Натрий бром электрофорез для детей: Электрофорез при заболеваниях крупных кровеносных сосудов (с раствором натрия бромида)

Электрофорез по Вермелю

Среди современных методов электролечения электрофорез занимает особое место. Во время этой процедуры используется совместное воздействие медикаментов и постоянного электрического тока. Применение электрофореза выглядит следующим образом:

• специальная гидрофильная прокладка пропитывается лекарством;
• прокладка размещается на теле пациента в области требуемого воздействия;
• на неё накладываются электроды с соответствующим зарядом

Лекарственные вещества, растворяясь, диссоциируют на ионы (заряженные частицы). При попадании таких растворов в электрическое поле ионы приобретают способность к перемещению. Благодаря этому они проникают в ткани организма, оказывая терапевтическое действие.

Основным эффектом от использования постоянного электрического тока является активизация обменных процессов в клетках и кровообращения в тканях. Кроме того, вещество, используемое для электрофореза, поставляется в патологический очаг в виде ионов, что значительно упрощает его попадание в ткани. В результате воздействие лекарственного средства локализируется, что значительно снижает риск появления аллергических реакций. Другое важное преимущество электрофореза – это создание «депо» препарата в тканях после процедуры и постепенное его поступление в кровь на протяжении целых 15-20 суток.

Метод электрофореза (гальванизации) по Вермелю

В современной физиотерапии существует несколько основных разновидностей электрофореза. Одна из них – метод электрофореза по Вермелю, также именуемый общей гальванизацией. Его главной особенностью является расположение электродов:

• прокладку большего размера, пропитанную лекарственным средством, размещают между лопатками, накладывая сверху электрод, соединяемый с аппаратом для гальванизации;
• две гидрофильные прокладки меньшего размера, поверх которых также размещаются электроды, накладываются на область икроножных мышц.

Сила тока при электрофорезе по Вермелю составляет 3—10 мА. Продолжительность самой процедуры – 20-40 минут, при этом в курсе физиотерапии может быть до 20 сеансов.

Во время общей гальванизации в организме происходят следующие процессы:

• изменяется проницаемость белковых субстанций;
• усиливается процесс осмоса и диффузии;
• наблюдается общая интенсификация обмена веществ.

В результате использования упомянутого метода организм пациента воспринимает поставляемый через кожу препарат гораздо эффективнее. К этому добавляется терапевтическое воздействие самих электрических токов, способствующих процессам регенерации.

Курс электрофореза по Вермелю может назначаться взрослым и детям при следующих патологиях:

• нарушения обмена веществ;
• заболевания, связанные с нарушениями периферического кровообращения;
• ослабление иммунитета;
• неврозоподобные состояния;
• вегетативно-трофические нарушения.

По результатам многочисленных исследований, после курса электрофореза по Вермелю у пациента наблюдались следующие реакции:

• общее улучшение состояния здоровья и самочувствия;
• активизация жизненных сил, повышение работоспособности;
• активизация защитных функций организма;
• улучшение кровообращения;
• противовоспалительный эффект и т.д.

Несмотря на эффективность электрофореза, для этого физиотерапевтического метода существует ряд противопоказаний. В частности, общую гальванизацию не рекомендуется проводить при:

• нарушении целостности кожных покровов в области воздействия;
• непереносимости постоянного электрического тока;
• нарушениях кожной чувствительности;
• острых воспалительных процессах любой локализации;
• склонности к кровотечению;
• некоторых заболеваниях сердечно-сосудистой системы и т.д.

Перед прохождением курса электрофореза по Вермелю в обязательном порядке требуется консультация нашего физиотерапевта.

Государственное бюджетное учреждение здравоохранения «Кемеровская городская клиническая поликлиника №5»

Бром – целебный яд | Журнал «Фармацевт Практик»

Наука

13/12/2017

Бром — это ядовитое вещество, при попадании повышенного количества которого в организм возможны серьезные последствия, вплоть до летального исхода. Тем не менее он является жизненно необходимым микроэлементом, а также в виде солей входит в состав многих болеутоляющих, седативных, антигистаминных и других препаратов. Поэтому врачам, назначающим лекарства, содержащие этот элемент, а пациентам, их использующим, следует проявлять особую осторожность

Измененное название

Выдающийся немецкий химик Юстас Либих был весьма близок к открытию брома, однако впервые получив это вещество, он принял его за смесь хлора и йода и таким образом «проглядел» столь важное открытие.

Судьба распорядилась так, что официальным первооткрывателем этого химического элемента в процессе экспериментов с золой морских водорослей стал Антуан Жером Балар — молодой, никому не известный преподаватель колледжа во французском городе Монпелье. Он назвал новое вещество муридом (от латинского слова «muria» — рассол) и 15 ноября 1825 г. отправил сообщение о своем открытии в Парижскую Академию наук, которое было заслушано 3 июля 1826 г. Специальная Комиссия под председательством знаменитого французского химика и физика Ж. Гей-Люссака воспроизвела эксперимент по получению нового вещества в соответствии с методикой, предложенной А. Баларом, и, изучив его свойства, 14 августа 1826 г. подтвердила, что совершено открытие. Однако для нового вещества Комиссия предложила другое название — бром (от греческого слова «бромос» — зловонный, дурно пахнущий). Причина этого заключалась в том, что в те времена соляная кислота называлась муриевой, а ее соли — муриатами, поэтому название, предложенное автором, могло привести к путанице и недоразумениям.

Читайте также: О янтаре и янтарной кислоте

За свое выдающееся открытие А. Балар был награжден медалью Лондонского Королевского Общества, которую присваивали только за крупные научные заслуги, а со временем возглавил кафедру химии в Сорбонне.

Серьезная опасность

Бром — это тяжелая (плотность брома более чем в три раза превышает плотность воды), маловязкая жидкость, красно-бурого оттенка, легко испаряющаяся при комнатной температуре в виде красного пара с выделением сильного неприятного запаха, похожего на запах хлора.

В высоких концентрациях бром оказывает разрушающее действие на организм. Отравление жидким бромом или его парами представляет серьезную опасность. У пострадавшего возникают головокружение, кровотечение из носа, раздражение слизистых оболочек, в более тяжелых случаях — спазм дыхательных путей и удушье. Также бром влияет и на лимфатические узлы, вызывая увеличение их объема и затвердение. При попадании на кожу бром приводит к зуду и раздражению. Если воздействие было длительным, то на коже образуются болезненные, очень медленно заживающие язвы.

Поэтому при работе с бромом следует строго соблюдать все необходимые меры безопасности.

Целебные свойства

Бромиды начали применять в медицине еще в XIX в. Прежде всего это натрия бромид и калия бромид, которые оказывают седативное действие. Влияние солей брома на высшую нервную деятельность было детально изучено выдающимся физиологом, лауреатом Нобелевской премии И.П. Павловым и его учениками при экспериментально вызванных неврозах у собак.

Согласно данным школы И.П. Павлова, основное действие бромидов связано со способностью концентрировать и усиливать процессы торможения в коре головного мозга, восстанавливая нарушенное равновесие между процессами торможения и возбуждения, особенно при повышенной возбудимости ЦНС. Действие бромидов зависит от типа высшей нервной деятельности и функционального состояния нервной системы. В экспериментальных условиях было установлено, что для достижения одинакового лечебного эффекта животным со слабым типом нервной деятельности требуются более низкие дозы бромидов, чем животным с сильным типом нервной деятельности.

Основным поставщиком брома является море, где и сосредоточены наибольшие запасы брома на планете

Кроме того, как правило, чем меньше выраженность функциональных нарушений в коре головного мозга, тем более низкие дозы необходимы для устранения этих нарушений.

Зависимость величины терапевтических доз бромидов от типа нервной деятельности нашла подтверждение и в клинических условиях. В связи с этим при подборе индивидуальной дозы необходимо учитывать тип и состояние нервной системы.

Читайте также: Золото в медицине: «вторая молодость» древнего металла

Бромиды обладают также противосудорожной активностью, но в качестве противоэпилептических средств в настоящее время их используют очень редко. Применяют их и при некоторых заболеваниях, связанных с нарушением кортико-висцеральной регуляции функций органов и систем (язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, начальные стадии артериальной гипертензии).

Суточная потребность человека в броме составляет 0,5-2 мг. Поступает бром в организм человека с пищей. Наиболее богаты этим микроэлементом бобовые, хлебопродукты и молоко.

Некоторые особенности фармакотерапии

Бромиды применяют внутрь в форме порошков и растворов. Натрия бромид, кроме того, вводятся и внутривенно. Дозирование бромидов значительно колеблется в зависимости от характера заболевания и типа высшей нервной деятельности. Пределы эффективных доз бромидов составляют от нескольких сотых до 1 г на прием, чаще всего — 0,1-1 г на прием три раза в день.

Еще одним способом введения является электрофорез с 2% раствором натрия бромида. Поскольку бром обладает успокаивающим действием, такой электрофорез применяют при воспалительных процессах, характеризующихся болевыми ощущениями; при боли, сопровождающей опоясывающий лишай.

В высоких дозах бром проявляет антагонизм с йодом и хлором, поэтому, принимая натрия бромид, бромкамфару, микстуру Равкина или микстуру Бехтерева, следует отказаться от употребления соленой пищи, так как ионы хлора поваренной соли могут свести на нет лечебное действие препаратов брома.

Каких-либо доказательств тому, что этот элемент отрицательно сказывается на мужском либидо, не существует. Он способен вызвать сонливость и устранить нервное возбуждение, при этом действуя одинаково на женщин и мужчин и не оказывая никакого специфического влияния на интенсивность сексуального желания у представителей сильного пола. Особое влияние на потенцию является лишь мифом

Необходимо учитывать, что особенностью солей брома является медленное выведение из организма (концентрация в плазме крови снижается наполовину примерно через 12 дней). Бромиды накапливаются в организме и могут стать причиной хронического отравления (бромизма), проявляющегося общей заторможенностью, апатией, нарушениями памяти, появлением характерной кожной сыпи (acne bromica), раздражением и воспалением слизистых оболочек и др. Для предупреждения явлений бромизма при лечении бромом рекомендован прием раз в неделю слабительных средств.

Специфическое поражение кожи — бромодерма — может наблюдаться у лиц с повышенной чувствительностью к брому. Врожденная бромодерма бывает у детей грудного возраста, матери которых принимали в период беременности бромиды.

«Живучий» миф

Довольно широко распространено мнение о том, что бром влияет на мужскую потенцию и его добавляют в пищу тем мужчинам, которые проходят срочную службу в армии, являются пациентами психиатрических клиник, отбывают наказание в тюрьме. Однако каких-либо доказательств тому, что этот элемент отрицательно сказывается на мужском либидо, не существует. Он способен вызвать сонливость и устранить нервное возбуждение, при этом действуя одинаково на женщин и мужчин и не оказывая никакого специфического влияния на интенсивность сексуального желания у представителей сильного пола. Особое влияние на потенцию является лишь мифом, который оказался весьма живучим.

Читайте также: У истоков науки токсикологии

Интересно отметить, что основным поставщиком брома является море, где и сосредоточены наибольшие запасы брома на планете. Содержание этого элемента в окружающей атмосфере, особенно в приморских районах, довольно высокое. Но никакого неблагоприятного влияния брома для мужчин, проживающих в данной местности, не отмечено.

Поскольку лекарства, содержащие бром, обладают мягким снотворным, успокаивающим воздействием, независимо от того, кто принимает данное средство — мужчина или женщина, не следует принимать их людям, работа которых требует повышенной внимательности (водителям, операторам, монтажникам-высотникам и т.д.). Кстати, по этой же причине, вопреки «мифу», о котором речь шла выше, в армии, где служат преимущественно мужчины, применение средств, содержащих бром, является нецелесообразным, учитывая уровень развития современной военной техники.

Последнее слово еще не сказано

Бром изучают не только химики и медики, но и представители других наук. Так, например, он оказался причастен к одному из важнейших открытий в области ядерной физики. Изискусственно полученных радиоактивных изотопов брома наиболее интересен бром-80, на примере которого академик И.В. Курчатов открыл явление изомерии атомных ядер. В настоящее время известно уже более 100 ядерных изомеров, а число искусственных изотопов брома достигло 16. Так, изотоп бром-82 наряду с кобальтом-60 и натрием-24 используют при лечении больных с некоторыми злокачественными опухолями.

Ныне доподлинно известно, что бром влияет на работу щитовидной железы, участвует в работе центральной нервной системы, деятельности клеток иммунной системы, активации пепсина, а также активизирует различные ферменты (амилазу, липазу и др.). Тем не менее ученые не считают бром до конца изученным химическим элементом, в частности, относительно его физиологической роли, поэтому следует полагать, что последнего слова в медицине он, по-видимому, еще не сказал.

Работа по изучению этого удивительного вещества продолжается, а если верить сообщениям некоторых СМИ, в одной из крупных фармацевтических фирм в настоящее время разрабатывается несколько препаратов, содержащих соединения брома, отдельные из которых уже проходят испытания и рассматриваются как новое поколение лекарств для лечения болезни Альцгеймера, рака и СПИДа.

Подготовил Руслан Примак, канд. хим. наук

“Фармацевт Практик” #12′ 2017

Поділіться цим з друзями!

Вам також буде цікаво це:

Бром и его действие на организм человека. Справка

При обычных условиях бром – тяжелая жидкость с резким запахом, в отраженном свете темно фиолетового, почти черного цвета, в проходящем – темно красного; легко образует желто бурые пары. Температура плавления  7,25 °С, температура кипения 59,2 °С.

Бром растворим в воде (3,58 г в 100 г при 20 °С), в присутствии хлоридов (химические соединения хлора) и особенно бромидов (химические соединения брома) растворимость повышается, а в присутствии сульфатов понижается.

По реакционной способности бром занимает промежуточное положение между хлором и йодом. С другими галогенами (фтором, хлором, йодом) образует неустойчивые соединения, отличающиеся высокой химической активностью.

С кислородом и азотом бром непосредственно не реагирует даже при повышенных температурах, его нестойкие соединения с этими элементами получают косвенными методами. Бром также не вступает в реакцию с углеродом.

При взаимодействии со многими металлами бром образует бромиды. К действию брома устойчивы тантал и платина, в меньшей степени — серебро, титан и свинец.

Бром – сильный окислитель.

Бром – довольно редкий в земной коре элемент. Его содержание в ней оценивается в 0,37х10 4 (примерно 50 е место).

Химически бром высоко активен и поэтому в свободном виде в природе не встречается. Входит в состав большого числа различных соединений (бромиды натрия, калия, магния и др.), сопутствующих хлоридам натрия, калия и магния. Собственные минералы брома – бромаргирит (бромид серебра) и эмболит (смешанный хлорид и бромид серебра) – чрезвычайно редки.

Источником брома служат воды горьких озер, соляные рассолы, сопутствующие нефти и различным соляным месторождениям, и морская вода. В настоящее время бром обычно извлекают из вод некоторых горьких озер, одно из которых расположено, в частности, в Кулундинской степи на Алтае.

Бром применяют при получении ряда неорганических и органических веществ, в аналитической химии. Соединения брома используют в качестве топливных добавок, пестицидов, ингибиторов горения. Широко известны содержащие бром лекарственные препараты.
Бром ядовит: токсическая доза для организма составляет 3 г, летальная – от 35 г.

При содержании брома в воздухе 0,001% наблюдаются раздражение слизистых оболочек, головокружение, кровотечение из носа. При концентрации 0,02% – удушье, спазмы, заболевание дыхательных путей. Попадание на кожу жидкого брома вызывает зуд, при длительном действии образуются медленно заживающие язвы.

Бром оказывает очень глубокое действие на лимфатические железы, в особенности на околоушную железу, яичники и яички. Он вызывает быстрое увеличение их в объеме и особого рода затвердение: пораженная железа тверда, как камень. Важная характеристика: поражаются железы только на левой стороне.

При внутреннем употреблении малых доз и очень высоких разведений бром производит своеобразное действие на головной и спинной мозг – он понижает интеллектуальную работоспособность и подавляет рефлекторную возбудимость, возбуждает сонливость.

При отравлении парами брома пострадавшего нужно немедленно вывести на свежий воздух. Для восстановления дыхания можно пользоваться тампоном, смоченным нашатырным спиртом, периодически поднося его к носу пострадавшего на короткое время. Дальнейшее лечение должно проводиться под наблюдением врача.

При бытовом отравлении бромом или бромидами, принятыми внутрь: дать пострадавшему молока с размешанным в нем яйцом, несколько раз вызвать рвоту, контролируя, чтобы рвотные массы не попали в дыхательные пути. Можно также дать выпить теплый крахмальный или мучной клейстер и активированный уголь. Внутрь для выведения брома из организма в течение дня необходимо принять 10 30 г поваренной соли в большом количестве воды (3 5 л). Дальнейшее лечение – симптоматическое.

Кожа, обожженная жидким бромом, промывается многократно водой.

Из-за высокой химической активности и ядовитости как паров брома, так и жидкого брома его следует хранить в стеклянной, плотно укупоренной толстостенной посуде. Склянки с бромом располагают в емкостях с песком, который предохраняет склянки от разрушения при встряхивании. Из за высокой плотности брома склянки с ним ни в коем случае нельзя брать только за горло (горло может оторваться, и тогда ядовитая жидкость окажется на полу).

Мерами индивидуальной защиты являются применение фильтрующих промышленных противогазов, резиновых перчаток, сапог, фартуков, строгое выполнение правил техники безопасности.

Материал подготовлен на основе информации открытых источников

Услуги

Нервные тики у детей. Как с ними бороться?

Тики – молниеносные непроизвольные сокращения мышц, чаще всего лица и конечностей (моргание, поднимание бровей, подергивание щеки, угла рта пожимание плечами, вздрагивания и пр.).

Причины тиков

Среди родителей и педагогов широко распространена точка зрения, что тиками страдают «нервные» дети. Однако, известно что «нервными» бывают все дети, особенно в периоды так называемого кризиса (периоды активной борьбы за самостоятельность), например, 3-х лет и 6-7-ми лет, а тики появляются только у некоторых детей.

Тики часто сочетаются с гиперактивным поведением и нарушением внимания, сниженным настроением (депрессией), тревожностью, ритуальным и навязчивым поведением (вырыванием волос или наматыванием их на палец, обгрызанием ногтей и пр.). Кроме того, ребенок с тиками обычно не переносит транспорт и душные помещения, быстро устает, утомляется от зрелищ и занятий, беспокойно спит или плохо засыпает.

Провокация тиков: психологический стресс

Если ребенок с наследственной предрасположенностью и неблагоприятным типом воспитания внезапно сталкивается с непосильной для него проблемой (психотравмирующий фактор), развиваются тики. Как правило, окружающие ребенка взрослые не знают, что послужило толчком для появления тиков. То есть, для всех, кроме самого ребенка, внешняя ситуация кажется обычной. Как правило, он не рассказывает о своих переживаниях. Но в такие моменты ребенок становится более требовательным к близким, ищет с ними тесного контакта, требует постоянного внимания. Активизируются невербальные виды общения: жесты и мимика. Учащается гортанное покашливание, которое сходно с такими звуками, как хмыкание, причмокивание, сопение и пр., возникающие во время задумчивости, смущении. Гортанное покашливание всегда усиливается при тревоге или опасности. Возникают или усиливаются движения в руках – перебирание складок одежды, накручивание волос на палец. Эти движения непроизвольны и бессознательны (человек может искренне не помнить, что он только что делал), усиливаются при волнении и напряжении, явно отражая эмоциональное состояние. Также может появляться зубной скрежет во сне, часто сочетаясь с ночным недержанием мочи и страшными снами.

Все эти движения, возникнув один раз, могут постепенно исчезнуть сами. Но если ребенок не находит поддержки у окружающих, они закрепляются в виде патологической привычки и затем трансформируются в тики.

Родители часто говорят, что, например, после тяжелой ангины их ребенок стал нервным, капризным, не хотел играть один, а уже потом появились тики. Нередко появлению тиков предшествуют острые вирусные инфекции или другие тяжелые заболевания. В частности, воспалительные заболевания глаз часто осложняются последующими тиками в виде моргания; длительные ЛОР-заболевания способствуют появления навязчивых покашливаний, посапываний, хмыканья.

Тики и поведенческие нарушения

У детей с тиками всегда отмечаются невротические нарушения в виде сниженного настроения, внутренней тревожности, склонности к внутреннему «самокопанию». Характерны раздражительность, утомляемость, трудность концентрации внимания, нарушения сна, что требует консультации квалифицированного психиатра.

Следует заметить, что в некоторых случаях тики являются первым симптомом более тяжелого неврологического и психического заболевания, которое может развиться спустя некоторое время. Поэтому ребенок с тиками должен быть тщательно обследован неврологом и психологом.

Тик от испуга

Допустим, совершенно здоровый, спокойный ребенок испугался чужой собаки, которая бросилась на него во дворе, или строгой учительницы, устроившей ему разнос перед всем классом. И теперь у него дергается глаз или мышца щеки, или он делает такие движения шеей, как будто освобождается от тесного воротничка. Это тик невротический. Несмотря на устрашающее название, невротический тик – простой вариант. Он возникает от внешней травмы – испуга, стресса, напряжения, и лечится врачом за пару недель, от силы пару месяцев. После лечения исчезает бесследно.

Как лечить

Во-первых, для того, чтобы убедиться, что ваш случай – всего лишь слабость нервной системы, а не симптомы серьезных душевных болезней. Врач может об этом судить, изучив среди каких других расстройств наблюдается тик. Например, неврозоподобные тики сочетаются с быстрой утомляемостью, раздражительностью, слезливостью, изменчивостью настроения, плохим сном. Надо исключить редкий тип таких навязчивых состояний, при которых тики с годами усложняются.

Во-вторых, когда диагноз станет ясен, врач назначит лечение. Для начала это могут быть физиопроцедуры: хвойные ванны (они очень хорошо действуют на 5–6-летних детей), успокоительный чай, электросон, электрофорез с бромом. Все это расслабляет нервную систему. Полезен массаж воротниковой зоны, он улучшает кровоснабжение мозга. Хорошо на ночь попить теплое молоко с медом – оно тоже успокаивает.

А родителям можно посоветовать:

Следите, чтобы ребенок высыпался Ему нужен щадящий режим и полноценный отдых в выходные дни Особенно берегите его нервную систему после болезни: даже пустячная простуда делает ее уязвимой еще на две недели И не обсуждайте его тики, чем больше о них говорите, тем ребенку становится хуже
Советы родителям

Не приставайте! Когда родители впервые замечают тики у ребенка, они начинают задавать ему вопросы: «Что это у тебя такое? Почему ты все время моргаешь?» Дети начинают искать оправдание своему состоянию и еще сильнее нервничают. Не акцентируйте на проблеме внимание всей семьи, а отправляйтесь к врачу.

Не корите себя за болезнь ребенка. Обычно родители, столкнувшись с проблемой детских тиков, чувствуют себя очень виноватыми: «Это я не уделял ему внимания. Это я не купила ему книгу, которую он у меня просил». Не стоит себя винить. Если у ребенка есть предрасположенность к тикам, рано или поздно они все равно бы появились.

Измените свой образ жизни. Задайте себе вопросы: правильно ли мы питаемся, все ли хорошо в отношениях между членами нашей семьи? Избегайте стрессов. Запишитесь в спортивный клуб всей семьей. Ребенку особенно полезны будут плавание и лыжи. Эти виды спорта укрепляют нервную систему и улучшают настроение. Постарайтесь сократить время общения детей с телевизором и компьютером до минимума.

Электрофорез области воротника («гальванический воротник»)по Щербаку.

«Гальванический
воротник» назначают детям старше двух
лет.

Один
электрод в форме шалевого воротника
площадью 300-600-800 см²
(в зависимости от возраста пациента)
располагают в области плечевого пояса
так, чтобы концы его покрывали надплечья
и ключицы. Второй электрод площадью
150-300 см²
(для подростков 400-600 см²)
помещают в пояснично-крестцовой области
(рис. 27). Сочетанное влияние гальванического
тока и лекарственного вещества при этом
методе улучшает кровоснабжение

Рис.17
Расположение электродов при проведении
гальванизации и электрофореза на
воротниковую зону.

головного
мозга и функциональное состояние
центральной нервной системы, снижает
мышечный тонус, ослабляет патологическую
постуральную активность.

Сила
тока и время возцействия увеличивают
через каждые две процедуры: силу тока
— на 1-2 мА (с 4-6 до 10-16 мА), время воздействия
— на 2 мин (с 6 до 16 мин), курс лечения 8- 15
процедур.

При
спастических формах ДЦП по этой методике
вводят:

• 5%-ный
раствор теоникола (ксантинола никотината),

• 1
%-ный раствор тропацина,

• 2-5%-ный
раствор хлорида кальция,

• 5%-ный
водныйраствор фенибута,

• 1-5%-ный
раствор новокаина,

• 0,5-1-2%-ный
раствор дибазола,

• 0,5-2%-ный
растворэуфиллина (биполярно),

• 2%-ный
раствор экстракта алоэ,

• 2%-ный
раствор экстракта алоэ с 5 10%о-ным
раствором меда.

При
спастических формах ДЦП рекомендуют
также электрофорез 1 %-ного раствора
дезоксипеганина гидрохлорида или 0,1
%-ного раствора прозерина (по 0,5-2 мл на
процедуру) с положительного электрода.
С отрицательнот раздвоенного электрода,
который в этом случае помещается на
икроножные мышцы, вводят 1-2 мл 1%-ного
раствора никотиновой кислоты.

При
гиперкинетической форме п методике
Щербака назначают электрофорез:

• 0,1
%-ного раствора атропина сульфата,

• 1
%-ного раствора аденозинтрифосфорной
кислоты,

• 2%-ного
раствора трентала,

• 1
%-ного раствора тропацина,

• 1-5%-ного
раствора витамина В6,

• 1
%-ного раствора серотонина,

• 1-5%-ного
раствора сернокислого магния,

• 2-5%о-ногораствора
бромида натри (калия).

При
атонически-астатической форме ДЦП
назначают электрофорез:

• 0,1
%-ного раствора прозерина,

• 2-3-5%-ного
раствора кислого фосфорнокислого
натрия,

• 1
%-ного раствора аденозинтрифосфорной
кислоты,

• 1
%-ного раствора серотонина,

• 2%
-ного раствора трентала,

• 0,5-1-2%-ного
раствора дибазола.

При
этой форме ДЦП проводят так же электрофорез
0,25-0,5-1 %-ного раствора галантамина в
количестве 0,5- 1 мл с положительного
электрода, расположенного в области
воротниковой зоны. С отрицательного
электрода, помещенного в области крестца,
вводят 2-4 мл 1 %о-ного раствора никотиновой
кислоты либо 0,5-2%-ного раствора эуфиллина.

При
всех формах ДЦП на область воротниковой
зоны назначают гальваногрязь.

Общий электрофорез (гальванизация) по Вермелю

Общий
электрофорез или гальванизацию по
Вермелю детям первых месяцев жизни
проводят с помощью электродов площадью
по 10 см²,
располагая один электрод в межлопаточной
области, другой — в области верхней
половины живота. Детям в возрасте от 6
месяцев до 2 лет электрод площадью 100-
150 см²
помещают в межлопаточной ооласти, два
других площадью по 50- 75 см²
— на передней поверхности бедер. Детям
старше 2 лет гальванизация и электрофорез
по методике Вермеля проводится
общепринятым способом: эзектрод площадью
100-250 см²
накладывают в межлопаточной области,
раздвоенный электрод такой же общей
площадью — в области икроножных мышц
(рис. 28).

Рис.
18 Расположение электродов при проведении
общей гальванизации и электрофореза
по методике Вермеля.

Лекарственные
вещества при электрофорезе по методике
Вермеля применяют в основном те же, что
и при электрофорезе воротниковой зоны,
причем введение некоторых лекарственных
веществ по методике Вермеля является
более эффективным. К ним относятся
прозерин, дезоксипеганин гидрохлорид,
дибазол, глутаминовая кислота, кислый
фосфорнокислый натрий, мумие, витамины
группы В.

Длительность
процедуры общего электрофореза по
Вермелю 10-15 мин, курс лечения составляют
10-12 процедур, которые проводят через
день или циклами: 3-4 процедуры ежедневно,
затем делают перерыв в 2-3 дня и ле- чение
продолжают. Маленьким детям уменьшают
время воздействия и количество процедур.

Продольный
электрофорез(гальванизация) позвоночника.

Больным
атонически-астатической формой ДЦП
назначают электрофорез прозерина по
продольной методике (рис. 29).

Рис.19
Расположение электродов вдоль позвоночника
— продольный электрофорез (гальванизация)
позвоночника.

PEDro — Результаты детального поиска

Используйте кнопку Назад в браузере, чтобы просмотреть другие результаты поиска или выбрать другую запись.

Результаты детального поиска

Оценка гемоглобинопатии | Лабораторные тесты онлайн

Источники, использованные в текущем обзоре

Обзор

2020 выполнен Сиднеем Уэббом Стриклендом, доктором философии, DABCC, директором LabCorp.

(2020) Первый тест ребенка Доступно на сайте https://www.babysfirsttest.org/newborn-screening/states. Дата обращения 23.04.2020.

(2014) Giardine B, Borg J, Viennas E, Pavlidis C, Moradkhani K, Joly P, Bartsakoulia M, Riemer C, Miller W., Tzimas G, Wajcman H, Hardison RC, Patrinos GP.Обновление базы данных HbVar вариантов гемоглобина человека и мутаций талассемии. Nucleic Acids Res . Янв; 42 (проблема с базой данных): D1063-9. Доступно в Интернете по адресу http://globin.cse.psu.edu/hbvar/menu.html. Дата обращения 23.04.2020.

Weatherall, ди-джей (2008). Гемоглобинопатии во всем мире: настоящее и будущее. Curr Mol Med 8 (7): 529-9.

Источники, использованные в предыдущих обзорах

Харменнинг Д. Клиническая гематология и основы гемостаза , пятое издание.Компания F.A. Davis, Филадельфия, 2009 г., главы 11 и 12.

Клиническая диагностика и лечение Генри с помощью лабораторных методов . 21-е изд. Макферсон Р., Пинкус М., ред. Филадельфия, Пенсильвания: Saunders Elsevier: 2007, стр. 520-522.

Кларк, В. и Дюфур, Д. Р., редакторы (2006). Современная практика клинической химии . AACC Press, Вашингтон, округ Колумбия, стр. 213-224.

(8 февраля 2012 г.) Медицинская энциклопедия MedlinePlus. Электрофорез гемоглобина. Доступно в Интернете по адресу http: // www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003639.htm. По состоянию на декабрь 2012 г.

(5 октября 2011 г.) Cheerva A. Alpha Thalassemia. Статья Medscape Review. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/206397-overview. По состоянию на декабрь 2012 г.

(3 января 2012 г.) Маакарон Дж. Серповидноклеточная анемия. Статья Medscape Review. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/205926-overview. По состоянию на декабрь 2012 г.

(16 мая 2012 г.) Болезнь гемоглобина С. Картера С.Справочная статья о Medscape. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/200853-overview. По состоянию на декабрь 2012 г.

(© Рочестерский университет, 2012 г.) Энциклопедия здоровья. Серповидно-клеточная анемия. Доступно в Интернете по адресу http://www.urmc.rochester.edu/Encyclopedia/Content.aspx?ContentTypeID=85&ContentID=P00101. По состоянию на декабрь 2012 г.

(© Рочестерский университет, 2012 г.) Энциклопедия здоровья. Альфа-талассемия. Доступно в Интернете по адресу http://www.urmc.rochester.edu/Encyclopedia/Content.aspx? ContentTypeID = 85 & ContentID = P00074. По состоянию на декабрь 2012 г.

(© Рочестерский университет, 2012 г.) Энциклопедия здоровья. Бета-талассемия. Доступно в Интернете по адресу http://www.urmc.rochester.edu/Encyclopedia/Content.aspx?ContentTypeID=85&ContentID=P00081. По состоянию на декабрь 2012 г.

(© 2012 Mayo Medical Laboratories) Каталог тестов. Оценка талассемии и гемоглобинопатии. Доступно в Интернете по адресу http://www.mayomedicallaboratories.com/test-catalog/Overview/84158 до. По состоянию на декабрь 2012 г.

(Опубликовано в Интернете в августе 2011 г.) Коне Э. Гемоглобинопатии. Dtsch Arztebl Int . 2011 август; 108 (31-32): 532–540. Доступно в Интернете по адресу http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3163784/. По состоянию на декабрь 2012 г.

(© Детская исследовательская больница Св. Иуды, 2013) Признак гемоглобина С. Доступно в Интернете по адресу http://www.stjude.org/stjude/v/index.jsp?vgnextoid=f1b0db6324d6f110VgnVCM1000001e0215acRCRD. По состоянию на февраль 2013 г.

(16 сентября 2011 г.) Центры по контролю и профилактике заболеваний.Серповидноклеточная болезнь, данные и статистика. Доступно в Интернете по адресу http://www.cdc.gov/NCBDDD/sicklecell/data.html. По состоянию на февраль 2013 г.

Мартин, Л. (31 января 2016 г., обновлено). Электрофорез гемоглобина. Энциклопедия MedlinePlus. Доступно на сайте https://medlineplus.gov/ency/article/003639.htm. Проверено 18.02.17.

Agarwal, A. et. al. (Обновлено за февраль 2017 г.). Гемоглобинопатии. ARUP Consult. Доступно на сайте https://arupconsult.com/content/hemoglobinopathies. Проверено 18.02.17.

Maakaron, J. et. al. (Обновлено 24 сентября 2016 г.). Анемия. Спасательные препараты и болезни. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/198475-overview#showall. Проверено 18.02.17.

Inoue, S. et. al. (Обновлено 12 апреля 2016 г.). Детская хроническая анемия. Спасательные препараты и болезни. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/954598-overview. Проверено 18.02.17.

(© 1995–2017). Каскад электрофореза гемоглобина, кровь. Клиника Мэйо Медицинские лаборатории Мэйо.Доступно в Интернете по адресу http://www.mayomedicallaboratories.com/test-catalog/Clinical+and+Interpretive/81626 Дата доступа 18.02.17.

Девкота, Б. (обновлено 16 января 2014 г.). Электрофорез гемоглобина. Спасательные препараты и болезни. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/2085637-overview#showall. Проверено 18.02.17.

Распространенность серповидно-клеточных заболеваний и малярийной инфекции у детей в возрасте 1–12 лет в регионе Вольта, Гана: исследование на уровне местных сообществ | Malaria Journal

Объекты исследования и население

Исследование проводилось в 3 из 25 районов региона Вольта (по одному в каждой из 3 экологических зон).Выбранными районами были муниципалитет Кета (южная зона), муниципалитет Хохо (средняя зона) и западный округ Крачи (северная зона) (рис. 1).

Рис. 1

Карта Ганы ( a ), на которой показан регион Вольта со всеми его районами ( b ). Участки исследования (муниципалитет Кета, муниципалитет Хохо и западный район Крачи) показаны белыми стрелками.

Население муниципалитета Кета составляет примерно 147 618 человек, более половины из которых (53,3%) проживают в городских районах.Годовое количество осадков составляет менее 1000 мм и является одним из самых засушливых на побережье Ганы. Население муниципалитета Хохо составляет около 167 016 человек, из которых 52,6% проживают в городских районах. Годовое количество осадков составляет 1592 мм. В Западном округе Крачи проживает 49 417 человек, из которых 81,8% коренных жителей проживают в сельской местности. Показана карта региона с указанием участков (рис. 1).

Передача малярии в регионе Вольта отражает национальную модель передачи и отличается в трех основных биоэкологических зонах Ганы.Кета находится в прибрежной зоне кустарников, Хохо — в средней полосе с переходной лесной или полуолиственной зоной, а Крачи — в зоне саванн на севере Гвинеи. Передача низкая у Кета, средняя у Хохо, а у Крачи высокая передача [23].

Исследование было проведено в декабре 2018 г., и исследуемая популяция состояла из детей в возрасте от 1 до 12 лет, проживающих в отобранных общинах в 3 отобранных районах. Критериями включения были дети указанного возраста, родители / опекуны которых дали согласие на участие в исследовании и проживали в районе исследования.Исключались дети, которые были серьезно больны и нуждались в медицинской помощи, и дети с серьезными врожденными дефектами, а также те, чьи родители / опекуны не дали согласия на участие в исследовании.

Дизайн исследования и выборка

Использовались перекрестные опросы на уровне сообществ. Была использована многоэтапная выборка, в которой был получен список всех районов в каждой зоне, и из каждой зоны случайным образом был выбран один район. Три сообщества были случайным образом выбраны из каждого из 3 выбранных районов, в результате чего получилось девять сообществ.Однако в ходе опроса одна община не подтвердила свою готовность участвовать в исследовании, поэтому были посещены 8 общин из 9. Интервью проводились и записывались с использованием полуструктурированных анкет для сбора базовой демографической информации о детях. В каждом из отобранных сообществ были зачислены все дети, соответствующие критериям, и их родители / опекуны. Антропологические измерения и биологические образцы были собраны у 938 участников.

Сбор данных и выборка

Родители / опекуны детей были опрошены с использованием предварительно протестированной полуструктурированной анкеты.Пятна высушенной крови (DBS) собирали на фильтровальной бумаге Whatman № 5 (GE Healthcare, Англия) для генотипирования Hb и ПЦР. Блоты фильтровальной бумаги сушили на воздухе и хранили с осушителем при 4ºC до использования. Некоторые капли крови были также собраны на двух матовых предметных стеклах: одно для микроскопии малярии (толстые и тонкие пленки), а другое — для скринингового теста на серповидность.

Измерение антропометрической и подмышечной температуры

Рост измеряли с помощью нерастягивающейся ленты с точностью до 1 см в соответствии со стандартом Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ).Измерение веса проводилось с минимальной одеждой и без обуви на весах с корректировкой нуля перед каждым измерением. Среднюю окружность плеча (MUAC) измеряли с точностью до 1 см с помощью нерастягивающейся ленты. Рост и состав тела исследуемой популяции оценивали с использованием Z-баллов антропометрических индексов роста к возрасту (HAZ), массы тела к возрасту (WAZ) и индекса массы тела к возрасту (BAZ). Программное обеспечение ВОЗ Anthroplus использовалось для преобразования, чтобы можно было сравнить участников исследования с эталонной популяцией [24].Поскольку рост стоя был измерен для всех детей из-за отсутствия соответствующего оборудования, для детей младше 24 месяцев (которые должны были измеряться в лежачем положении) программное обеспечение добавляло 0,7 см к их росту, чтобы получить расчетную длину. Все Z-баллы, которые не соответствуют флагам ВОЗ, таким образом, WAZ — от 6 до + 5; ЗТВ — от 6 до +6; и БАЗ — от 5 до + 5 были исключены из набора данных. Подмышечную температуру измеряли с помощью бесконтактного инфракрасного термометра (UNIONCARE, модель: IT-122).

Клиническая классификация

Согласно протоколу исследования лихорадка определялась как подмышечная температура ≥ 37.5 ^◦ C. Задержка в росте определялась как HAZ <-2SD, недостаточный вес как WAZ <-2SD, худоба как BAZ <-2SD, избыточный вес как BAZ> + 1SD и ожирение как BAZ> + 2SD (24). Все участники, которые были низкорослыми, с недостаточным весом, ожирением и худощавыми, были классифицированы как истощенные. Оперативное определение паразитемии было положительным при микроскопии, а клиническое определение малярии — любая паразитемия плюс лихорадка. Анемия была классифицирована с использованием Информационной системы ВОЗ о витаминах и минералах [25]. Классификация нарушений гемоглобина была разделена на нормальные (HbAA), серповидно-клеточные ((HbSS, HbSC, HbSF и HbSCF), серповидноклеточные признаки (HbAS) и «другие нарушения гемоглобина» (HbAC, HbAF, HbCC и HbACF), как показано. в дополнительном (Дополнительный файл 1: Таблица S1).В этом исследовании серповидно-клеточные признаки были сгруппированы отдельно от других серповидно-клеточных заболеваний, чтобы установить их индивидуальное влияние на анемию и малярию.

Определение уровня гемоглобина

Каплю крови укола пальца использовали для фотометрического определения уровня гемоглобина с помощью портативного анализатора гемоглобина (Hemocue, Швеция). Уровни гемоглобина были классифицированы с использованием Информационной системы ВОЗ по витаминам и минеральному питанию [25] с небольшими изменениями; все три различных классификации анемии; «Легкая», «Умеренная» и «Тяжелая» были объединены в одну группу «Анемия».

Скрининговый тест на серповидность и генотипирование гемоглобина

Участники исследования были проверены на серповидный статус с использованием метода метабисульфита натрия (Sigma Aldrich, США). Генотипирование гемоглобина выполняли с использованием метода электрофореза с изоэлектрическим фокусированием (IEF) на приборе для электрофореза Multiphor II (GE Healthcare, Little Chalfont, England). Контроли и образцы прогоняли при постоянной мощности 26 Вт (1200 В и 300 мА) в течение примерно 1 ч 30 мин. Пластинки с гелем фиксировали 10% трихлоруксусной кислотой, а затем помещали в лоток для промывки дистиллированной водой на ротационном шейкере на 12 мин.После 5 циклов стирки гель помещали в сушильный шкаф при 60 oC. Затем полосы, образованные отдельным гемоглобином, сравнивали с полосами соответствующих контролей и записывали.

Паразитемия под микроскопом

Как толстые, так и тонкие мазки крови были приготовлены на одном матовом предметном стекле, высушены на воздухе и окрашены 10% Гимза (тонкая пленка, фиксированная метанолом) для обнаружения паразитов как бесполой, так и половой стадии с помощью микроскопии в масляной иммерсии. (100-кратное увеличение). Плотность паразитов оценивали путем подсчета 200 лейкоцитов, а затем пересчитывали в количество паразитов на микролитр крови, принимая стандартное количество лейкоцитов 8000 / мкл [26].Отрицательный слайд — это слайд, на котором паразиты не наблюдались после исследования не менее 200 полей.

Экстракция ДНК паразита

ДНК паразита экстрагировали из перфорированного DBS с использованием протокола Chelex®-сапонина, как описано в другом месте [27,28,29] с небольшими изменениями. Таким образом, 50 мкл 10% сапонина и 1 мл забуференного фосфатом физиологического раствора (PBS при pH 7,2) добавляли к каждому перфорированному DBS в пробирке Эппендорфа и оставляли на ночь при 4 ° C. Фильтровальную бумагу дважды промывали в 1 мл PBS, а затем нагревали до 100 ° C в 150 мкл стерильной дистиллированной воды и 50 мкл 20% Chelex®-100 (Sigma-Aldrich, США) в течение 10 мин с периодическим встряхиванием.После заключительного этапа центрифугирования (13000 об / мин в течение 10 минут) экстрагированную ДНК переносили в 96-луночный планшет для ПЦР, покрывали герметиком для планшетов и хранили при -20 ° C для анализа ПЦР.

Молекулярное обнаружение

Plasmodium falciparum паразитов

Plasmodium falciparum было обнаружено с помощью вложенной ПЦР-амплификации, как описано ранее [30] с минимальными модификациями. Первичная реакционная смесь составляла 15 мкл и содержала 2 мкл ДНК, по 0,20 мкМ каждого праймера rPLU5 и rPLU6 (Eurofins Genomics, Германия), 200 мкМ каждого из четырех дезоксирибонуклеотидтрифосфатов (dNTP) (Promega Corporation, США), 3 мМ MgCl ₂ (Sigma-Aldrich, США) и 0.05 единиц / мкл Thermus aquaticus (Taq) ДНК-полимеразы (Sigma-Aldrich, США). Параметры цикла реакции включали начальную денатурацию при 94 ° C в течение 2 минут, денатурацию при 94 ° C в течение 1 минуты, отжиг при 55 ° C в течение 1 минуты 30 секунд (всего 30 циклов). Удлинение проводилось при 72 ° C в течение 3 минут, а окончательное удлинение при 72 ° C в течение 5 минут. Вторичная реакционная смесь была аналогична первичной. Однако 1 мкл первичного продукта ПЦР использовали в качестве матрицы ДНК и с набором праймеров rFal1 и rFal2, используемым при амплификации.Для реакции гнезда 2 использовались следующие условия цикла: начальная денатурация при 95 ° C в течение 1 мин, затем денатурация при 94 ° C в течение 1 мин, отжиг при 55 ° C в течение 1 мин 30 с (все для 30 циклов). ). Удлинение проводилось при 72 ° C в течение 2 минут, а окончательное удлинение при 72 ° C в течение 5 минут. Продукты ПЦР хранили при 4 ° C до анализа. Положительные контроли и отрицательный контроль без матрицы ДНК были частью каждого набора реакций.

Молекулярное обнаружение

Plasmodium malariae паразитов

Обнаружение Plasmodium malariae было выполнено в соответствии с протоколом Padley и его коллег [31] с некоторыми небольшими изменениями.Один обратный праймер (Prv) с консервативными областями для всех четырех видов Plasmodium использовали с видоспецифическим прямым праймером для P. malariae (Pm-F). Реакционная смесь содержала 0,20 мкМ каждого олигонуклеотидного праймера, 200 мкМ каждого dNTP, 3 мМ MgCl ₂ и 0,05 единиц / мкл ДНК-полимеразы Taq. В качестве матрицы использовали два микролита ДНК в общем реакционном объеме 15 мкл. Условия цикла были следующими: начальная денатурация при 95 ° C в течение 5 мин, денатурация при 95 ° C в течение 30 с, отжиг при 56.2 ° C в течение 30 с (35 циклов). Удлинение проводилось при 72 ° C в течение 1 мин, а окончательное удлинение при 72 90–150 o 90 151 C в течение 5 минут. Продукты ПЦР хранили при 4 ° C до анализа. Положительные контроли и отрицательный контроль без матрицы ДНК были частью каждого набора реакций.

Анализ продуктов ПЦР

Продукты ПЦР разделяли с использованием 2% агарозного геля, окрашенного электрофорезом бромистого этидия 0,5 мкг / мл. Затем цифровые изображения анализировали с помощью Gel Dock (VILBER, Франция). Гелевые фотографии оценивали путем визуального сравнения фрагментов ДНК для отдельных образцов и оценивали с использованием лестничного маркера ДНК из 100 пар оснований (п.о.) (Promega Corporation, США).Образец считался положительным, если продукт размером 205 пар оснований был обнаружен для P. falciparum и 412 пар оснований был обнаружен для P. malariae.

Статистический анализ

Собранные данные были дважды проверены перед вводом в Epi Data версии 3.1 (Оденсе, Дания). Затем они были экспортированы в Stata версии 15.0 (StataCorp LLC, Техас, США) для анализа. Частота получения различных результатов выражалась в процентах. Описательные данные были суммированы как средние или пропорциональные. Демографические характеристики (возрастная группа, пол, этническая принадлежность и район), маляриометрические и антропометрические параметры, а также анемия сравнивались между классификациями гемоглобина с использованием хи-квадрат или точных тестов Фишера (когда частота была меньше 5).Для проверки силы наблюдаемой связи были выполнены двоичные, а также многомерные логистические регрессии. Статистическая значимость была определена как p <0,05.

Метилирование ДНК промоторов лептина и адипонектина у детей снижается за счет сочетанного наличия ожирения и инсулинорезистентности

Бромид этидия, загрузочный буфер и ДНК-лестница: визуализация ДНК и определение ее размера — видео и стенограмма урока

Бромид этидия

Бромид этидия представляет собой молекулу, обычно используемую для визуализации ДНК в экспериментах по электрофорезу в агарозном геле.Он как связывается с ДНК, так и флуоресцирует при правильных условиях. Бромид этидия известен как интеркалирующий агент. Плоская структура бромистого этидия позволяет ему вставлять или вставлять между азотистыми основаниями молекулы ДНК. Это взаимодействие особенно полезно из-за второй характеристики бромида этидия. Под воздействием ультрафиолета бромид этидия флуоресцирует. Таким образом, это химическое вещество обеспечивает как средство маркировки молекул ДНК, так и средство их визуализации.

Однако учтите, что любая молекула, которая связывается или каким-либо образом изменяет молекулярную структуру ДНК, может быть опасной для живого организма.Хотя есть некоторые споры о точном характере риска для здоровья, связанного с воздействием бромистого этидия, большинство организаций и агентств считают это риском. Многие считают, что из-за интеркалирующей характеристики бромистого этидия он представляет мутагенный риск. Однако при наличии строгих протоколов безопасности бромид этидия продолжает оставаться одним из наиболее распространенных методов визуализации нуклеиновых кислот в экспериментах с электрофорезом в агарозном геле.

Буфер загрузки

Что ж, это конец истории, верно? Агароза будет разделять молекулы ДНК в зависимости от размера, а бромид этидия будет маркировать молекулы, чтобы мы могли визуализировать их в ультрафиолетовом свете.Не совсем так. ДНК, как и многие биологические молекулы, бесцветна. Чтобы замкнуть электрическую цепь, гель необходимо окунуть в солевой раствор, называемый буфером для электрофореза. Вода тоже бесцветная. Видите проблему?

Если ДНК бесцветна и буфер для электрофореза, омывающий агарозный гель, также бесцветен, как мы узнаем, вставили ли мы образец ДНК в лунку геля или нет? Мы могли бы добавить бромид этидия и выполнить весь протокол в ультрафиолетовом свете, но это кажется излишне опасным для нашего здоровья.Ответ заключается в том, что нам нужно использовать другое решение, называемое загрузочным буфером . Загрузочный буфер добавляется к образцу ДНК, чтобы придать ему цвет, видимый невооруженным глазом.

Обратите внимание, что мониторинг развития молекул красителя в геле также позволит нам определить, когда протокол завершен. Фантастика. Теперь я могу сказать, правильно ли я вставил наш образец ДНК в лунку. Но есть еще одна проблема. ДНК — водная молекула.

Это означает, что он гидрофильный и растворяется в воде.Если наши образцы ДНК растворятся в воде буфера для электрофореза, молекулы ДНК будут равномерно распределены по всему раствору и не будут оставаться локализованными в данной лунке.

Таким образом, загрузочный буфер обеспечивает еще одну функцию при гель-электрофорезе. Загрузка буфера также увеличивает плотность образца. Напомним, что более плотные объекты тонут, поэтому добавление загрузочного буфера к образцам ДНК позволит молекулам ДНК погрузиться в лунки геля при подготовке к гель-электрофорезу.

Лестница ДНК

Хотя качественная визуализация молекул ДНК, безусловно, полезна, эксперименты часто требуют гораздо более точного анализа размера фрагментов ДНК. Вместо того, чтобы сделать вывод о том, что первый фрагмент больше, чем второй, ученым часто нужно сделать вывод, что первый фрагмент составляет три килобазы, а второй — одну килобазу. Чтобы определить размер фрагмента ДНК, ученые используют так называемую лестницу ДНК. Лестница ДНК представляет собой раствор, состоящий из фрагментов ДНК известной длины.

Поскольку размер каждой полосы в лестничном растворе ДНК известен, их можно использовать для определения размера фрагментов ДНК в экспериментальных образцах. Рассмотрим следующий эксперимент. Кусочек линейной ДНК размером четыре килобазы был переварен рестрикционным ферментом. Лестницу ДНК, неразрезанную ДНК и образцы расщепленной ДНК запускали на агарозном геле.Видите, как полосы лестницы ДНК служат точкой сравнения экспериментальных образцов? Поскольку нам известны размеры фрагментов ДНК в каждой полосе, мы можем подтвердить, что размер неразрезанного фрагмента составляет четыре килобазы, потому что он совпадает с четырехкилометровым фрагментом в образце лестничной клетки ДНК.

Мы также можем определить, что рестрикционный фермент разрезал этот фрагмент на фрагменты с тремя и одним килобазами, сравнивая полосы на полосе переваренного образца с полосами на лестничной дорожке ДНК. Для полос, которые не идеально совпадают с одной из полос в лестнице ДНК, размер можно оценить невооруженным глазом или определить с помощью математического расчета.Таким образом, ученые могут использовать гель-электрофорез для проверки или определения размера фрагментов ДНК.

Краткое содержание урока

Итак, электрофорез в агарозном геле представляет собой метод разделения биологических молекул с помощью электрического тока. Бромид этидия — это молекула, обычно используемая для визуализации ДНК в экспериментах по электрофорезу в агарозном геле. Он вставляется между азотистыми основаниями ДНК и флуоресцирует в УФ-свете.

Буфер для загрузки — это раствор, добавляемый к образцу для электрофореза для придания ему цвета и плотности.Лестница ДНК представляет собой раствор, состоящий из молекул ДНК известной длины, который используется для определения размера фрагментов ДНК в экспериментальных образцах.

Результаты обучения

После просмотра этого урока вы должны уметь:

• Определить электрофорез в агарозном геле, лестницу ДНК и загрузочный буфер
• Напомним атрибуты бромистого этидия
• Анализировать размеры образцов ДНК в экспериментах по электрофорезу

Электрофорез в агарозном геле — Academic Kids

От академических детей

Отсутствует изображение
DNA_Agarose_Gel_Electrophor.jpg

Цифровая распечатка электрофореза в агарозном геле для вставки плазмидной ДНК cat

Электрофорез в агарозном геле — это метод, используемый в молекулярной биологии для разделения цепей ДНК по размеру и определения размера разделенных цепей путем сравнения с цепями известной длины. Он действует по механизму, подобному просеиванию молекул через сито; электрическое поле используется для перетаскивания отрицательно заряженных молекул ДНК через матрицу геля, и более короткие молекулы ДНК движутся быстрее, чем более длинные, поскольку они могут легче проскальзывать через гель.Белки также могут быть разделены из-за разного заряда и размера. Его можно использовать для разделения фрагментов ДНК от 50 пар оснований до нескольких мегабаз. Большие молекулы ДНК могут двигаться дальше только в процессе, называемом «рептацией», и их труднее отделить. Как правило, чем ниже концентрация агарозы, тем больше идеальный размер молекулы, которая должна быть разделена до 750 Кбайт. Недостатком более низких концентраций является длительное время работы (иногда дни) и проблема обращения с хрупким гелем.На скорость миграции влияет ряд факторов. Концентрация агарозы уже упоминалась. Конформация ДНК также является важным фактором и демонстрируется тремя формами плазмиды: суперспиральной, разорванной и линейной. Каждая форма работает по-своему, сверхспиральная — самая быстрая, а линейная — самая медленная. Присутствие бромистого этидия (EtBr) в геле заставляет ДНК работать медленнее из-за способности EtBr интеркалировать и разматывать ДНК. Напряжение также является фактором миграции и может быть таким высоким только до снижения разрешения (~ 5-8 В / см).Загрузочные буферы добавляются к ДНК для ее визуализации и осаждения в лунке геля. Отрицательно заряженные индикаторы отслеживают положение ДНК. Используются бромфеноловый синий и ксилолцианол FF, длина которых составляет около 300 пар оснований и 4 килобайт соответственно. Существует ряд буферов, используемых для электрофореза в агарозе, но я упомяну только два: трисацетат EDTA (TAE) и борид натрия (SB). TAE имеет самую низкую буферную емкость, но обеспечивает лучшее разрешение. Это означает более низкое напряжение и больше времени, но более качественный продукт.SB является относительно новым и неэффективен при разрешении фрагментов размером более 5 КБ, но он имеет самую высокую емкость буферизации, допускающую напряжения до 350 В ⁵ , ⁶ .

Материал

Для электрофореза в агарозном геле необходимо несколько элементов:

• ДНК, подлежащая разделению.
• Лестница ДНК, смесь фрагментов ДНК (обычно 10-20) известного размера. Размер разделенных цепей ДНК определяется путем сравнения их относительного положения с положением цепей ДНК в лестнице ДНК.В продаже имеется несколько лестничных смесей ДНК.
• Буфер, обычно TBE или TAE 0,5x, pH 8,0
• Агароза
• Бромид этидия (5,25 мг / мл в H ₂ O)
• Нитриловые перчатки
• Цветной маркер, содержащий краситель с низкой молекулярной массой, такой как «бромфеноловый синий» (для отслеживания хода электрофореза) и глицерин (чтобы сделать раствор ДНК более плотным, чтобы он погрузился в лунки геля).
• Стойка для геля
• «гребешок» (обычно вырезается из листа тефлона)

Препарат

Есть несколько методов приготовления агарозных гелей.Здесь показан общий пример. Другие методы могут отличаться в зависимости от используемой системы буферизации, размера загружаемого образца, общего объема геля (обычно толщина сводится к минимуму, а длина и ширина варьируются по мере необходимости), а также от того, готовится ли гель по горизонтали или по вертикали. (подавляющее большинство агарозных гелей, используемых в современной молекулярной биологии, готовятся и работают горизонтально).

1. Сделайте 1% раствор агарозы в 0,5x TBE. Если вы анализируете небольшие нити ДНК, поднимитесь до 2%.Используйте 15-70 мл, в зависимости от размера геля.
2. Раствор вскипятить, желательно в микроволновке.
3. Дайте раствору остыть примерно до 60 ° C при комнатной температуре. Во время охлаждения перемешайте раствор.
4. Добавьте 1 мл бромистого этидия на каждые 10 мл раствора геля. С этого момента надевайте перчатки, бромистый этидий является мутагеном (рекомендуются нитриловые перчатки) ! Некоторые исследователи предпочитают не добавлять бромид этидия в сам гель, вместо этого вымачивая гель в растворе бромида этидия после пробежки.
5. Перемешайте раствор для диспергирования бромистого этидия, затем залейте его в штатив для геля.
6. Вставьте гребешок с одной стороны геля, примерно в 5-10 мм от границы геля.
7. Когда гель остынет и затвердеет, снимите гребешок. Отверстия, которые остались в геле, — это щели.
8. Поместите гель вместе со штативом в камеру с 0,5x TBE. Убедитесь, что гель полностью покрыт TBE, а прорези находятся на электроде, который будет иметь отрицательный ток.
9. Добавьте цветной маркер в Лестницу ДНК, как правило, уже окрашено.

для получения дополнительной информации о безопасности бромистого этидия см. Ссылки ¹ , ² , ³

для получения информации об альтернативах бромистому этидию см. Ссылки ² , ⁴

Процедура

После приготовления геля с помощью микропипетки введите около 25 мкл окрашенной ДНК (также настоятельно рекомендуется использовать лестницу ДНК).Закройте крышку камеры для электрофореза и подайте ток (обычно 100 В в течение 30 минут с 15 мл геля). Цветной краситель в лестнице ДНК и образцах ДНК действует как «передняя волна», которая движется быстрее, чем сама ДНК. Когда «передняя волна» приближается к концу геля, ток прекращается. Известно, что можно визуализировать ДНК (окрашенную бромистым этидием) с помощью УФ-света.

Отсутствует изображение
Agarose_Gel_Electrophoresis.png

Рисунок 1: Схематическое изображение процесса электрофореза, см. Текст для описания шагов

шагов:

1. Гель агарозы с тремя прорезями (S).
2. Введение лестницы ДНК в первый слот.
3. ДНК-лестница введена. Ввод образцов во второй и третий слот.
4. Подается ток. ДНК движется к положительному аноду из-за отрицательных зарядов на ее фосфатной основе.
5. Маленькие нити ДНК движутся быстро, большие нити ДНК медленно движутся через гель. ДНК обычно не видна во время этого процесса, поэтому маркерный краситель добавляется к ДНК, чтобы ДНК полностью не выходила из геля.Маркер-краситель имеет низкую молекулярную массу и мигрирует быстрее, чем ДНК, поэтому до тех пор, пока маркер не пройдет мимо конца геля, ДНК все еще будет в геле.
6. ДНК распределена по всему гелю. Процесс электрофореза окончен.

Осветите гель ультрафиолетовой лампой (обычно помещая ее в световой короб), чтобы увидеть полосы ДНК — бромид этидия флуоресцирует розовым цветом в присутствии ДНК. Надевайте защитные очки! Полосу ДНК также можно вырезать из геля и затем растворить для извлечения очищенной ДНК.

Список литературы

Примечание 1: States, Kelly M. (2003). Бромид этидия в Мусорная бумага: Ежемесячный отчет по утилизации опасных отходов ( http://web.princeton.edu/sites/ehs/chemwaste/WastePaper/0302.htm ). Проверено 31 января 2005.
Примечание 2: Управление биологической безопасности, Univ. Висконсина (Мэдисон) (2003 г.). Бромид этидия: альтернативы и безопасное обращение в BioSide Lines: Информационный бюллетень Управления биологической безопасности UW ( http: // www2.fpm.wisc.edu/biosafety/bioside_lines/bioside_lines_04_2003.htm ). Проверено 31 января 2005.
Примечание 3: Здоровье и безопасность окружающей среды в Институте исследований Скриппса (1999). БУДУТ ЛИ ВАШИ ПЕРЧАТКИ ЗАЩИТИТЬ? in Environmental Health & Safety: Second Quarter 1999 ( http://www.scripps.edu/researchservices/ehs/News/safetygram/sg1999/sg1999b.html ) Дата обращения 31 января 2005 г.
Примечание 4: Мэдден, Дин (2004 [последнее изменение]). Более безопасные пятна для ДНК ( http: // www.bioscience-explained.org/EN1.2/schollar.html ). Проверено 31 января 2005.
Примечание 5: Sambrook J, Russel DW (2001). Молекулярное клонирование: лабораторное руководство, 3-е изд. Лабораторный пресс Колд-Спринг-Харбор. Колд-Спринг-Харбор, штат Нью-Йорк.
Примечание 6: Brody JR, Calhoun ES, Gallmeier E, Creavalle TD, Kern SE (2004). Сверхбыстрый электрофорез ДНК и РНК в агарозе с высоким разрешением с использованием проводящих сред с низкой молярностью. Биотехники. 37: 598-602.
[1] ( http://www.biotechniques.com/default.asp? page = article_archive & subsction = article_display & id = 101200415 & prevpage = article_archive )

См. Также

ja: ア ガ ロ ー ス ゲ ル 電 気 泳 動

Несовершеннолетние, участвующие в исследовательской или клинической деятельности

I. Возрастные ограничения

1. Лицам младше 12 лет вход в лаборатории запрещен.
2. Лица в возрасте от 12 до 15 лет не могут входить в лабораторию Йельского университета или участвовать в образовательных исследованиях или клинической деятельности, за исключением случаев, когда эта деятельность является утвержденной программой для детей и молодежи, которая может быть (i) частью организованной лабораторной экскурсии, проводимой с разрешения факультета член, ответственный за лабораторию и заведующий отделом или их назначенное лицо, или (ii) одноразовая образовательная демонстрация или демонстрация набора.Спонсирующий преподаватель будет нести ответственность за надлежащий надзор и за обеспечение посетителей соответствующими средствами индивидуальной защиты. Поездки должны находиться под постоянным наблюдением во время пребывания в Йельском университете, и участники тура не могут участвовать в каких-либо исследовательских / клинических мероприятиях.
3. Лица в возрасте 16 или 17 лет могут запросить возможность участвовать в утвержденных образовательных исследованиях и / или клинических мероприятиях под индивидуальным наставничеством и контролем спонсирующего преподавателя, как описано ниже.

II. Требования к работе с несовершеннолетними 16-17 лет в исследовательской / клинической деятельности

1. Спонсирующий преподаватель должен подать заявку, включая соответствующий план надзора, через EHS Integrator. Подайте заявку здесь: EHS Integrator
2. Спонсирующий преподаватель должен соблюдать все соответствующие требования безопасности и соответствия, а также придерживаться утвержденного плана надзора.
3. Преподавательский преподаватель должен действовать как непосредственный руководитель несовершеннолетнего или назначить другого преподавателя или сотрудника для выполнения этой роли.И преподаватель-спонсор, и назначенный руководитель, если таковой имеется, должны пройти проверку биографических данных, прежде чем несовершеннолетний сможет приступить к предлагаемому исследованию или клинической деятельности. Информацию об этом требовании можно найти на https://programs-minors.yale.edu/FAQs-Labs.
4. В ходе исследования или клинической практики несовершеннолетние не могут (i) находиться одни в исследовательских, клинических или офисных помещениях Йельского университета; (ii) один на один, вне поля зрения других, с преподавателем или сотрудником, не прошедшим проверку биографических данных; или (iii) присутствовать в исследовательских, клинических или офисных помещениях Йельского университета по выходным или вне обычных часов с понедельника по пятницу технических сотрудников спонсирующего преподавателя.
5. Несовершеннолетний, чье постоянное место жительства находится за пределами ежедневного коммутирующего расстояния от Йельского университета, должен предъявить доказательства того, что, участвуя в исследовательской / клинической деятельности в Йельском университете, он будет проживать (1) в пределах ежедневного расстояния до Йельского университета и (2) со своими родителями или законными опекун.
6. Медицинские услуги в Yale Health или где-либо еще не входят в эту программу. Таким образом, несовершеннолетние должны предоставить подтверждение медицинского страхования в районе Нью-Хейвена на период, когда они будут участвовать в исследовательской / клинической деятельности в Йельском университете.
7. Все предлагаемые исследования или клиническая деятельность, проводимая несовершеннолетними в университетах, должны соответствовать требованиям или ограничениям, налагаемым проректором или его назначенным лицом, департаментом или школой, Управлением по охране окружающей среды, здоровья и безопасности (EHS) и, при необходимости, другими подразделениями, отвечающими за соблюдение нормативных требований. , включая Программу защиты научных исследований на людях (HRPP), Институциональный комитет по уходу и использованию животных (IACUC) и HIPAA. Спонсирующие преподаватели могут наложить дополнительные ограничения, которые они сочтут необходимыми для безопасности несовершеннолетних и других сотрудников лаборатории или рабочего подразделения.
8. Поддерживающий преподавательский состав должен обеспечить, чтобы несовершеннолетний не входил в рабочую зону до завершения ВСЕГО необходимого обучения, и гарантировать, что несовершеннолетний постоянно находится под надлежащим наблюдением квалифицированного научного руководителя.
9. Спонсирующий преподаватель должен получить подписанные формы согласия родителей и освобождение от ответственности для всех участников, прежде чем разрешить несовершеннолетнему участвовать в любых исследованиях / клинических мероприятиях, связанных с Йельским университетом. Спонсирующий преподавательский состав, директор программы или назначенное лицо должны обеспечить загрузку этих документов в EHS Integrator.
10. Спонсирующий преподаватель должен решить все нерешенные проблемы с соблюдением нормативных требований, о чем сообщает EHS Integrator по электронной почте, до дальнейшей обработки второстепенной заявки.
11. Спонсирующий преподаватель должен организовать своевременную встречу в Йельском университете для несовершеннолетнего через офис соответствующего отдела. Лицам, одобренным для участия, будет присвоен тип классификации «Исследования / клинические исследования несовершеннолетних учащихся» в системе спонсорской идентификации (несовершеннолетние, участвующие в исследованиях или клинических мероприятиях, не могут быть включены в Workday).Для того, чтобы несовершеннолетний мог пройти соответствующие курсы обучения, потребуется удостоверение личности Йельского университета.
12. Цель участия несовершеннолетнего в исследовательской / клинической деятельности в Йельском университете состоит в том, чтобы познакомить учащегося с академической областью обучения и исследований и / или предложить несовершеннолетнему возможность наставничества. Научно-исследовательский / клинический опыт в Йельском университете предназначен исключительно для образовательных целей несовершеннолетнего и не представляет собой трудовых отношений между несовершеннолетним и Йельским университетом.Несовершеннолетний не может получать заработную плату или другую компенсацию за свою образовательную деятельность в Йельском университете. Участник может получить единовременное пособие для участия в мероприятии.

III. Запрещенные или ограниченные материалы или процессы для несовершеннолетних в возрасте 16 или 17 лет

1. Несовершеннолетние в возрасте 16 или 17 лет, которые занимаются исследовательской / клинической деятельностью не могут работать с любым из следующих материалов:

Биологические материалы:

• Патогены человека, зарегистрированные в штате Коннектикут DPH

• Приматы, не относящиеся к человеку

• Требуемые разрешения на патогены или материалы для животных или растений

• Токсины биологического происхождения с ЛД50 <100 мкг / кг массы тела

Химические материалы:

• Высокотоксичные химические вещества — LD50 <300 мг / кг перорально-крыса (например,грамм. - Тетроксид осмия, акрилонитрил, ацетонитрил, азид натрия) Пирофорные материалы

• Взрывчатые вещества и высокореактивные материалы

• Плавиковая кислота

• Контролируемые вещества

Излучение:

• Радиоактивные материалы — закрытые и открытые источники

• Рентгеновское оборудование

• Лазеры с открытым лучом — класс 3b или выше