — нужно позвонить по телефону медцентра или колл-центра 600-22-10 или оставить свой контактный телефон (просьба не оставлять в данном сообщении своих полных персональных данных).

Для оперативного разбора ситуации укажите, пожалуйста, свой регистрационный номер из договора (в разделе реквизиты заказчика), место, дату обращения и контактный телефон (просьба не оставлять в данном сообщении своих полных персональных данных).

Правила подготовки к УЗИ и др. процедурам можно уточнить тут

Мы оставляем за собой право не отвечать на неконкретные вопросы, на вопросы по рекламе и снабжению, не имеющие отношения к содержанию сайта, а также, находящиеся вне компетенции технической службы, а также на вопросы, заданные в неуважительной форме.

Ортостатическая проба в Новгороде — пройти ортостатическую пробу пульса, оптимальные цены


Про ортостатические пробы знают не только медики, но и спортсмены. Ортостатический (наклонный) тест – важный показатель устойчивости сердечно-сосудистой системы. Этот метод диагностики позволяет выявить определенные нарушения в работе сердца и нервной системы.


В медицинской клинике «Альфа-Центр Здоровья» можно пройти ортостатические пробы под контролем опытного кардиолога. Это позволит поставить более точный диагноз, чем при использовании классической ЭКГ, и выявить скрытые нарушения в работе систем.


Показания для проведения ортостатических проб


В результате изменения положения тела вегетативная нервная система человека перевозбуждается, и происходит выброс норадреналина, который способствует увеличению частоты сердечных ритмов. Цель ортостатического тестирования – зафиксировать эти ощущения и провести оперативную диагностику.


Суть обследования проста – это сбор данных о работе сердца при переходе тела из горизонтального положения в вертикальное.


Как правило, направление на тест выдает кардиолог или невролог. Основным показанием является сильный дискомфорт при смене положения тела, который выражается в головокружении, обмороках, резком повышении артериального давления.


Методика выполнения ортостатических проб


Функциональное исследование проводится на голодный желудок, желательно в первой половине дня.


Первый вариант проведения теста – активный. Начальные замеры делаются в состоянии покоя в горизонтальном положении, затем обследуемого плавно переводят в вертикальное положение и измеряют пульс в течение не менее трех минут. В стационаре проведение активных тестов организуют сразу после пробуждения пациента.


Второй вид ортостатических проб – пассивные. Обследуемый ложится на кушетку, делается контрольный замер, после чего пациента резко переводят в вертикальное состояние. Этот тест используется с целью выявления риска падения в обморок при резкой смене положения тела.


Оценка результатов проб


Выполнение активной и пассивной пробы позволяет кардиологу
оценить изменения в показаниях артериального давления и ЧСС. Например, увеличение ЧСС более, чем на 25 единиц позволяет определить наличие возможных патологий сердечно-сосудистой системы.


Выполнить ортостатические пробы в Новгороде


Сделать ортостатические пробы состояния сердечно-сосудистой системы можно в новгородском филиале клиники «Альфа-Центр Здоровья». Записаться на процедуру предлагаем по телефону или на сайте, заполнив специальную онлайн-форму.

Ортостатическая проба в Мурманске — пройти ортостатическую пробу пульса, оптимальные цены


Ортостатическая проба, или наклонный тест – метод диагностики, позволяющий выявить нарушения в работе
сердечно-сосудистой и нервной систем. Обследование представляет собой снятие ЭКГ при изменении положения тела из
горизонтального в вертикальное.


В клинике «Альфа-Центр Здоровья» проводятся ортостатические пробы и другие функциональные исследования.
Предварительно рекомендуем записаться на прием к кардиологу
или
неврологу, который соберет анамнез и оценит необходимость прохождения исследования.


Показания к процедуре


Данный вид диагностики назначается пациентам, испытывающим сильные негативные ощущения при резкой смене положения
тела. Дискомфорт может проявляться в виде головокружения, обмороков, скачков артериального давления.


Цель методики – документальная фиксация этих ощущений с учетом их физиологических признаков.


Методика проведения ортостатической пробы


Выполнение теста не требует особой подготовки. Чаще всего он проводится утром на пустой желудок. Если врач назначает
серию ортостатических проб, то они, как правило, проходят в одно и то же время.


Существует 2 варианта проведения ортостатических проб: активная и пассивная. В первом случае обследуемый находится в
положении лежа не менее 5 минут, а затем аккуратно поднимается на ноги. При пассивной пробе пациент фиксируется на
специальной кушетке. После 5 минут пребывания в состоянии покоя в горизонтальном положении, обследуемого резко
переводят в вертикальное положение.


Во время проведения исследования у пациента трижды измеряется пульс:

  • первый раз – в горизонтальном положении;
  • второй раз – при самостоятельном подъёме или резком переходе в вертикальное положение;
  • через 3 минуты после изменения положения.


Оценка результатов


На основании результатов теста делают определенные выводы о функциональном состоянии сердечно-сосудистой системы.
Оценивают показатели пульса и артериального давления.


Нормой является учащение пульса не более чем на 20 ударов в минуту. При этом допускается снижение систолического и
повышение диастолического давления, не более чем на 10 единиц


Увеличение сердечного пульса более чем на 25 единиц свидетельствует о наличии заболеваний сердечно-сосудистой или
вегетативной нервной систем.


Сделать ортостатические пробы нервной системы в Мурманске


Записаться на прием к кардиологу и ортостатические пробы состояния сердечно-сосудистой системы можно по телефону или
на сайте, заполнив простую онлайн-форму.


Наши администраторы помогут с решением любой проблемы: подберут удобное время приема, порекомендуют специалиста,
сориентируют по стоимости и определят оптимальный для вас вариант проезда к клинике.

Изделия для отбора проб и принадлежности

















1700518x Мукус-Экстрактор катетер для аспирации верхних дыхательных путей, 370 мм, Ch20 1/50/200
1700618x Мукус-Экстрактор катетер для аспирации верхних дыхательных путей, 370 мм, Ch22 1/50/200
1700818x Мукус-Экстрактор катетер для аспирации верхних дыхательных путей, 370 мм, Ch24 1/50/200
1700718x Мукус-Экстрактор катетер для аспирации верхних дыхательных путей, 530 мм, Ch22 1/50/200
1700918x Мукус-Экстрактор катетер для аспирации верхних дыхательных путей, 530 мм, Ch24 1/50/200
1702318x Мукус-Экстрактор (без фильтра), 370 мм, Ch20 1/50/200
1702418x Мукус-Экстрактор (без фильтра), 370 мм, Ch22 1/50/200
1702518x Мукус-Экстрактор (без фильтра), 370 мм, Ch24 1/50/200
1702018x Мукус-Экстрактор (без фильтра), с дополнительной крышкой, штекерный разъём, включая аспирационный катетер с воронкообразным коннектором, длина 370 мм, CH06 1/50/200
1702118x Мукус-Экстрактор (без фильтра), дополнительная крышка и штекерный разъём 1/50/200
1700118x Двухкамерный Мукус-Экстрактор катетер для аспирации верхних дыхательных путей, 370 мм, Ch20 1/50/200
1700218x Двухкамерный Мукус-Экстрактор катетер для аспирации верхних дыхательных путей, 370 мм, Ch22 1/50/200
1700418x Двухкамерный Мукус-Экстрактор катетер для аспирации верхних дыхательных путей, 370 мм, Ch24 1/50/200
1702218x Двухкамерный Мукус-Экстрактор катетер для аспирации верхних дыхательных путей, 370 мм, Ch20 1/50/200
258100210120 Мукус-Экстрактор катетер для аспирации верхних дыхательных путей, со сменными катетерами тип Мюлли, 430 мм, Ch24/16 1/50/200
258100110120 Мукус-Экстрактор катетер для аспирации верхних дыхательных путей, со сменными катетерами тип Мюлли, 430 мм, CH06/10/14 1/50/200

Полезно знать об АСТМЕ И ХОЛОДЕ (astma og kulde)

АСТМА И ХОЛОД (astmaogkulde)

Полезная информация об астме и холоде – Информационный лист Норвежского союза астматиков и аллергиков

Холодная погода доставляет особые хлопоты людям, страдающим астмой и иными заболеваниями верхних дыхательных путей. Однако, соответствующие предупредительные меры, правильное применение лекарств и защита от холода позволяют астматикам находиться на улице зимой.

Холод сам по себе не является самой большой проблемой. Загрязнение воздуха взвесями в холодную погоду, особенно в городах и крупных населённых пунктах, как правило, усиливает астматические симптомы. Частые простуды в зимнее время также усугубляют проблему. Астма является болезнью с многочисленными формами проявления, но у большинства астматиков плохое самочувствие возникает в холодную погоду. Интенсивные тренировки в очень холодную погоду (< 10°C) следует проводить с большой осторожностью.

Что происходит с астмой в холодную погоду?

Причиной того, что состояние астматиков ухудшается при вдыхании холодного воздуха, является сверхчувствительность верхних дыхательных путей, а не аллергия к холоду. Вдыхание холодного воздуха ведёт к иссушению поверхности дыхательных путей и последующему их сужению.

В очень холодную погоду также становится трудно дышать носом. Вдыхание астматиком воздуха ртом приводит к дополнительному сужению дыхательных путей, так как воздух не успевает согреться до поступления в лёгкие.

Нос играет весьма важную роль в защите органов дыхания от необработанного воздуха. Обнаружена зависимость между размером носа и эффективностью процесса вдыхания через нос. Исследования показали, что у инуитов, живущих в очень холодном климате Гренландии, носовая полость расположена выше, чем у многих других народностей!

Астма, холод и тренировка

Важно помнить, что тренировка на сильном холоде без достаточной защиты может привести к усилению астмы. Возникновение так называемой астмы физического усилия может быть косвенно вызвано интенсивной тренировкой в холодную погоду, так как в этом случае происходит попадание большого количества холодного воздуха в дыхательные пути. Как правило, проблемы с астмой физического усилия возникают во время интенсивных тренировок или соревнований при температуре ниже -15°C.

Даже здоровые дыхательные пути животных и человека могут реагировать на физические нагрузки в холодную погоду. Пробы ткани дыхательных путей, взятые у ездовых собак, участвовавших в гонках собачьих упряжек на Аляске, показали наличие воспалительных реакций различной степени, точно так же, как и у спортсменов лыжников, соревнующихся в холодную погоду.

Несмотря на вышесказанное, следует помнить, что физическая активность улучшает общее состояние организма и его способность противостоять астме. Астматики могут регулярно заниматься спортом, даже в мороз, при хорошей защите лица от холода в районе носа и рта, а также применении индивидуально подобранных медикаментов. Как правило, астматикам не рекомендуется интенсивно тренироваться при температуре ниже -10°C.

Астма является весьма индивидуальной болезнью со многими перепадами, что может приводить к тому, что некоторые испытывают затруднения с дыханием даже при лёгких морозах. Важно знать свою болезнь и учитывать собственные реакции.

Холодовая астма – это не то же самое, что холодовая аллергия!

Холодовая аллергия – это крапивница, возникающая особенно часто в результате внешнего воздействия, особенно это касается холодной воды. Крапивница, как результат воздействия низкой температуры или холодной воды, может привести к серьезным реакциям, например в виде отёков на больших участках тела. Холодовая аллергия может стать причиной аллергического шока.

Холод и загрязнение воздуха

В городах и крупных населённых пунктах, холодные, безветренные дни и большое автомобильное движение могут привести к повышенной концентрации газов и взвесей в воздухе. Двуокись азота (NO2), выбрасываемая в атмосферу дизельными двигателями, способствует увеличению степени загрязнения воздуха.

Попадание двуокиси азота в воздушные пути людей, находящихся в группе риска, может привести к увеличению кашля, усилению симптомов бронхита и уменьшению устойчивости к инфекциям. Астматики реагируют на пониженную функциональность лёгких даже после непродолжительного воздействия.

Взвешенные частицы могут являться причиной вспышки болезни или ее усиления у людей, страдающих хроническими заболеваниями дыхательных путей. Также взвешенные частицы могут быть носителями аллергенов, способных вызвать аллергические реакции.

Защита и профилактика – астма и холод

Термомаска «Jonas», предлагаемая Норвежским союзом астматиков и аллергиков, обеспечивает защиту от холодного, сухого воздуха и предназначена для тех, кто чувствует себя хуже в холодную погоду.

Кроме того, маска даёт необходимую защиту во время тренировок при низких температурах. Шапка или шарф с дыхательной сеткой обеспечивают согревание воздуха перед его попаданием в легкие. Это уменьшает проблемы астматиков и других людей, которым трудно дышать через нос в морозную погоду.

Термомаска является одобренным средством лечения и она может быть выделена органом здравоохранения по месту проживания, на основании направления врача-специалиста в организацию по выделению средств лечения.

 

пройдите обследование и узнайте свой результат в клинике МЕДСИ в Санкт-Петербурге

Оглавление


Уреазный дыхательный тест– один из высоко эффективных методов диагностики обсемененности желудка бактерией Helicobacter pilori. В основе метода находится способность хеликобактера выделять фермент уреазу, переводящего введенный реактив карбамид (0.5 гр) в аммиак, выделяемый с дыхательным воздухом. Уреазная активность бактерии считываются при помощи анализа выдыхаемого воздуха цифровым аппаратом.


Дыхательные тесты на хеликобактер являются абсолютно безболезненными, неинвазивными и информативными методами выявления хеликобактериоза. Для их проведения требуется минимальная подготовка пациента и уреазный дыхательный тест не имеет никаких противопоказаний.

Показания к назначению дыхательных тестов на Helicobacter pylori


Назначить проведение дыхательных тестов на хеликобактер может гастроэнтеролог или семейный врач, терапевт, педиатр или другой врач при следующих состояниях или заболеваниях:

  • Возникновение во время или после приема пищи тяжести, дискомфорта или болевых ощущений в желудке ноющего, колющего, давящего или схваткообразного характера

  • Частые отрыжки

  • Изжога

  • Ухудшение аппетита

  • Неприятный запах изо рта

  • Появление тошноты или рвоты после еды

  • Гастрит, гастродуоденит, язвенная болезнь или другие выявленные ранее кислотозависимые заболевания пищеварительной системы

  • Наличие необъяснимой железодефицитной анемии, идиопатической тромоцитопенической пурпуры, дефицита витамина B12

  • Перед назначением аспирина и НПВП для снижения риска эрозивно-язвенных поражений желудка и двенадцатиперсной кишки и кровотечений из верхних отделов ЖКТ у пациентов, инфицированных H. pylori

  • У пациентов с отягощенной наследственностью по раку желудка

  • У одного из членов семьи во время анализов была выявлена Helicoter pylori

  • Не выполнение или противопоказания к выполнению ФГДС

  • Необходимость оценки эффективности проведенной эрадикационной терапии

При подготовке к дыхательным тестам на Helicobacter pylori пациент должен соблюдать следующие правила:

  • Обследование проводится утром натощак: перед исследованием исключить прием пищи и воды. Последний прием пищи должен быть «легким» с исключением мяса, рыбы, грибов и не менее чем за 12 часов до исследования
  • Тест должен назначаться только спустя 4-6 недель после приема антибиотиков или антисекреторных средств. Прием анальгетиков, противовоспалительных или антацидных препаратов, препаратов висмута должен прекращаться за 14 дней до проведения исследования. О применении других лекарственных средств следует обязательно сообщить врачу для возможной коррекции приема препаратов
  • Нельзя принимать крепкие спиртные напитки в течение 3 суток до обследования
  • Нельзя есть бобовые (фасоль, горох, чечевица, сою) в течение 3 суток до обследования
  • Утром в день исследования нельзя принимать пищу и жевать жевательную резинку. Отказаться от курения следует за 3-4 часа до процедуры
  • Перед тестом необходимо почистить зубы и тщательно прополоскать рот. После этого нельзя пользоваться ополаскивателями для полости рта и т. п.

Как проводится исследование


Для сдачи хелик-теста следует выполнить следующие действия:

  • Пациент удобно располагается в положении сидя
  • Перед обследованием тщательно прополаскивается рот водой
  • Врач предлагает пациенту подышать в обычном режиме в пластиковую трубку на протяжении 6 минут. Дыхание не должно форсироваться, а используемая трубка не должна касаться языка и неба. При попадании слюны в трубку исследование следует начать заново
  • Результаты фонового обследования считываются и запоминаются автоматически
  • После этого врач дает пациенту принять 0,5 г карбамида, который предварительно растворяется в 50 мл воды
  • Далее больной вновь прополаскивает рот водой и дышит в трубку с другой стороны. Этот этап анализа занимает также 6 минут
  • После завершения второй части обследования результаты вновь фиксируются и проводится их автоматическая обработка

Результаты


Обработка данных и составление заключения проводится автоматически и выдаются в виде отчета об проведённом обследовании с указанием о наличии или отсутствии инфекции Helicobacter pylori. При выявлении этой болезнетворной бактерии пациенту рекомендуется консультация гастроэнтеролога (терапевта), который и определяет дальнейший план лечения хеликобактериоза. При необходимости больному могут назначаться дополнительные виды обследований: ФГД, биохимическое исследование крови, рН-метрия, анализ кала и др.

Сбор и тестирование респираторных проб — Просмотр полного текста

Ежегодно заболеваемость и смертность, связанные с острыми респираторными инфекциями, колеблются в зависимости от сезона. Этот рост и падение связаны с изменением распространенности респираторных вирусов среди населения. Мириады респираторных вирусов ответственны за эти инфекции. Например, вирус гриппа, респираторно-синцитиальный вирус (RSV), вирус парагриппа, метапневмовирус человека, риновирус и аденовирус были идентифицированы как вызывающие такие острые инфекции.Внутри большинства этих вирусных групп были идентифицированы многочисленные патогенные подтипы. Вспышка тяжелого острого респираторного синдрома (SARS) в 2003 году была в конечном итоге идентифицирована как коронавирус; смертность от ОРВИ среди пожилых людей может достигать 50%. Совсем недавно было установлено, что бокавирус человека (HBoV) вызывает острые инфекции дыхательных путей. В 2005 году HBoV был идентифицирован молекулярным тестированием и оказался единственным вирусом, идентифицированным в субпопуляции пациентов, страдающих инфекциями дыхательных путей.Помимо поддерживающих мер (например, постельный режим, гидратация и т. Д.), Не существует эффективных методов лечения многих из этих вирусных инфекций; однако противовирусные агенты (например, ингибиторы нейраминидазы осельтамивир или занамивир) могут использоваться для облегчения тяжести гриппоподобных симптомов. Идентификация респираторного вируса как возбудителя болезни важна, поскольку устраняет необходимость лечения антибиотиками; Врачи обычно ждут 7-10 дней, пока симптомы не исчезнут, прежде чем назначать антибиотики из-за рисков, связанных с обострением устойчивости бактерий к антибиотикам.

Каждый год популяция вируса колеблется, а вместе с ней и антигенная презентация доминирующих штаммов, циркулирующих в популяции. Эпидемии возникают, когда все большие и большие части населения не обладают врожденной или приобретенной иммунологической устойчивостью к такому штамму (штаммам) в определенное время года. Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) поддерживает отдельный веб-сайт, посвященный отслеживанию вспышек гриппа, особенно птичьего гриппа (https://www.who.int/fluvirus_tracker). Эти зоонозные передачи, которые в дальнейшем адаптируются к передаче от человека к человеку, вызывают наибольшую озабоченность, поскольку предсказано, что практически все люди будут иммунологически наивными.Передача зоонозов среди людей отслеживается в надежде, что можно будет избежать пандемии, подобной испанскому гриппу 1918 года; по оценкам, от испанского гриппа умерло более 25 миллионов человек. Правительство США также поддерживает отдельный веб-сайт с ресурсами, касающимися информации о гриппе и пандемии (http://www.pandemicflu.gov/). 11 июня 2009 г. ВОЗ повысила уровень угрозы пандемии до 6 в ответ на глобальное появление нового штамма свиного гриппа A (подтип h2N1).Скорость распространения вируса h2N1 иллюстрирует представление о том, что быстрое и точное определение вирусного патогена, связанного со вспышкой, имеет решающее значение для общественного здравоохранения во всем мире.

Помимо угрозы вспышки гриппа, увеличение числа вирусов, вызывающих острые инфекции дыхательных путей, усложняет правильное и быстрое определение первичного патогена; каждый новый вирус или подтип увеличивает сложность тестирования. Молекулярные диагностические тесты идеально подходят для решения этой проблемы.Анализы, основанные на полимеразной цепной реакции (ПЦР), могут включать несколько праймеров и зондов (например, мультиплексированных) в одну реакцию, чтобы справиться с этой сложностью.4 Такие анализы чрезвычайно чувствительны, имеют высокую степень специфичности и могут быть выполнены очень быстро. Тест artus Influenza A / B RT-PCR — это анализ ПЦР в реальном времени для обнаружения и идентификации гриппа A и B, в то время как тест QIAGEN ResPlex II Advanced Panel — это анализ на основе амплификации нуклеиновых кислот для обнаружения и идентификации широкий спектр некоторых из наиболее распространенных респираторных вирусов, связанных с острыми респираторными инфекциями.В настоящем исследовании респираторные образцы будут проспективно собраны и протестированы с использованием теста RT-PCR artus Influenza A / B и теста QIAGEN ResPlex II Advanced Panel.

Отбор респираторных проб при тяжелом остром респираторном синдроме коронавирус 2: обзор

Голова Шея. 8 мая 2020 г .: 10.1002 / hed.26232.

, MMed (ORL)
1
и, MMed (ORL), FAMS (ORL)
1

Анна См.

1
Отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи,
Больница общего профиля Сингапура,
Сингапур,

Сонг Тар То

1
Отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи,
Больница общего профиля Сингапура,
Сингапур,

1
Отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи,
Больница общего профиля Сингапура,
Сингапур,

Автор, ответственный за переписку. * Переписка
Анна Си, отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи, Сингапурская больница общего профиля, Outram Road, Сингапур 169608.
Электронная почта: [email protected],

Поступила в редакцию 20 апреля 2020 г .; Принята к печати 22 апреля 2020 г. Его можно использовать для неограниченного повторного использования в исследованиях и анализа в любой форме и любыми средствами с указанием первоисточника на время чрезвычайной ситуации в области общественного здравоохранения.

Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Abstract

Новое коронавирусное заболевание 2019 года вызвано тяжелым острым респираторным синдромом коронавирусом 2 (SARS ‐ CoV ‐ 2) и было объявлено пандемией в марте 2020 года. Множество методов взятия проб из дыхательных путей для выявления вируса SARS ‐ CoV ‐ 2 имеют использовались, и в текущей развивающейся ситуации не существует международного консенсуса по рекомендуемому методу отбора респираторных проб для диагностики. Отоларингологи тесно занимаются верхними дыхательными путями, и четкое понимание методов взятия проб из дыхательных путей имеет первостепенное значение.Эта статья призвана предоставить обзор различных методов и их доказательств на сегодняшний день.

Ключевые слова: коронавирус , COVID-19, отбор респираторных проб, ОТ-ПЦР, SARS-CoV-2

1. ВВЕДЕНИЕ

Новое коронавирусное заболевание 2019 г. (COVID-19), вызванное тяжелым острым респираторным синдромом коронавирусом 2 (SARS ‐ CoV ‐ 2) — это развивающаяся пандемия.
1
Описаны различные методы обнаружения. В настоящее время наиболее распространенным методом обнаружения вирусов является отбор проб из дыхательных путей.Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в реальном времени (ОТ-ПЦР), нацеленная на ген E SARS-CoV-2, была разработана на основе протокола Кормана и др., И этот анализ был официально выпущен Всемирной организацией здравоохранения.
2
Положительные результаты могут быть подтверждены последующим анализом ОТ-ПЦР в реальном времени, направленным на ген ORF1b-NSP-14, на основе протокола Chu et al.
3
В этой статье мы представляем обзор множества методов взятия проб из дыхательных путей на SARS ‐ CoV ‐ 2, которые были опубликованы на сегодняшний день.Эти методы можно разделить на две основные категории: отбор проб верхних дыхательных путей (носовой, носоглоточный, ротоглоточный, лингвальный и полоскание горла) и отбор проб нижних дыхательных путей (мокрота, трахея и бронхоальвеолярный отбор).

2. ОТБОР ВЕРХНЕЙ ДЫХАТЕЛЬНОЙ ПРОБЫ

2.1. Образцы из носа и носоглотки

Назальный мазок (NS) относится к взятию флокированного мазка из передней носовой полости, которая анатомически ограничена ноздрями спереди и переходом твердое-мягкое небо сзади.В отличие от этого, мазок из носоглотки (NPS) включает введение флокированного тампона глубоко в носоглотку (за переходом между твердым и мягким небом) для достижения прямого контакта с задней стенкой слизистой оболочки носоглотки. Невозможно получить чистый носоглоточный образец с помощью флокированного тампона, поскольку его введение требует контакта с носовой полостью на пути внутрь. Однако вполне возможно получить чистый NS, избегая глубокого введения флокированного тампона. палка.Средняя длина передней полости носа у здорового взрослого человека составляет от 5 до 7 см.
4
Обзор английской литературы на PubMed подтвердил, что не существует опубликованного сравнительного исследования, посвященного выходу вирусной нагрузки SARS-CoV-2 между образцами мазков из носа и носоглотки. Исследование такого рода также не имеет клинической значимости и не было бы логически предпринято.

Во время вспышки атипичной пневмонии в 2003 г. Chan et al. Описали альтернативный метод взятия пробы из носоглотки, известный как «назофарингеальный аспират» (NPA).5
Этот метод позволяет получить чистый носоглоточный образец без загрязнения передней носовой полости. Вместо флокированного тампона в носоглотку вводится отсасывающий катетер, после чего активируется отсасывание, всасывающее носоглоточную слизь в ловушку. Чан и др. Сравнили образцы NPA с образцами «мазков из носа и горла» и обнаружили несколько лучшую эффективность NPA в обнаружении вирусной РНК SARS у подтвержденных пациентов с SARS (NPA 29,6% против NS / OPS 28,3%, значение P не предоставлено) .5
Однако следует отметить, что подробностей процедуры «мазок из носа и зева» не было. Неясно, относится ли «назальный» компонент к отбору проб из передней носовой полости (NS) или к комбинированному отбору проб NS / NPS. В отличие от результатов Чана и др., Другое исследование, проведенное в Гонконге во время вспышки атипичной пневмонии в 2003 году, показало, что «объединенные мазки из горла и носа» обеспечивают более высокую диагностическую ценность по сравнению с образцами NPA. Далее было подчеркнуто, что первое имеет дополнительное преимущество в виде меньшего риска образования аэрозолей, поскольку не используется всасывание.6

В условиях нынешней пандемии COVID-19 литература, посвященная NPA как форме респираторного отбора проб для выделения вируса SARS-CoV-2, отсутствует. Большинство исследований используют мазки в качестве основного метода отбора проб из верхних дыхательных путей. Были опубликованы сравнения комбинированного NS / NPS и мазка из ротоглотки (OPS). В исследовании Zou et al. 72 образца NS / NPS, взятых из средней носовой раковины и носоглотки в разные дни болезни, были проанализированы у 18 пациентов с COVID-19. Более высокие вирусные нагрузки (порог цикла [ C
t ] значений) были обнаружены в этих образцах по сравнению с 72 образцами OPS в той же группе пациентов.7
По мнению авторов, по сравнению с NS, NPS и OPS, метод NPA требует много времени, ресурсов и не подходит для массового тестирования в ситуации пандемии.

2.2. Мазок из ротоглотки

OPS также известен как «мазок из зева». Это относится к отбору образцов одного или нескольких из четырех участков ротоглотки (миндалины, мягкое небо, основание языка и задняя стенка глотки). Так же, как носоглотка спарена кзади от носовой полости, ротоглотка расположена позади ротовой полости и начинается на переходе между твердым и мягким небом.Наиболее частым местом-мишенью ОПС является задняя стенка глотки, поскольку она считается анатомическим континуумом носоглотки. Мазки из горла или OPS обычно используются для взятия проб из дыхательных путей во время текущей вспышки COVID ‐ 19. В раннем эпохальном исследовании, подробно описывающем клинические характеристики пациентов с COVID-19 в Ухане, OPS использовался как единственный метод отбора респираторных проб.
7
В крупнейшем на сегодняшний день исследовании китайской когорты COVID-19, не связанной с Уханьем, в Чжэцзяне, OPS также использовался в качестве единственного метода выборки.8
Однако сообщалось о низкой отрицательной прогностической ценности OPS. Се и др. Сообщили, что только 9 из 19 (47%) ОПС у серопозитивных пациентов с COVID-19 были положительными, что обращает внимание на важность повторного отбора образцов из нескольких мест, включая нижние дыхательные пути, для повышения диагностической эффективности.
9

Методы NS, NPS, NPA и OPS сравнивались в китайском исследовании Ye et al., В котором анализировалась литература по отбору респираторных проб SARS, MERS и h2N1, и был сделан вывод, что среди всех методов отбора проб из верхних дыхательных путей NPA имеет более высокий процент положительных результатов. в течение 2 недель с момента появления симптомов, в то время как комбинированные NS + OPS были наименее вредными для медицинского персонала во время отбора проб.10
Остается оценить, можно ли экстраполировать вышеуказанные результаты на SARS ‐ CoV ‐ 2.

2.3. Лингвальный мазок

Лингвальный мазок (LS) или мазок из полости рта (OCS) для обнаружения SARS ‐ CoV ‐ 2 включает мазок с передних двух третей языка или ротового языка. Исследование в Ухане сравнило LS с OPS и обнаружило, что у 91 пациента частота положительных результатов OPS была выше, чем у LS. Однако авторы отметили, что это различие могло быть связано с тем, что одна опытная медсестра собрала все образцы.11

Аззи и др. Сообщили об использовании OCS и «сбора оральной пипетки слюны» для обнаружения вирусов. В когорте из 25 пациентов с COVID-19 от тяжелой до очень тяжелой (степень тяжести не указана, но все пациенты находились на искусственной вентиляции легких в отделении интенсивной терапии) сообщалось, что SARS-CoV-2 был обнаружен во всех мазках слюны 25 пациентов, при этом разные C
t значений (диапазон 18,12-32,23, среднее значение 27,16 ± 3,07). У всех пациентов на момент постановки диагноза ранее имелись положительные NPS.12
Таким образом, авторы пришли к выводу, что сбор слюны из ротовой полости является надежным методом обнаружения вирусов. Однако следует отметить, что эти результаты были получены от пациентов в критическом состоянии, у которых характер выделения вируса может отличаться от подозрительных случаев. Следовательно, использование мазков из слюны или LS может не воспроизводиться в сценариях скрининга. Хотя LS или OCS просты и, по-видимому, вызывают меньший дискомфорт, их использование в текущей пандемии вряд ли будет распространенным из-за необходимости максимизировать взятие проб и сбор выделений для точной диагностики инфекции.

2.4. Промывание полосканием

Риск воздействия на медицинских работников является неотъемлемым при взятии флокированных мазков, поскольку эти методы могут спровоцировать чихание, кашель и рвоту. Сайто и др. Сообщили об использовании полоскания для полоскания в качестве безопасной и чувствительной альтернативы взятию мазков. Промывание горла с использованием 10 мл физиологического раствора и OPS сравнивали у пациента с COVID-19 на 8 и 9 дни болезни. Примечательно, что более высокие количества вирусного генома были замечены в образцах промывания для полоскания.
13
Однако это был единственный случай.Несмотря на вышесказанное, ранее сообщалось, что в отношении респираторных патогенов, таких как грипп A, грипп B и респираторно-синцитиальный вирус, полоскание горла более чувствительно, чем мазки из горла.
14
В нынешней вспышке мало доказательств чувствительности и специфичности полоскания для выявления вирусов.

3. ОТБОР НИЖНЕЙ ДЫХАТЕЛЬНОЙ ПРОБЫ

3.1. Сбор мокроты

Сбор мокроты может производиться во время произвольного кашля или непроизвольной индукции.То и др. Выполнили сбор мокроты, заставляя пациентов откашляться в стерильный контейнер, и продемонстрировали последовательное определение уровней вирусной РНК в собранных образцах.
15
В другом ограниченном исследовании 10 пациентов с COVID-19 Ло и др. Сообщили, что РНК SARS-CoV-2 была обнаружена в 90% образцов НПВ, но ложно отсутствовала в 10% (один пациент).
16
В конечном итоге этому пациенту был поставлен диагноз после обнаружения вируса в собранной мокроте после одного отрицательного и одного неубедительного результата NPS (неубедительный результат был определен как C
т — номинал 36-38).Превосходство мокроты для обнаружения вируса SARS-CoV-2 было также подтверждено Пан и соавторами, которые продемонстрировали, что образцы мокроты обычно показывают более высокую вирусную нагрузку, чем мазки из зева.
17

3.2. Трахеальный аспират

Трахеальный аспират (ТА) может быть получен путем аспирации из постоянной эндотрахеальной трубки у пациентов с механической вентиляцией легких или путем прямого аспирации трахеи у пациентов с трахеотомией. Китайское общество анестезиологов опубликовало свои рекомендации по интубации трахеи у тяжелобольных пациентов с COVID-19, отметив, что это процедура с образованием аэрозолей, и ее следует избегать, за исключением случаев крайней необходимости.18
В то же время сбор ТА для обнаружения вирусов представляет значительный риск для медицинского работника. Хуанг и др. Сообщили о сравнении вирусной нагрузки в образцах верхних дыхательных путей и эндотрахеальных аспиратах в когорте из 16 интубированных пациентов с COVID-19 и обнаружили, что у последних значительно более высокие значения вирусной РНК по сравнению с носовыми и ОПС.
19
Однако этот метод респираторного отбора проб не имеет отношения к сценариям амбулаторного скрининга, но может иметь значение при скрининге на COVID-19 пациентов на ИВЛ в отделениях интенсивной терапии и для серийного мониторинга вирусной нагрузки интубированных подтвержденных случаев.

3.3. Бронхоальвеолярный лаваж

Самая ранняя идентификация генома SARS-CoV-2 была проведена с помощью образцов бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) в Уханьском институте вирусологии.
20
БАЛ — это форма отбора проб из нижних дыхательных путей, при которой бронхоскоп вводится в трахею и бронхи, вводится рассчитанное количество жидкости и затем собирается для исследования. С декабря 2019 года были опубликованы исследования из Китая и Европы по использованию образцов БАЛ для обнаружения вируса SARS ‐ CoV ‐ 2.21, 22, 23 Накапливающиеся данные свидетельствуют о том, что БАЛ может быть полезен при обнаружении вирусов в случаях ложноотрицательных NPS и / или OPS.
24
В исследовании 4880 пациентов с подозрением на COVID-19 в Ухане Лю и др. Обнаружили, что БАЛ показал самый высокий положительный показатель при обнаружении SARS-CoV-2, и сообщили, что NS и OPS показали низкий комбинированный положительный показатель 38,25% при сборе мокроты. показал положительную оценку 49,12%. Определение случая пациента с подозрением на COVID-19 в исследовании было основано на следующем: (a) типичные симптомы респираторной инфекции, такие как лихорадка, кашель и затрудненное дыхание, или (b) тесный контакт с SARS-CoV‐ 2 пациента.25

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В целом, совокупные исследования показывают, что образцы нижних дыхательных путей, особенно БАЛ, имеют тенденцию давать более высокую диагностическую ценность, чем образцы верхних дыхательных путей у пациентов с пневмонией, и поэтому их следует получать по возможности. Однако отбор проб нижних дыхательных путей сопряжен с большими техническими трудностями и риском воздействия. TA и BAL также неприемлемы в качестве инструментов проверки. Следовательно, отбор проб из верхних дыхательных путей остается весьма актуальным, хотя в современной литературе все чаще подчеркиваются ограничения NS / NPS и OPS и возможные ложноотрицательные результаты.Ложноотрицательный результат позволяет вернуть инфицированного пациента в сообщество для продолжения передачи вируса. С точки зрения общественного здравоохранения, пациенты, у которых есть симптоматика SARS-CoV-2, но изначально отрицательный результат теста, должны пройти повторное тестирование и быть изолированы дома. Для клиницистов критически важно основывать свой диагноз на более чем одном тесте и учитывать восприимчивость пациента к риску, особенно в условиях известного распространения среди населения.

В настоящее время Центры США по контролю и профилактике заболеваний рекомендуют использовать мазки из носоглотки и ротоглотки для сбора образцов для выявления вируса SARS ‐ CoV ‐ 2.26
Хотя эти методы имеют свои ограничения, оба они позволяют быстро расширять масштабы для массового тестирования и выявления, что является частью более широкой стратегии большинства стран по проактивному тестированию, изоляции и отслеживанию инфицированных случаев. Методы отбора проб из нижних дыхательных путей не обладают потенциалом быстрого масштабирования.

Вирус SARS-CoV-2 демонстрирует сродство к рецептору ангиотензинпревращающего фермента 2, который присутствует в тканях слизистой оболочки дыхательных путей, сердца, почек, эндотелия и кишечника.27, 28 Таким образом, существует множество других методов отбора биологических образцов, таких как: но не ограничиваясь этим, был описан сбор образцов крови, мочи и кала.Подробное обсуждение каждого из них выходит за рамки данной статьи. Дальнейшие совокупные исследования могут быть рассмотрены для проверки диагностических возможностей каждого из вышеупомянутых методов.

Банкноты

См. A, Toh ST. Отбор респираторных проб при тяжелом остром респираторном синдроме коронавируса 2: обзор. Голова и шея. 2020; 1–5. 10.1002 / hed.26232
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef]

СПРАВОЧНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

2.
Корман В.М., Ландт О., Кайзер М. и др. Обнаружение нового коронавируса 2019 года (2019 ‐ nCoV) с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени.Евронаблюдение. 2020; 25 (3): 2000045
10.2807 / 1560-7917.ES.2020.25.3.2000045. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3.
Chu DKW, Pan Y, Cheng SMS и др. Молекулярная диагностика нового коронавируса (2019 ‐ nCoV), вызывающего вспышку пневмонии. Clin Chem. 2020; 66 (4): 549-555. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 5.
Чан К.Х., Пун Л.Л., Ченг В.С. и др. Выявление коронавируса SARS у пациентов с подозрением на SARS. J Emerg Infect Dis. 2004; 10 (2): 294-299. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 7.Zou L, Ruan F, Huang M и др. Вирусная нагрузка SARS ‐ CoV ‐ 2 в образцах верхних дыхательных путей инфицированных пациентов. N Engl J Med. 2020; 382: 1177-1179. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 8.
Цянь GQ, Ян Н.Б., Дин Ф. и др. Эпидемиологические и клинические характеристики 91 госпитализированного пациента с COVID ‐ 19 в Чжэцзяне, Китай: ретроспективная серия клинических случаев в нескольких центрах. QJM Int J Med. 2020.
10.1093 / qjmed / hcaa089
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9.
Xie C, Jiang L, Huang G и др.Сравнение различных образцов для обнаружения нового коронавируса 2019 года с помощью тестов амплификации нуклеиновых кислот. Int J Infect Dis. 2020; 93: 264-267. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 10.
Ye B, Fan C, Pan Y и др. Какой метод отбора проб из верхних дыхательных путей следует использовать для диагностики пациента с COVID ‐ 19? (статья на китайском языке). Чжунхуа Эр би Ян Хоу Тоу Цзин Вай Кэ За Чжи. 2020; 55: E003. [PubMed] [Google Scholar] 11.
Йе Г, Ли Й, Лу М. и др. Опыт использования различных стратегий отбора проб из верхних дыхательных путей для выявления COVID ‐ 19.J Hosp Infect. 2020.
10.1016 / j.jhin.2020.03.012
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12.
Аззи Л., Каркано Дж., Джанфагна Ф. и др. Слюна — надежный инструмент для обнаружения SARS ‐ CoV ‐ 2. J Infect. 2020; pii: S0163-4453 (20) 30213–9
10.1016 / j.jinf.2020.04.005
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13.
Сайто М., Адачи Э., Ямаёши С. и др. Промывание горла как безопасная и чувствительная альтернатива мазкам для диагностики COVID ‐ 19: отчет о болезни в Японии. Clin Infect Dis. 2020.10.1093 / cid / ciaa377
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14.
Беннет С., Дэвидсон Р.С., Гансон Р.Н. Сравнение образцов для полоскания горла и мазков из горла для выявления респираторных патогенов. J Virol Methods. 2017; 248: 83-86. [PubMed] [Google Scholar] 16.
Lo IL, Lio CF, Cheong HH и др. Оценка выделения РНК SARS-CoV-2 в клинических образцах и клинических характеристиках 10 пациентов с COVID-19 в Макао. Int J Biol Sci. 2020; 16 (10): 1698-1707. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 17.Пан И, Чжан Д., Ян П., Пун LLM, Ван К. Вирусная нагрузка SARS ‐ CoV ‐ 2 в клинических образцах. Lancet Infect Dis. 2020; 20 (4): 411-412. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 18.
Zuo MZ, Huang YG, Ma WH и др. Рекомендации экспертов по интубации трахеи у тяжелобольных пациентов с новой коронавирусной болезнью 2019. Chin Med Sci J. 2020.
10.24920 / 003724
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 19.
Хуанг Й., Чен С., Янг З. и др. Вирусная нагрузка SARS ‐ CoV ‐ 2 в клинических выборках пациентов в критическом состоянии.Am J Respir Crit Care Med. 2020.
10.1164 / rccm.202003-0572LE
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 20.
Чжоу П, Ян X, Ван X и др. Вспышка пневмонии, связанная с новым коронавирусом, вероятно, происхождения летучих мышей. Природа. 2020; 579: 270-273. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 21.
Yu F, Du L, Ojcius DM, Pan C, Jiang S. Меры по диагностике и лечению инфекций, вызванных новым коронавирусом, ответственным за вспышку пневмонии, возникшую в Ухане, Китай. Микробы заражают. 2020; 22: 74-79.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 23.
Реускен С., Броберг Е.К., Хаагманс Б. и др. Готовность лабораторий и ответные меры на новый коронавирус (2019 ‐ nCoV) в экспертных лабораториях 30 стран ЕС / ЕЭЗ, январь 2020 г. Еврононадзор. 2020; 25 (6): 2000082
10.2807 / 1560-7917.ES.2020.25.6.2000082. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24.
Winichakoon P, Chaiwarith R., Liwsrisakun C, et al. Отрицательные результаты мазков из носоглотки и ротоглотки не исключают COVID ‐ 19. J Clin Microbiol.2020; 58: e00297–20.
10.1128 / JCM.00297-20. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25.
Лю Р., Хань Х., Лю Ф. и др. Положительный уровень выявления инфекции SARS-CoV-2 с помощью ОТ-ПЦР в 4880 случаях в одной больнице в Ухане, Китай, с января по февраль 2020 г. Clin Chim Acta. 2020; 505: 172-175. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 27.
Zhang H, Penninger JM, Li Y, Zhong N, Slutsky AS. Ангиотензин-превращающий фермент 2 (ACE2) как рецептор SARS-CoV-2: молекулярные механизмы и потенциальная терапевтическая мишень.Intensive Care Med. 2020; 46 (4): 586-590. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 28.
Hamming I, Timens W., Bulthuis MLC, Lely AT, Navis GJ, van Goor H. Распределение в тканях белка ACE2, функционального рецептора коронавируса SARS: первый шаг в понимании патогенеза SARS. J Pathol. 2004; 203: 631-663. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

Отбор проб дыхательных путей на тяжелый острый респираторный синдром, коронавирус 2: обзор

Head Neck. 2020 8 мая: 10.1002 / хед.26232.

, MMed (ORL)
1
и, MMed (ORL), FAMS (ORL)
1

Анна См.

1
Отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи,
Больница общего профиля Сингапура,
Сингапур,

Сонг Тар То

1
Отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи,
Больница общего профиля Сингапура,
Сингапур,

1
Отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи,
Больница общего профиля Сингапура,
Сингапур,

Автор, ответственный за переписку. * Переписка
Анна Си, отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи, Сингапурская больница общего профиля, Outram Road, Сингапур 169608.
Электронная почта: [email protected],

Поступила в редакцию 20 апреля 2020 г .; Принята к печати 22 апреля 2020 г. Его можно использовать для неограниченного повторного использования в исследованиях и анализа в любой форме и любыми средствами с указанием первоисточника на время чрезвычайной ситуации в области общественного здравоохранения.

Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Abstract

Новое коронавирусное заболевание 2019 года вызвано тяжелым острым респираторным синдромом коронавирусом 2 (SARS ‐ CoV ‐ 2) и было объявлено пандемией в марте 2020 года. Множество методов взятия проб из дыхательных путей для выявления вируса SARS ‐ CoV ‐ 2 имеют использовались, и в текущей развивающейся ситуации не существует международного консенсуса по рекомендуемому методу отбора респираторных проб для диагностики. Отоларингологи тесно занимаются верхними дыхательными путями, и четкое понимание методов взятия проб из дыхательных путей имеет первостепенное значение.Эта статья призвана предоставить обзор различных методов и их доказательств на сегодняшний день.

Ключевые слова: коронавирус , COVID-19, отбор респираторных проб, ОТ-ПЦР, SARS-CoV-2

1. ВВЕДЕНИЕ

Новое коронавирусное заболевание 2019 г. (COVID-19), вызванное тяжелым острым респираторным синдромом коронавирусом 2 (SARS ‐ CoV ‐ 2) — это развивающаяся пандемия.
1
Описаны различные методы обнаружения. В настоящее время наиболее распространенным методом обнаружения вирусов является отбор проб из дыхательных путей.Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в реальном времени (ОТ-ПЦР), нацеленная на ген E SARS-CoV-2, была разработана на основе протокола Кормана и др., И этот анализ был официально выпущен Всемирной организацией здравоохранения.
2
Положительные результаты могут быть подтверждены последующим анализом ОТ-ПЦР в реальном времени, направленным на ген ORF1b-NSP-14, на основе протокола Chu et al.
3
В этой статье мы представляем обзор множества методов взятия проб из дыхательных путей на SARS ‐ CoV ‐ 2, которые были опубликованы на сегодняшний день.Эти методы можно разделить на две основные категории: отбор проб верхних дыхательных путей (носовой, носоглоточный, ротоглоточный, лингвальный и полоскание горла) и отбор проб нижних дыхательных путей (мокрота, трахея и бронхоальвеолярный отбор).

2. ОТБОР ВЕРХНЕЙ ДЫХАТЕЛЬНОЙ ПРОБЫ

2.1. Образцы из носа и носоглотки

Назальный мазок (NS) относится к взятию флокированного мазка из передней носовой полости, которая анатомически ограничена ноздрями спереди и переходом твердое-мягкое небо сзади.В отличие от этого, мазок из носоглотки (NPS) включает введение флокированного тампона глубоко в носоглотку (за переходом между твердым и мягким небом) для достижения прямого контакта с задней стенкой слизистой оболочки носоглотки. Невозможно получить чистый носоглоточный образец с помощью флокированного тампона, поскольку его введение требует контакта с носовой полостью на пути внутрь. Однако вполне возможно получить чистый NS, избегая глубокого введения флокированного тампона. палка.Средняя длина передней полости носа у здорового взрослого человека составляет от 5 до 7 см.
4
Обзор английской литературы на PubMed подтвердил, что не существует опубликованного сравнительного исследования, посвященного выходу вирусной нагрузки SARS-CoV-2 между образцами мазков из носа и носоглотки. Исследование такого рода также не имеет клинической значимости и не было бы логически предпринято.

Во время вспышки атипичной пневмонии в 2003 г. Chan et al. Описали альтернативный метод взятия пробы из носоглотки, известный как «назофарингеальный аспират» (NPA).5
Этот метод позволяет получить чистый носоглоточный образец без загрязнения передней носовой полости. Вместо флокированного тампона в носоглотку вводится отсасывающий катетер, после чего активируется отсасывание, всасывающее носоглоточную слизь в ловушку. Чан и др. Сравнили образцы NPA с образцами «мазков из носа и горла» и обнаружили несколько лучшую эффективность NPA в обнаружении вирусной РНК SARS у подтвержденных пациентов с SARS (NPA 29,6% против NS / OPS 28,3%, значение P не предоставлено) .5
Однако следует отметить, что подробностей процедуры «мазок из носа и зева» не было. Неясно, относится ли «назальный» компонент к отбору проб из передней носовой полости (NS) или к комбинированному отбору проб NS / NPS. В отличие от результатов Чана и др., Другое исследование, проведенное в Гонконге во время вспышки атипичной пневмонии в 2003 году, показало, что «объединенные мазки из горла и носа» обеспечивают более высокую диагностическую ценность по сравнению с образцами NPA. Далее было подчеркнуто, что первое имеет дополнительное преимущество в виде меньшего риска образования аэрозолей, поскольку не используется всасывание.6

В условиях нынешней пандемии COVID-19 литература, посвященная NPA как форме респираторного отбора проб для выделения вируса SARS-CoV-2, отсутствует. Большинство исследований используют мазки в качестве основного метода отбора проб из верхних дыхательных путей. Были опубликованы сравнения комбинированного NS / NPS и мазка из ротоглотки (OPS). В исследовании Zou et al. 72 образца NS / NPS, взятых из средней носовой раковины и носоглотки в разные дни болезни, были проанализированы у 18 пациентов с COVID-19. Более высокие вирусные нагрузки (порог цикла [ C
t ] значений) были обнаружены в этих образцах по сравнению с 72 образцами OPS в той же группе пациентов.7
По мнению авторов, по сравнению с NS, NPS и OPS, метод NPA требует много времени, ресурсов и не подходит для массового тестирования в ситуации пандемии.

2.2. Мазок из ротоглотки

OPS также известен как «мазок из зева». Это относится к отбору образцов одного или нескольких из четырех участков ротоглотки (миндалины, мягкое небо, основание языка и задняя стенка глотки). Так же, как носоглотка спарена кзади от носовой полости, ротоглотка расположена позади ротовой полости и начинается на переходе между твердым и мягким небом.Наиболее частым местом-мишенью ОПС является задняя стенка глотки, поскольку она считается анатомическим континуумом носоглотки. Мазки из горла или OPS обычно используются для взятия проб из дыхательных путей во время текущей вспышки COVID ‐ 19. В раннем эпохальном исследовании, подробно описывающем клинические характеристики пациентов с COVID-19 в Ухане, OPS использовался как единственный метод отбора респираторных проб.
7
В крупнейшем на сегодняшний день исследовании китайской когорты COVID-19, не связанной с Уханьем, в Чжэцзяне, OPS также использовался в качестве единственного метода выборки.8
Однако сообщалось о низкой отрицательной прогностической ценности OPS. Се и др. Сообщили, что только 9 из 19 (47%) ОПС у серопозитивных пациентов с COVID-19 были положительными, что обращает внимание на важность повторного отбора образцов из нескольких мест, включая нижние дыхательные пути, для повышения диагностической эффективности.
9

Методы NS, NPS, NPA и OPS сравнивались в китайском исследовании Ye et al., В котором анализировалась литература по отбору респираторных проб SARS, MERS и h2N1, и был сделан вывод, что среди всех методов отбора проб из верхних дыхательных путей NPA имеет более высокий процент положительных результатов. в течение 2 недель с момента появления симптомов, в то время как комбинированные NS + OPS были наименее вредными для медицинского персонала во время отбора проб.10
Остается оценить, можно ли экстраполировать вышеуказанные результаты на SARS ‐ CoV ‐ 2.

2.3. Лингвальный мазок

Лингвальный мазок (LS) или мазок из полости рта (OCS) для обнаружения SARS ‐ CoV ‐ 2 включает мазок с передних двух третей языка или ротового языка. Исследование в Ухане сравнило LS с OPS и обнаружило, что у 91 пациента частота положительных результатов OPS была выше, чем у LS. Однако авторы отметили, что это различие могло быть связано с тем, что одна опытная медсестра собрала все образцы.11

Аззи и др. Сообщили об использовании OCS и «сбора оральной пипетки слюны» для обнаружения вирусов. В когорте из 25 пациентов с COVID-19 от тяжелой до очень тяжелой (степень тяжести не указана, но все пациенты находились на искусственной вентиляции легких в отделении интенсивной терапии) сообщалось, что SARS-CoV-2 был обнаружен во всех мазках слюны 25 пациентов, при этом разные C
t значений (диапазон 18,12-32,23, среднее значение 27,16 ± 3,07). У всех пациентов на момент постановки диагноза ранее имелись положительные NPS.12
Таким образом, авторы пришли к выводу, что сбор слюны из ротовой полости является надежным методом обнаружения вирусов. Однако следует отметить, что эти результаты были получены от пациентов в критическом состоянии, у которых характер выделения вируса может отличаться от подозрительных случаев. Следовательно, использование мазков из слюны или LS может не воспроизводиться в сценариях скрининга. Хотя LS или OCS просты и, по-видимому, вызывают меньший дискомфорт, их использование в текущей пандемии вряд ли будет распространенным из-за необходимости максимизировать взятие проб и сбор выделений для точной диагностики инфекции.

2.4. Промывание полосканием

Риск воздействия на медицинских работников является неотъемлемым при взятии флокированных мазков, поскольку эти методы могут спровоцировать чихание, кашель и рвоту. Сайто и др. Сообщили об использовании полоскания для полоскания в качестве безопасной и чувствительной альтернативы взятию мазков. Промывание горла с использованием 10 мл физиологического раствора и OPS сравнивали у пациента с COVID-19 на 8 и 9 дни болезни. Примечательно, что более высокие количества вирусного генома были замечены в образцах промывания для полоскания.
13
Однако это был единственный случай.Несмотря на вышесказанное, ранее сообщалось, что в отношении респираторных патогенов, таких как грипп A, грипп B и респираторно-синцитиальный вирус, полоскание горла более чувствительно, чем мазки из горла.
14
В нынешней вспышке мало доказательств чувствительности и специфичности полоскания для выявления вирусов.

3. ОТБОР НИЖНЕЙ ДЫХАТЕЛЬНОЙ ПРОБЫ

3.1. Сбор мокроты

Сбор мокроты может производиться во время произвольного кашля или непроизвольной индукции.То и др. Выполнили сбор мокроты, заставляя пациентов откашляться в стерильный контейнер, и продемонстрировали последовательное определение уровней вирусной РНК в собранных образцах.
15
В другом ограниченном исследовании 10 пациентов с COVID-19 Ло и др. Сообщили, что РНК SARS-CoV-2 была обнаружена в 90% образцов НПВ, но ложно отсутствовала в 10% (один пациент).
16
В конечном итоге этому пациенту был поставлен диагноз после обнаружения вируса в собранной мокроте после одного отрицательного и одного неубедительного результата NPS (неубедительный результат был определен как C
т — номинал 36-38).Превосходство мокроты для обнаружения вируса SARS-CoV-2 было также подтверждено Пан и соавторами, которые продемонстрировали, что образцы мокроты обычно показывают более высокую вирусную нагрузку, чем мазки из зева.
17

3.2. Трахеальный аспират

Трахеальный аспират (ТА) может быть получен путем аспирации из постоянной эндотрахеальной трубки у пациентов с механической вентиляцией легких или путем прямого аспирации трахеи у пациентов с трахеотомией. Китайское общество анестезиологов опубликовало свои рекомендации по интубации трахеи у тяжелобольных пациентов с COVID-19, отметив, что это процедура с образованием аэрозолей, и ее следует избегать, за исключением случаев крайней необходимости.18
В то же время сбор ТА для обнаружения вирусов представляет значительный риск для медицинского работника. Хуанг и др. Сообщили о сравнении вирусной нагрузки в образцах верхних дыхательных путей и эндотрахеальных аспиратах в когорте из 16 интубированных пациентов с COVID-19 и обнаружили, что у последних значительно более высокие значения вирусной РНК по сравнению с носовыми и ОПС.
19
Однако этот метод респираторного отбора проб не имеет отношения к сценариям амбулаторного скрининга, но может иметь значение при скрининге на COVID-19 пациентов на ИВЛ в отделениях интенсивной терапии и для серийного мониторинга вирусной нагрузки интубированных подтвержденных случаев.

3.3. Бронхоальвеолярный лаваж

Самая ранняя идентификация генома SARS-CoV-2 была проведена с помощью образцов бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) в Уханьском институте вирусологии.
20
БАЛ — это форма отбора проб из нижних дыхательных путей, при которой бронхоскоп вводится в трахею и бронхи, вводится рассчитанное количество жидкости и затем собирается для исследования. С декабря 2019 года были опубликованы исследования из Китая и Европы по использованию образцов БАЛ для обнаружения вируса SARS ‐ CoV ‐ 2.21, 22, 23 Накапливающиеся данные свидетельствуют о том, что БАЛ может быть полезен при обнаружении вирусов в случаях ложноотрицательных NPS и / или OPS.
24
В исследовании 4880 пациентов с подозрением на COVID-19 в Ухане Лю и др. Обнаружили, что БАЛ показал самый высокий положительный показатель при обнаружении SARS-CoV-2, и сообщили, что NS и OPS показали низкий комбинированный положительный показатель 38,25% при сборе мокроты. показал положительную оценку 49,12%. Определение случая пациента с подозрением на COVID-19 в исследовании было основано на следующем: (a) типичные симптомы респираторной инфекции, такие как лихорадка, кашель и затрудненное дыхание, или (b) тесный контакт с SARS-CoV‐ 2 пациента.25

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В целом, совокупные исследования показывают, что образцы нижних дыхательных путей, особенно БАЛ, имеют тенденцию давать более высокую диагностическую ценность, чем образцы верхних дыхательных путей у пациентов с пневмонией, и поэтому их следует получать по возможности. Однако отбор проб нижних дыхательных путей сопряжен с большими техническими трудностями и риском воздействия. TA и BAL также неприемлемы в качестве инструментов проверки. Следовательно, отбор проб из верхних дыхательных путей остается весьма актуальным, хотя в современной литературе все чаще подчеркиваются ограничения NS / NPS и OPS и возможные ложноотрицательные результаты.Ложноотрицательный результат позволяет вернуть инфицированного пациента в сообщество для продолжения передачи вируса. С точки зрения общественного здравоохранения, пациенты, у которых есть симптоматика SARS-CoV-2, но изначально отрицательный результат теста, должны пройти повторное тестирование и быть изолированы дома. Для клиницистов критически важно основывать свой диагноз на более чем одном тесте и учитывать восприимчивость пациента к риску, особенно в условиях известного распространения среди населения.

В настоящее время Центры США по контролю и профилактике заболеваний рекомендуют использовать мазки из носоглотки и ротоглотки для сбора образцов для выявления вируса SARS ‐ CoV ‐ 2.26
Хотя эти методы имеют свои ограничения, оба они позволяют быстро расширять масштабы для массового тестирования и выявления, что является частью более широкой стратегии большинства стран по проактивному тестированию, изоляции и отслеживанию инфицированных случаев. Методы отбора проб из нижних дыхательных путей не обладают потенциалом быстрого масштабирования.

Вирус SARS-CoV-2 демонстрирует сродство к рецептору ангиотензинпревращающего фермента 2, который присутствует в тканях слизистой оболочки дыхательных путей, сердца, почек, эндотелия и кишечника.27, 28 Таким образом, существует множество других методов отбора биологических образцов, таких как: но не ограничиваясь этим, был описан сбор образцов крови, мочи и кала.Подробное обсуждение каждого из них выходит за рамки данной статьи. Дальнейшие совокупные исследования могут быть рассмотрены для проверки диагностических возможностей каждого из вышеупомянутых методов.

Банкноты

См. A, Toh ST. Отбор респираторных проб при тяжелом остром респираторном синдроме коронавируса 2: обзор. Голова и шея. 2020; 1–5. 10.1002 / hed.26232
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef]

СПРАВОЧНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

2.
Корман В.М., Ландт О., Кайзер М. и др. Обнаружение нового коронавируса 2019 года (2019 ‐ nCoV) с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени.Евронаблюдение. 2020; 25 (3): 2000045
10.2807 / 1560-7917.ES.2020.25.3.2000045. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3.
Chu DKW, Pan Y, Cheng SMS и др. Молекулярная диагностика нового коронавируса (2019 ‐ nCoV), вызывающего вспышку пневмонии. Clin Chem. 2020; 66 (4): 549-555. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 5.
Чан К.Х., Пун Л.Л., Ченг В.С. и др. Выявление коронавируса SARS у пациентов с подозрением на SARS. J Emerg Infect Dis. 2004; 10 (2): 294-299. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 7.Zou L, Ruan F, Huang M и др. Вирусная нагрузка SARS ‐ CoV ‐ 2 в образцах верхних дыхательных путей инфицированных пациентов. N Engl J Med. 2020; 382: 1177-1179. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 8.
Цянь GQ, Ян Н.Б., Дин Ф. и др. Эпидемиологические и клинические характеристики 91 госпитализированного пациента с COVID ‐ 19 в Чжэцзяне, Китай: ретроспективная серия клинических случаев в нескольких центрах. QJM Int J Med. 2020.
10.1093 / qjmed / hcaa089
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9.
Xie C, Jiang L, Huang G и др.Сравнение различных образцов для обнаружения нового коронавируса 2019 года с помощью тестов амплификации нуклеиновых кислот. Int J Infect Dis. 2020; 93: 264-267. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 10.
Ye B, Fan C, Pan Y и др. Какой метод отбора проб из верхних дыхательных путей следует использовать для диагностики пациента с COVID ‐ 19? (статья на китайском языке). Чжунхуа Эр би Ян Хоу Тоу Цзин Вай Кэ За Чжи. 2020; 55: E003. [PubMed] [Google Scholar] 11.
Йе Г, Ли Й, Лу М. и др. Опыт использования различных стратегий отбора проб из верхних дыхательных путей для выявления COVID ‐ 19.J Hosp Infect. 2020.
10.1016 / j.jhin.2020.03.012
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12.
Аззи Л., Каркано Дж., Джанфагна Ф. и др. Слюна — надежный инструмент для обнаружения SARS ‐ CoV ‐ 2. J Infect. 2020; pii: S0163-4453 (20) 30213–9
10.1016 / j.jinf.2020.04.005
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13.
Сайто М., Адачи Э., Ямаёши С. и др. Промывание горла как безопасная и чувствительная альтернатива мазкам для диагностики COVID ‐ 19: отчет о болезни в Японии. Clin Infect Dis. 2020.10.1093 / cid / ciaa377
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14.
Беннет С., Дэвидсон Р.С., Гансон Р.Н. Сравнение образцов для полоскания горла и мазков из горла для выявления респираторных патогенов. J Virol Methods. 2017; 248: 83-86. [PubMed] [Google Scholar] 16.
Lo IL, Lio CF, Cheong HH и др. Оценка выделения РНК SARS-CoV-2 в клинических образцах и клинических характеристиках 10 пациентов с COVID-19 в Макао. Int J Biol Sci. 2020; 16 (10): 1698-1707. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 17.Пан И, Чжан Д., Ян П., Пун LLM, Ван К. Вирусная нагрузка SARS ‐ CoV ‐ 2 в клинических образцах. Lancet Infect Dis. 2020; 20 (4): 411-412. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 18.
Zuo MZ, Huang YG, Ma WH и др. Рекомендации экспертов по интубации трахеи у тяжелобольных пациентов с новой коронавирусной болезнью 2019. Chin Med Sci J. 2020.
10.24920 / 003724
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 19.
Хуанг Й., Чен С., Янг З. и др. Вирусная нагрузка SARS ‐ CoV ‐ 2 в клинических выборках пациентов в критическом состоянии.Am J Respir Crit Care Med. 2020.
10.1164 / rccm.202003-0572LE
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 20.
Чжоу П, Ян X, Ван X и др. Вспышка пневмонии, связанная с новым коронавирусом, вероятно, происхождения летучих мышей. Природа. 2020; 579: 270-273. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 21.
Yu F, Du L, Ojcius DM, Pan C, Jiang S. Меры по диагностике и лечению инфекций, вызванных новым коронавирусом, ответственным за вспышку пневмонии, возникшую в Ухане, Китай. Микробы заражают. 2020; 22: 74-79.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 23.
Реускен С., Броберг Е.К., Хаагманс Б. и др. Готовность лабораторий и ответные меры на новый коронавирус (2019 ‐ nCoV) в экспертных лабораториях 30 стран ЕС / ЕЭЗ, январь 2020 г. Еврононадзор. 2020; 25 (6): 2000082
10.2807 / 1560-7917.ES.2020.25.6.2000082. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24.
Winichakoon P, Chaiwarith R., Liwsrisakun C, et al. Отрицательные результаты мазков из носоглотки и ротоглотки не исключают COVID ‐ 19. J Clin Microbiol.2020; 58: e00297–20.
10.1128 / JCM.00297-20. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25.
Лю Р., Хань Х., Лю Ф. и др. Положительный уровень выявления инфекции SARS-CoV-2 с помощью ОТ-ПЦР в 4880 случаях в одной больнице в Ухане, Китай, с января по февраль 2020 г. Clin Chim Acta. 2020; 505: 172-175. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 27.
Zhang H, Penninger JM, Li Y, Zhong N, Slutsky AS. Ангиотензин-превращающий фермент 2 (ACE2) как рецептор SARS-CoV-2: молекулярные механизмы и потенциальная терапевтическая мишень.Intensive Care Med. 2020; 46 (4): 586-590. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 28.
Hamming I, Timens W., Bulthuis MLC, Lely AT, Navis GJ, van Goor H. Распределение в тканях белка ACE2, функционального рецептора коронавируса SARS: первый шаг в понимании патогенеза SARS. J Pathol. 2004; 203: 631-663. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

Отбор проб дыхательных путей на тяжелый острый респираторный синдром, коронавирус 2: обзор

Head Neck. 2020 8 мая: 10.1002 / хед.26232.

, MMed (ORL)
1
и, MMed (ORL), FAMS (ORL)
1

Анна См.

1
Отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи,
Больница общего профиля Сингапура,
Сингапур,

Сонг Тар То

1
Отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи,
Больница общего профиля Сингапура,
Сингапур,

1
Отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи,
Больница общего профиля Сингапура,
Сингапур,

Автор, ответственный за переписку. * Переписка
Анна Си, отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи, Сингапурская больница общего профиля, Outram Road, Сингапур 169608.
Электронная почта: [email protected],

Поступила в редакцию 20 апреля 2020 г .; Принята к печати 22 апреля 2020 г. Его можно использовать для неограниченного повторного использования в исследованиях и анализа в любой форме и любыми средствами с указанием первоисточника на время чрезвычайной ситуации в области общественного здравоохранения.

Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Abstract

Новое коронавирусное заболевание 2019 года вызвано тяжелым острым респираторным синдромом коронавирусом 2 (SARS ‐ CoV ‐ 2) и было объявлено пандемией в марте 2020 года. Множество методов взятия проб из дыхательных путей для выявления вируса SARS ‐ CoV ‐ 2 имеют использовались, и в текущей развивающейся ситуации не существует международного консенсуса по рекомендуемому методу отбора респираторных проб для диагностики. Отоларингологи тесно занимаются верхними дыхательными путями, и четкое понимание методов взятия проб из дыхательных путей имеет первостепенное значение.Эта статья призвана предоставить обзор различных методов и их доказательств на сегодняшний день.

Ключевые слова: коронавирус , COVID-19, отбор респираторных проб, ОТ-ПЦР, SARS-CoV-2

1. ВВЕДЕНИЕ

Новое коронавирусное заболевание 2019 г. (COVID-19), вызванное тяжелым острым респираторным синдромом коронавирусом 2 (SARS ‐ CoV ‐ 2) — это развивающаяся пандемия.
1
Описаны различные методы обнаружения. В настоящее время наиболее распространенным методом обнаружения вирусов является отбор проб из дыхательных путей.Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в реальном времени (ОТ-ПЦР), нацеленная на ген E SARS-CoV-2, была разработана на основе протокола Кормана и др., И этот анализ был официально выпущен Всемирной организацией здравоохранения.
2
Положительные результаты могут быть подтверждены последующим анализом ОТ-ПЦР в реальном времени, направленным на ген ORF1b-NSP-14, на основе протокола Chu et al.
3
В этой статье мы представляем обзор множества методов взятия проб из дыхательных путей на SARS ‐ CoV ‐ 2, которые были опубликованы на сегодняшний день.Эти методы можно разделить на две основные категории: отбор проб верхних дыхательных путей (носовой, носоглоточный, ротоглоточный, лингвальный и полоскание горла) и отбор проб нижних дыхательных путей (мокрота, трахея и бронхоальвеолярный отбор).

2. ОТБОР ВЕРХНЕЙ ДЫХАТЕЛЬНОЙ ПРОБЫ

2.1. Образцы из носа и носоглотки

Назальный мазок (NS) относится к взятию флокированного мазка из передней носовой полости, которая анатомически ограничена ноздрями спереди и переходом твердое-мягкое небо сзади.В отличие от этого, мазок из носоглотки (NPS) включает введение флокированного тампона глубоко в носоглотку (за переходом между твердым и мягким небом) для достижения прямого контакта с задней стенкой слизистой оболочки носоглотки. Невозможно получить чистый носоглоточный образец с помощью флокированного тампона, поскольку его введение требует контакта с носовой полостью на пути внутрь. Однако вполне возможно получить чистый NS, избегая глубокого введения флокированного тампона. палка.Средняя длина передней полости носа у здорового взрослого человека составляет от 5 до 7 см.
4
Обзор английской литературы на PubMed подтвердил, что не существует опубликованного сравнительного исследования, посвященного выходу вирусной нагрузки SARS-CoV-2 между образцами мазков из носа и носоглотки. Исследование такого рода также не имеет клинической значимости и не было бы логически предпринято.

Во время вспышки атипичной пневмонии в 2003 г. Chan et al. Описали альтернативный метод взятия пробы из носоглотки, известный как «назофарингеальный аспират» (NPA).5
Этот метод позволяет получить чистый носоглоточный образец без загрязнения передней носовой полости. Вместо флокированного тампона в носоглотку вводится отсасывающий катетер, после чего активируется отсасывание, всасывающее носоглоточную слизь в ловушку. Чан и др. Сравнили образцы NPA с образцами «мазков из носа и горла» и обнаружили несколько лучшую эффективность NPA в обнаружении вирусной РНК SARS у подтвержденных пациентов с SARS (NPA 29,6% против NS / OPS 28,3%, значение P не предоставлено) .5
Однако следует отметить, что подробностей процедуры «мазок из носа и зева» не было. Неясно, относится ли «назальный» компонент к отбору проб из передней носовой полости (NS) или к комбинированному отбору проб NS / NPS. В отличие от результатов Чана и др., Другое исследование, проведенное в Гонконге во время вспышки атипичной пневмонии в 2003 году, показало, что «объединенные мазки из горла и носа» обеспечивают более высокую диагностическую ценность по сравнению с образцами NPA. Далее было подчеркнуто, что первое имеет дополнительное преимущество в виде меньшего риска образования аэрозолей, поскольку не используется всасывание.6

В условиях нынешней пандемии COVID-19 литература, посвященная NPA как форме респираторного отбора проб для выделения вируса SARS-CoV-2, отсутствует. Большинство исследований используют мазки в качестве основного метода отбора проб из верхних дыхательных путей. Были опубликованы сравнения комбинированного NS / NPS и мазка из ротоглотки (OPS). В исследовании Zou et al. 72 образца NS / NPS, взятых из средней носовой раковины и носоглотки в разные дни болезни, были проанализированы у 18 пациентов с COVID-19. Более высокие вирусные нагрузки (порог цикла [ C
t ] значений) были обнаружены в этих образцах по сравнению с 72 образцами OPS в той же группе пациентов.7
По мнению авторов, по сравнению с NS, NPS и OPS, метод NPA требует много времени, ресурсов и не подходит для массового тестирования в ситуации пандемии.

2.2. Мазок из ротоглотки

OPS также известен как «мазок из зева». Это относится к отбору образцов одного или нескольких из четырех участков ротоглотки (миндалины, мягкое небо, основание языка и задняя стенка глотки). Так же, как носоглотка спарена кзади от носовой полости, ротоглотка расположена позади ротовой полости и начинается на переходе между твердым и мягким небом.Наиболее частым местом-мишенью ОПС является задняя стенка глотки, поскольку она считается анатомическим континуумом носоглотки. Мазки из горла или OPS обычно используются для взятия проб из дыхательных путей во время текущей вспышки COVID ‐ 19. В раннем эпохальном исследовании, подробно описывающем клинические характеристики пациентов с COVID-19 в Ухане, OPS использовался как единственный метод отбора респираторных проб.
7
В крупнейшем на сегодняшний день исследовании китайской когорты COVID-19, не связанной с Уханьем, в Чжэцзяне, OPS также использовался в качестве единственного метода выборки.8
Однако сообщалось о низкой отрицательной прогностической ценности OPS. Се и др. Сообщили, что только 9 из 19 (47%) ОПС у серопозитивных пациентов с COVID-19 были положительными, что обращает внимание на важность повторного отбора образцов из нескольких мест, включая нижние дыхательные пути, для повышения диагностической эффективности.
9

Методы NS, NPS, NPA и OPS сравнивались в китайском исследовании Ye et al., В котором анализировалась литература по отбору респираторных проб SARS, MERS и h2N1, и был сделан вывод, что среди всех методов отбора проб из верхних дыхательных путей NPA имеет более высокий процент положительных результатов. в течение 2 недель с момента появления симптомов, в то время как комбинированные NS + OPS были наименее вредными для медицинского персонала во время отбора проб.10
Остается оценить, можно ли экстраполировать вышеуказанные результаты на SARS ‐ CoV ‐ 2.

2.3. Лингвальный мазок

Лингвальный мазок (LS) или мазок из полости рта (OCS) для обнаружения SARS ‐ CoV ‐ 2 включает мазок с передних двух третей языка или ротового языка. Исследование в Ухане сравнило LS с OPS и обнаружило, что у 91 пациента частота положительных результатов OPS была выше, чем у LS. Однако авторы отметили, что это различие могло быть связано с тем, что одна опытная медсестра собрала все образцы.11

Аззи и др. Сообщили об использовании OCS и «сбора оральной пипетки слюны» для обнаружения вирусов. В когорте из 25 пациентов с COVID-19 от тяжелой до очень тяжелой (степень тяжести не указана, но все пациенты находились на искусственной вентиляции легких в отделении интенсивной терапии) сообщалось, что SARS-CoV-2 был обнаружен во всех мазках слюны 25 пациентов, при этом разные C
t значений (диапазон 18,12-32,23, среднее значение 27,16 ± 3,07). У всех пациентов на момент постановки диагноза ранее имелись положительные NPS.12
Таким образом, авторы пришли к выводу, что сбор слюны из ротовой полости является надежным методом обнаружения вирусов. Однако следует отметить, что эти результаты были получены от пациентов в критическом состоянии, у которых характер выделения вируса может отличаться от подозрительных случаев. Следовательно, использование мазков из слюны или LS может не воспроизводиться в сценариях скрининга. Хотя LS или OCS просты и, по-видимому, вызывают меньший дискомфорт, их использование в текущей пандемии вряд ли будет распространенным из-за необходимости максимизировать взятие проб и сбор выделений для точной диагностики инфекции.

2.4. Промывание полосканием

Риск воздействия на медицинских работников является неотъемлемым при взятии флокированных мазков, поскольку эти методы могут спровоцировать чихание, кашель и рвоту. Сайто и др. Сообщили об использовании полоскания для полоскания в качестве безопасной и чувствительной альтернативы взятию мазков. Промывание горла с использованием 10 мл физиологического раствора и OPS сравнивали у пациента с COVID-19 на 8 и 9 дни болезни. Примечательно, что более высокие количества вирусного генома были замечены в образцах промывания для полоскания.
13
Однако это был единственный случай.Несмотря на вышесказанное, ранее сообщалось, что в отношении респираторных патогенов, таких как грипп A, грипп B и респираторно-синцитиальный вирус, полоскание горла более чувствительно, чем мазки из горла.
14
В нынешней вспышке мало доказательств чувствительности и специфичности полоскания для выявления вирусов.

3. ОТБОР НИЖНЕЙ ДЫХАТЕЛЬНОЙ ПРОБЫ

3.1. Сбор мокроты

Сбор мокроты может производиться во время произвольного кашля или непроизвольной индукции.То и др. Выполнили сбор мокроты, заставляя пациентов откашляться в стерильный контейнер, и продемонстрировали последовательное определение уровней вирусной РНК в собранных образцах.
15
В другом ограниченном исследовании 10 пациентов с COVID-19 Ло и др. Сообщили, что РНК SARS-CoV-2 была обнаружена в 90% образцов НПВ, но ложно отсутствовала в 10% (один пациент).
16
В конечном итоге этому пациенту был поставлен диагноз после обнаружения вируса в собранной мокроте после одного отрицательного и одного неубедительного результата NPS (неубедительный результат был определен как C
т — номинал 36-38).Превосходство мокроты для обнаружения вируса SARS-CoV-2 было также подтверждено Пан и соавторами, которые продемонстрировали, что образцы мокроты обычно показывают более высокую вирусную нагрузку, чем мазки из зева.
17

3.2. Трахеальный аспират

Трахеальный аспират (ТА) может быть получен путем аспирации из постоянной эндотрахеальной трубки у пациентов с механической вентиляцией легких или путем прямого аспирации трахеи у пациентов с трахеотомией. Китайское общество анестезиологов опубликовало свои рекомендации по интубации трахеи у тяжелобольных пациентов с COVID-19, отметив, что это процедура с образованием аэрозолей, и ее следует избегать, за исключением случаев крайней необходимости.18
В то же время сбор ТА для обнаружения вирусов представляет значительный риск для медицинского работника. Хуанг и др. Сообщили о сравнении вирусной нагрузки в образцах верхних дыхательных путей и эндотрахеальных аспиратах в когорте из 16 интубированных пациентов с COVID-19 и обнаружили, что у последних значительно более высокие значения вирусной РНК по сравнению с носовыми и ОПС.
19
Однако этот метод респираторного отбора проб не имеет отношения к сценариям амбулаторного скрининга, но может иметь значение при скрининге на COVID-19 пациентов на ИВЛ в отделениях интенсивной терапии и для серийного мониторинга вирусной нагрузки интубированных подтвержденных случаев.

3.3. Бронхоальвеолярный лаваж

Самая ранняя идентификация генома SARS-CoV-2 была проведена с помощью образцов бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) в Уханьском институте вирусологии.
20
БАЛ — это форма отбора проб из нижних дыхательных путей, при которой бронхоскоп вводится в трахею и бронхи, вводится рассчитанное количество жидкости и затем собирается для исследования. С декабря 2019 года были опубликованы исследования из Китая и Европы по использованию образцов БАЛ для обнаружения вируса SARS ‐ CoV ‐ 2.21, 22, 23 Накапливающиеся данные свидетельствуют о том, что БАЛ может быть полезен при обнаружении вирусов в случаях ложноотрицательных NPS и / или OPS.
24
В исследовании 4880 пациентов с подозрением на COVID-19 в Ухане Лю и др. Обнаружили, что БАЛ показал самый высокий положительный показатель при обнаружении SARS-CoV-2, и сообщили, что NS и OPS показали низкий комбинированный положительный показатель 38,25% при сборе мокроты. показал положительную оценку 49,12%. Определение случая пациента с подозрением на COVID-19 в исследовании было основано на следующем: (a) типичные симптомы респираторной инфекции, такие как лихорадка, кашель и затрудненное дыхание, или (b) тесный контакт с SARS-CoV‐ 2 пациента.25

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В целом, совокупные исследования показывают, что образцы нижних дыхательных путей, особенно БАЛ, имеют тенденцию давать более высокую диагностическую ценность, чем образцы верхних дыхательных путей у пациентов с пневмонией, и поэтому их следует получать по возможности. Однако отбор проб нижних дыхательных путей сопряжен с большими техническими трудностями и риском воздействия. TA и BAL также неприемлемы в качестве инструментов проверки. Следовательно, отбор проб из верхних дыхательных путей остается весьма актуальным, хотя в современной литературе все чаще подчеркиваются ограничения NS / NPS и OPS и возможные ложноотрицательные результаты.Ложноотрицательный результат позволяет вернуть инфицированного пациента в сообщество для продолжения передачи вируса. С точки зрения общественного здравоохранения, пациенты, у которых есть симптоматика SARS-CoV-2, но изначально отрицательный результат теста, должны пройти повторное тестирование и быть изолированы дома. Для клиницистов критически важно основывать свой диагноз на более чем одном тесте и учитывать восприимчивость пациента к риску, особенно в условиях известного распространения среди населения.

В настоящее время Центры США по контролю и профилактике заболеваний рекомендуют использовать мазки из носоглотки и ротоглотки для сбора образцов для выявления вируса SARS ‐ CoV ‐ 2.26
Хотя эти методы имеют свои ограничения, оба они позволяют быстро расширять масштабы для массового тестирования и выявления, что является частью более широкой стратегии большинства стран по проактивному тестированию, изоляции и отслеживанию инфицированных случаев. Методы отбора проб из нижних дыхательных путей не обладают потенциалом быстрого масштабирования.

Вирус SARS-CoV-2 демонстрирует сродство к рецептору ангиотензинпревращающего фермента 2, который присутствует в тканях слизистой оболочки дыхательных путей, сердца, почек, эндотелия и кишечника.27, 28 Таким образом, существует множество других методов отбора биологических образцов, таких как: но не ограничиваясь этим, был описан сбор образцов крови, мочи и кала.Подробное обсуждение каждого из них выходит за рамки данной статьи. Дальнейшие совокупные исследования могут быть рассмотрены для проверки диагностических возможностей каждого из вышеупомянутых методов.

Банкноты

См. A, Toh ST. Отбор респираторных проб при тяжелом остром респираторном синдроме коронавируса 2: обзор. Голова и шея. 2020; 1–5. 10.1002 / hed.26232
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef]

СПРАВОЧНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

2.
Корман В.М., Ландт О., Кайзер М. и др. Обнаружение нового коронавируса 2019 года (2019 ‐ nCoV) с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени.Евронаблюдение. 2020; 25 (3): 2000045
10.2807 / 1560-7917.ES.2020.25.3.2000045. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3.
Chu DKW, Pan Y, Cheng SMS и др. Молекулярная диагностика нового коронавируса (2019 ‐ nCoV), вызывающего вспышку пневмонии. Clin Chem. 2020; 66 (4): 549-555. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 5.
Чан К.Х., Пун Л.Л., Ченг В.С. и др. Выявление коронавируса SARS у пациентов с подозрением на SARS. J Emerg Infect Dis. 2004; 10 (2): 294-299. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 7.Zou L, Ruan F, Huang M и др. Вирусная нагрузка SARS ‐ CoV ‐ 2 в образцах верхних дыхательных путей инфицированных пациентов. N Engl J Med. 2020; 382: 1177-1179. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 8.
Цянь GQ, Ян Н.Б., Дин Ф. и др. Эпидемиологические и клинические характеристики 91 госпитализированного пациента с COVID ‐ 19 в Чжэцзяне, Китай: ретроспективная серия клинических случаев в нескольких центрах. QJM Int J Med. 2020.
10.1093 / qjmed / hcaa089
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9.
Xie C, Jiang L, Huang G и др.Сравнение различных образцов для обнаружения нового коронавируса 2019 года с помощью тестов амплификации нуклеиновых кислот. Int J Infect Dis. 2020; 93: 264-267. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 10.
Ye B, Fan C, Pan Y и др. Какой метод отбора проб из верхних дыхательных путей следует использовать для диагностики пациента с COVID ‐ 19? (статья на китайском языке). Чжунхуа Эр би Ян Хоу Тоу Цзин Вай Кэ За Чжи. 2020; 55: E003. [PubMed] [Google Scholar] 11.
Йе Г, Ли Й, Лу М. и др. Опыт использования различных стратегий отбора проб из верхних дыхательных путей для выявления COVID ‐ 19.J Hosp Infect. 2020.
10.1016 / j.jhin.2020.03.012
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12.
Аззи Л., Каркано Дж., Джанфагна Ф. и др. Слюна — надежный инструмент для обнаружения SARS ‐ CoV ‐ 2. J Infect. 2020; pii: S0163-4453 (20) 30213–9
10.1016 / j.jinf.2020.04.005
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13.
Сайто М., Адачи Э., Ямаёши С. и др. Промывание горла как безопасная и чувствительная альтернатива мазкам для диагностики COVID ‐ 19: отчет о болезни в Японии. Clin Infect Dis. 2020.10.1093 / cid / ciaa377
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14.
Беннет С., Дэвидсон Р.С., Гансон Р.Н. Сравнение образцов для полоскания горла и мазков из горла для выявления респираторных патогенов. J Virol Methods. 2017; 248: 83-86. [PubMed] [Google Scholar] 16.
Lo IL, Lio CF, Cheong HH и др. Оценка выделения РНК SARS-CoV-2 в клинических образцах и клинических характеристиках 10 пациентов с COVID-19 в Макао. Int J Biol Sci. 2020; 16 (10): 1698-1707. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 17.Пан И, Чжан Д., Ян П., Пун LLM, Ван К. Вирусная нагрузка SARS ‐ CoV ‐ 2 в клинических образцах. Lancet Infect Dis. 2020; 20 (4): 411-412. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 18.
Zuo MZ, Huang YG, Ma WH и др. Рекомендации экспертов по интубации трахеи у тяжелобольных пациентов с новой коронавирусной болезнью 2019. Chin Med Sci J. 2020.
10.24920 / 003724
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 19.
Хуанг Й., Чен С., Янг З. и др. Вирусная нагрузка SARS ‐ CoV ‐ 2 в клинических выборках пациентов в критическом состоянии.Am J Respir Crit Care Med. 2020.
10.1164 / rccm.202003-0572LE
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 20.
Чжоу П, Ян X, Ван X и др. Вспышка пневмонии, связанная с новым коронавирусом, вероятно, происхождения летучих мышей. Природа. 2020; 579: 270-273. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 21.
Yu F, Du L, Ojcius DM, Pan C, Jiang S. Меры по диагностике и лечению инфекций, вызванных новым коронавирусом, ответственным за вспышку пневмонии, возникшую в Ухане, Китай. Микробы заражают. 2020; 22: 74-79.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 23.
Реускен С., Броберг Е.К., Хаагманс Б. и др. Готовность лабораторий и ответные меры на новый коронавирус (2019 ‐ nCoV) в экспертных лабораториях 30 стран ЕС / ЕЭЗ, январь 2020 г. Еврононадзор. 2020; 25 (6): 2000082
10.2807 / 1560-7917.ES.2020.25.6.2000082. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24.
Winichakoon P, Chaiwarith R., Liwsrisakun C, et al. Отрицательные результаты мазков из носоглотки и ротоглотки не исключают COVID ‐ 19. J Clin Microbiol.2020; 58: e00297–20.
10.1128 / JCM.00297-20. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25.
Лю Р., Хань Х., Лю Ф. и др. Положительный уровень выявления инфекции SARS-CoV-2 с помощью ОТ-ПЦР в 4880 случаях в одной больнице в Ухане, Китай, с января по февраль 2020 г. Clin Chim Acta. 2020; 505: 172-175. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 27.
Zhang H, Penninger JM, Li Y, Zhong N, Slutsky AS. Ангиотензин-превращающий фермент 2 (ACE2) как рецептор SARS-CoV-2: молекулярные механизмы и потенциальная терапевтическая мишень.Intensive Care Med. 2020; 46 (4): 586-590. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 28.
Hamming I, Timens W., Bulthuis MLC, Lely AT, Navis GJ, van Goor H. Распределение в тканях белка ACE2, функционального рецептора коронавируса SARS: первый шаг в понимании патогенеза SARS. J Pathol. 2004; 203: 631-663. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

Отбор проб дыхательных путей на тяжелый острый респираторный синдром, коронавирус 2: обзор

Head Neck. 2020 8 мая: 10.1002 / хед.26232.

, MMed (ORL)
1
и, MMed (ORL), FAMS (ORL)
1

Анна См.

1
Отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи,
Больница общего профиля Сингапура,
Сингапур,

Сонг Тар То

1
Отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи,
Больница общего профиля Сингапура,
Сингапур,

1
Отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи,
Больница общего профиля Сингапура,
Сингапур,

Автор, ответственный за переписку. * Переписка
Анна Си, отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи, Сингапурская больница общего профиля, Outram Road, Сингапур 169608.
Электронная почта: [email protected],

Поступила в редакцию 20 апреля 2020 г .; Принята к печати 22 апреля 2020 г. Его можно использовать для неограниченного повторного использования в исследованиях и анализа в любой форме и любыми средствами с указанием первоисточника на время чрезвычайной ситуации в области общественного здравоохранения.

Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Abstract

Новое коронавирусное заболевание 2019 года вызвано тяжелым острым респираторным синдромом коронавирусом 2 (SARS ‐ CoV ‐ 2) и было объявлено пандемией в марте 2020 года. Множество методов взятия проб из дыхательных путей для выявления вируса SARS ‐ CoV ‐ 2 имеют использовались, и в текущей развивающейся ситуации не существует международного консенсуса по рекомендуемому методу отбора респираторных проб для диагностики. Отоларингологи тесно занимаются верхними дыхательными путями, и четкое понимание методов взятия проб из дыхательных путей имеет первостепенное значение.Эта статья призвана предоставить обзор различных методов и их доказательств на сегодняшний день.

Ключевые слова: коронавирус , COVID-19, отбор респираторных проб, ОТ-ПЦР, SARS-CoV-2

1. ВВЕДЕНИЕ

Новое коронавирусное заболевание 2019 г. (COVID-19), вызванное тяжелым острым респираторным синдромом коронавирусом 2 (SARS ‐ CoV ‐ 2) — это развивающаяся пандемия.
1
Описаны различные методы обнаружения. В настоящее время наиболее распространенным методом обнаружения вирусов является отбор проб из дыхательных путей.Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в реальном времени (ОТ-ПЦР), нацеленная на ген E SARS-CoV-2, была разработана на основе протокола Кормана и др., И этот анализ был официально выпущен Всемирной организацией здравоохранения.
2
Положительные результаты могут быть подтверждены последующим анализом ОТ-ПЦР в реальном времени, направленным на ген ORF1b-NSP-14, на основе протокола Chu et al.
3
В этой статье мы представляем обзор множества методов взятия проб из дыхательных путей на SARS ‐ CoV ‐ 2, которые были опубликованы на сегодняшний день.Эти методы можно разделить на две основные категории: отбор проб верхних дыхательных путей (носовой, носоглоточный, ротоглоточный, лингвальный и полоскание горла) и отбор проб нижних дыхательных путей (мокрота, трахея и бронхоальвеолярный отбор).

2. ОТБОР ВЕРХНЕЙ ДЫХАТЕЛЬНОЙ ПРОБЫ

2.1. Образцы из носа и носоглотки

Назальный мазок (NS) относится к взятию флокированного мазка из передней носовой полости, которая анатомически ограничена ноздрями спереди и переходом твердое-мягкое небо сзади.В отличие от этого, мазок из носоглотки (NPS) включает введение флокированного тампона глубоко в носоглотку (за переходом между твердым и мягким небом) для достижения прямого контакта с задней стенкой слизистой оболочки носоглотки. Невозможно получить чистый носоглоточный образец с помощью флокированного тампона, поскольку его введение требует контакта с носовой полостью на пути внутрь. Однако вполне возможно получить чистый NS, избегая глубокого введения флокированного тампона. палка.Средняя длина передней полости носа у здорового взрослого человека составляет от 5 до 7 см.
4
Обзор английской литературы на PubMed подтвердил, что не существует опубликованного сравнительного исследования, посвященного выходу вирусной нагрузки SARS-CoV-2 между образцами мазков из носа и носоглотки. Исследование такого рода также не имеет клинической значимости и не было бы логически предпринято.

Во время вспышки атипичной пневмонии в 2003 г. Chan et al. Описали альтернативный метод взятия пробы из носоглотки, известный как «назофарингеальный аспират» (NPA).5
Этот метод позволяет получить чистый носоглоточный образец без загрязнения передней носовой полости. Вместо флокированного тампона в носоглотку вводится отсасывающий катетер, после чего активируется отсасывание, всасывающее носоглоточную слизь в ловушку. Чан и др. Сравнили образцы NPA с образцами «мазков из носа и горла» и обнаружили несколько лучшую эффективность NPA в обнаружении вирусной РНК SARS у подтвержденных пациентов с SARS (NPA 29,6% против NS / OPS 28,3%, значение P не предоставлено) .5
Однако следует отметить, что подробностей процедуры «мазок из носа и зева» не было. Неясно, относится ли «назальный» компонент к отбору проб из передней носовой полости (NS) или к комбинированному отбору проб NS / NPS. В отличие от результатов Чана и др., Другое исследование, проведенное в Гонконге во время вспышки атипичной пневмонии в 2003 году, показало, что «объединенные мазки из горла и носа» обеспечивают более высокую диагностическую ценность по сравнению с образцами NPA. Далее было подчеркнуто, что первое имеет дополнительное преимущество в виде меньшего риска образования аэрозолей, поскольку не используется всасывание.6

В условиях нынешней пандемии COVID-19 литература, посвященная NPA как форме респираторного отбора проб для выделения вируса SARS-CoV-2, отсутствует. Большинство исследований используют мазки в качестве основного метода отбора проб из верхних дыхательных путей. Были опубликованы сравнения комбинированного NS / NPS и мазка из ротоглотки (OPS). В исследовании Zou et al. 72 образца NS / NPS, взятых из средней носовой раковины и носоглотки в разные дни болезни, были проанализированы у 18 пациентов с COVID-19. Более высокие вирусные нагрузки (порог цикла [ C
t ] значений) были обнаружены в этих образцах по сравнению с 72 образцами OPS в той же группе пациентов.7
По мнению авторов, по сравнению с NS, NPS и OPS, метод NPA требует много времени, ресурсов и не подходит для массового тестирования в ситуации пандемии.

2.2. Мазок из ротоглотки

OPS также известен как «мазок из зева». Это относится к отбору образцов одного или нескольких из четырех участков ротоглотки (миндалины, мягкое небо, основание языка и задняя стенка глотки). Так же, как носоглотка спарена кзади от носовой полости, ротоглотка расположена позади ротовой полости и начинается на переходе между твердым и мягким небом.Наиболее частым местом-мишенью ОПС является задняя стенка глотки, поскольку она считается анатомическим континуумом носоглотки. Мазки из горла или OPS обычно используются для взятия проб из дыхательных путей во время текущей вспышки COVID ‐ 19. В раннем эпохальном исследовании, подробно описывающем клинические характеристики пациентов с COVID-19 в Ухане, OPS использовался как единственный метод отбора респираторных проб.
7
В крупнейшем на сегодняшний день исследовании китайской когорты COVID-19, не связанной с Уханьем, в Чжэцзяне, OPS также использовался в качестве единственного метода выборки.8
Однако сообщалось о низкой отрицательной прогностической ценности OPS. Се и др. Сообщили, что только 9 из 19 (47%) ОПС у серопозитивных пациентов с COVID-19 были положительными, что обращает внимание на важность повторного отбора образцов из нескольких мест, включая нижние дыхательные пути, для повышения диагностической эффективности.
9

Методы NS, NPS, NPA и OPS сравнивались в китайском исследовании Ye et al., В котором анализировалась литература по отбору респираторных проб SARS, MERS и h2N1, и был сделан вывод, что среди всех методов отбора проб из верхних дыхательных путей NPA имеет более высокий процент положительных результатов. в течение 2 недель с момента появления симптомов, в то время как комбинированные NS + OPS были наименее вредными для медицинского персонала во время отбора проб.10
Остается оценить, можно ли экстраполировать вышеуказанные результаты на SARS ‐ CoV ‐ 2.

2.3. Лингвальный мазок

Лингвальный мазок (LS) или мазок из полости рта (OCS) для обнаружения SARS ‐ CoV ‐ 2 включает мазок с передних двух третей языка или ротового языка. Исследование в Ухане сравнило LS с OPS и обнаружило, что у 91 пациента частота положительных результатов OPS была выше, чем у LS. Однако авторы отметили, что это различие могло быть связано с тем, что одна опытная медсестра собрала все образцы.11

Аззи и др. Сообщили об использовании OCS и «сбора оральной пипетки слюны» для обнаружения вирусов. В когорте из 25 пациентов с COVID-19 от тяжелой до очень тяжелой (степень тяжести не указана, но все пациенты находились на искусственной вентиляции легких в отделении интенсивной терапии) сообщалось, что SARS-CoV-2 был обнаружен во всех мазках слюны 25 пациентов, при этом разные C
t значений (диапазон 18,12-32,23, среднее значение 27,16 ± 3,07). У всех пациентов на момент постановки диагноза ранее имелись положительные NPS.12
Таким образом, авторы пришли к выводу, что сбор слюны из ротовой полости является надежным методом обнаружения вирусов. Однако следует отметить, что эти результаты были получены от пациентов в критическом состоянии, у которых характер выделения вируса может отличаться от подозрительных случаев. Следовательно, использование мазков из слюны или LS может не воспроизводиться в сценариях скрининга. Хотя LS или OCS просты и, по-видимому, вызывают меньший дискомфорт, их использование в текущей пандемии вряд ли будет распространенным из-за необходимости максимизировать взятие проб и сбор выделений для точной диагностики инфекции.

2.4. Промывание полосканием

Риск воздействия на медицинских работников является неотъемлемым при взятии флокированных мазков, поскольку эти методы могут спровоцировать чихание, кашель и рвоту. Сайто и др. Сообщили об использовании полоскания для полоскания в качестве безопасной и чувствительной альтернативы взятию мазков. Промывание горла с использованием 10 мл физиологического раствора и OPS сравнивали у пациента с COVID-19 на 8 и 9 дни болезни. Примечательно, что более высокие количества вирусного генома были замечены в образцах промывания для полоскания.
13
Однако это был единственный случай.Несмотря на вышесказанное, ранее сообщалось, что в отношении респираторных патогенов, таких как грипп A, грипп B и респираторно-синцитиальный вирус, полоскание горла более чувствительно, чем мазки из горла.
14
В нынешней вспышке мало доказательств чувствительности и специфичности полоскания для выявления вирусов.

3. ОТБОР НИЖНЕЙ ДЫХАТЕЛЬНОЙ ПРОБЫ

3.1. Сбор мокроты

Сбор мокроты может производиться во время произвольного кашля или непроизвольной индукции.То и др. Выполнили сбор мокроты, заставляя пациентов откашляться в стерильный контейнер, и продемонстрировали последовательное определение уровней вирусной РНК в собранных образцах.
15
В другом ограниченном исследовании 10 пациентов с COVID-19 Ло и др. Сообщили, что РНК SARS-CoV-2 была обнаружена в 90% образцов НПВ, но ложно отсутствовала в 10% (один пациент).
16
В конечном итоге этому пациенту был поставлен диагноз после обнаружения вируса в собранной мокроте после одного отрицательного и одного неубедительного результата NPS (неубедительный результат был определен как C
т — номинал 36-38).Превосходство мокроты для обнаружения вируса SARS-CoV-2 было также подтверждено Пан и соавторами, которые продемонстрировали, что образцы мокроты обычно показывают более высокую вирусную нагрузку, чем мазки из зева.
17

3.2. Трахеальный аспират

Трахеальный аспират (ТА) может быть получен путем аспирации из постоянной эндотрахеальной трубки у пациентов с механической вентиляцией легких или путем прямого аспирации трахеи у пациентов с трахеотомией. Китайское общество анестезиологов опубликовало свои рекомендации по интубации трахеи у тяжелобольных пациентов с COVID-19, отметив, что это процедура с образованием аэрозолей, и ее следует избегать, за исключением случаев крайней необходимости.18
В то же время сбор ТА для обнаружения вирусов представляет значительный риск для медицинского работника. Хуанг и др. Сообщили о сравнении вирусной нагрузки в образцах верхних дыхательных путей и эндотрахеальных аспиратах в когорте из 16 интубированных пациентов с COVID-19 и обнаружили, что у последних значительно более высокие значения вирусной РНК по сравнению с носовыми и ОПС.
19
Однако этот метод респираторного отбора проб не имеет отношения к сценариям амбулаторного скрининга, но может иметь значение при скрининге на COVID-19 пациентов на ИВЛ в отделениях интенсивной терапии и для серийного мониторинга вирусной нагрузки интубированных подтвержденных случаев.

3.3. Бронхоальвеолярный лаваж

Самая ранняя идентификация генома SARS-CoV-2 была проведена с помощью образцов бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) в Уханьском институте вирусологии.
20
БАЛ — это форма отбора проб из нижних дыхательных путей, при которой бронхоскоп вводится в трахею и бронхи, вводится рассчитанное количество жидкости и затем собирается для исследования. С декабря 2019 года были опубликованы исследования из Китая и Европы по использованию образцов БАЛ для обнаружения вируса SARS ‐ CoV ‐ 2.21, 22, 23 Накапливающиеся данные свидетельствуют о том, что БАЛ может быть полезен при обнаружении вирусов в случаях ложноотрицательных NPS и / или OPS.
24
В исследовании 4880 пациентов с подозрением на COVID-19 в Ухане Лю и др. Обнаружили, что БАЛ показал самый высокий положительный показатель при обнаружении SARS-CoV-2, и сообщили, что NS и OPS показали низкий комбинированный положительный показатель 38,25% при сборе мокроты. показал положительную оценку 49,12%. Определение случая пациента с подозрением на COVID-19 в исследовании было основано на следующем: (a) типичные симптомы респираторной инфекции, такие как лихорадка, кашель и затрудненное дыхание, или (b) тесный контакт с SARS-CoV‐ 2 пациента.25

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В целом, совокупные исследования показывают, что образцы нижних дыхательных путей, особенно БАЛ, имеют тенденцию давать более высокую диагностическую ценность, чем образцы верхних дыхательных путей у пациентов с пневмонией, и поэтому их следует получать по возможности. Однако отбор проб нижних дыхательных путей сопряжен с большими техническими трудностями и риском воздействия. TA и BAL также неприемлемы в качестве инструментов проверки. Следовательно, отбор проб из верхних дыхательных путей остается весьма актуальным, хотя в современной литературе все чаще подчеркиваются ограничения NS / NPS и OPS и возможные ложноотрицательные результаты.Ложноотрицательный результат позволяет вернуть инфицированного пациента в сообщество для продолжения передачи вируса. С точки зрения общественного здравоохранения, пациенты, у которых есть симптоматика SARS-CoV-2, но изначально отрицательный результат теста, должны пройти повторное тестирование и быть изолированы дома. Для клиницистов критически важно основывать свой диагноз на более чем одном тесте и учитывать восприимчивость пациента к риску, особенно в условиях известного распространения среди населения.

В настоящее время Центры США по контролю и профилактике заболеваний рекомендуют использовать мазки из носоглотки и ротоглотки для сбора образцов для выявления вируса SARS ‐ CoV ‐ 2.26
Хотя эти методы имеют свои ограничения, оба они позволяют быстро расширять масштабы для массового тестирования и выявления, что является частью более широкой стратегии большинства стран по проактивному тестированию, изоляции и отслеживанию инфицированных случаев. Методы отбора проб из нижних дыхательных путей не обладают потенциалом быстрого масштабирования.

Вирус SARS-CoV-2 демонстрирует сродство к рецептору ангиотензинпревращающего фермента 2, который присутствует в тканях слизистой оболочки дыхательных путей, сердца, почек, эндотелия и кишечника.27, 28 Таким образом, существует множество других методов отбора биологических образцов, таких как: но не ограничиваясь этим, был описан сбор образцов крови, мочи и кала.Подробное обсуждение каждого из них выходит за рамки данной статьи. Дальнейшие совокупные исследования могут быть рассмотрены для проверки диагностических возможностей каждого из вышеупомянутых методов.

Банкноты

См. A, Toh ST. Отбор респираторных проб при тяжелом остром респираторном синдроме коронавируса 2: обзор. Голова и шея. 2020; 1–5. 10.1002 / hed.26232
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef]

СПРАВОЧНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

2.
Корман В.М., Ландт О., Кайзер М. и др. Обнаружение нового коронавируса 2019 года (2019 ‐ nCoV) с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени.Евронаблюдение. 2020; 25 (3): 2000045
10.2807 / 1560-7917.ES.2020.25.3.2000045. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3.
Chu DKW, Pan Y, Cheng SMS и др. Молекулярная диагностика нового коронавируса (2019 ‐ nCoV), вызывающего вспышку пневмонии. Clin Chem. 2020; 66 (4): 549-555. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 5.
Чан К.Х., Пун Л.Л., Ченг В.С. и др. Выявление коронавируса SARS у пациентов с подозрением на SARS. J Emerg Infect Dis. 2004; 10 (2): 294-299. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 7.Zou L, Ruan F, Huang M и др. Вирусная нагрузка SARS ‐ CoV ‐ 2 в образцах верхних дыхательных путей инфицированных пациентов. N Engl J Med. 2020; 382: 1177-1179. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 8.
Цянь GQ, Ян Н.Б., Дин Ф. и др. Эпидемиологические и клинические характеристики 91 госпитализированного пациента с COVID ‐ 19 в Чжэцзяне, Китай: ретроспективная серия клинических случаев в нескольких центрах. QJM Int J Med. 2020.
10.1093 / qjmed / hcaa089
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9.
Xie C, Jiang L, Huang G и др.Сравнение различных образцов для обнаружения нового коронавируса 2019 года с помощью тестов амплификации нуклеиновых кислот. Int J Infect Dis. 2020; 93: 264-267. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 10.
Ye B, Fan C, Pan Y и др. Какой метод отбора проб из верхних дыхательных путей следует использовать для диагностики пациента с COVID ‐ 19? (статья на китайском языке). Чжунхуа Эр би Ян Хоу Тоу Цзин Вай Кэ За Чжи. 2020; 55: E003. [PubMed] [Google Scholar] 11.
Йе Г, Ли Й, Лу М. и др. Опыт использования различных стратегий отбора проб из верхних дыхательных путей для выявления COVID ‐ 19.J Hosp Infect. 2020.
10.1016 / j.jhin.2020.03.012
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12.
Аззи Л., Каркано Дж., Джанфагна Ф. и др. Слюна — надежный инструмент для обнаружения SARS ‐ CoV ‐ 2. J Infect. 2020; pii: S0163-4453 (20) 30213–9
10.1016 / j.jinf.2020.04.005
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13.
Сайто М., Адачи Э., Ямаёши С. и др. Промывание горла как безопасная и чувствительная альтернатива мазкам для диагностики COVID ‐ 19: отчет о болезни в Японии. Clin Infect Dis. 2020.10.1093 / cid / ciaa377
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14.
Беннет С., Дэвидсон Р.С., Гансон Р.Н. Сравнение образцов для полоскания горла и мазков из горла для выявления респираторных патогенов. J Virol Methods. 2017; 248: 83-86. [PubMed] [Google Scholar] 16.
Lo IL, Lio CF, Cheong HH и др. Оценка выделения РНК SARS-CoV-2 в клинических образцах и клинических характеристиках 10 пациентов с COVID-19 в Макао. Int J Biol Sci. 2020; 16 (10): 1698-1707. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 17.Пан И, Чжан Д., Ян П., Пун LLM, Ван К. Вирусная нагрузка SARS ‐ CoV ‐ 2 в клинических образцах. Lancet Infect Dis. 2020; 20 (4): 411-412. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 18.
Zuo MZ, Huang YG, Ma WH и др. Рекомендации экспертов по интубации трахеи у тяжелобольных пациентов с новой коронавирусной болезнью 2019. Chin Med Sci J. 2020.
10.24920 / 003724
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 19.
Хуанг Й., Чен С., Янг З. и др. Вирусная нагрузка SARS ‐ CoV ‐ 2 в клинических выборках пациентов в критическом состоянии.Am J Respir Crit Care Med. 2020.
10.1164 / rccm.202003-0572LE
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 20.
Чжоу П, Ян X, Ван X и др. Вспышка пневмонии, связанная с новым коронавирусом, вероятно, происхождения летучих мышей. Природа. 2020; 579: 270-273. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 21.
Yu F, Du L, Ojcius DM, Pan C, Jiang S. Меры по диагностике и лечению инфекций, вызванных новым коронавирусом, ответственным за вспышку пневмонии, возникшую в Ухане, Китай. Микробы заражают. 2020; 22: 74-79.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 23.
Реускен С., Броберг Е.К., Хаагманс Б. и др. Готовность лабораторий и ответные меры на новый коронавирус (2019 ‐ nCoV) в экспертных лабораториях 30 стран ЕС / ЕЭЗ, январь 2020 г. Еврононадзор. 2020; 25 (6): 2000082
10.2807 / 1560-7917.ES.2020.25.6.2000082. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24.
Winichakoon P, Chaiwarith R., Liwsrisakun C, et al. Отрицательные результаты мазков из носоглотки и ротоглотки не исключают COVID ‐ 19. J Clin Microbiol.2020; 58: e00297–20.
10.1128 / JCM.00297-20. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25.
Лю Р., Хань Х., Лю Ф. и др. Положительный уровень выявления инфекции SARS-CoV-2 с помощью ОТ-ПЦР в 4880 случаях в одной больнице в Ухане, Китай, с января по февраль 2020 г. Clin Chim Acta. 2020; 505: 172-175. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 27.
Zhang H, Penninger JM, Li Y, Zhong N, Slutsky AS. Ангиотензин-превращающий фермент 2 (ACE2) как рецептор SARS-CoV-2: молекулярные механизмы и потенциальная терапевтическая мишень.Intensive Care Med. 2020; 46 (4): 586-590. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 28.
Hamming I, Timens W., Bulthuis MLC, Lely AT, Navis GJ, van Goor H. Распределение в тканях белка ACE2, функционального рецептора коронавируса SARS: первый шаг в понимании патогенеза SARS. J Pathol. 2004; 203: 631-663. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

Отбор проб дыхательных путей на тяжелый острый респираторный синдром, коронавирус 2: обзор

Head Neck. 2020 8 мая: 10.1002 / хед.26232.

, MMed (ORL)
1
и, MMed (ORL), FAMS (ORL)
1

Анна См.

1
Отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи,
Больница общего профиля Сингапура,
Сингапур,

Сонг Тар То

1
Отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи,
Больница общего профиля Сингапура,
Сингапур,

1
Отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи,
Больница общего профиля Сингапура,
Сингапур,

Автор, ответственный за переписку. * Переписка
Анна Си, отделение оториноларингологии хирургии головы и шеи, Сингапурская больница общего профиля, Outram Road, Сингапур 169608.
Электронная почта: [email protected],

Поступила в редакцию 20 апреля 2020 г .; Принята к печати 22 апреля 2020 г. Его можно использовать для неограниченного повторного использования в исследованиях и анализа в любой форме и любыми средствами с указанием первоисточника на время чрезвычайной ситуации в области общественного здравоохранения.

Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Abstract

Новое коронавирусное заболевание 2019 года вызвано тяжелым острым респираторным синдромом коронавирусом 2 (SARS ‐ CoV ‐ 2) и было объявлено пандемией в марте 2020 года. Множество методов взятия проб из дыхательных путей для выявления вируса SARS ‐ CoV ‐ 2 имеют использовались, и в текущей развивающейся ситуации не существует международного консенсуса по рекомендуемому методу отбора респираторных проб для диагностики. Отоларингологи тесно занимаются верхними дыхательными путями, и четкое понимание методов взятия проб из дыхательных путей имеет первостепенное значение.Эта статья призвана предоставить обзор различных методов и их доказательств на сегодняшний день.

Ключевые слова: коронавирус , COVID-19, отбор респираторных проб, ОТ-ПЦР, SARS-CoV-2

1. ВВЕДЕНИЕ

Новое коронавирусное заболевание 2019 г. (COVID-19), вызванное тяжелым острым респираторным синдромом коронавирусом 2 (SARS ‐ CoV ‐ 2) — это развивающаяся пандемия.
1
Описаны различные методы обнаружения. В настоящее время наиболее распространенным методом обнаружения вирусов является отбор проб из дыхательных путей.Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в реальном времени (ОТ-ПЦР), нацеленная на ген E SARS-CoV-2, была разработана на основе протокола Кормана и др., И этот анализ был официально выпущен Всемирной организацией здравоохранения.
2
Положительные результаты могут быть подтверждены последующим анализом ОТ-ПЦР в реальном времени, направленным на ген ORF1b-NSP-14, на основе протокола Chu et al.
3
В этой статье мы представляем обзор множества методов взятия проб из дыхательных путей на SARS ‐ CoV ‐ 2, которые были опубликованы на сегодняшний день.Эти методы можно разделить на две основные категории: отбор проб верхних дыхательных путей (носовой, носоглоточный, ротоглоточный, лингвальный и полоскание горла) и отбор проб нижних дыхательных путей (мокрота, трахея и бронхоальвеолярный отбор).

2. ОТБОР ВЕРХНЕЙ ДЫХАТЕЛЬНОЙ ПРОБЫ

2.1. Образцы из носа и носоглотки

Назальный мазок (NS) относится к взятию флокированного мазка из передней носовой полости, которая анатомически ограничена ноздрями спереди и переходом твердое-мягкое небо сзади.В отличие от этого, мазок из носоглотки (NPS) включает введение флокированного тампона глубоко в носоглотку (за переходом между твердым и мягким небом) для достижения прямого контакта с задней стенкой слизистой оболочки носоглотки. Невозможно получить чистый носоглоточный образец с помощью флокированного тампона, поскольку его введение требует контакта с носовой полостью на пути внутрь. Однако вполне возможно получить чистый NS, избегая глубокого введения флокированного тампона. палка.Средняя длина передней полости носа у здорового взрослого человека составляет от 5 до 7 см.
4
Обзор английской литературы на PubMed подтвердил, что не существует опубликованного сравнительного исследования, посвященного выходу вирусной нагрузки SARS-CoV-2 между образцами мазков из носа и носоглотки. Исследование такого рода также не имеет клинической значимости и не было бы логически предпринято.

Во время вспышки атипичной пневмонии в 2003 г. Chan et al. Описали альтернативный метод взятия пробы из носоглотки, известный как «назофарингеальный аспират» (NPA).5
Этот метод позволяет получить чистый носоглоточный образец без загрязнения передней носовой полости. Вместо флокированного тампона в носоглотку вводится отсасывающий катетер, после чего активируется отсасывание, всасывающее носоглоточную слизь в ловушку. Чан и др. Сравнили образцы NPA с образцами «мазков из носа и горла» и обнаружили несколько лучшую эффективность NPA в обнаружении вирусной РНК SARS у подтвержденных пациентов с SARS (NPA 29,6% против NS / OPS 28,3%, значение P не предоставлено) .5
Однако следует отметить, что подробностей процедуры «мазок из носа и зева» не было. Неясно, относится ли «назальный» компонент к отбору проб из передней носовой полости (NS) или к комбинированному отбору проб NS / NPS. В отличие от результатов Чана и др., Другое исследование, проведенное в Гонконге во время вспышки атипичной пневмонии в 2003 году, показало, что «объединенные мазки из горла и носа» обеспечивают более высокую диагностическую ценность по сравнению с образцами NPA. Далее было подчеркнуто, что первое имеет дополнительное преимущество в виде меньшего риска образования аэрозолей, поскольку не используется всасывание.6

В условиях нынешней пандемии COVID-19 литература, посвященная NPA как форме респираторного отбора проб для выделения вируса SARS-CoV-2, отсутствует. Большинство исследований используют мазки в качестве основного метода отбора проб из верхних дыхательных путей. Были опубликованы сравнения комбинированного NS / NPS и мазка из ротоглотки (OPS). В исследовании Zou et al. 72 образца NS / NPS, взятых из средней носовой раковины и носоглотки в разные дни болезни, были проанализированы у 18 пациентов с COVID-19. Более высокие вирусные нагрузки (порог цикла [ C
t ] значений) были обнаружены в этих образцах по сравнению с 72 образцами OPS в той же группе пациентов.7
По мнению авторов, по сравнению с NS, NPS и OPS, метод NPA требует много времени, ресурсов и не подходит для массового тестирования в ситуации пандемии.

2.2. Мазок из ротоглотки

OPS также известен как «мазок из зева». Это относится к отбору образцов одного или нескольких из четырех участков ротоглотки (миндалины, мягкое небо, основание языка и задняя стенка глотки). Так же, как носоглотка спарена кзади от носовой полости, ротоглотка расположена позади ротовой полости и начинается на переходе между твердым и мягким небом.Наиболее частым местом-мишенью ОПС является задняя стенка глотки, поскольку она считается анатомическим континуумом носоглотки. Мазки из горла или OPS обычно используются для взятия проб из дыхательных путей во время текущей вспышки COVID ‐ 19. В раннем эпохальном исследовании, подробно описывающем клинические характеристики пациентов с COVID-19 в Ухане, OPS использовался как единственный метод отбора респираторных проб.
7
В крупнейшем на сегодняшний день исследовании китайской когорты COVID-19, не связанной с Уханьем, в Чжэцзяне, OPS также использовался в качестве единственного метода выборки.8
Однако сообщалось о низкой отрицательной прогностической ценности OPS. Се и др. Сообщили, что только 9 из 19 (47%) ОПС у серопозитивных пациентов с COVID-19 были положительными, что обращает внимание на важность повторного отбора образцов из нескольких мест, включая нижние дыхательные пути, для повышения диагностической эффективности.
9

Методы NS, NPS, NPA и OPS сравнивались в китайском исследовании Ye et al., В котором анализировалась литература по отбору респираторных проб SARS, MERS и h2N1, и был сделан вывод, что среди всех методов отбора проб из верхних дыхательных путей NPA имеет более высокий процент положительных результатов. в течение 2 недель с момента появления симптомов, в то время как комбинированные NS + OPS были наименее вредными для медицинского персонала во время отбора проб.10
Остается оценить, можно ли экстраполировать вышеуказанные результаты на SARS ‐ CoV ‐ 2.

2.3. Лингвальный мазок

Лингвальный мазок (LS) или мазок из полости рта (OCS) для обнаружения SARS ‐ CoV ‐ 2 включает мазок с передних двух третей языка или ротового языка. Исследование в Ухане сравнило LS с OPS и обнаружило, что у 91 пациента частота положительных результатов OPS была выше, чем у LS. Однако авторы отметили, что это различие могло быть связано с тем, что одна опытная медсестра собрала все образцы.11

Аззи и др. Сообщили об использовании OCS и «сбора оральной пипетки слюны» для обнаружения вирусов. В когорте из 25 пациентов с COVID-19 от тяжелой до очень тяжелой (степень тяжести не указана, но все пациенты находились на искусственной вентиляции легких в отделении интенсивной терапии) сообщалось, что SARS-CoV-2 был обнаружен во всех мазках слюны 25 пациентов, при этом разные C
t значений (диапазон 18,12-32,23, среднее значение 27,16 ± 3,07). У всех пациентов на момент постановки диагноза ранее имелись положительные NPS.12
Таким образом, авторы пришли к выводу, что сбор слюны из ротовой полости является надежным методом обнаружения вирусов. Однако следует отметить, что эти результаты были получены от пациентов в критическом состоянии, у которых характер выделения вируса может отличаться от подозрительных случаев. Следовательно, использование мазков из слюны или LS может не воспроизводиться в сценариях скрининга. Хотя LS или OCS просты и, по-видимому, вызывают меньший дискомфорт, их использование в текущей пандемии вряд ли будет распространенным из-за необходимости максимизировать взятие проб и сбор выделений для точной диагностики инфекции.

2.4. Промывание полосканием

Риск воздействия на медицинских работников является неотъемлемым при взятии флокированных мазков, поскольку эти методы могут спровоцировать чихание, кашель и рвоту. Сайто и др. Сообщили об использовании полоскания для полоскания в качестве безопасной и чувствительной альтернативы взятию мазков. Промывание горла с использованием 10 мл физиологического раствора и OPS сравнивали у пациента с COVID-19 на 8 и 9 дни болезни. Примечательно, что более высокие количества вирусного генома были замечены в образцах промывания для полоскания.
13
Однако это был единственный случай.Несмотря на вышесказанное, ранее сообщалось, что в отношении респираторных патогенов, таких как грипп A, грипп B и респираторно-синцитиальный вирус, полоскание горла более чувствительно, чем мазки из горла.
14
В нынешней вспышке мало доказательств чувствительности и специфичности полоскания для выявления вирусов.

3. ОТБОР НИЖНЕЙ ДЫХАТЕЛЬНОЙ ПРОБЫ

3.1. Сбор мокроты

Сбор мокроты может производиться во время произвольного кашля или непроизвольной индукции.То и др. Выполнили сбор мокроты, заставляя пациентов откашляться в стерильный контейнер, и продемонстрировали последовательное определение уровней вирусной РНК в собранных образцах.
15
В другом ограниченном исследовании 10 пациентов с COVID-19 Ло и др. Сообщили, что РНК SARS-CoV-2 была обнаружена в 90% образцов НПВ, но ложно отсутствовала в 10% (один пациент).
16
В конечном итоге этому пациенту был поставлен диагноз после обнаружения вируса в собранной мокроте после одного отрицательного и одного неубедительного результата NPS (неубедительный результат был определен как C
т — номинал 36-38).Превосходство мокроты для обнаружения вируса SARS-CoV-2 было также подтверждено Пан и соавторами, которые продемонстрировали, что образцы мокроты обычно показывают более высокую вирусную нагрузку, чем мазки из зева.
17

3.2. Трахеальный аспират

Трахеальный аспират (ТА) может быть получен путем аспирации из постоянной эндотрахеальной трубки у пациентов с механической вентиляцией легких или путем прямого аспирации трахеи у пациентов с трахеотомией. Китайское общество анестезиологов опубликовало свои рекомендации по интубации трахеи у тяжелобольных пациентов с COVID-19, отметив, что это процедура с образованием аэрозолей, и ее следует избегать, за исключением случаев крайней необходимости.18
В то же время сбор ТА для обнаружения вирусов представляет значительный риск для медицинского работника. Хуанг и др. Сообщили о сравнении вирусной нагрузки в образцах верхних дыхательных путей и эндотрахеальных аспиратах в когорте из 16 интубированных пациентов с COVID-19 и обнаружили, что у последних значительно более высокие значения вирусной РНК по сравнению с носовыми и ОПС.
19
Однако этот метод респираторного отбора проб не имеет отношения к сценариям амбулаторного скрининга, но может иметь значение при скрининге на COVID-19 пациентов на ИВЛ в отделениях интенсивной терапии и для серийного мониторинга вирусной нагрузки интубированных подтвержденных случаев.

3.3. Бронхоальвеолярный лаваж

Самая ранняя идентификация генома SARS-CoV-2 была проведена с помощью образцов бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) в Уханьском институте вирусологии.
20
БАЛ — это форма отбора проб из нижних дыхательных путей, при которой бронхоскоп вводится в трахею и бронхи, вводится рассчитанное количество жидкости и затем собирается для исследования. С декабря 2019 года были опубликованы исследования из Китая и Европы по использованию образцов БАЛ для обнаружения вируса SARS ‐ CoV ‐ 2.21, 22, 23 Накапливающиеся данные свидетельствуют о том, что БАЛ может быть полезен при обнаружении вирусов в случаях ложноотрицательных NPS и / или OPS.
24
В исследовании 4880 пациентов с подозрением на COVID-19 в Ухане Лю и др. Обнаружили, что БАЛ показал самый высокий положительный показатель при обнаружении SARS-CoV-2, и сообщили, что NS и OPS показали низкий комбинированный положительный показатель 38,25% при сборе мокроты. показал положительную оценку 49,12%. Определение случая пациента с подозрением на COVID-19 в исследовании было основано на следующем: (a) типичные симптомы респираторной инфекции, такие как лихорадка, кашель и затрудненное дыхание, или (b) тесный контакт с SARS-CoV‐ 2 пациента.25

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В целом, совокупные исследования показывают, что образцы нижних дыхательных путей, особенно БАЛ, имеют тенденцию давать более высокую диагностическую ценность, чем образцы верхних дыхательных путей у пациентов с пневмонией, и поэтому их следует получать по возможности. Однако отбор проб нижних дыхательных путей сопряжен с большими техническими трудностями и риском воздействия. TA и BAL также неприемлемы в качестве инструментов проверки. Следовательно, отбор проб из верхних дыхательных путей остается весьма актуальным, хотя в современной литературе все чаще подчеркиваются ограничения NS / NPS и OPS и возможные ложноотрицательные результаты.Ложноотрицательный результат позволяет вернуть инфицированного пациента в сообщество для продолжения передачи вируса. С точки зрения общественного здравоохранения, пациенты, у которых есть симптоматика SARS-CoV-2, но изначально отрицательный результат теста, должны пройти повторное тестирование и быть изолированы дома. Для клиницистов критически важно основывать свой диагноз на более чем одном тесте и учитывать восприимчивость пациента к риску, особенно в условиях известного распространения среди населения.

В настоящее время Центры США по контролю и профилактике заболеваний рекомендуют использовать мазки из носоглотки и ротоглотки для сбора образцов для выявления вируса SARS ‐ CoV ‐ 2.26
Хотя эти методы имеют свои ограничения, оба они позволяют быстро расширять масштабы для массового тестирования и выявления, что является частью более широкой стратегии большинства стран по проактивному тестированию, изоляции и отслеживанию инфицированных случаев. Методы отбора проб из нижних дыхательных путей не обладают потенциалом быстрого масштабирования.

Вирус SARS-CoV-2 демонстрирует сродство к рецептору ангиотензинпревращающего фермента 2, который присутствует в тканях слизистой оболочки дыхательных путей, сердца, почек, эндотелия и кишечника.27, 28 Таким образом, существует множество других методов отбора биологических образцов, таких как: но не ограничиваясь этим, был описан сбор образцов крови, мочи и кала.Подробное обсуждение каждого из них выходит за рамки данной статьи. Дальнейшие совокупные исследования могут быть рассмотрены для проверки диагностических возможностей каждого из вышеупомянутых методов.

Банкноты

См. A, Toh ST. Отбор респираторных проб при тяжелом остром респираторном синдроме коронавируса 2: обзор. Голова и шея. 2020; 1–5. 10.1002 / hed.26232
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef]

СПРАВОЧНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

2.
Корман В.М., Ландт О., Кайзер М. и др. Обнаружение нового коронавируса 2019 года (2019 ‐ nCoV) с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени.Евронаблюдение. 2020; 25 (3): 2000045
10.2807 / 1560-7917.ES.2020.25.3.2000045. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3.
Chu DKW, Pan Y, Cheng SMS и др. Молекулярная диагностика нового коронавируса (2019 ‐ nCoV), вызывающего вспышку пневмонии. Clin Chem. 2020; 66 (4): 549-555. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 5.
Чан К.Х., Пун Л.Л., Ченг В.С. и др. Выявление коронавируса SARS у пациентов с подозрением на SARS. J Emerg Infect Dis. 2004; 10 (2): 294-299. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 7.Zou L, Ruan F, Huang M и др. Вирусная нагрузка SARS ‐ CoV ‐ 2 в образцах верхних дыхательных путей инфицированных пациентов. N Engl J Med. 2020; 382: 1177-1179. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 8.
Цянь GQ, Ян Н.Б., Дин Ф. и др. Эпидемиологические и клинические характеристики 91 госпитализированного пациента с COVID ‐ 19 в Чжэцзяне, Китай: ретроспективная серия клинических случаев в нескольких центрах. QJM Int J Med. 2020.
10.1093 / qjmed / hcaa089
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9.
Xie C, Jiang L, Huang G и др.Сравнение различных образцов для обнаружения нового коронавируса 2019 года с помощью тестов амплификации нуклеиновых кислот. Int J Infect Dis. 2020; 93: 264-267. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 10.
Ye B, Fan C, Pan Y и др. Какой метод отбора проб из верхних дыхательных путей следует использовать для диагностики пациента с COVID ‐ 19? (статья на китайском языке). Чжунхуа Эр би Ян Хоу Тоу Цзин Вай Кэ За Чжи. 2020; 55: E003. [PubMed] [Google Scholar] 11.
Йе Г, Ли Й, Лу М. и др. Опыт использования различных стратегий отбора проб из верхних дыхательных путей для выявления COVID ‐ 19.J Hosp Infect. 2020.
10.1016 / j.jhin.2020.03.012
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12.
Аззи Л., Каркано Дж., Джанфагна Ф. и др. Слюна — надежный инструмент для обнаружения SARS ‐ CoV ‐ 2. J Infect. 2020; pii: S0163-4453 (20) 30213–9
10.1016 / j.jinf.2020.04.005
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13.
Сайто М., Адачи Э., Ямаёши С. и др. Промывание горла как безопасная и чувствительная альтернатива мазкам для диагностики COVID ‐ 19: отчет о болезни в Японии. Clin Infect Dis. 2020.10.1093 / cid / ciaa377
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14.
Беннет С., Дэвидсон Р.С., Гансон Р.Н. Сравнение образцов для полоскания горла и мазков из горла для выявления респираторных патогенов. J Virol Methods. 2017; 248: 83-86. [PubMed] [Google Scholar] 16.
Lo IL, Lio CF, Cheong HH и др. Оценка выделения РНК SARS-CoV-2 в клинических образцах и клинических характеристиках 10 пациентов с COVID-19 в Макао. Int J Biol Sci. 2020; 16 (10): 1698-1707. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 17.Пан И, Чжан Д., Ян П., Пун LLM, Ван К. Вирусная нагрузка SARS ‐ CoV ‐ 2 в клинических образцах. Lancet Infect Dis. 2020; 20 (4): 411-412. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 18.
Zuo MZ, Huang YG, Ma WH и др. Рекомендации экспертов по интубации трахеи у тяжелобольных пациентов с новой коронавирусной болезнью 2019. Chin Med Sci J. 2020.
10.24920 / 003724
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 19.
Хуанг Й., Чен С., Янг З. и др. Вирусная нагрузка SARS ‐ CoV ‐ 2 в клинических выборках пациентов в критическом состоянии.Am J Respir Crit Care Med. 2020.
10.1164 / rccm.202003-0572LE
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 20.
Чжоу П, Ян X, Ван X и др. Вспышка пневмонии, связанная с новым коронавирусом, вероятно, происхождения летучих мышей. Природа. 2020; 579: 270-273. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 21.
Yu F, Du L, Ojcius DM, Pan C, Jiang S. Меры по диагностике и лечению инфекций, вызванных новым коронавирусом, ответственным за вспышку пневмонии, возникшую в Ухане, Китай. Микробы заражают. 2020; 22: 74-79.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 23.
Реускен С., Броберг Е.К., Хаагманс Б. и др. Готовность лабораторий и ответные меры на новый коронавирус (2019 ‐ nCoV) в экспертных лабораториях 30 стран ЕС / ЕЭЗ, январь 2020 г. Еврононадзор. 2020; 25 (6): 2000082
10.2807 / 1560-7917.ES.2020.25.6.2000082. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24.
Winichakoon P, Chaiwarith R., Liwsrisakun C, et al. Отрицательные результаты мазков из носоглотки и ротоглотки не исключают COVID ‐ 19. J Clin Microbiol.2020; 58: e00297–20.
10.1128 / JCM.00297-20. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25.
Лю Р., Хань Х., Лю Ф. и др. Положительный уровень выявления инфекции SARS-CoV-2 с помощью ОТ-ПЦР в 4880 случаях в одной больнице в Ухане, Китай, с января по февраль 2020 г. Clin Chim Acta. 2020; 505: 172-175. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 27.
Zhang H, Penninger JM, Li Y, Zhong N, Slutsky AS. Ангиотензин-превращающий фермент 2 (ACE2) как рецептор SARS-CoV-2: молекулярные механизмы и потенциальная терапевтическая мишень.Intensive Care Med. 2020; 46 (4): 586-590. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 28.
Hamming I, Timens W., Bulthuis MLC, Lely AT, Navis GJ, van Goor H. Распределение в тканях белка ACE2, функционального рецептора коронавируса SARS: первый шаг в понимании патогенеза SARS. J Pathol. 2004; 203: 631-663. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

оптимальных участков для отбора проб и методов обнаружения патогенов, которые могут вызывать внебольничные инфекции нижних дыхательных путей

Streptococcus pneumoniae .

Принято считать, что лучшим нестерильным респираторным образцом для выявления S. pneumoniae является мокрота. Чувствительность и специфичность посевов мокроты снижаются из-за заражения флорой, колонизирующей ВДП. Значение посевов мокроты в установлении бактериальной причины ИДП зависит от того, как собираются и обрабатываются образцы, и от того, наблюдается ли преобладающий бактериальный морфотип при окраске по Граму.

Выход посевов мокроты варьировал в широких пределах от 99% до> 90% для госпитализированных пациентов с пневмонией (35).Было обнаружено хорошее соответствие между результатами посевов мокроты и трахеального аспирата (41), особенно когда образцы мокроты хорошего качества промывают и культуры оценивают количественно (4). Дрю обнаружил S. pneumoniae в 94% случаев (29). / 31) образцов от пациентов с положительным посевом крови (35). Другие приходят к выводу, что в случаях бактериемической пневмококковой пневмонии S. pneumoniae может быть выделено в посеве мокроты только в 40–50% случаев при использовании стандартных микробиологических методов.Гнойную мокроту также можно получить у пациентов без легочной патологии (59), а в некоторых исследованиях прогностическая ценность посева мокроты низкая (3), даже всего 5% в случаях нетяжелой ВП (99). В одном исследовании (66), в котором у 19/48 (39,5%) пациентов с бактериемией был посев мокроты, было обнаружено совпадение результатов крови и мокроты для 9 (47%) пар, а в другом исследовании (3) для 25 / 51 (49,0%) пар. В отличие от широко распространенного мнения, теперь также ясно, что результаты посева мокроты убедительны тогда и только тогда, когда выделенный организм совместим с морфологией организма, присутствующего в> 90% лейкоцитов. в окраске по Граму (14, 35, 42, 53, 85).

Однако очень часто мокрота отсутствует у пациентов с ВП, особенно у детей, и берутся образцы из верхних дыхательных путей, хотя этим образцам нет места в диагностике ИДП, вызванных бактериальными патогенами, такими как S. pneumoniae , поскольку эти образцы не позволяйте различать носительство и инфекцию.

Mycoplasma pneumoniae .

Из-за своей требовательной природы, M. pneumoniae обычно не культивируется из респираторных образцов.Большинство исследований основано на ПЦР как на LRT, так и на URT образцах.

Gnarpe et al. (43) сравнили НПВ и ОПС для обнаружения M. pneumoniae с помощью ПЦР. Всего семь пациентов (10,6%) были положительными на M. pneumoniae , из них шесть были положительными на OPS и два были положительными на NPS. Эта разница не была статистически значимой — вероятно, из-за небольшого числа положительных образцов. Michelow et al. (69) исследовали оптимальное место и метод отбора проб URT для обнаружения M.pneumoniae с помощью ПЦР. Диагностические утилиты NPS и OPS оказались одинаково эффективными. Однако наибольшая диагностическая чувствительность была получена при объединении обоих сайтов. Резников и соавт. (82) сравнили NPA с OPS у детей и не обнаружили существенной разницы в обнаружении M. pneumoniae с помощью ПЦР. Они отметили, что NPA с большей вероятностью отторгались, чем OPS, из-за ингибиторов ПЦР или отсутствия респираторного эпителиального материала. Honda et al. (49) применили капиллярную ПЦР к мокроте, БАЛ и ОПС.Обзор различий в показателях положительных результатов ПЦР в зависимости от общего количества собранных образцов показал, что наиболее высокий уровень обнаружения у OPSs (28,6%). Однако были некоторые проблемы с правильным сбором OPS из-за неадекватного соскабливания поверхности слизистой оболочки, что приводило к ложноотрицательным результатам из-за сбора недостаточного количества ДНК. Таким образом, OPS представляются ценной альтернативой. С другой стороны, при объединении результатов двух исследований LRTI, проведенных Loens et al.(61, 62), у 25 пациентов были доступны как OPS, так и образец мокроты для анализа с помощью NAAT и посева. Для обоих методов обнаружения предпочтительными образцами были образцы мокроты. Räty et al. (79) собрали мокроту, образец NPA и OPS у 32 молодых призывников с пневмонией во время вспышки M. pneumoniae и применили ПЦР, а также пришли к выводу, что мокрота является лучшим образцом для обнаружения M. pneumoniae . Дориго-Зецма и др. также обнаружили, что образец мокроты с наибольшей вероятностью дает положительный результат ПЦР (62.5% по сравнению с 41% для носоглотки, 28% для OPS и 44% для полосканий горла (31). Превосходство мокроты в этих исследованиях согласуется с более ранними исследованиями, когда M. pneumoniae было обнаружено путем гибридизации зонда из мокроты и OPS (57) и путем обнаружения антигена в мокроте и NPA (56). Высокая диагностическая чувствительность ПЦР мокроты может быть объяснена большим количеством микроорганизмов M. pneumoniae в легочных альвеолах, чем на эпителии ВДП, что было продемонстрировано на экспериментально инфицированных хомяках Brunner et al.(13), которые количественно оценили микроорганизмов M. pneumoniae и в различных частях дыхательных путей путем культивирования. В этой модели количество КОЕ из легких было в 100–1000 раз выше, чем в культурах из горла. Коллиер и Клайд (22) извлекли от 10 2 до 10 7 КОЕ на мл из образцов мокроты, в то время как более поздние исследования оценили количество КОЕ в ОПС от 60 до 2000 на мл (55) по культуре и от 20 до 3830 КОЕ. / мл методом ПЦР (32). Следует проявлять осторожность при нанесении NAAT на образцы мокроты, поскольку ингибиторы в мокроте встречаются часто (63) и их трудно устранить.

В заключение, согласно современной методологии, если образец мокроты доступен, он может быть лучшим образцом для обнаружения M. pneumoniae с помощью посева и NAAT. NPS, NPA или OPS могут быть вторым лучшим вариантом для анализа NAAT.

Chlamydophila pneumoniae .

Выбор респираторного образца также может иметь большое влияние на чувствительность выделения C. pneumoniae и ПЦР. В исследовании лечения пневмонии с участием 260 ранее здоровых детей в возрасте от 3 до 12 лет было показано, что задняя часть носоглотки может превосходить горло в качестве источника изоляции организма.Из 34 детей, у которых было выделено C. pneumoniae , NPS были положительными для всех детей, но OPS были положительными только для 50% тех же детей (10). Во время вспышки C. pneumoniae Boman et al. (12) собрали мокроту, ОПС и НПВ у 116 пациентов с ИРО. При сравнении эффективности ПЦР, посева и обнаружения антигена для образцов из разных мест у 61 пациента, для которого были доступны все три респираторных образца, 20 пациентов были признаны инфицированными C.pneumoniae , для которых 7 NPS, 10 OPS и 20 образцов мокроты были признаны действительно положительными. Чувствительность ПЦР, посева и обнаружения антигена иммуноферментным анализом (ИФА) на НПВ составляла 35%, 30% и 30% соответственно. Чувствительность ПЦР, посева и обнаружения антигена с помощью EIA на OPS составляла 50%, 40% и 25% соответственно. Наконец, при изучении мокроты была обнаружена чувствительность 95%, 100% и 80% для ПЦР, посева и обнаружения антигена с помощью EIA, соответственно. Превосходство мокроты при обнаружении C.pneumoniae с помощью ПЦР было подтверждено Kuoppa et al. (58), которые исследовали образец мокроты, NPA и OPS у 35 пациентов с подозрением на инфекцию C. pneumoniae . C. pneumoniae копий ДНК варьировали от 6,0 × 10 2 до 6,7 × 10 6 / мл. Большинство всех образцов имело число копий ниже 1 × 10 4 / мл, но большая часть образцов мокроты содержала большие количества ДНК C. pneumoniae , в среднем 8,6 × 10 5 копий / мл. .Однако эти результаты противоречат результатам, полученным Verkooyen et al. (103), которые исследовали образцы мокроты, NPS, OPS и промывания горла с помощью ПЦР и посева 156 последовательно госпитализированных пациентов с ВП. Наивысшая чувствительность в их исследовании была получена при применении ПЦР к НПВ. Удивительно, но ни один из протестированных образцов мокроты не дал положительных результатов. Эти данные могут указывать на колонизацию организма в URT, а не на инвазивную инфекцию LRT. Gnarpe et al. (43) сравнили результаты ПЦР для C.pneumoniae из НПВ и ОПБ у 66 пациентов с пневмонией или ИВДП. Из 18 пациентов, положительных на C. pneumoniae , у 15 пациентов OPS был единственным положительным образцом, тогда как у 3 пациентов и OPS, и NPS дали положительный результат ПЦР. Gaydos et al. (40) сообщили от 10 до> 500 образующих включение единиц (IFU) / мл при выделении C. pneumoniae из NPS с использованием клеток HEp-2. Это соответствует дозе от 5 до 30 IFU / мл, сообщенной Roblin et al.после выделения из свежих образцов носоглотки пациентов с подозрением на инфекцию C. pneumoniae с использованием клеток HEp-2, оптимальной клеточной линии (84).

В заключение, мокрота или NPS могут быть предпочтительными образцами для обнаружения C. pneumoniae с помощью NAAT.

Респираторные вирусы.

Антигены наиболее распространенных респираторных вирусов, таких как грипп, респираторно-синцитиальный вирус (RSV), аденовирус и вирусы парагриппа, могут быть обнаружены с помощью DIF или коммерчески доступных EIA.Чувствительность этих тестов варьируется от 50% до> 90% (48, 92). Двумя основными проблемами при оценке различных методов антигенного обнаружения респираторных вирусов являются тип исследуемого образца и возраст пациентов. Большинство исследований, посвященных методам EIA с возможностью одновременного, хотя и не дифференцированного обнаружения вирусов гриппа A и B, показали важные различия в чувствительности в зависимости от типа исследуемого образца (24, 90). Так, в исследовании Schultze et al.(90) метод оптического иммуноанализа (FLU OIA) (Biostar, Inc., Боулдер, Колорадо) показывает общую чувствительность 71,8% в образцах у детей и 51,4% в образцах взрослых. Аналогичным образом Ковальчук и др. (24) сообщили, что при использовании того же метода самая высокая чувствительность была получена с назальным аспиратом (88,4%), а самая низкая чувствительность получена с OPS (62,1%). Чувствительность теста DIF ниже у взрослых и пожилых людей, чем у детей (94). Ранние исследования представили данные в пользу образцов NPA (38, 67) для выделения и обнаружения респираторных вирусов у детей.Frayha et al. (38) сравнили парные НПВ и НПВ от 125 детей с ИВДП ( n = 32) и / или ИДП ( n = 93) для вирусной диагностики с помощью посева и непрямого иммунофлуоресцентного анализа (IFA) и обнаружили более высокий уровень выделения из NPAs.Masters et al. (67) сравнивали НПВ с НПВ от детей с подозрением на бронхиолит для диагностики РСВ. Независимо от используемого метода обнаружения, NPA приводили к лучшему восстановлению RSV по сравнению с NPS. Это согласуется с результатами Mackie et al.(64). NPA, как правило, выявляли большее количество флуоресцирующих клеток на поле высокого увеличения, чем периназальные мазки. Три метода сбора образцов с использованием NPS, NS и NPA, использованных у 122 детей (2), также были оценены для обнаружения вирусов гриппа A и B с помощью экспресс-тест на антиген в педиатрической больнице. Вирусы гриппа A и B были обнаружены в 85% НПВ, 78% НП и 69% НПВ (от 3 до 5 мл). Относительно низкая чувствительность NPA по сравнению с мазками удивила авторов.Исследование, опубликованное Cazacu et al. (18), исследовавшие образцы NPA, собранные в отделении неотложной помощи большой детской больницы, подтверждают открытие Agoritsas et al. (2) о чувствительности, полученной с образцами NPA для быстрого обнаружения вируса гриппа. Возможно, что объем физиологического раствора, использованный в процедурах сбора промывок NP, разбавлял целевые антигены вируса гриппа для быстрых иммунологических методов, что приводило к снижению чувствительности. Этот эффект может не наблюдаться в DFA или анализах культур на вирус гриппа, потому что образцы для флуоресцентных анализов антител обычно центрифугируются для концентрирования клеточного материала, а в анализах культур используются относительно большие инокуляты.Это ограничение можно преодолеть, если материал NPA центрифугировать и осадок ресуспендировать в меньшем объеме физиологического раствора (2). Этот результат также может иметь отношение к быстрому тестированию на антиген мазков, разбавленных путем помещения в объем транспортной среды большего размера, чем необходимо для выполнения экспресс-теста. аспираты и мокрота) двумя методами обнаружения, мокрота и назальный аспират, соответственно, превосходят НПВ и ОПС (24).Пригодность мокроты для выделения вируса уже была описана в 1970-х годах (50), когда Horn et al. исследовали мокроту, НП и ОПС у 22 детей (от 5 до 15 лет) во время 72 приступов хрипящего бронхита. Двадцать девять (41%) изолятов были получены из 70 мокроты, 15 (23%) из 64 NS и 14 (22%) из 64 OPS. Чтобы определить роль типа образца, Weinberg et al. проанализировали чувствительность и специфичность трех наборов иммуноанализа для быстрого обнаружения вирусов гриппа A и B в образцах НПВ и НПВ и обнаружили, что чувствительность варьирует от 27 до 100% для НПВ и от 50 до 81% для НПВ (108).Авторы исследовали различия в характеристиках тестов в зависимости от возрастной группы и сообщили о тенденции к более низкой чувствительности в старшей возрастной группе по всем трем тестам. Ограничением этого исследования является неодинаковое количество образцов, испытанных разными методами. Однако более низкая чувствительность экспресс-тестов была подтверждена в исследовании, проведенном Ruest et al. (88) с использованием NPA от детей и взрослых, госпитализированных Reina et al. (81) разделили пациентов на две разные группы, как по возрасту (дети и взрослые), так и по типу клинического образца, который нужно проанализировать (NPA и OPS) при оценке теста Directigen Flu A + B на культуре клеточных флаконов.Еще раз кажется очевидным, что тип образца и, следовательно, присутствующая вирусная нагрузка, вероятно, определяет чувствительность различных методов обнаружения антигена к большинству респираторных вирусов (90). ИФА Directigen Flu A + B был проведен на NPS, NPA и OPS, собранных у жителей домов престарелых с клиническим подозрением на грипп во время семи вероятных вспышек (44). ПЦР выявила РНК вируса гриппа в 80% (68/85) образцов от 38/47 жителей.НПВ были одинаково чувствительны к НПВ с помощью ПЦР, но последний оказался непрактичным из-за общей основной инвалидности жителей. Кроме того, пороговые значения цикла ПЦР NPS были постоянно на 4,7 цикла ниже, чем в парных OPS, что указывает на 10–100-кратную чувствительность NPS. Чувствительность ПЦР и иммуноанализа была наивысшей для NPS, а положительные результаты редко были обнаружены в OPS и промывках NP. Более высокий уровень обнаружения вирусов гриппа A и B в НПВ был подтвержден, когда Smit et al.применили различные тесты как для NPS, так и для OPS (93). Превосходство NPA в обнаружении респираторных вирусов с помощью ПЦР было продемонстрировано в исследовании Gruteke (46): процент диагностированных эпизодов составил 84% для NPA по сравнению с 58. %, когда были доступны только трансназальные мазки или ОПС. При анализе парных NPA и NS на наличие респираторных вирусов с помощью посева, иммунофлуоресценции и мультиплексной ПЦР Sung et al. (97) обнаружили более высокую общую чувствительность обнаружения вирусов с образцами NPA, но при использовании ПЦР чувствительность, полученная с NPA, была значительно выше, чем полученная с NSs только для RSV.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *