Диагноз холера: Как избежать заражения холерой

Содержание

Как избежать заражения холерой

Холера – острая кишечная инфекция, возникающая при поражении человека холерным вибрионом. Холера проявляется выраженной частой диареей, обильной многократной рвотой. При своевременном лечении после подавления инфекции наступает выздоровление.

Холера – это острая кишечная инфекция, возникающая при поражении человека холерным вибрионом. Холера проявляется выраженной частой диареей, обильной многократной рвотой, что приводит к значительной потере жидкости и обезвоживанию организма. Признаками дегидратации служат сухость кожных покровов и слизистых, снижением тургора тканей и сморщивание кожи, заострение черт лица, олигоанурия. Диагноз холеры подтверждается результатами бактериологического посева каловых и рвотных масс, серологическими методиками. Лечение включает изоляцию холерного больного, парентеральную регидратацию, терапию тетрациклиновыми антибиотиками.

Общие сведения

Холера – особо опасная инфекция, вызываемая энтеропатогенной бактерией Vibrio cholerae, протекающая с развитием тяжёлого гастроэнтерита и выраженным обезвоживанием вплоть до развития дигидратационного шока. Холера имеет тенденцию к эпидемическому распространению и высокую летальность, поэтому отнесена ВОЗ к высокопатогенным карантинным инфекциям. Наиболее часто эпидемические вспышки холеры регистрируются в странах Африки, Латинской Америки, Юго-Восточной Азии. По оценкам ВОЗ, ежегодно холерой заражается 3-5 млн. человек, около 100-120 тыс. случаев заболевания заканчивается смертельно. Т. о., на сегодняшний день холера остается глобальной проблемой мирового здравоохранения.

Характеристика возбудителя

На сегодняшний день обнаружено более 150 типов холерных вибрионов, различающихся по серологическим признакам. Холерные вибрионы разделяют на две группы: А и В. Холеру вызывают вибрионы группы А. Холерный вибрион представляет собой грамотрицательную подвижную бактерию, выделяющую в процессе жизнедеятельности термостабильный эндотоксин, а также термолабильный энтеротоксин (холероген).

Возбудитель устойчив к действию окружающей среды, сохраняет жизнеспособность в проточном водоеме до нескольких месяцев, до 30 часов в сточных водах. Хорошей питательной средой является молоко, мясо. Холерный вибрион погибает при химическом дезинфицировании, кипячении, высушивании и воздействии солнечного света. Отмечается чувствительность к тетрациклинам и фторхинолонам.

Резервуаром и источником инфекции является больной человек или транзиторный носитель инфекции. Наиболее активно выделяются бактерии в первые дни с рвотными и фекальными массами. Тяжело выявить инфицированных лиц с легко протекающей холерой, однако они представляют опасность в плане заражения. В очаге обнаружения холеры обследованию подвергаются все контактировавшие, вне зависимости от клинических проявлений. Заразность с течением времени уменьшается, и обычно к 3-й неделе происходит выздоровление и освобождение от бактерий. Однако в некоторых случаях носительство продолжается до года и более. Удлинению срока носительства способствуют сопутствующие инфекции.

Холера передается бытовым (грязные руки, предметы, посуда), пищевым и водным путем по фекально-оральному механизму. В настоящее время особое место в передаче холеры отводится мухам. Водный путь (загрязненный источник воды) является наиболее распространенным. Холера является инфекцией с высокой восприимчивостью, наиболее легко происходит заражение людей с гипоацидозом, некоторыми анемиями, зараженных гельминтами, злоупотребляющих алкоголем.

Симптомы холеры

Инкубационный период при заражении холерным вибрионом продолжается от нескольких часов до 5 дней. Начало заболевания острое, обычно ночью или утром. Первым симптомом выступает интенсивный безболезненный позыв к дефекации, сопровождающийся дискомфортным ощущением в животе. Первоначально стул имеет разжиженную консистенцию, но сохраняет каловый характер. Довольно быстро частота дефекаций увеличивается, достигает 10 и более раз за сутки, при этом стул становится бесцветным, водянистым. При холере испражнения обычно не зловонны в отличие от других инфекционных заболеваний кишечника. Повышенная секреция воды в просвет кишечника способствует заметному увеличению количества выделяемых каловых масс. В 20-40% случаев кал приобретает консистенцию рисового отвара. Обычно испражнения имеют вид зеленоватой жидкости с белыми рыхлыми хлопьями, похожими на рисовые.

Нередко отмечается урчание, бурление в животе, дискомфорт, переливание жидкости в кишечнике. Прогрессирующая потеря жидкости организмом приводит к проявлению симптомов обезвоживания: сухость во рту, жажда, затем появляется ощущение похолодания конечностей, звон в ушах, головокружение. Эти симптомы говорят о значительном обезвоживании и требуют экстренных мер по восстановлению водно-солевого гомеостаза организма.

Поскольку к диарее зачастую присоединяется частая рвота, потеря жидкости усугубляется. Рвота возникает обычно спустя несколько часов, иногда на следующие сутки после начала диареи. Рвота обильная, многократная, начинается внезапно и сопровождается интенсивным ощущением тошноты и болью в верхней части живота под грудиной. Первоначально в рвотных массах отмечаются остатки непереваренной пищи, затем желчь. Со временем, рвотные массы также становятся водянистыми, приобретая иногда вид рисового отвара.

При рвоте происходит быстрая потеря организмом ионов натрия и хлора, что приводит к развитию мышечных судорог, сначала в мышцах пальцев, затем всех конечностей. При прогрессировании дефицита электролитов мышечные судороги могут распространиться на спину, диафрагму, брюшную стенку. Мышечная слабость и головокружение нарастает вплоть до невозможности подняться и дойти до туалета. При этом сознание полностью сохраняется.

Выраженной болезненности в животе, в отличие от большинства кишечных инфекций, при холере не отмечается. 20-30% больных жалуются на умеренную боль. Не характерна и лихорадка, температура тела остается в нормальных пределах, иногда достигает субфебрильных цифр. Выраженная дегидратация проявляется снижением температуры тела.

Сильное обезвоживание характеризуется побледнением и сухостью кожных покровов, снижением тургора, цианозом губ и дистальных фаланг пальцев. Сухость характерна и для слизистых оболочек. С прогрессированием дегидратации отмечают осиплость голоса (снижается эластичность голосовых связок) вплоть до афонии. Черты лица заостряются, живот втягивается, под глазами проявляются темные круги, сморщивается кожа на подушечках пальцев и ладонях (симптом «рук прачки»). При физикальном исследовании отмечается тахикардия, артериальная гипотензия. Снижается количество мочи.

При дальнейшей потере жидкости (потеря более 10% массы тела) и ионов происходит прогрессирование дегидратации. Возникает анурия, значительная гипотермия, пульс в лучевой артерии не прощупывается, периферическое артериальное давление не определяется. При этом диарея и рвота становятся менее частыми в связи с параличом кишечной мускулатуры. Данное состояние называют дегидратационным шоком.

Дегидратация организма различается по стадиям: на первой стадии потеря жидкости не превышает 3% от массы тела, вторая и третья стадии подразумевает потерю в размере 3-6 и 6-9% массы тела соответственно, и на четвертой стадии (дигидратационный шок) потеря жидкости превышает 9% массы тела. Нарастание клинических проявлений холеры может прекратиться на любом этапе, течение может быть стертым. В зависимости от тяжести дегидратации и скорости нарастания потери жидкости различают холеру легкого, среднетяжелого и тяжелого течения. Тяжелая форма холеры отмечается у 10-12% пациентов. В случаях молниеносного течения развитие дегидратационного шока возможно в течение первых 10-12 часов.

Холера может осложняться присоединением других инфекций, развитием пневмонии, тромбофлебита и гнойного воспаления (абсцесс, флегмона), тромбозом сосудов брыжейки и ишемией кишечника. Значительная потеря жидкости может способствовать возникновению расстройств мозгового кровообращения, инфарктом миокарда.

Диагностика холеры

Тяжело протекающая холера диагностируется на основании данных клинической картины и физикального обследования. Окончательный диагноз устанавливают на основании бактериологического посева каловых или рвотных масс, кишечного содержимого (секционный анализ). Материал для посева необходимо доставить в лабораторию не позднее 3-х часов с момента получения, результат будет готов через 3-4 суток.

Существуют серологические методики выявления заражения холерным вибрионом (РА, РНГА, виброцидный тест, ИФА, РКА), но они не являются достаточными для окончательной диагностики, считаясь методами ускоренного ориентировочного определения возбудителя. Ускоренными методиками для подтверждения предварительного диагноза можно считать люминисцентно-серологический анализ, микроскопию в темном поле иммобилизованных О-сывороткой вибрионов.

Лечение холеры

Поскольку основную опасность при холере представляет прогрессирующая потеря жидкости, ее восполнение в организме является основной задачей лечения этой инфекции. Лечение холеры производится в специализированном инфекционном отделении с изолированной палате (боксе), оборудованной специальной койкой (койка Филипса) с весами и посудой для сбора испражнений. Для точного определения степени дегидратации ведут учет их объема, регулярно определяют гематокрит, уровень ионов в сыворотке, кислотно-щелочной показатель.

Первичные регидратационные мероприятия включают восполнение имеющегося дефицита жидкости и электролитов. В тяжелых случаях производится внутривенное введение полиионных растворов. После этого производят компенсаторную регидратацию. Введение жидкости происходит в соответствии с ее потерями. Возникновение рвоты не является противопоказанием к продолжению регидратации. После восстановления водно-солевого баланса и прекращения рвоты начинают антибиотикотерапию. При холере назначают курс препаратов тетрациклинового ряда, а в случае повторного выделения бактерий – хлорамфеникол.

Специфической диеты при холере нет, в первые дни могут рекомендовать стол N°4, а после стихания выраженной симптоматики и восстановления кишечной деятельности (3-5-й лень лечения) — питание без особенностей. Перенесшим холеру рекомендовано увеличить в рационе содержащие калия продукты (курага, томатный и апельсиновый соки, бананы).

Прогноз и профилактика холеры

При своевременном и полном лечении после подавления инфекции наступает выздоровление. В настоящее время современные препараты эффективно действуют на холерный вибрион, а регидратационная терапия способствует профилактике осложнений.

Специфическая профилактика холеры заключается в однократной вакцинации холерным токсином перед посещением регионов с высоким уровнем распространения этого заболевания. При необходимости через 3 месяца производят ревакцинацию. Неспецифические меры профилактики холеры подразумевают соблюдение санитарно-гигиенических норм в населенных местах, на предприятиях питания, в районах забора вод для нужд населения. Индивидуальная профилактика заключается в соблюдении гигиены, кипячении употребляемой воды, мытье продуктов питания и их правильной кулинарной обработке. При обнаружении случая холеры эпидемиологический очаг подлежит дезинфекции, больные изолируются, все контактные лица наблюдаются в течение 5-ти дней на предмет выявления возможного заражения.

Холера — справочник болезней — ЗдоровьеИнфо

Большинство людей, подвергнувшихся воздействию возбудителя холеры (холерного вибриона) не заболевают и даже не узнают, что были инфицированы. По той причине, что они выделяют холерный вибрион со стулом 7-14 дней, они могут заражать и других людей через воду. Большинство случаев холеры, при которых возникают симптомы, включают диарею, которую сложно отличить от диареи, вызванной другими причинами.

Только у 1 из 10 заболевших холерой развиваются типичные симптомы заболевания. Они могут включать:

Диарею. Диарея возникает внезапно и может быстро привести к опасной потери жидкости – примерно до 1 литра в час. Стул при диарее может быть бесцветным или похожим на рисовый отвар.
Тошнота и рвота. Возникает на ранних стадиях заболевания, рвота может продолжаться в течение нескольких часов.
Дегидратация. Дегидратация может развиваться в течение нескольких часов после появления симптомов. В зависимости от того, как много жидкости теряет человек, дегидратация может варьировать по степени от легкой до крайне тяжелой. Потеря более 10% от общей массы тела свидетельствует о тяжелой дегидратации.

Симптомы дегидратации при холере включают раздражительность, вялость, западение глаз, сухость во рту, выраженную жажду, сухую и сморщенную кожу, которая при нажатии остается впавшей на некоторое время, низкое кровяное давление, небольшой объем отделения мочи, аритмию.
Дегидратация может вести к быстрой потере электролитов, которые поддерживают баланс жидкостей в организме. Это состояние называется электролитным дисбалансом.

Электролитный дисбаланс
Электролитный дисбаланс может вести к серьезным симптомам, таким как:

Судороги. Являются результатом быстрой потери натрия, калия и хлоридов.
Шок. Одно из самых серьезных осложнений дегидратации. Он возникает, когда сниженный объем циркулирующей крови вызывает падение давление и снижение количества кислорода в крови. При отсутствии лечения гиповолемический шок может вызывать быструю смерть.

Симптомы заболевания у детей
В общих чертах, симптомы холеры у детей соответствуют таковым у взрослых, но дети особенно чувствительны к низкому уровню глюкозы крови, вызванному дегидратацией, что может вызывать:

Измененное состояние сознания
Припадки
Кому

ООН доставила помощь жителям Мохи в Йемене, охваченном конфликтом и холерой

Сегодня на брифинге в Женеве представитель УВКБ Уильям Спиндлер сказал, что доставленный груз будет распределен среди 6 200 жителей Моха. В начале этого года товары первой необходимости получили 70 тысяч жителей этого города.

Жители Мохи фактически оказались «в ловушке» и используются в качестве «живого щита». Есть опасения, что такая же участь постигнет и население города Ходейды.

Боевые действия в провинции Таиз усилились в январе, что привело к перемещению еще 50 тысяч человек, а это примерно 27 процентов всех внутренне перемещенных лиц в Йемене.

Уильям Спиндлер рассказал, что сотрудники УВКБ сообщают об ухудшении ситуации в этой провинции. «Многим людям приходится жить в тяжелых условиях, просто под открытым небом, без защиты, без существенной помощи», — подчеркнул пресс-секретарь УВКБ.

Тем временем Детский фонд ООН (ЮНИСЕФ) сообщает о том, что в Йемене свирепствует эпидемия холеры. На сегодняшний день зафиксировано уже более 250 случаев этого заболевания.

В ЮНИСЕФ отметили, что по всей стране зарегистрировано 11 тысяч случаев диареи. 250 пациентам поставлен диагноз холера. К настоящему времени от диареи умерли 130 человек. 25 процентов всех случаев заболевания холерой приходится на столицу — Сану. Треть пациентов с таким диагнозом — дети.

На брифинге в Женеве официальный представитель Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) Кристиан Линдмайер заявил, что сейчас примерно 7, 6 миллиона йеменцев живут в районах, где существует высокий риск заразиться холерой.

При содействии ВОЗ в Йемене было открыто около 30 центров по лечению и предотвращению холеры, однако этого явно недостаточно.

Многие йеменцы лишены возможности получать медицинскую помощь, поскольку больницы разрушены, а врачи бежали от конфликта. В Йемене функционирует менее 45 процентов больниц и поликлиник. С марта 2015 года, когда начались боевые действия, поставки лекарств в страну сократились на 70 процентов.

Война сказалась на всех сферах жизни йеменцев и довела людей до отчаяния. На сегодняшний день 18,8 миллионов жителей Йемена нуждаются в срочной гуманитарной помощи. В самом тяжелом положении оказались дети. По данным ЮНИСЕФ, 2,2 миллиона йеменских детей недоедают.

женщина могла заразиться на религиозной церемонии в Индии

В Москве медики зафиксировали случаи заболевания холерой. Инфекционное заболевание обнаружили у молодой москвички и ее дочери, которые на днях вернулись из Индии. Скорее всего, женщина заразилась после совершения религиозного обряда, согласно которому необходимо выпить священную воду из реки Ганг.

29-летняя москвичка вместе со своей маленькой дочерью прилетела из Индии. Спустя несколько часов после приземления она почувствовала недомогание, ее с ребенком госпитализировали. Врачи поставили диагноз: холера. «Сейчас состояние пациентов стабилизировалось, они находятся под наблюдением врачей, получают адекватное лечение», – заверили в больнице. Также были обследованы все, кто контактировал с заболевшими: признаков заболевания у них нет. Угрозы распространения холеры тоже нет.

Стоит отметить, что в России периодически регистрируются случаи завоза холеры из-за рубежа, последний был в 2008 году. Сергей Бень, занимается отправкой туристов в Индию более десяти лет. На его памяти это второй случай заболевания холерой, привезенной из этого государства. Он считает, скорее всего, девушка пострадала из-за собственной неосмотрительности.

«Это называется пуджа. В Индии, когда на реке Ганг они производят какой-то ритуал, после этого они пьют воду из реки, – поясняет он. – Скорее всего после какого-то религиозного ритуала и чего-то подобного она и заразилась».

Холера – инфекционное заболевание, возбудителем которого является холерный вибрион. Передается болезнь через употребление инфицированной воды, пищи и при контакте с носителем. В министерстве здравоохранения считают, что поводов для паники нет. Холера хорошо изучена и поддается лечению. Отправляясь в Индию можно обезопасить себя, сделав прививку и соблюдая элементарные правила гигиены.

«Если наши люди едут туда, они могут там заболеть. Поскольку сейчас самолетом очень быстро можно прилететь, то, бывает, они там заразились, а вся картина развертывается уже или в самолете, или по приезде сюда», – рассказывает Виктор Малеев, заместитель директора ЦНИИ Эпидемиологии.

После обнаружения холеры карантинным службам пришлось проверить экипаж самолета, на котором прилетела женщина и всех кто с ней контактировал. Других случаев заражения холерой не зафиксировано.

Зимбабве: борьба с холерой в Хараре

Атлас Мурима 25 лет, она заразилась холерой, когда навещала свою сестру в Гленвью в провинции Хараре, где находился эпицентр вспышки. Проведя почти целый день в центре по лечению холеры, открытом MSF в сотрудничестве с министерством здравоохранения страны, женщина чувствует себя лучше.

_______________

«Когда я поняла, что у меня холера, я очень испугалась, была в шоке. Я думала, что умру. Все мои мысли были о дочке, — рассказывает Атлас Мурима.

Молодая женщина живет в западной провинции Машоналенд на севере Зимбабве. В Хараре, расположенном более чем в 160 км, она приехала в гости к сестре. Атлас слышала, что в начале сентября здесь началась вспышка холеры, но не думала, что может тоже заразиться.

Когда проявились явные симптомы – постоянная рвота, водянистая диарея, сильные головные боли, западание глаз – Атлас поставили диагноз в центре по лечению холеры, организованном совместно «Врачами без границ» и местными медицинскими властями.

В сельских районах холера случается редко. Мы слышим о вспышках в Хараре и только
атлас муримапациент MSF

Причина возникновения холеры – употребление зараженной пищи или жидкости. Заболевание вызывает сильнейшее обезвоживание и при отсутствии лечения может быть смертельным. Профилактика холеры чрезвычайно проста: соблюдение правил гигиены и санитарии и доступ к чистой питьевой воде. В Зимбабве вспышки холеры часто случаются в период дождей с ноября по конец мая.

«Я научу свою дочку мыть руки прежде, чем взять еду, перед едой и после туалета. А также – пить только из чистых чашек», — говорит Атлас.

Женщина оказалась в числе 9 100 человек в Хараре, у которых заподозрили холеру начиная с 12 сентября, когда была официально объявлена чрезвычайная ситуация. Это вторая по величине вспышка холеры в стране после разрушительной эпидемии 2008 года, в результате которой погибли более 4 000 человек. Болезнь уже унесла жизни 43 человек, это уже четвертая вспышка в этом году.

После того, как был зарегистрирован первый случай заболевания в пригороде Гленвью, болезнь быстро распространилась в других районах Хараре. Число заболевших увеличилось и по всей стране. В Хараре старая система водоснабжения, она разрушается, что приводит к утечкам воды, а также ее загрязнению из-за окружающих свалок и попадания сточных вод. В густонаселенных пригородах, таких как Гленвью, особенно высок риск распространения подвержены заболеваний, передающихся через воду. Поскольку дефицит снабжения чистой водой вынуждает людей использовать небезопасные альтернативы, такие как колодцы и скважины.

Оперативная помощь «Врачей без границ»

Когда вспышка была объявлена, руководство страны пригласило MSF для оказания материально-технической помощи в то время, пока происходит мобилизация человеческих и материальных ресурсов.

«Мы обучили медсестер уходу за пациентами, который соответствует международными стандартам, выделили ресурсы для управления центрами, провели тренинги для подсобных рабочих и специалистов по инфекционному контролю»
фарейи марумекоординатор MSF по оказанию помощи в чрезвычайной ситуации

«Комплексный подход позволил MSF построить работу наиболее эффективным с точки зрения ресурсов образом, — говорит Бьорн Ниссен, директор MSF по работе в Зимбабве. — Мы взяли на себя роль советников, предоставили медсестер, квалифицированных специалистов по водоснабжению, санитарии и логистике, чтобы технически поддержать работу местных органов здравоохранения там, где это было особенно критично».

По мере развития ситуации MSF оказывала помощь в лечении пациентов, инфекционном контроле, а также техническую и материально-техническую поддержку центрам по лечению холеры, созданным в Гленвью и в инфекционной больнице Беатрис Роуд. Кроме того, техническую поддержку организации получили центры в Будириро, Бухере, Читунгвизе и в Центральной больнице Хараре.

Холера не требует сложного лечения, но начинать его нужно быстро. В центрах по лечению холеры пациенты получают лечение от обезвоживания – питьевой раствор для регидратации и капельницы. Кроме того, местным жителям было рекомендовано при подозрении на холеру начинать принимать регидратационные растворы в домашних условиях, еще до поступления в клиники.

«Главное для MSF – спасение людей. Пациент находится в центре всего, что мы делаем. Итак, мы выявили слабые места и внедрились там, где была необходимость, — говорит Фарейи Маруме, координатор MSF по оказанию помощи в чрезвычайной ситуации. — Мы обучили медсестер уходу за пациентами, который соответствует международными стандартам, выделили ресурсы для управления центрами, провели тренинги для подсобных рабочих и специалистов по инфекционному контролю».

Кроме того, «Врачи без границ» содействовали в планировании и проведении двух кампаний по вакцинопрофилактике, организованных Министерством здравоохранения Зимбабве при поддержке Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) и других партнеров, чтобы предотвратить распространение холеры. В общей сложности в два этапа, которые начались 3 и 15 октября, вакцинацию прошли около 760 000 человек в шести пригородах Хараре.

Более долгосрочные способы профилактики эпидемий

С 2008 года «Врачи без границ» занимаются проектами в Зимбабве, направленными на борьбу со вспышками холеры и тифа, в частности в Хараре. За 2018 год MSF восемь раз оказывала поддержку при вспышках этих заболеваний в различных районах страны.

С 2015 года сотрудники «Врачей без границ» разрабатывают различные решения, с помощью которых особо уязвимые группы населения в густонаселенных районах Хараре могут получить доступ к чистой питьевой воде. Для того, чтобы предотвратить распространение заболеваний, передающихся через воду, мы бурили новые скважины и улучшали старые.

Важной составляющей подобной деятельности является создание так называемых «общественных групп здоровья»: их участники обучены следить за точками доступа к воде и поддерживать их работу. Каждый месяц они жертвуют небольшую сумму денег на хлор и ремонт точек доступа к воде. За работой 70 восстановленных скважин, которые расположены в густонаселенных районах Хараре, следят более 60 «общественных групп здоровья».

ООН доставила помощь жителям Мохи в Йемене, охваченном конфликтом и холерой

В Управлении Верховного комиссара ООН по делам беженцев (УВКБ) подтвердили, что недавно его сотрудникам удалось лишь в третий раз за весь год доставить гуманитарную помощь жителям города Моха в провинции Таиз на побережье Красного моря. В этом портовом городе наблюдается активизация боевых действий.

Заболевшая холерой женщина находится в тяжелом состоянии — Российская газета

У 29 летней россиянки, вернувшейся на родину из Индии, и ее 10-месячного ребенка обнаружена холера. По данным столичных медиков, состояние женщины тяжелое, но уже стабильное.

Напомним, что женщина вернулась из заграницы 7 июня навестить бывшего мужа. Через несколько часов после прилета женщине стало плохо, бывший муж вызвал скорую помощь. Прибывшие медики госпитализировали и женщину и ее дочь в одну из инфекционных больниц города. Как пояснил пресс-секретарь департамента здравоохранения Москвы Владимир Егоров, пациенты получают всю необходимую медицинскую помощь, ребенок, которому в больнице также был поставлен диагноз «холера», переносит болезнь в легкой форме, женщина находится в тяжелом состоянии.

— Ее состояние стабилизировалось, однако остается еще тяжелым, — подчеркнул Егоров. — Но, мы надеемся, что заболевшие холерой поправятся, на утро четверга угрозы для их жизни нет.

Как ранее заявляли представители Минздравсоцразвития, врачи обследовали всех лиц, которые контактировали с заболевшими, и не обнаружили у них признаков болезни.

Напомним, что эту редкую болезнь, которая до изобретения антибиотиков косила людей сотнями, и считалась не менее опасной чем чума, последний раз завозили в столицу 13 лет назад во время проведения Первых всемирных детско-юношеских игр.

Между тем, в России (в основном регионы Дальнего Востока, Урала, Сибири) ежегодно регистрируются случаи завоза холеры из-за рубежа. В прошлом году эту болезнь завозили иностранцы из Индии, Китая и Ближнего Востока.

Досье «РГ»

Холеру иногда называют болезнью грязных рук. И это действительно так, опасное инфекционное кишечное заболевание холера легко передается бытовым путем — через грязные руки, пищу и воду. Болезнь поддается лечению антибиотиками, если своевременно обратится к врачу. Симптомы болезни разные, так при легкой форме наблюдается жидкий стул и рвота, которые могут быть однократными. При более тяжелых формах происходит обезвоживание организма, наблюдается частый, обильный и водянистый стул, рвота, выраженные судороги мышц. Артериальное давление падает, пульс слабый, частый.

Чтобы не заболеть холерой, надо соблюдать элементарную гигиену: мыть руки перед едой, пить качественную воду и не есть сомнительную пищу.

Холера — Диагностика и лечение

Диагноз

Хотя признаки и симптомы тяжелой холеры могут быть безошибочными в тех регионах, где она распространена, единственный способ подтвердить диагноз — это идентифицировать бактерии в образце стула.

Экспресс-тест на холеру позволяет врачам в отдаленных районах быстро подтвердить диагноз холеры. Быстрое подтверждение помогает снизить уровень смертности в начале вспышки холеры и приводит к более раннему вмешательству общественного здравоохранения для борьбы со вспышкой.

Лечение

Холера требует немедленного лечения, поскольку болезнь может привести к смерти в течение нескольких часов.

Регидратация. Цель состоит в том, чтобы восполнить потерю жидкости и электролитов с помощью простого раствора для регидратации, солей для пероральной регидратации (ORS). Раствор ORS доступен в виде порошка, который можно приготовить из кипяченой или бутилированной воды.
Без регидратации умирает примерно половина людей, больных холерой.После лечения летальность снижается до менее 1%.
Жидкости для внутривенного введения. Большинству людей с холерой может помочь только пероральная регидратация, но людям с сильным обезвоживанием также может потребоваться внутривенное введение жидкости.
Антибиотики. Хотя некоторые антибиотики не являются необходимой частью лечения холеры, они могут уменьшить диарею, связанную с холерой, и сократить ее продолжительность у тяжелобольных.
Цинк добавки. Исследования показали, что цинк может уменьшить диарею и сократить ее продолжительность у детей с холерой.

Подготовка к приему

Немедленно обратитесь за медицинской помощью, если у вас развилась тяжелая диарея или рвота, и вы находитесь в стране, где наблюдается холера, или совсем недавно вернулись из нее.

Если вы считаете, что заразились холерой, но у вас нет серьезных симптомов, обратитесь к семейному врачу. Обязательно скажите, что подозреваете, что у вас холера.

Вот некоторая информация, которая поможет вам подготовиться к встрече.

При записи на прием спросите, есть ли ограничения, которые вам нужно соблюдать перед визитом.

Составьте список из:

Ваши симптомы, когда они появились и насколько они серьезны
Недавний контакт с возможными источниками инфекции, особенно, если вы недавно выезжали за границу
Основная медицинская информация, , включая другие состояния, от которых вы лечитесь
Все лекарства, витамины или другие добавки, которые вы принимаете, , включая дозы
Вопросы, которые следует задать Вашему врачу

Вот некоторые вопросы о холере, которые следует задать врачу:

Есть ли другие возможные причины моих симптомов?
Какие тесты мне нужны?
Какой подход к лечению вы рекомендуете?
Как скоро после начала лечения я почувствую себя лучше?
Как долго вы ожидаете полного восстановления?
Когда я могу вернуться на работу или учебу?
Есть ли у меня риск долгосрочных осложнений холеры?
Я заразен? Как я могу снизить риск передачи болезни другим?

Чего ожидать от врача

Ваш врач, скорее всего, задаст такие вопросы, как:

У вас был водянистый понос? Насколько серьезно?
Есть ли еще что-нибудь необычное во внешнем виде вашего стула?
Тебя рвало?
Были ли у вас симптомы обезвоживания, такие как сильная жажда, мышечные судороги или усталость?
Удалось ли вам подавить еду или жидкость?
Вы недавно ели сырых моллюсков, например устриц?
Вы беременны?
Какая у вас группа крови, если вы знаете?

Чем вы можете заняться в настоящее время

Поддерживайте водный баланс организма.При диарее и рвоте, которые могут быть связаны с холерой, используйте раствор для пероральной регидратации.

В большинстве развивающихся стран вы можете купить порошкообразные пакеты солей для пероральной регидратации (ПРС), первоначально разработанные Всемирной организацией здравоохранения для лечения диареи и обезвоживания у младенцев, больных холерой. Размешайте порошок в чистой питьевой или кипяченой воде в соответствии с инструкциями на упаковке.

Если растворы для пероральной регидратации недоступны, приготовьте их самостоятельно, смешав 1 литр (около 1 литра) бутилированной или кипяченой воды с 6 чайными ложками без горки (около 30 миллилитров) столового сахара и 1/2 чайной ложкой без горки (около 2.5 миллилитров) поваренной соли.

01 февраля 2020 г.

Показать ссылки

Kliegman RM, et al. Холера. В: Учебник педиатрии Нельсона. 21-е изд. Эльзевир; 2020. https://www.clinicalkey.com. По состоянию на 12 декабря 2019 г.
Ferri FF. Холера. В: Клинический советник Ферри 2020. Elsevier; 2020. https://www.clinicalkey.com. По состоянию на 12 декабря 2019 г.
Холера. Центры по контролю и профилактике заболеваний.http://www.cdc.gov/cholera/index.html. По состоянию на 12 декабря 2019 г.
Холера. Всемирная организация здравоохранения. https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/cholera. По состоянию на 12 декабря 2019 г.
LaRocque R, et al. Холера: клиника, диагностика, лечение и профилактика. https://www.uptodate.com/contents/search. По состоянию на 12 декабря 2019 г.
Позиционный документ ВОЗ по солям для пероральной регидратации для снижения смертности от холеры. Всемирная организация здравоохранения. https: // www.who.int/cholera/technical/en/. По состоянию на 12 декабря 2019 г.

Связанные

Продукты и услуги

Показать больше продуктов и услуг Mayo Clinic

Диагностика и обнаружение | Холера

Практически невозможно отличить одного пациента с холерой от пациента, инфицированного другим патогеном, вызывающим острую водянистую диарею, без анализа образца стула.Обзор клинических особенностей нескольких пациентов, которые являются частью подозреваемой вспышки острой водянистой диареи, может быть полезным для выявления холеры из-за быстрого распространения болезни.

В то время как ведение пациентов с острой водянистой диареей одинаково независимо от заболевания, важно идентифицировать холеру из-за возможности широко распространенной вспышки.

Vibrio cholerae , выращиваемый на чашках с агаром

Как диагностировать

Выделение и идентификация Vibrio cholerae серогруппы O1 или O139 путем посева образца кала остается золотым стандартом лабораторной диагностики холеры.

Среда

Cary Blair идеальна для транспортировки, а селективный агар с солями тиосульфата, цитрата и желчных солей (TCBS) идеально подходит для выделения и идентификации. Реагенты для серогруппировки Изоляты Vibrio cholerae доступны во всех лабораториях департаментов здравоохранения штата США. Имеющиеся в продаже наборы для быстрого тестирования полезны в условиях эпидемии, но не дают изолятов для тестирования чувствительности к противомикробным препаратам и определения подтипов и не должны использоваться для рутинной диагностики .

Во многих странах, где холера не редкость, но доступ к диагностическим лабораторным исследованиям затруднен, ВОЗ рекомендует использовать следующее клиническое определение для случаев подозрения на холеру.

Случай с подозрением на холеру

В районах, где вспышка холеры не была объявлена: любой пациент в возрасте 2 лет и старше с острой водянистой диареей и тяжелым обезвоживанием или умирающий от острой водянистой диареи.
В районах, где объявлена вспышка холеры: любой человек, заболевший острой водянистой диареей или умирающий от нее.

ВОЗ также рекомендует следующее определение подтвержденных случаев холеры.

Подтвержденный случай холеры

Предполагаемый случай с Vibrio cholerae O1 или O139, подтвержденный посевом или ПЦР, а в странах, где холера не присутствует или была элиминирована, штамм Vibrio cholerae O1 или O139 является токсигенным.

Экспресс-тесты

В районах с ограниченным или отсутствующим лабораторным тестированием экспресс-тест индикаторной полоски Crystal ^® VC может обеспечить раннее предупреждение должностным лицам органов здравоохранения о вспышке холеры. Однако чувствительность и специфичность этого теста не оптимальны. Поэтому рекомендуется всегда подтверждать образцы фекалий с положительным результатом теста на V. cholerae O1 и / или O139 с помощью индикаторной полоски Crystal ^® VC с использованием традиционных методов культивирования, подходящих для выделения и идентификации V.холеры.

Электронная микрофотография холерного вибриона

Обнаружение в США

Холера является заболеванием, подлежащим регистрации на национальном уровне в США. Все изоляты следует отправлять в CDC через лаборатории департамента здравоохранения штата для тестирования и определения подтипов холерного токсина.

Симптомы, причины, лечение и профилактика

Обзор

Что такое холера?

Холера — это внезапное заболевание, которое возникает, когда человек случайно проглатывает (проглатывает) холерный вибрион (V.холера) бактерии . Когда бактерии заражают кишечник человека, они могут вызвать очень сильную диарею и обезвоживание. Эти осложнения иногда могут привести к летальному исходу.

Насколько распространена холера?

Миллионы людей во всем мире ежегодно заражаются холерой. Бактериальное заражение обычно происходит в местах, где отсутствуют современные системы канализации и чистой воды. Примеры включают неразвитые страны и лагеря беженцев, а также части Ближнего Востока, Азии, Южной Америки и Африки.

Вспышки холеры чаще встречаются в теплом климате. Вспышки иногда случаются после стихийных бедствий, таких как землетрясения и ураганы. Эти бедствия могут повредить канализационные системы.

Холера редко встречается в Соединенных Штатах и других современных промышленно развитых странах. Но американцы должны знать об этой болезни и ее причинах, особенно если они путешествуют за границу.

Симптомы и причины

Что вызывает холеру?

Холера происходит от V.бактерии холеры. Люди, инфицированные этими бактериями, могут распространять болезнь через фекалии (также называемые калом или фекалиями). Они поступают так, когда инфицированные фекалии попадают в водную систему. Если вода не продезинфицирована (очищена) должным образом, люди, использующие воду для питья, готовки и стирки, подвергаются риску заражения.

Когда человек ест или пьет пищу или воду, содержащие холерные вибрионы, внутри него размножаются бактерии. Затем бактерии заставляют тонкий кишечник выделять (вытекать) жидкость, что приводит к диарее.

Холера обычно не передается напрямую от человека к человеку, но может.Поэтому важно мыть руки, чтобы предотвратить заражение.

Бактерии холеры также обитают в соленых реках и прибрежных водах. Некоторые люди заразились холерой в результате употребления в пищу сырых или недоваренных моллюсков, хотя это случается редко.

Каковы симптомы холеры?

Инфекция холеры может протекать в легкой форме без симптомов. Но примерно у 10% инфицированных людей развиваются тяжелые симптомы через 12 часов или 5 дней после употребления бактерий. Эти симптомы включают:

Диарея или очень водянистые фекалии.
Сильная жажда.
Меньшее количество мочи (моча).
Мышечные судороги.
Беспокойство или раздражительность.
Рвота.
Слабость.

Если у вас появятся какие-либо симптомы холеры, немедленно обратитесь к врачу. Легкие симптомы могут исчезнуть сами по себе через несколько дней. Но обезвоживание очень быстро может стать смертельным. Раннее лечение может спасти вам жизнь.

Какие проблемы может вызвать холера?

Диарея и рвота из-за холеры могут привести к потере организмом большого количества важных веществ:

Когда вашему организму не хватает этих веществ, вы обезвоживаетесь и у вас может развиться:

Сухие слизистые оболочки (например, глаз, носа и рта).
Быстрый пульс.
Гипокалиемия (низкий уровень калия в крови).
Гипотония (пониженное артериальное давление).
Потеря естественной эластичности кожи.

Без лечения тяжелое обезвоживание от холеры может привести к:

Диагностика и тесты

Как диагностируется холера?

Для проверки на холеру врачу потребуется образец вашего стула. Часто вы попадете в сборную чашку или сумку. Иногда медицинский работник вводит мазок в прямую кишку (отверстие, через которое выходит фекалия).

Образец отправляется в лабораторию, где специалисты рассматривают его под микроскопом, чтобы идентифицировать бактерию V. cholera. В некоторых регионах, где холера более распространена, есть доступ к измерительному щупу, с помощью которого можно быстро проверить образец стула.

Ведение и лечение

Как лечится холера?

Самая важная часть лечения холеры — предотвращение обезвоживания или обращение вспять. Любой, кто болен холерой, должен немедленно восполнить потерю жидкости и солей.Поставщик медицинских услуг может выписать:

Раствор для пероральной регидратации (ПРР): Возможно, вам придется выпить большое количество предварительно расфасованной смеси сахара, солей и воды.
Внутривенные жидкости: В тяжелом случае обезвоживания врач может использовать иглу для закачивания жидкости непосредственно в ваши вены.

Другие виды лечения могут включать:

Бактерии V. cholera обычно исчезают из организма в течение двух недель.

Профилактика

Как избежать холеры?

У людей, которые не живут или не посещают районы с плохой санитарией, мало шансов заболеть холерой.Но если вы находитесь в районе, где заболели холерой, определенные стратегии могут помочь предотвратить заражение:

Избегайте водопроводной воды, фонтанов и кубиков льда. Эта мера предосторожности распространяется на воду, которую вы пьете, и воду, которую вы используете для мытья посуды, приготовления пищи и чистки зубов.
Не ешьте сырые или недоваренные морепродукты.
Пейте воду только в том случае, если она разлита в бутылки, консервы, сварена или обработана определенными химическими веществами. И не пейте из бутылки или банки со сломанной крышкой.
Ешьте расфасованные продукты.Или убедитесь, что другие продукты свежеприготовленные и подаются горячими.
Рассмотрите возможность дезинфекции воды: кипятите ее не менее одной минуты. Добавьте половину таблетки йода или две капли бытового отбеливателя на каждый литр воды. Или используйте таблетки хлора.
Вымойте фрукты и овощи чистой водой.
Мойте руки чистой водой с мылом, особенно перед тем, как брать пищу и принимать ее, а также после посещения туалета. Если чистой воды и мыла нет под рукой, используйте дезинфицирующее средство для рук, содержащее не менее 60% спирта.

Есть ли вакцина от холеры?

Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) одобрило одну вакцину от холеры (Vaxchora®). Он предназначен для взрослых в возрасте от 18 до 64 лет, которые планируют отправиться в районы с холерой. Но вакцину не рекомендуют очень часто, потому что большинство туристов не посещают места, где есть холера. Существуют две другие вакцины против холеры, но они не одобрены в США.

Вакцины

не на 100% эффективны, поэтому вам все равно следует проявлять осторожность во время путешествий. Соблюдайте меры предосторожности с пищей и водой и часто мойте руки.

Перспективы / Прогноз

Каковы перспективы для больного холерой?

Холера может пройти сама по себе всего за несколько дней. Но если у вас серьезные симптомы и вы начинаете обезвоживаться, вам потребуется медицинская помощь. Вы должны очень быстро заменять жидкости.

Жить с

Как я могу защитить себя, если я планирую оказаться в районе холеры?

У Центров по контролю и профилактике заболеваний (CDC) есть веб-сайт, на котором путешественники могут проверить наличие вспышек холеры и других заболеваний (посетите их веб-сайт Travel Health Notices.)

Если вы живете в районе с холерой или планируете поехать туда, убедитесь, что вы осторожно относитесь к воде, которую пьете. Мойте руки и тщательно готовьте пищу. Могут помочь следующие расходные материалы:

Вода в бутылках.
Таблицы хлора.
Отбеливатель бытовой.
Йод в таблетках.
Расфасованные продукты.

Записка из клиники Кливленда

Если у вас тяжелая диарея из-за холеры или другой причины, немедленно обратитесь к врачу.Вы должны заменить жидкости и электролиты, чтобы избежать обезвоживания. Это осложнение может вызвать серьезные проблемы со здоровьем и даже смерть.

Симптомы, причины, лечение и профилактика

Обзор

Что такое холера?

Холера — это внезапное заболевание, которое возникает, когда человек случайно проглатывает (проглатывает) бактерии холерного вибриона (V. cholera) . Когда бактерии заражают кишечник человека, они могут вызвать очень сильную диарею и обезвоживание. Эти осложнения иногда могут привести к летальному исходу.

Насколько распространена холера?

Симптомы и причины

Что вызывает холеру?

Холера происходит от бактерий V. cholera. Люди, инфицированные этими бактериями, могут распространять болезнь через фекалии (также называемые калом или фекалиями). Они поступают так, когда инфицированные фекалии попадают в водную систему. Если вода не продезинфицирована (очищена) должным образом, люди, использующие воду для питья, готовки и стирки, подвергаются риску заражения.

Холера обычно не передается напрямую от человека к человеку, но может. Поэтому важно мыть руки, чтобы предотвратить заражение.

Каковы симптомы холеры?

Диарея или очень водянистые фекалии.
Сильная жажда.
Меньшее количество мочи (моча).
Мышечные судороги.
Беспокойство или раздражительность.
Рвота.
Слабость.

Если у вас появятся какие-либо симптомы холеры, немедленно обратитесь к врачу.Легкие симптомы могут исчезнуть сами по себе через несколько дней. Но обезвоживание очень быстро может стать смертельным. Раннее лечение может спасти вам жизнь.

Какие проблемы может вызвать холера?

Диарея и рвота из-за холеры могут привести к потере организмом большого количества важных веществ:

Когда вашему организму не хватает этих веществ, вы обезвоживаетесь и у вас может развиться:

Сухие слизистые оболочки (например, глаз, носа и рта).
Быстрый пульс.
Гипокалиемия (низкий уровень калия в крови).
Гипотония (пониженное артериальное давление).
Потеря естественной эластичности кожи.

Без лечения тяжелое обезвоживание от холеры может привести к:

Диагностика и тесты

Как диагностируется холера?

Ведение и лечение

Как лечится холера?

Раствор для пероральной регидратации (ПРР): Возможно, вам придется выпить большое количество предварительно расфасованной смеси сахара, солей и воды.
Внутривенные жидкости: В тяжелом случае обезвоживания врач может использовать иглу для закачивания жидкости непосредственно в ваши вены.

Другие виды лечения могут включать:

Бактерии V. cholera обычно исчезают из организма в течение двух недель.

Профилактика

Как избежать холеры?

Избегайте водопроводной воды, фонтанов и кубиков льда. Эта мера предосторожности распространяется на воду, которую вы пьете, и воду, которую вы используете для мытья посуды, приготовления пищи и чистки зубов.
Не ешьте сырые или недоваренные морепродукты.
Пейте воду только в том случае, если она разлита в бутылки, консервы, сварена или обработана определенными химическими веществами. И не пейте из бутылки или банки со сломанной крышкой.
Ешьте расфасованные продукты.Или убедитесь, что другие продукты свежеприготовленные и подаются горячими.
Рассмотрите возможность дезинфекции воды: кипятите ее не менее одной минуты. Добавьте половину таблетки йода или две капли бытового отбеливателя на каждый литр воды. Или используйте таблетки хлора.
Вымойте фрукты и овощи чистой водой.
Мойте руки чистой водой с мылом, особенно перед тем, как брать пищу и принимать ее, а также после посещения туалета. Если чистой воды и мыла нет под рукой, используйте дезинфицирующее средство для рук, содержащее не менее 60% спирта.

Есть ли вакцина от холеры?

Вакцины

Перспективы / Прогноз

Каковы перспективы для больного холерой?

Жить с

Как я могу защитить себя, если я планирую оказаться в районе холеры?

Вода в бутылках.
Таблицы хлора.
Отбеливатель бытовой.
Йод в таблетках.
Расфасованные продукты.

Записка из клиники Кливленда

Симптомы, причины, лечение и профилактика

Обзор

Что такое холера?

Насколько распространена холера?

Симптомы и причины

Что вызывает холеру?

Холера обычно не передается напрямую от человека к человеку, но может. Поэтому важно мыть руки, чтобы предотвратить заражение.

Каковы симптомы холеры?

Диарея или очень водянистые фекалии.
Сильная жажда.
Меньшее количество мочи (моча).
Мышечные судороги.
Беспокойство или раздражительность.
Рвота.
Слабость.

Если у вас появятся какие-либо симптомы холеры, немедленно обратитесь к врачу.Легкие симптомы могут исчезнуть сами по себе через несколько дней. Но обезвоживание очень быстро может стать смертельным. Раннее лечение может спасти вам жизнь.

Какие проблемы может вызвать холера?

Диарея и рвота из-за холеры могут привести к потере организмом большого количества важных веществ:

Когда вашему организму не хватает этих веществ, вы обезвоживаетесь и у вас может развиться:

Сухие слизистые оболочки (например, глаз, носа и рта).
Быстрый пульс.
Гипокалиемия (низкий уровень калия в крови).
Гипотония (пониженное артериальное давление).
Потеря естественной эластичности кожи.

Без лечения тяжелое обезвоживание от холеры может привести к:

Диагностика и тесты

Как диагностируется холера?

Ведение и лечение

Как лечится холера?

Раствор для пероральной регидратации (ПРР): Возможно, вам придется выпить большое количество предварительно расфасованной смеси сахара, солей и воды.
Внутривенные жидкости: В тяжелом случае обезвоживания врач может использовать иглу для закачивания жидкости непосредственно в ваши вены.

Другие виды лечения могут включать:

Бактерии V. cholera обычно исчезают из организма в течение двух недель.

Профилактика

Как избежать холеры?

Избегайте водопроводной воды, фонтанов и кубиков льда. Эта мера предосторожности распространяется на воду, которую вы пьете, и воду, которую вы используете для мытья посуды, приготовления пищи и чистки зубов.
Не ешьте сырые или недоваренные морепродукты.
Пейте воду только в том случае, если она разлита в бутылки, консервы, сварена или обработана определенными химическими веществами. И не пейте из бутылки или банки со сломанной крышкой.
Ешьте расфасованные продукты.Или убедитесь, что другие продукты свежеприготовленные и подаются горячими.
Рассмотрите возможность дезинфекции воды: кипятите ее не менее одной минуты. Добавьте половину таблетки йода или две капли бытового отбеливателя на каждый литр воды. Или используйте таблетки хлора.
Вымойте фрукты и овощи чистой водой.
Мойте руки чистой водой с мылом, особенно перед тем, как брать пищу и принимать ее, а также после посещения туалета. Если чистой воды и мыла нет под рукой, используйте дезинфицирующее средство для рук, содержащее не менее 60% спирта.

Есть ли вакцина от холеры?

Вакцины

Перспективы / Прогноз

Каковы перспективы для больного холерой?

Жить с

Как я могу защитить себя, если я планирую оказаться в районе холеры?

Вода в бутылках.
Таблицы хлора.
Отбеливатель бытовой.
Йод в таблетках.
Расфасованные продукты.

Записка из клиники Кливленда

Холера: диагностика и дифференциация от других диарейных болезней | Журнал медицины путешествий

Аннотация

Общие сведения

В глобальном масштабе 1,4 миллиарда человек подвержены риску холеры в странах, где эта болезнь носит эндемический характер, и ежегодно заболевает примерно 2,8 миллиона человек. О заболевании значительно меньше сообщается из-за экономических, социальных и политических сдерживающих факторов, а также из-за плохих лабораторных ресурсов и эпидемиологического надзора в этих регионах.Кроме того, выявление холеры от других диарейных причин часто затруднено из-за общей патологии и симптомов, о которых сообщалось лишь в нескольких случаях у путешественников из Северной Европы.

Методы

Был проведен поиск в PubMed и Ovid Medline публикаций по диагностике холеры с 2010 по 2017 годы. В число поисковых запросов входили холера, экспресс-диагностический тест (RDT), мультиплексная ПЦР и диагностика диареи. Исследования включались, если они опубликованы на английском, французском или испанском языках.

Результаты

За период публикации наблюдалось увеличение публикаций по исследованиям RDT по диарейным заболеваниям и попыткам валидации тестов. Было отмечено, что RDT имеют различную избирательность и специфичность, а также связанные с этим затраты и требования к местным ресурсам, которые могут препятствовать их использованию.

Выводы

Несмотря на возможность использования БДТ с высокой избирательностью и специфичностью в районах эпидемии или в удаленных местах без доступа к службам здравоохранения, такие тесты ограничиваются использованием в целях наблюдения.Это может означать упущенную возможность обнаружить истинное глобальное присутствие Vibrio cholerae и его роль во всех причинах диарейных заболеваний в слаборазвитых странах и у путешественников в эти районы. Более широкое применение ДЭТ может также предоставить возможность более широкого лечения диареи путешественников.

Введение

Vibrio cholera — это грамотрицательная галофильная факультативная анаэробная бактерия, которая является предметом давних исследований патогенеза болезни, которые заложили основу эффективных мер по предотвращению вспышек холеры во всем мире.^1,2 Несмотря на наше коллективное понимание холеры, она остается серьезным бременем для мировых ресурсов здравоохранения. Например, в 2010 году 700 000 гаитян заразились холерой, что привело к смертельному исходу в более чем 9000 случаях. ^3,4

Были идентифицированы два серотипа Vibrio cholera , вызывающие холеру, O1 и O139. Эти классификации сделаны на основе O-метилирования O-антигена на поверхности бактериальных клеток. Серогруппа O1 также может быть дополнительно разделена на две подгруппы: биотипы «Классический» и «Эль-Тор».Современные эпидемии холеры увековечены штаммом O1 El Tor, при этом серогруппа O139, идентифицированная в 1992 году как генетически полученная из El Tor. ⁵

Холера и врач — симптомы и лечение

Симптомы холеры в легкой форме часто неотличимы от других причин диареи. По данным ВОЗ, холеру следует подозревать в тех случаях, когда у пациентов в возрасте 5 лет и старше развивается тяжелое обезвоживание или они умирают от острой водянистой диареи, а также в случаях у пациентов в возрасте 2 лет и старше в регионах с эндемичной холерой или страдает эпидемией холеры.¹

Эпидемии холеры также часто сочетаются с гуманитарным кризисом и сбоями в инфраструктуре, которые позволяют внедренным инфицированным фекалиям переносчика распространяться среди населения, с циклическими эпидемиями, связанными с погодными условиями, такими как сезоны муссонов, снижение уровня иммунитета в пределах местное население, повышенная устойчивость к антибиотикам и такие факторы, как изменение климата. ⁶ Изменение климата само по себе является одной из причин возникновения эпидемий холеры, поскольку оно может приводить к более частому повышению уровня холеры в организмах-хозяевах, обитающих в водных резервуарах, в первую очередь в прибрежных водах и устьях рек.^1,7

Инфицирование холерой происходит перорально при попадании внутрь зараженной воды и / или пищи, при этом инфекционная доза, по оценкам, составляет от 10 ⁵ до 10 ⁸ бактериальных клеток; однако, поскольку сильно кислая природа желудка обеспечивает первую линию защиты организма, инфекционные дозы 10 ³ могут быть достаточными для людей с ахлоргидрией. ¹ Другие факторы восприимчивости включают дефицит ретинола (витамина А), а также генетически обусловленные факторы, например, группа крови O связана с более тяжелой холерой и может объяснять низкую распространенность этой группы крови в Южной Азии.^1,8

Инкубационный период холеры составляет от 12 часов до 5 дней. ⁹ В 2016 году 38 стран мира зарегистрировали в общей сложности 132 121 случай заболевания, включая 2420 случаев смерти, в результате чего общий коэффициент летальности составил 1,8%. Тем не менее, в 2016 году в Европе было зафиксировано 47 случаев импорта; зная время инкубации, но игнорируя диагностические трудности, эту цифру можно интерпретировать как приблизительный показатель низкого риска для путешественников. ¹⁰

Холера и путешественник

Поездки в регионы, эндемичные по холере, являются признанным фактором риска для путешественников.^10–14 Весьма вероятно, что районы, которые становятся эндемичными, склонны способствовать циклу передачи Vibrio cholerae из-за ненадлежащего отделения фекалий от источников пищи и воды. ¹⁵

Пункты назначения для путешественников из Северной Европы, которые, таким образом, представляют риск, согласно последним данным эпиднадзора ВОЗ, включают страны Восточной Африки. Популярные страны-сафари, в которых зафиксирован высокий уровень инфицирования холерой в 2016 году, включают Кению (5866 подтвержденных случаев) и Танзанию в период 2015–2018 годов (33 421).^10,16

Сложность обнаружения холеры у путешественника возникает из-за выявления симптомов и исторического отсутствия методов обнаружения, позволяющих установить основную причину диареи путешественника. ¹⁵ Причины диареи путешественников (TD) зависят от пункта назначения, обстановки и времени года. Исследования всех причин TD проводились у путешественников, но лишь немногие из них включали обнаружение V. cholerae . ^15,17–19 Кишечные бактерии зарегистрированы как наиболее частые причины диареи путешественников: Escherichia coli , Campylobacter , Salmonella и Shigella spp.³ Энтеротоксигенный E. coli (ETEC) продуцирует термолабильный и термостабильный токсин. Это самый распространенный вид кишечной палочки , который упоминается при диарее путешественников. ²⁰ Термолабильный токсин является общим с V. cholerae . ³ Гипотетически наличие общего патологического пути может привести к занижению сведений о холере, но рандомизированные контролируемые исследования, в которых использовалась подробная методология для возвращающихся путешественников, показали, что это не так. ¹⁸

Выявление возбудителей диарейных заболеваний

Хотя микробные культуры на селективных средах и тестирование на антитела остаются золотыми стандартами для диагностического подтверждения диарейных патогенов, такие анализы часто затруднены в условиях ограниченных ресурсов, где обнаруживается подавляющее большинство случаев холеры.Для тестирования культур требуется, чтобы образцы были отправлены в лабораторию с соответствующим оборудованием и обученным персоналом, и это может занять до 2 дней. ^21,22 Микроскопия в темном поле может предоставить быстрый альтернативный и менее трудоемкий метод диагностики; однако чувствительность этого метода составляет всего 50% по сравнению с культурой. ¹

Таким образом, есть интерес к другим методам обнаружения кишечных патогенов, таким как стандартные полимеразные цепные реакции (ПЦР), ПЦР в реальном времени и иммуноанализы.Пациенты с диареей выделяют несколько патогенов, что затрудняет оценку этиологии. Подходы количественной ПЦР в реальном времени могут обнаруживать бактериальные, вирусные и паразитарные патогены одновременно с использованием согласованных пар нуклеиновых кислот в нескольких лабораториях с высокой чувствительностью и отличной воспроизводимостью и количественной оценкой. ²³ В качестве показателя специфичности инфекционный агент может быть идентифицирован у более чем 80% людей с TD с помощью исследовательских методов, включая ПЦР. ^24,25 Подобно методам культивирования, ПЦР-диагностика по своей сути способствует выявлению наиболее распространенных патогенов.Ложноотрицательный результат, скорее всего, имеет место в случае патогена с низким числом копий в образце стула вместе с одним или двумя патогенами в большом количестве. Например, одним из наиболее часто идентифицируемых патогенов в стуле пациентов с TD является ETEC, который может создать ложноотрицательный результат для патогенов с низким числом копий в больших объемах. ²⁶

Для решения этой проблемы был разработан мультиплексный количественный ПЦР-тест для выявления распространенных патогенов, связанных с диареей, менее чем за 6 часов. ²⁷ Надежно обнаруживает кишечные бактерии (диареи E.coli , Campylobacter , Shigella , Salmonella ), вирусы (норовирус, ротавирус и аденовирус) и паразитов ( Giardia , Cryptosporidium и E. histolytica ). ^28,29 Проблема с этим диагностическим подходом — стоимость и отсутствие валидации на холеру. ²⁹ Прайс может также запретить рутинное использование для оценки пациентов с острой TD, при этом одно эссе стоит ~ 750 долларов. Эти дорогостоящие анализы, вероятно, больше подходят для случаев стойкой диареи и исследований, а не для лечения острых заболеваний, связанных с поездками.²⁷

Недавнее исследование Deng et al. ³⁰ исследовали присутствие энтеропатогенов в 290 образцах стула от пациентов с диареей в Южном Китае, используя такой многопанельный тест на нуклеиновые кислоты, анализ xTAG-GPP. Они обнаружили, что 159 (54%) из 290 образцов стула были положительными на энтеропатогены. При сравнении использования анализа xTAG-GPP с традиционными методами выявленная частота коинфекции составила 12,1 и 10% соответственно. Чувствительность составила 100% для всех целей, кроме Salmonella, и C.difficile — 84,9 и 88,6% соответственно. Холерный вибрион , чувствительность не установлена. Панель также была ограничена 15 видами бактерий и вирусов, а стоимость и простота транспортировки могут сделать использование анализа xTAG-GPP неприменимым для обнаружения холеры. ³⁰

Диагностика холеры

Что касается других бактериальных причин, то обычный подход к диагностике пациента и эпиднадзору за холерой основан на клиническом обследовании подозреваемых случаев с подтверждением положительным посевом образцов кала в справочных лабораториях.Культура клеток очень специфична и в большинстве стран считается эталонным методом лечения холеры. Фенотипическое разнообразие означает, что для тестирования чувствительности к антибиотикам требуется выделение штаммов V. cholera (VC). ³¹ Однако успешное культивирование клеток — это умение, необходимое для отбора образцов, и задержки в доставке могут существенно повлиять на эффективность культивирования как основного диагностического инструмента. Холера также требует дополнительного молекулярного подтипа для определения подтипа токсина.³²

Холера связана с антисанитарными условиями и плохой инфраструктурой. Задержки в обнаружении вспышек и отсутствие мер контроля в таких средах — из-за зависимости от культуры — могут в конечном итоге привести к ненадежным оценкам бремени холеры. ³³ Появление молекулярных тестов стало альтернативой культивированию для идентификации многих патогенов с помощью методов антигенов и нуклеиновых кислот, разработанных для идентификации видов V. cholera и характеристики серогрупп O1 и / или O139.^34–36 С 2010 г. в многочисленных исследованиях сравнивались тесты амплификации нуклеиновых кислот, такие как ПЦР, с такими методами, как традиционное культивирование, мультиплексная ПЦР со стандартной культурой и для прямого обнаружения антигена, стандартная мультиплексная ПЦР, ПЦР с молекулярным обнаружением и оценка. количественной ПЦР и сероконверсии. ²⁹ В целом те исследования, которые включали обнаружение холеры, подчеркивают большие различия в диагностической эффективности ПЦР в отношении чувствительности и специфичности, цифры варьируются от 58 до 100% и от 60 до 100%, соответственно.⁷ Однако следует предостеречь, что на эти цифры могли повлиять ограничения в дизайне исследования и заниженная специфичность теста. ⁷

ПЦР развивается, но все еще зависит от лаборатории в медицинских учреждениях. Устройства для тестирования по месту лечения (POC) становятся доступными с использованием такой технологии, которая обеспечивает полный процесс «лаборатория на чипе», тем самым устраняя необходимость в центральной испытательной лаборатории и может использоваться полу- квалифицированные специалисты в области здравоохранения в этой области.^37,38 Некоторые преимущества быстрых диагностических тестов (RDT) заключаются в том, что они не требуют холодного хранения и требуют минимального надзора за обработкой. БДТ от холеры также классифицируются регулирующими органами как препараты с низким уровнем риска и не подлежат тем же строгим испытаниям, которые применяются, например, к лекарствам. Знак CE требуется для использования в Европейском Союзе, но такой знак является признаком достижения европейских нормативных стандартов, а не отражением чувствительности или специфичности устройства. ³³

Быстрая тестовая диагностика (RTD) использовалась для выявления ротавирусов, ³⁹ аденовирусных и норовирусных желудочно-кишечных инфекций и выявляла причины в полевых испытаниях с хорошей специфичностью, в том числе в неблагоприятных условиях, таких как ситуации с беженцами.^40,41

Всего было задокументировано 24 RDT для холеры с упором на предоставление быстрых результатов в POC для использования в условиях, где стоимость и доступ к ресурсам, как с точки зрения лаборатории, так и с точки зрения персонала, могут быть ограниченными. Такие иммунологические тесты основаны на обнаружении антигена или антитела и используют такие методы, как обратная пассивная латексная агглютинация (RPLA), тестирование коагглютинации (COAT), подсчетный иммуноанализ (CIA), прямой флуоресцентный анализ антител (DFA) и экспресс-тест на чувствительный мембранный антиген (SMART). .^7,37,38,42 Иммунологические тесты могут не иметь более точного диагноза штамма холеры по сравнению с ПЦР, так как не могут количественно определить количество присутствующих V. cholerae .

БДТ на холеру в своей простейшей форме представляют собой устройство для иммунохроматографических тестов: индикаторную полоску, которую погружают в пробирку с образцом и прикладывают к реагентам, затем жидкость анализируют через кассету, где образец наносится в лунку для образца. Затем ELISA и тест на спаривание на основе моноклональных антител позволяет определить молекулярную специфичность.²¹ Тесты дают быстрый (<30 мин) качественный результат в виде цветной полосы, которую можно прочитать невооруженным глазом. Они быстрые, доступные, простые в использовании и требуют минимальной инфраструктуры. ²¹ Как таковые, они хорошо подходят для удовлетворения спроса на диагностику холеры в тех областях, где методы на основе культивирования или ПЦР невозможны. Таким образом, ДЭТ по холере можно использовать для быстрого выявления случаев холеры среди населения во время кризиса. ^37,38 В то время как ПЦР имеет проблему обфускации нуклеиновых кислот с низким числом копий при разделении и определении видов, тесты ELISA для отдельных видов могут не дифференцировать эндотоксины близкородственных видов.⁴³

Устройства бокового потока, которые обнаруживают липополисахарид V . cholerae O1 и O139, полученные с помощью иммунохроматографических анализов, являются наиболее распространенными ДЭТ на холеру. ^44,45 Несмотря на свои преимущества, существуют также значительные ограничения для RDT с боковым потоком. Доказательства для их использования ограничены, и большинство исследований, проведенных с Crystal VC, наиболее широко используемым RDT, демонстрируют субоптимальную специфичность. ⁷ Щуп Crystal VC дешев, дает результаты в течение 15–20 минут и похож на тест на беременность в том, что появление полос на полоске щупа используется для диагностики наличия холеры в образце стула или мазке. .⁴⁶ Хотя щуп Crystal VC является чувствительным, он обладает относительно низкой специфичностью. В ходе полевых испытаний пользователи щупа обнаружили, что легко различать положительные и отрицательные результаты благодаря узнаваемому положительному сигналу. ^47,48

Предыдущие оценки Crystal VC продемонстрировали чувствительность от 58 до 100% и специфичность от 60 до 100%. ^46–53 На Гаити этот тест оценивался дважды, и его чувствительность составила 95 единиц.0 и 95,6%, а специфичность 79,5 и 80,0%. ^33,49,50 Расширенная версия этого теста, которая включает инкубацию образца перед тестированием, значительно улучшает характеристики теста (специфичность: 100%; чувствительность: 86%). Однако это также значительно увеличивает время отображения результата и увеличивает сложность теста и требуемых ресурсов. ⁵²

Определение холеры, вызванной другими причинами желудочно-кишечной инфекции, не изучалось с использованием наборов для экспресс-тестов, и специфичность тестов, особенно против ETEC, должна быть тщательно изучена при использовании иммуноанализов, нацеленных на липополисахаридный токсин V.cholera , который на 80% похож на термолабильный эндотоксин E. coli . ⁵⁴ В настоящее время требуются менее практичные лабораторные тесты, способные к дифференциации, такие как ПЦР, такие как набор Genosensor для холеры, с высокой специфичностью (100%) и чувствительностью (до 10 КОЕ / мкл) для штаммов холеры. ⁵⁵

С точки зрения одновременного обнаружения нескольких штаммов холеры, также был разработан метод тестирования холеры POC под названием Vch-UPT-LF, ⁵⁶, который представляет собой боковой поток на основе люминофорной технологии с повышающим преобразованием (UPT-LF ) в режиме обнаружения с двумя мишенями (рис. 1).Он был разработан для обнаружения V . cholerae O1 и O139 одновременно из одной загрузки образца в отличие от двух отдельных тестов на иммуноген. ⁵⁷ Хотя применение независимой пары реакций сделало оба результата обнаружения для двух каналов обнаружения Vch-UPT-LF более стабильными, чувствительность немного снизилась с 10 ⁴ до 10 ⁵ колониеобразующих единиц (КОЕ) мл ^{— 1} по сравнению с анализом с одной мишенью. Полоска Vch-UPT-LF показала превосходную специфичность для семи видов Vibrio , которые являются высокородными генетически, и девяти видов пищевого происхождения, включая ETEC, пути передачи которых аналогичны путям передачи V . холеры . ⁵⁶ Тем не менее, тест требует более высокой степени компетентности.

Рис. 1.

Принципиальная схема анализа Vch-UPT-LF. (A) Анализ бокового потока на основе технологии повышающего преобразования для одновременного обнаружения V. cholerae O1 и O139, а именно Vch-UPT-LF, был установлен с антителами против O1 и O139 в качестве тестовой линии 1 и тестовой линии. 2, нанесенных на аналитическую мембрану на полоске, соответственно.(B) После добавления образца комплексы UCP-антитело текли вперед вместе с жидким образцом. (C) Положительные сигналы генерировались для тестовой линии 1 или тестовой линии 2, когда образцы содержали V. cholerae, O1 или O139. Точность и точность Vch-UPT-LF зависела от стабильных сигналов на линии C, которые поддерживаются кроличьими анти-козьими IgG, независимо связанными с UCP-козьими IgG. Воспроизведено с разрешения Ref. ⁵⁶

Рис. 1.

Принципиальная схема анализа Vch-UPT-LF.(A) Анализ бокового потока на основе технологии повышающего преобразования для одновременного обнаружения V. cholerae O1 и O139, а именно Vch-UPT-LF, был установлен с антителами против O1 и O139 в качестве тестовой линии 1 и тестовой линии. 2, нанесенных на аналитическую мембрану на полоске, соответственно. (B) После добавления образца комплексы UCP-антитело текли вперед вместе с жидким образцом. (C) Положительные сигналы генерировались для тестовой линии 1 или тестовой линии 2, когда образцы содержали V. cholerae, O1 или O139.Точность и точность Vch-UPT-LF зависела от стабильных сигналов на линии C, которые поддерживаются кроличьими анти-козьими IgG, независимо связанными с UCP-козьими IgG. Воспроизведено с разрешения Ref. ⁵⁶

Эффективность различных ДЭТ для диагностики холеры существенно различается. Некоторые обладают высокой чувствительностью и низкой специфичностью. ⁵⁸ Субоптимальные характеристики (специфичность, 95% ДИ: 64,7–76,9%) ⁵⁵ этих тестов, вероятно, ограничивают их использование в качестве клинических тестов POC, поскольку дифференциация причины диареи ограничивается ложноположительными результатами на холеру; хотя они могут быть полезны для реагирования на вспышки, эпиднадзора и исследований в условиях ограниченных ресурсов.⁵²

В соответствии с этими выводами рекомендации ВОЗ по использованию ДЭТ являются ограничивающими: они подчеркивают использование на уровне первичной медико-санитарной помощи только для целей наблюдения, а не для диагностики бактериальной причины. Руководство рассматривает ДЭТ как метод сортировки образцов для лабораторного подтверждения с помощью посева или лабораторной ПЦР. ⁵⁹ Руководство написано с некоторым учетом среды в условиях холеры при идентификации одноразовых БДТ в пунктах оказания медицинской помощи, но, вероятно, чрезмерно полагается на культуру, когда чувствительность тестовой ПЦР может превышать 95%.^22,33

Целостно и локально для Северной Европы определение холеры как причинного вида в повторяющихся случаях диареи путешественников может иметь прямое отношение к клиническому сообществу при определении противомикробной фармакотерапии по мере появления моделей устойчивости. Это в дополнение к любому интересу к определению определенного количества возвращающихся случаев и разговорных проблемных областей. Использование БДТ с высокой специфичностью в отношении холеры или более распространенных возбудителей, таких как ETEC, может иметь значение для путешественников в районах с известной эпидемией холеры, когда путешественники рассматривают возможность фармакотерапии в удаленных местах.⁶⁰ Помощь в выборе подходящего антибиотика профессиональным медицинским работником в поездках или помощь в другом эмпирическом лечении в целях борьбы с устойчивостью к противомикробным препаратам. ⁶¹

Заключение

Появление RDT дает возможность быстро идентифицировать холеру от других причин диареи. Появляющаяся доступность этих тестов означает, что точный диагноз холеры как причины диареи может быть быстро установлен в удаленных условиях, что помогает локальным усилиям по сдерживанию распространения болезни.Роль БЭТ по холере у путешественников из Северной Европы менее ясна. Другие одноразовые тесты, такие как системы на основе ELISA для ETEC, могут сыграть роль в идентификации причины TD и избежать ненужной удаленной эмпирической антимикробной терапии путешественником. Более сложные лабораторные тесты, такие как ПЦР, были применены в контролируемых исследованиях для выявления причины TD, в то время как холера не показала, что является инфекционным агентом в таких образцах, роль ПЦР в снижении нагрузки на здравоохранение на местном уровне, путем выявления причины диареи и контроля устойчивости к антибиотикам, имеет были идентифицированы.

Конфликты интересов: Dr T.P. Лиройд является руководителем медицинского отдела Valneva UK и Valneva по европейским и глобальным дистрибьюторским соглашениям, а также директором по рассмотрению жалоб компании PharmaDoctor, партнера-дистрибьютора Biopanda Rapid Dignositic Test Kits. R.M. Гаут владеет Xnomics Ltd, исследовательской организацией, изучающей процессы полимеразной цепной реакции.

Список литературы

Harris

LaRocque

Qadri

et al..

Холера

Ланцет

2012

;

379

2466

—

Zmeter

Tabaja

Sharara

Kanj

Не-O1, не-O139 Септицемия холерного вибриона в центре третичной медицинской помощи в Бейруте, Ливан; отчет о болезни и обзор

J Инфекция общественного здравоохранения

2018

. .3

Ali

Nelson

Lopez

Sack

Обновленное глобальное бремя холеры в эндемичных странах

PLoS Neglected Trop Dis

2015

;

e0003832

Taylor

Kahawita

Cairncross

Ensink

JHJ

Воздействие водоснабжения, санитарии и гигиены на борьбу с холерой: систематический обзор

PLoS One

2015

;

e0135676

Clemens

Nair

Ahmed

et al. .

Холера

Ланцет

2017

;

390

1539

—

Mandal

Pal

Холера: большая глобальная проблема

Asian Pac J Trop Med

2011

;

573

—

Dick

Guillerm

Moussy

Chaignat

Обзор диагностики холеры за два десятилетия — как далеко мы действительно продвинулись?

PLoS Neglected Trop Dis

2012

;

e1845

Nelson

Harris

Morris

et al. .

Передача холеры: хозяин, возбудитель и бактериофаг динамика

Nat Rev Microbiol

2009

;

693

—

702

.10

Всемирная организация здравоохранения

. Еженедельный эпидемиологический журнал,

2017

; 92 : 521–536.12

Lopez

Gonzales

MLA

Aldaba

Nair

Убитые оральные вакцины против холеры: история, проблемы разработки и внедрения

Ther Adv Vaccines

2014

;

123

—

.15

Jiang

Butzler

. Бактериальные возбудители. В:

Ericsson

DuPont

Steffen

(ред.).

Диарея путешественников

, 2-е изд.

Гамильтон, Онтарио

Decker BC

2008

, стр.

—

.17

Найнин

Leder

Qadri

et al. .

Влияние добавления промывки рук и дезинфекции воды к оральной вакцинации против холеры на госпитализацию в связи с диареей в Дакке, Бангладеш: данные кластерного рандомизированного контрольного исследования

Int J Epidemiol

2017

;

2056

—

. .18

Lääveri

Vilkman

Pakkanen

et al..

A. Перспективное исследование диареи путешественников: анализ обнаружения патогенов по пунктам назначения в различных (суб) тропических регионах

Clin Microbiol Infect

2017

. .19

Jiang

DuPont

Этиология диареи путешественников

J Travel Med

2017

;

S13

—

. .20

Риддл

Коннор

Beeching

et al..

Руководство по профилактике и лечению диареи путешественников: оцененный отчет экспертной группы

J Travel Med

2017

;

S63

—

. .21

Rahaman

Islam

Colwell

Alam

Молекулярные инструменты для понимания эволюции холерного вибриона

Передний микробиол

2015

;

1040

.22

Ontweka

Deng

Rauzier

et al. .

Экспресс-тест на холеру с этапом обогащения имеет диагностические характеристики, эквивалентные посеву

PLoS One

2016

;

e0168257

.23

Liu

Platts-Mills

Juma

et al. .

Использование количественных молекулярных методов диагностики для выявления причин диареи у детей: повторный анализ исследования случай-контроль GEMS

Ланцет

2016

;

388

1291

—

301

.24

Antikainen

Kantele

Pakkanen

et al. .

Количественный анализ полимеразной цепной реакции для быстрого обнаружения 9 патогенов непосредственно в стуле путешественников с диареей

Клин Гастроэнтерол Гепатол

2013

;

1300

—

7 e3

.25

Koo

Ajami

Jiang

et al. .

Норовирусы как причина диареи у путешественников в Гватемалу, Индию и Мексику

J Clin Microbiol

2010

;

1673

—

,26

Youmans

Ajami

Jiang

et al. .

Разработка и точность количественных анализов полимеразной цепной реакции в реальном времени для обнаружения и количественной оценки энтеротоксигенных Escherichia coli (ETEC) генов термолабильных и термостабильных токсинов в образцах диареи путешественников

Am J Trop Med Hyg

2014

;

124

—

,27

DuPont

Стойкая диарея: клинический обзор

J Am Med Assoc

2016

;

315

2712

—

,28

Ajami

Kavanagh

Ramani

et al. .

Сероэпидемиология диареи путешественников, связанной с норовирусом

J Travel Med

2014

;

—

,29

Зборомирская

Hurtado

Salvador

et al. .

Этиология диареи путешественников: оценка инструмента мультиплексной ПЦР для обнаружения различных энтеропатогенов

Clin Microbiol Infect

2014

;

O753

—

.30

Deng

Luo

Wang

et al..

Сравнение панели желудочно-кишечных патогенов LuminexxTAG (xTAG-GPP) и стандартных тестов для обнаружения энтероаптогенов, циркулирующих в Южном Китае

Диагностика Microbiol Infect Dis

2015

;

325

—

.31

Vila

Новые средства молекулярной диагностики диареи путешественников

J Travel Med

2017

;

S23

—

, 10.1093 / jtm / taw071.32

Duong

Phat

Tuyen

et al. .

Оценка панельного анализа желудочно-кишечных патогенов LuminexxTAG для выявления множественных диарейных патогенов в образцах фекалий во Вьетнаме

J Clin Microbiol

2016

;

1094

—

100

.33

Всемирная организация здравоохранения. Глобальная целевая группа по борьбе с холерой. Промежуточное техническое примечание — Использование экспресс-тестов на холеру .

2016

: 1–5.34

Lopez

Macasaet

Ylade

Tayag

Ali

Эпидемиология холеры на Филиппинах

PLoS Negl Trop Dis

2015

;

e3440

.35

Chen

Shi

et al..

Быстрое генетическое типирование диареи Escherichia coli с использованием двухпробирного модифицированного молекулярного маяка на основе мультиплексного ПЦР-анализа в реальном времени и его клинического применения

Ann Clin Microbiol Antimicrob

2014

;

,36

Мэдисон-Антенуччи

Relich

Doyle

et al. .

Многоцентровая оценка анализа BD MAX Enteric Parasite RT-PCR assay для выявления Giardia duodenalis, Cryptosporidium hominis и C.parvum и Entamoeba histolytica

J Clin Microbiol

2016

;

00765

—

.37

Страница

Alberti

Mondonge

et al. .

Оценка экспресс-теста для диагностики холеры при отсутствии золотого стандарта

PLoS One

2012

;

e37360

.38

Ley

Khatib

Thriemer

et al..

Оценка тестовой полоски Rapid Dipstick (Crystal VC) для диагностики холеры на Занзибаре и сравнение с предыдущими исследованиями

PLoS One

2012

;

e36930

.39

Ope

Nyoka

Unshur

et al. .

Оценка полевых характеристик ImmunoCard STAT! (®) Быстрый диагностический тест на ротавирус в лагере беженцев Дадааб и на границе Кении и Сомали

Am J Trop Med Hyg

2017

;

1302

—

.40

Kas

Maure

Soli

кВт

и др. .

Оценка быстрого иммунохроматографического анализа для обнаружения ротавируса, норовируса и аденовируса у детей, госпитализированных с острой водянистой диареей

P N G Med J

2013

;

141

—

.41

Kumthip

Khamrin

Saikruang

et al. .

Сравнительная оценка норовирусной инфекции у детей с острым гастроэнтеритом с помощью экспресс-иммунохроматографического теста, ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР в реальном времени

J Trop Pediatr

2017

2 марта .42

Qadri

Hasan

Hossain

et al. .

Оценка набора на основе моноклональных антител Bengal SMART для быстрого обнаружения Vibrio cholerae O139 синонима Bengal в образцах стула

J Clin Microbiol

1995

;

732

—

.43

Свеннерхольм

A-M

Разработка вакцины от холеры до энтеротоксигенной Escherichia coli (ETEC)

Indian J Med Res

2011

;

133

188

—

.44

Chen

Zhang

Gang

et al. .

Разработка иммунохроматографического устройства с боковым потоком для быстрой диагностики холерного вибриона O1 серотипа Огава

Clin Biochem

2014

;

448

—

.45

Keddy

Sooka

Parsons

et al. .

Диагностика инфекции V ibrio cholerae O1 в Африке

J Infect Dis

2013

;

208

—

.46

Harris

Cavallaro

De Nóbrega

et al..

Полевая оценка экспресс-тест-полоски Crystal VC ^® на холеру во время вспышки холеры в Гвинее-Бисау

Trop Med Int Health

2009

;

1117

—

.47

Каллури

Naheed

Rahman

et al. .

Оценка трех экспресс-тестов для диагностики холеры: имеет ли значение уровень квалификации специалиста?

Trop Med Int Health

2006

;

—

.48

Sinha

Sengupta

Ghosh

et al. .

Оценка экспресс-теста для выявления случаев холеры во время вспышки

Indian J Med Res

2012

;

135

523

—

.49

Boncy

Rossignol

Dahourou

et al. .

Эффективность и полезность экспресс-теста на холеру: заметки из Гаити

Диагностика Microbiol Infect Dis

2013

;

521

—

.50

Хасан

Huq

Nair

et al. .

Разработка и тестирование наборов для экспресс-диагностики на основе моноклональных антител для прямого обнаружения Vibrio cholerae O139 синоним Bengal

J Clin Microbiol

1995

;

2935

—

.51

Steenland

Joseph

Lucien

MAB

et al. .

Лабораторно подтвержденные холера и ротавирус среди пациентов с острой диареей в четырех больницах Гаити, 2012–2013 гг.

Am J Trop Med Hyg

2013

;

641

—

.52

Мукерджи

Ghosh

Ramamurthy

et al..

Оценка набора экспресс-иммунохроматографических тест-полосок для диагностики холеры подчеркивает его полезность для вспышек

Jpn J Infect Dis

2010

;

234

—

.53

Ley

Khatib

Thriemer

et al. .

Оценка тест-полоски для экспресс-анализа (Crystal VC) для диагностики холеры на Занзибаре и сравнение с предыдущими исследованиями

PLoS One

2012

;

—

.54

Gonzales

Brooks

Pukatzki

Provenzano

Быстрый протокол подготовки электрокомпетентной кишечной палочки и холерного вибриона

J Vis Exp

2013

;

50684

. .55

Matias

Julceus

Abelard

et al..

Лабораторная оценка иммунохроматографических экспресс-тестов для диагностики холеры в Гаити

PLoS One

2017

;

e0186710

.56

Hao

Zhang

et al. .

Разработка и оценка анализа бокового потока на основе технологии повышающего преобразования люминофора для быстрого одновременного обнаружения Vibrio cholera e серогрупп O1 и O139

PLoS One

2017

;

e0179937

.57

Hasan

Huq

Tamplin

et al. .

Новый набор для быстрого обнаружения Vibrio cholerae O1

J Clin Microbiol

1994

;

249

—

.58

Ютла

Whitcombe

Hasan

et al..

Факторы окружающей среды, влияющие на эпидемию холеры

Am J Trop Med Hyg

2013

;

597

—

607

.59

Beckmann

Heininger

Marti

Hirsch

Патогены желудочно-кишечного тракта, обнаруженные с помощью множественного тестирования амплификации нуклеиновых кислот в стуле педиатрических пациентов и пациентов, вернувшихся из тропиков

Инфекция

2014

;

961

—

.60

Feglo

Sewurah

Характеристика высоко вирулентного вируса с множественной лекарственной устойчивостью Vibrio cholerae , выделенного из крупной вспышки холеры в Гане

BMC Res Notes

2018

;

. .61

DuPont

Steffen

Использование противомикробных препаратов для лечения и профилактики диареи путешественников перед лицом повышенного риска транзиторного фекального носительства энтеробактерий с множественной лекарственной устойчивостью: подготовка основ для согласованных рекомендаций

J Travel Med

2017

;

S57

—

. .

Лабораторная оценка экспресс-тестов для обнаружения холерного вибриона O1 с использованием образцов диареи

Аннотация

Фон

Холера, острое диарейное заболевание, является серьезной проблемой общественного здравоохранения во многих развивающихся странах. Для выявления холеры доступно несколько экспресс-тестов (RDT), но их эффективность не сравнивается в эндемичных условиях.В этом исследовании мы сравнили специфичность и чувствительность трех наборов RDT для обнаружения Vibrio cholerae O1 и сравнили их эффективность с методами культивирования и полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Методы

Пятьсот шесть образцов диарейного стула, взятых у пациентов из двух разных больниц в Калькутте, Индия, были протестированы с использованием наборов SD Bioline Cholera, SMART-II Cholera O1 и Crystal-VC RDT. Все образцы стула были проверены на наличие V . cholerae прямым и накопительным методами культивирования. ПЦР-анализ стула на основе ДНК проводили для нацеливания на гены, кодирующие токсин холеры ( ctxAB ) и соматический антиген O1 ( rfb ). Статистическая оценка RDT была проведена с использованием программного обеспечения STATA с результатами посева кала и результатами ПЦР в качестве золотых стандартов. Модель латентного класса Байеса (LCM) использовалась для оценки диагностических тестов в отсутствие золотого стандарта.

Результаты

При использовании метода культивирования в качестве золотого стандарта чувствительность и специфичность наборов БДТ для холеры при прямом тестировании стула была самой высокой с SAMRT-II (86.1%) и SD-холера (94,4%) соответственно. Анализ ПЦР на основе ДНК дал очень высокую чувствительность (98,4%), но специфичность была сравнительно низкой (75,3%). После обогащения высокая чувствительность и специфичность были обнаружены с SAMRT-II (78,8%) и SD-Cholera (99,1%) соответственно. Считая ПЦР золотым стандартом, чувствительность и специфичность ДЭТ оставались между 52,3–58,2% и 92,3–96,8% соответственно. В LCM чувствительность прямого и обогащенного тестирования была высокой для SAMRT-II (88% и 92% соответственно), но специфичность была высокой для SD-холеры для обоих методов (97% и 100% соответственно).Чувствительность / специфичность ДЭТ и прямой посев также анализировались с учетом возраста, пола и тяжести диарейного заболевания у пациентов.

Заключение

В целом, характеристики наборов RDT остались почти одинаковыми с точки зрения специфичности и чувствительности. Эффективность ПЦР была выше, чем у RDT на основе антител. RTD очень полезны для выявления случаев холеры во время вспышек / эпидемий и для того, чтобы превратить их в инструмент тестирования на месте (POC), требующий дальнейшего улучшения.

Информация об авторе

Холера вызывается токсигенным Vibrio cholerae , который вызывает массовое накопление жидкости в кишечнике хозяина и секреторную диарею. Смерть от холеры можно предотвратить путем своевременной диагностики и раннего лечения пациентов с помощью регидратационной терапии. Вспышки холеры часто регистрируются в нескольких странах из-за низкого качества питьевой воды и отсутствия санитарии. Ранняя диагностика вспышек холеры очень полезна для обеспечения соблюдения мер борьбы.Во многих эндемичных по холере странах ресурсы лабораторий для выявления случаев холеры ограничены. Несмотря на то, что обычные методы культивирования выделения и идентификации V . cholerae полезны для диагностики холеры, его чувствительность не превосходит по сравнению с методами на основе антител и ДНК. Несколько наборов для быстрой диагностики холеры (RTD) на основе антител разработаны для использования в качестве устройства для оказания медицинской помощи (POC) или в полевых условиях. Используя образцы диарейного стула, мы сравнили эффективность трех ДЭТ на холеру с бактериальными культурами и анализами ПЦР.Применяя результаты культивирования и ПЦР в качестве золотых стандартов, а также в отсутствие золотого стандарта, был проведен соответствующий статистический анализ для оценки диагностических тестов. Мы также рассмотрели наличие других патогенов в стуле и клинические характеристики пациентов в анализе. Хотя наборы для диагностики холеры очень полезны для обнаружения V . cholerae O1, даже при наличии других патогенов в стуле, они не могут рассматриваться как инструмент POC из-за отсутствия необходимой специфичности.

Образец цитирования: Чоудхури Г., Сенапати Т., Дас Б., Камат А., Пал Д., Бозе П. и др. (2021) Лабораторная оценка экспресс-тестов для обнаружения Vibrio cholerae O1 с использованием диарейных образцов. PLoS Negl Trop Dis 15 (6):
e0009521.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0009521

Редактор: Хусейн Пунавала, Больница общего профиля Лоуэлл, СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ

Поступила: 18 июня 2020 г .; Принят в печать: 30 мая 2021 г .; Опубликован: 15 июня 2021 г.

Авторские права: © 2021 Chowdhury et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в рукописи и ее файлах с вспомогательной информацией.

Финансирование: Работа была поддержана Фондом Билла и Мелинды Гейтс (инвестиционный код OPP1126286). Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, решении опубликовать или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Холера — серьезная проблема общественного здравоохранения во многих развивающихся странах. В 2017 г. 34 страны сообщили в ВОЗ о более чем 490 000 случаев холеры и 2900 смертельных исходах [1]. Важные эпидемиологические события в истории холеры включают эпидемию в Латинской Америке через 100 лет [2], генезис Vibrio cholerae O139 на Индийском субконтиненте [3] и появление и распространение V . cholerae, гибридных штаммов Эль Тор [4]. В октябре 2010 г. от эпидемии холеры на Гаити пострадало более 8 000 000 человек, 9 000 из которых умерли [5]. В Йемене за период с 2016 по 2018 год было зарегистрировано более одного миллиона случаев холеры и 2300 смертей, что представляет собой общий уровень заболеваемости 3,7%, что является одной из крупнейших эпидемий в Азии [6].

Возбудителем холеры является грамотрицательная изогнутая бактерия Vibrio cholerae . Токсин холеры (ХТ), продуцируемый этим патогеном, является основным фактором вирулентности, связанным с заболеванием.CT содержат субъединицы A и B, которые кодируются генами ctxA и ctxB соответственно. Оба гена являются частью нитчатой оцДНК бактериофага CTXΦ, которая интегрирована в локусы dif хромосомы V . cholerae [7]. Субъединица CT-A отвечает за фенотип заболевания, тогда как субъединица B транспортирует субъединицу A к клеткам-мишеням, катализируя аденозиндифосфат (АДФ) -рибозилирование, что приводит к стимуляции аденилатциклазы и увеличению внутриклеточного циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) [8] .Повышение внутриклеточного цАМФ приводит к снижению поглощения натрия и увеличению оттока хлоридов, вызывая обильную секрецию воды в форме острой диареи, которая может стать фатальной при отсутствии лечения [9].

В . cholerae классифицируется более чем на 200 серогрупп соматического О-антигена [10,11]. Серогруппа O1 подразделяется на два биотипа, классический и Эль-Тор, оба включают серотипы Огава и Инаба. Предполагалось, что классический биотип участвует в первых шести пандемиях холеры, а биотип Эль-Тор связан с продолжающейся седьмой пандемией [12].Другой токсигенный V . cholerae серогруппа O139, синоним Бенгалия, появилась на Индийском субконтиненте в 1992 году и распространилась на другие азиатские страны [3]. Известно, что серогруппы O1 и O139 вызывают эпидемическую холеру.

В клинических условиях случаи острой холеры распознаются на основании характерных клинических симптомов, типичных для рисовой водянистой диареи с рвотой или без рвоты и тяжелого обезвоживания. Смертность от холеры можно предотвратить, если своевременно выявить заболевание и восполнить потерю жидкости путем регидратации пораженных пациентов.Поскольку несколько других патогенов могут вызывать острую диарею, для идентификации возбудителя используются обычные методы. Диагноз холеры был поставлен путем выделения и идентификации V . cholerae из образцов кала. Эти методы, основанные на культуре, могут занять два или более дней, а также требуют хорошей лабораторной инфраструктуры с квалифицированным персоналом. Несвоевременное выявление вспышек холеры может иметь несколько последствий, включая неэффективные меры общественного здравоохранения, распространение болезни и рост показателей заболеваемости и смертности.Быстрая диагностика помогает в установлении надлежащего ухода на ранней стадии инфекции и своевременном проведении вмешательств в любых условиях.

Тест экспресс-диагностики холеры (RDT) представляет собой многообещающий инструмент для раннего обнаружения V . cholerae O1 / O139 непосредственно из образцов стула даже в отдаленных районах, где лабораторные ресурсы ограничены [13]. Этот метод не требует специальных лабораторных навыков для выявления случаев холеры [14]. Учитывая его известность, RDT был включен в исследование ВОЗ по холере (https: // www.who.int/cholera/kit/cholera-kit-item-list.pdf?ua=1). Одним из широко используемых БДТ на холеру является Crystal-VC (Arkray Health Care Pvt Ltd, Сурат, Индия), который представляет собой набор щупов с вертикальным потоком. Практически все наборы для диагностики холеры основаны на обнаружении антигена, специфичного для липополисахаридов (ЛПС) V . cholerae серогрупп O1 и O139 моноклональными антителами, работающими по принципу иммунохроматографии [15]. В нескольких исследованиях было показано, что чувствительность и специфичность ДЭТ при холере различаются и поэтому используются в качестве эпидемиологического инструмента, а не диагностического набора [16,17].Кроме того, ДЭТ использовалась в кампании иммунизации против холеры для выявления вакцинированных лиц [18]. Доступно несколько наборов БДТ для холеры, но их эффективность не подтверждена на большом количестве образцов. Помимо культивирования и ДЭТ на основе антител, для быстрого обнаружения генов вирулентности V использовалось несколько методов полимеразной цепной реакции (ПЦР). cholerae [19]. Анализ ПЦР обычно быстрее и более чувствителен, чем методы культивирования и, следовательно, идентификация V . cholerae в кале с помощью посева или ПЦР считается золотым стандартом диагностики холеры [20–22]. Однако эти анализы требуют подходящей лабораторной инфраструктуры, дорогостоящего оборудования и квалифицированного персонала, чего не было бы в отдаленных районах, где часто происходят вспышки.

В этом исследовании мы рассмотрели три различных набора БДТ для холеры, не только оценив их эффективность, но и сравнив результаты с методами культивирования и ПЦР. Основная цель исследования состояла в том, чтобы определить, соответствует ли общая диагностическая эффективность ДЭТ другим диагностическим методам или лучше.Кроме того, мы предприняли попытку предоставить оценки чувствительности / специфичности, стратифицированные по тяжести заболевания, возрасту и полу. Мы также проверили предел обнаружения наборов для диагностики холеры и продолжительность действия В . cholerae O1 жизнеспособность в среде Кэри-Блера для проверки их эффективного использования.

Материалы и методы

Заявление об этике

Комитет по этике Национального института холеры и кишечных заболеваний (NICED), Калькутта, одобрил это исследование.Письменное информированное согласие было получено от участников исследования или от родителей / опекунов в случае несовершеннолетних. Конфиденциальность и конфиденциальность данных, полученных от участников, были обеспечены во время и после исследования.

Сбор образцов

Перед введением антибиотиков образцы стула были взяты у госпитализированных пациентов с диареей в Инфекционной больнице (IDH) и у детей, лечившихся от диареи в амбулаторных условиях в Детской больнице им. Б. К. Роя (BCH), Калькутта.Диарейная инфекция определяется, когда у пациента выделяется 3 или более жидких или жидких стула за последние 24 часа или менее 3 жидких стула, связанных с обезвоживанием; или хотя бы один жидкий стул с кровью за последние 24 часа. Клинические симптомы диарейных пациентов включали жидкий / водянистый стул с обезвоживанием или без него, спазмы в животе, рвоту и лихорадку. У пациентов с дизентерией был частый стул с кровью / слизью и боль в животе от легкой до сильной. Образцы стула были собраны в стерильные контейнеры с широким горлышком и доставлены в течение 2 часов в лабораторию NICED при температуре окружающей среды.Отбор образцов проводился в течение двух последовательных сезонов пика холеры, т. Е. С августа по декабрь 2016 г. и с июля по ноябрь 2017 г. результаты посева и устранение / уменьшение количества патогенов в стуле.

Размер выборки для исследования был основан на формуле Будерера для чувствительности и специфичности диагностических наук о здоровье. Результаты предыдущего больничного исследования [23] показали 26% -ную изоляцию V . cholerae O1 от больных диареей всех возрастных групп. Учитывая 90% специфичность теста, требуемый размер выборки будет 260, для 95% уровня достоверности и 6% абсолютной точности. Точно так же при 80% чувствительности теста требуемый размер выборки составил бы 463. Ожидая вариации в пропорции изолированного организма, мы включили примерно на 10% больше образца и, наконец, включили в это исследование 506 образцов.

Холерные РДЦ

Для скрининга использовали три набора БДТ на холеру, а именно SD Bioline Cholera Ag O1 / O139 (Standard Diagnosis, S.Корея), SMART-II Cholera O1 (New Horizon, США) и Crystal-VC (Arkray Health Care Pvt Ltd, Сурат, Индия). Из них SD Bioline Cholera и Crystal-VC могут обнаруживать серогруппы O1 и O139 V . холеры . Пять капель (~ 200 мкл) жидкого стула добавляли во флакон для обработки образца и осторожно смешивали с разбавителем, поставляемым вместе с соответствующим набором. В . cholerae позволили расти в щелочной пептонной воде (APW, pH 8,0) в течение 4 часов из образцов стула, также были протестированы с использованием наборов RDT.Для теста Crystal-VC четыре капли обработанного образца помещали в пробирку, и тест-полоску погружали в пробирку для вертикального потока. Результаты интерпретировали согласно протоколу производителя. Для двух других наборов с боковым потоком разбавленный стул распределялся непосредственно в лунку для образца тест-кассеты, и результаты интерпретировались в соответствии с рекомендациями производителей.

Техника культивирования

Для изоляции В . cholerae образцы стула непосредственно инокулировали на чашки с сахарозным агаром с солями желчных кислот и цитратом тиосульфатом (TCBS, Eiken, Tokyo, Japan) с последующей инкубацией в течение ночи при 37 ° C. Одновременно несколько капель стула инокулировали в APW в течение 4 часов. Культуру, обогащенную APW, проверяли на V . cholerae с использованием агара TCBS. Типичный положительный по сахарозе V . изолятов холеры были субкультивированы на агаре Luria Bertani (LB, Difco, Sparks, MD, USA) и серологически протестированы с использованием коммерчески доступного V . cholerae, O1 poly и моновалентные антисыворотки Ogawa и Inaba (Denka-Seiken, Tokyo, Japan). Образцы стула также тестировались на наличие других кишечных бактериальных, вирусных и простейших патогенов в соответствии с методами, описанными в нашем предыдущем исследовании [23].

PCR

Двести мкл водянистого стула использовали для экстракции ДНК с использованием мини-набора для стула QIAamp Fast DNA (Qiagen, Hilden, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. В Научно-технологическом институте трансляционного здравоохранения, Фаридабад, был проведен анализ ПЦР с ДНК стула, нацеленной на ген CT ( ctxAB ), а также на область rfb , которая кодирует соматический антиген серогруппы O1.Симплексный ПЦР-анализ выполняли на приборе Eppendorf Mastercycler (Eppendorf, Германия). В . cholerae O1- rfb специфические праймеры: O1-F (5′-TCTATGTGCTGCGATTGGTG-3 ‘), O1-R (5′-CCCCGAAACCTAATGTGAG-3’) и холерный токсин ( ctxAB : ген ctxAB ) -F (5′- CAATATCAGATTGATAGCCTGA-3 ‘), ctx -R (5′-ACTAATTGCGGCAATCGCATG-3′) были использованы для амплификации O1 rfb (размер ампликона 650 п.н.) и ctx размером 413 п.н. ) гены при температурах отжига 46 ° C и 49 ° C в течение 20 секунд соответственно.Продукты ПЦР визуализировали на 1% агарозном геле с помощью устройства для визуализации изображений Gel (AlphaImager HP, Сан-Хосе, Калифорния, США) после окрашивания бромидом этидия (0,5 мкг / мл). ДНК, выделенная из V . cholerae O1 штамм N16961 использовали в качестве положительного контроля. Это исследование было проведено полностью ослепляющими обученными техниками при выполнении посева кала, ДЭТ и ПЦР.

Предел обнаружения холеры наборов БДТ

Ночная культура стандарт В . cholerae O1 штамм N16961 использовали в качестве исходной культуры в бульоне LB (Difco), который выращивали до логарифмической фазы при 37 ° C в течение 4 часов.Серийные разведения (от 10 ¹ до 10 ⁶) этой культуры производили с использованием стерильного фосфатно-солевого буфера (PBS, pH 7,0). Все три набора RDT были протестированы с аликвотами из каждого разведения. Для подсчета бактериальных колоний 100 мкл каждого разведения также помещали на чашки с агаром LB (Difco) и инкубировали в течение ночи при 37 ° C.

Продолжительность

В . cholerae Жизнеспособность O1 в среде Кэри-Блера

Тампоны смачивали несколькими разведениями V . cholerae, O1 и хранят в транспортной среде Кэри-Блэра (Difco) при температуре окружающей среды. Продолжительность жизнеспособности и эффективность ДЭТ на холеру определяли с регулярными интервалами до 18 дней с использованием культур, обогащенных APW.

Анализ данных

Клинические и лабораторные данные были проверены вручную и введены в предварительно разработанную проформу ввода данных, разработанную в Visual Basic со встроенной программой проверки достоверности ввода, облегченной программой на сервере языка запросов структуры (SQL) методом двойного ввода.Данные были случайным образом проверены и сопоставлены для получения согласованности и достоверности для анализа.

Для целей анализа истинный случай холеры был подтвержден положительным посевом на V . холеры О1. Истинно отрицательный случай был выявлен с отрицательной культурой для целевого патогена. Чувствительность, специфичность, положительная прогностическая ценность, отрицательная прогностическая ценность и точность были оценены как для прямого культурального тестирования, так и для тестирования после 4 часов обогащения в APW с последующим ростом в агаре TCBS и серологическим подтверждением, а также путем сравнения трех результатов RDT с культурой. эталонный стандарт.

Первичной конечной точкой является оценка RDT с использованием результатов посева кала, то есть как прямым методом, так и методами обогащения для выделения V . cholerae O1, как золотой стандарт для сравнения. Кроме того, был проведен отдельный анализ эффективности RDT с использованием ПЦР в качестве золотого стандарта. Чувствительность определялась как вероятность того, что пациенты с холерой, подтвержденной культурой, имели положительный результат ДЭТ. Специфичность определялась как вероятность того, что пациенты с холерой, не подтвержденной культурой, имели отрицательный результат ДЭТ.Прогнозирующая ценность положительного результата (PPV) представляла собой вероятность того, что пациенты с положительным RDT имели V . cholerae O1 выделено из каловой культуры. Отрицательная прогностическая ценность (NPV) представляла собой вероятность того, что пациенты с отрицательной RDT не имели V . cholerae выделено из стула. Статистический анализ проводился с использованием программного обеспечения для статистики и обработки данных (STATA версия 13, Stata Corp, Техас, США). Чувствительность и специфичность были проверены на основе сравнения результатов ДЭТ с тестом на культуру, а также анализом ПЦР и представлены в процентах.Для получения более точных прогнозов были также оценены 95% доверительные интервалы (ДИ) Клоппера-Пирсона.

Байесовская модель латентного класса (LCM) объединяет установленные гипотезы о характеристиках теста с фактическими результатами для оценки эффективности каждого анализа. Байесовский-LCM использовался при оценке диагностических тестов в отсутствие «золотого стандарта» теста в предположениях модели с двумя тестами и двумя латентными классами популяций, а именно: (i) распространенность каждой популяции должна быть разной, когда несколько популяций сравнивается; (ii) чувствительность (S _e) и специфичность (S _p) теста одинаковы во всех исследуемых популяциях; и (iii) тесты условно независимы [24].Анализ проводился с использованием пяти тестов и одной популяции [25,26]. Предполагая полиномиальное распределение для подсчетов различных комбинаций результатов тестов пяти тестов и априорное решение Дирихле, параметры модели оценивались при условной независимости [25,26]. Все модели применялись с использованием статистической программной среды R с использованием пакета BayesLCA. Используя выборку Гиббса, был выполнен апостериорный вывод и были представлены оценки с байесовскими 95% -ными интервалами достоверности.

Точность определялась как процент правильно классифицированных экземпляров (TP + TN) / (TP + TN + FP + FN), где TP, FN, FP и TN представляют собой количество истинных положительных результатов, ложных отрицательных результатов, ложных положительных результатов и истинных результатов. негативы соответственно. Используя специфичность, а также положительные и отрицательные прогностические значения, был составлен вероятностный индекс клинической полезности (CUI) для приложения мультиатрибутной полезности, которое фокусируется на клинических характеристиках.

Результаты

Клинические характеристики пациентов, включенных в это исследование, показаны в Таблице 1 .Из 506 протестированных образцов стула 243 (48%) были отрицательными для всех анализов, использованных в этом исследовании, и 91 (18%) были положительными во всех протестированных анализах. Остальные 172 (34%) образца дали положительный результат по крайней мере в любом из анализов. Из общего количества 506 образцов стула V . cholerae O1 был выделен непосредственно из 129 (25,5%) образцов и 156 (30,8%) путем обогащения культуры. Набор для тестирования SMART-II дал наивысшие положительные результаты при анализе прямого стула (29,6%; 150/506) и при анализе обогащенных образцов (28.1%; 142/506). Показатели SD cholera и Crystal VC были почти одинаковыми как для прямого, так и для обогащенного образцов. ПЦР-анализ стула на основе ДНК дал наибольшее количество положительных образцов (43,5%, 220/506).

Результаты традиционного подхода с методом прямого культивирования с использованием образцов стула в качестве золотого стандарта показаны в Таблице 2 . Чувствительность наборов для диагностики холеры при прямом тестировании была высокой в SMART-II (86,1%), за которым следует Crystal-VC (82,6%). Специфичность была высокой для SD-холеры (94.4%), затем Кристалл-ВК (93,6%). Точность была высокой в SD-Cholera и Crystal-VC (> 90%). В целом, анализы ПЦР на основе ДНК ctx и O1 rfb имели очень высокую чувствительность (98,4%), но специфичность (75,3%) и точность (81,2%) были сравнительно низкими. CUI с положительной прогностической ценностью был хорош для SD-Cholera и Crystal-VC с весом атрибута более 0,64. Однако CUI был удовлетворительным в случае SMART-II и PCR с весом атрибута 0.637 и 0,568 соответственно. CUI с отрицательной прогностической ценностью был превосходным во всех RDT с весом атрибута выше порогового значения 0,81.

Результаты эффективности ДЭТ после обогащающего культивирования в качестве золотого стандарта показаны в Таблице 3 . Чувствительность наборов была> 78% для SAMRT-II и Crystal-VC, а специфичность была высокой для SD-холеры (99,1%). Точность была высокой для Crystal-VC (92,1%), за которым следует SD-Cholera (90,5%). CUI с положительным прогнозирующим значением был хорошим во всех RDT с весом атрибута, превышающим пороговое значение (0.64). CUI с отрицательной прогностической ценностью был превосходным в наборах SD-Cholera и Crystal-VC с весом атрибута, превышающим пороговое значение 0,81. Результаты обнаружения V . cholerae O1, полученные с помощью RTD с использованием прямых методов и методов обогащения, очень значимы (<0,0001, , таблицы 2 и 3, ).

Мы также проанализировали производительность RDT с использованием ПЦР в качестве золотого стандарта (, таблица 4, ). В этом анализе чувствительность и специфичность RDT оставались на уровне 52.3–58,2% и 92,3–96,8% соответственно. Точность была низкой (> 77%) по сравнению с методами культивирования в качестве золотого стандарта. CUI с положительной прогностической ценностью был хорош с SMAR-II и Crystal-VC с весом атрибута от 0,497 до 0,515, и все наборы показали хорошие результаты с отрицательными прогностическими значениями с весами атрибута от 0,684 до 0,714. За исключением комплекта SMART-II, сравнительное обнаружение V . cholerae O1 с анализом ПЦР с другими наборами не имеет значения ( Таблица 4, ).Около 15% образцов дали положительный результат ПЦР, когда ни методы прямого культивирования, ни методы обогащения не смогли идентифицировать V . cholerae O1 в образцах, и это повлияло бы на результат специфичности. В этом наборе образцов результаты RDT также были отрицательными.

Таблица 5 показывает байесовский анализ латентного класса результатов RDT без какого-либо золотого стандарта. Чувствительность наборов ДЭТ на холеру при прямом и дополнительном тестировании стула показала высокую в SMART-II (88% и 92% соответственно).Специфичность прямого и дополнительного анализа стула показала высокую в наборах SD Cholera и Crystal-VC (≥ 97%). Общий анализ ДНК на основе ctx и O1 rfb ПЦР имел очень высокую чувствительность (98%), но специфичность оставалась низкой (77%).

Из 11 образцов с кровью в стуле, протестированных в этом исследовании, один был положительным в анализе ПЦР. Из 129 образцов, которые показали положительный результат на V . cholerae O1 методом прямого культивирования, 21 образец (16.3%) были также положительны в отношении других патогенов ( S1, таблица ). Присутствие других патогенов не влияло на эффективность ДЭТ или ПЦР. Результаты чувствительности / специфичности ДЭТ и прямого посева, стратифицированные по возрасту, полу и тяжести диарейного заболевания, показаны в Таблице 6 . Считая метод прямого культивирования золотым стандартом, чувствительность SMART-II и Crystal VC составила 100%, а SD Cholera и Crystal VC были более специфичными (> 95%) с образцами стула, взятыми у возрастной группы менее 5 лет.Среди возрастной группы старше 5 лет SMART-II был более чувствительным (85,2%), а ДЭТ SD Cholera и Crystal VC более специфичны (> 93%). Мы проанализировали результаты ДЭТ по чувствительности / специфичности среди пациентов мужского и женского пола. SMART-II и SD Cholera более чувствительны и специфичны, соответственно, в образцах, собранных у представителей обоих полов ( Таблица 6, ). В более тяжелых случаях диареи чувствительность всех RDT оставалась прежней (85%), но Crystal VC был более специфичным (96,6%), чем остальные.Среди умеренных / легких случаев SMART-II и SD Cholera более чувствительны (86,2) и специфичны (94,3%) соответственно.

Результаты чувствительности / специфичности ДЭТ и ПЦР, стратифицированных по возрасту, полу и тяжести диарейного заболевания, показаны в Таблице 7 . Считая анализ ПЦР золотым стандартом, чувствительность всех ДЭТ в возрастной группе менее 5 лет оставалась низкой (≤ 38%), а SD Cholera была более специфичной (97,7%). Однако чувствительность и специфичность больше у SMART-II (60.8) и Crystal VC (97,1%) соответственно среди возрастной группы старше 5 лет. SMART-II был более чувствительным (56–60%), а Crystal VC более специфичен (> 95%) в образцах, собранных у обоих полов. В более тяжелых случаях диареи чувствительность всех наборов RDT оставалась прежней (52,9%), но Crystal VC оставался сравнительно более специфичным (97,8%). Среди умеренных / легких случаев SMART-II и Crystal VC / SD Cholera более чувствительны (59,1%) и специфичны (> 96) соответственно.

Предел обнаружения наборов БДТ для холеры варьировался от 6 x 10 ⁷ КОЕ (SD-Cholera) до 6 x 10 ⁸ КОЕ (SMART-II и Crystal-VC).БДТ на холеру давали положительные результаты до 14 дней, когда тампоны были засеяны 1 x 10 ⁶ КОЕ и хранились в транспортной среде Кэри-Блэра при температуре окружающей среды. Подробности по восстановлению V . cholerae O1 и результаты RDT в течение этого периода тестирования были показаны в дополнительной таблице S2 .

Обсуждение

Тестирование БДТ по холере в эндемичных по холере условиях, таких как Калькутта, не проводилось в рамках систематического подхода. Быстрое выявление случаев холеры поможет быстро отреагировать на борьбу с вспышками и их распространение.Информация, полученная в результате таких исследований, может быть полезной для понимания важности БДТ в эпиднадзоре за холерой и эпидемиологического мониторинга, а также их использования в качестве инструмента тестирования в местах оказания медицинской помощи в эндемическом контексте. Методы, основанные на культуре, обычно используются в лаборатории для поддержки эпиднадзора за холерой или даже ее вспышек. Этот метод также традиционно использовался в качестве эталона для оценки производительности других тестов. Однако из-за низкой чувствительности посев кала недооценивает специфичность [20,27].Общий подход к диагностике и эпиднадзору за холерой основан на клиническом обследовании на предмет типичных симптомов холеры и подтверждении посева образцов кала при наличии лабораторного оборудования. Плохой забор и задержка транспортировки стула существенно влияет на эффективность методов культивирования. Учитывая эти факторы, ДЭТ рекомендуются в качестве дополнения к эпиднадзору за холерой на уровне первичной медико-санитарной помощи. В настоящее время RDT используется во время вспышек и эпиднадзора Индийской программой комплексного надзора за заболеваниями в отдаленных районах, где лабораторная поддержка недостаточна.

В прошлом несколько ДЭТ использовались во время вспышек / эпидемий холеры с разной степенью специфичности и чувствительности [28]. Техническая записка Глобальной целевой группы по борьбе с холерой Всемирной организации здравоохранения содержит указания по применению ДЭТ [27]. Ожидаемая минимальная эффективность ДЭТ согласно этому руководству — с чувствительностью ≥90% и специфичностью ≥85%. Что касается этих рекомендуемых пороговых значений, настоящее исследование показало умеренную чувствительность, но с хорошей специфичностью результатов ДЭТ с использованием методов прямого культивирования в качестве золотого стандарта.Однако точность обнаружения> 90% наблюдалась по крайней мере с двумя наборами. В нескольких исследованиях Crystal-VC показал чувствительность от 58 до 100% и специфичность от 60 до 100% [27]. Показатели SD Bioline RDT были почти такими же, как и в отчете из Гаити [29].

В нескольких исследованиях была проведена оценка байесовской LCM для оценки эффективности анализов в отсутствие золотого стандарта [30,31]. При условной независимости между посевом, ДЭТ и ПЦР, байесовский-LCM показал несколько лучшие результаты в определении чувствительности и специфичности по сравнению с методами культивирования в качестве золотого стандарта [22].В целом размер выборки в этом исследовании был достаточно большим, чтобы рассмотреть байесовскую модель LCM для оценки наборов RDT [32]. В отсутствие золотого стандарта байесовский-LCM-анализ проводился с приемлемыми значениями чувствительности для наборов SMART-II и Crystal-VC, а значения специфичности для всех наборов RDT оставались> 90%. Эти результаты совпадают с предыдущим исследованием, проведенным в Демократической Республике Конго с помощью Crystal-VC [22]. Поскольку байесовский анализ опирается на предшествующие гипотезы, мы строго придерживались протоколов, и анализы проводились в непредвзятых условиях.Рассмотрены несколько препятствующих факторов, о которых сообщалось в предыдущих исследованиях, в том числе обученный лабораторный персонал, сокращение времени транспортировки и обработки образцов в лаборатории, а также выборочное включение пациентов в исследование.

Низкая чувствительность накопительной культуры APW может быть связана с более коротким временем инкубации, указанным в этом исследовании. Как правило, обогащение образцов стула APW в течение> 6 часов при 37 ° C значительно улучшило специфичность теста [33]. Длительный этап обогащения увеличивает время сообщения, и, следовательно, в этом случае не достигается скорость обнаружения холеры.Наряду с методами культивирования, ПЦР также использовалась при оценке ДЭТ на холеру [34,35]. Как было отмечено в этом исследовании, низкая специфичность ПЦР по сравнению с культурой может быть связана с ложноотрицательными результатами посева и / или результатом низкого выхода ДНК стула. Ложноотрицательные результаты посева могут также встречаться из-за наличия небольшого количества патогенов, как следствие использования антибиотиков, что, в свою очередь, влияет на результаты ПЦР [36–38]. Что касается положительного результата на культуру и / или ПЦР и отрицательного результата на ДЭТ, количественное определение V . cholerae Значения КОЕ или СТ в количественной ПЦР в несовместимых образцах могут помочь понять эту проблему. Более того, ПЦР не может рассматриваться как анализ POC, поскольку этот метод до сих пор использовался только в оборудованных лабораториях из-за зависимости от сложной и хорошей инфраструктуры, высококвалифицированного персонала и особых условий хранения. В целом, показатель CUI был хорошим или отличным после ДДТ с обогащением и от удовлетворительного до отличного — с ДДТ прямого обнаружения [39].

Интересно отметить, что значения чувствительности БДТ к холере ниже, чем в оценках, проведенных в Африке и Бангладеш.Влияние В . cholerae Количество O1 в образцах и эффективность анализов в различных географических регионах — очень интересный, но сложный вопрос. Номер В . cholerae в стуле зависит не только от использования антибиотика, но также от времени сбора стула после начала заболевания, продолжительности переноса, наличия бактериальных фагов и т. Д. будущие исследования.Наличие других кишечных патогенов наряду с V . cholerae O1 не оказал никакого влияния на эффективность ДЭТ. Этот аспект не рассматривался в других исследованиях. Количество вибрионов, присутствующих у пациентов с острой холерой, может достигать 10 ⁹ КОЕ [40], и, следовательно, характеристики всех протестированных наборов БДТ для холеры по существу хорошие. В образцах мазков, хранящихся в среде Кэри-Блэра, ДЭТ холеры дали положительные результаты, подтвердив, что мазки со стула можно хранить до двух недель при температуре окружающей среды, что подтверждает более раннее исследование [41].

БДТ

представляют собой благоприятные варианты для POC-диагностики холеры во время вспышек и в условиях нехватки ресурсов благодаря своей простоте, длительному сроку хранения, меньшей стоимости и способности обнаружения V . cholerae O1 даже при наличии других патогенов в стуле. Однако ДЭТ при холере не могут рассматриваться в качестве инструмента для оценки риска заражения из-за отсутствия требуемой специфичности в различных анализах, как показано в этом исследовании.

Заключение

Общая производительность всех трех комплектов RDT практически одинакова.Хотя анализ ПЦР превосходит ДЭТ на основе антител, его нельзя использовать в качестве инструмента POC из-за процедурных трудностей. RTD повысит ценность клинического ведения холеры во время вспышек / эпидемий.

Ссылки

1.
Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ). Холера 2018. Weekly Epidemiol Rec. 2019; 93: 561–80.
2.
Капер Дж. Б., Моррис Дж. Дж. Младший, Левин ММ. Холера. Clin Microbiol Rev.1995; 8: 48–86. pmid: 7704895
3.Рамамурти Т., Ямасаки С., Такеда Ю., Наир Г.Б. Vibrio cholerae O139 Бенгалия: одиссея случайного варианта. Микробы заражают. 2003; 5: 329–44. pmid: 12706446
4.
Safa A, Sultana J, Dac Cam P, Mwansa JC, Kong RY. Vibrio cholerae O1 гибридные штаммы Эль Тор, Азия и Африка. Emerg Infect Dis. 2008; 14: 987–88. pmid: 18507925
5.
Зарокостас Дж. Вспышка холеры на Гаити — с 2010 года по сегодняшний день. Ланцет. 2017; 389: 2274–75. pmid: 28612739
6.Камачо А., Бухения М., Алюсфи Р., Алкоглани А., Наджи МАМ, де Радигес X и др. Эпидемия холеры в Йемене, 2016–2018 гг .: анализ данных эпиднадзора. Ланцет Glob Health. 2018; 6 (6): e680 – e690. pmid: 29731398
7.
Вальдор МК, Мекаланос Дж. Дж. Лизогенная конверсия нитчатым бактериофагом, кодирующим токсин холеры. Наука. 1996; 272: 1910–14. pmid: 8658163
8.
Санчес Дж., Холмгрен Дж. Структура токсина холеры, регуляция генов и патофизиологические и иммунологические аспекты.Cell Mol. Life Sci. 2008; 65: 1347–60. pmid: 18278577
9.
Санчес Дж., Холмгрен Дж. Токсин холеры — враг и друг. Indian J. Med. Res. 2011; 133: 153–63. pmid: 21415489
10.
Шимада Т., Аракава Э., Ито К., Окицу Т., Мацусима А., Асаи Ю. и др. Расширенная схема серотипирования для Vibrio cholerae . Curr Microbiol. 1994; 28: 175–78.
11.
Ямаи С., Окицу Т., Шимада Т., Каацубе Ю. Серогруппа Vibrio cholerae не-O1 / не-O139 с конкретной ссылкой на их способность продуцировать токсин холеры и добавление новых серогрупп.J Jpn Infect Dis. 1997; 71: 1037–45. pmid: 9394556
12.
Клеменс Дж. Д., Наир Г. Б., Ахмед Т., Кадри Ф., Холмгрен Дж. Холера. 2017; Ланцет pii: S0140–6736 (17) 30559-7.
13.
Нато Ф., Бутонье А., Раджерисон М., Грожан П., Дартевель С., Геноле А. и др. Одноэтапные иммунохроматографические тест-полоски для быстрого обнаружения Vibrio cholerae O1 и O139 в образцах стула. Clin Diagn Lab Immunol. 2003. 10 (3): 476–78. pmid: 12738652
14.
Каллури П., Нахид А., Рахман С., Ансаруззаман М., Фарук ASG, Берд М. и др.Оценка трех экспресс-тестов для диагностики холеры: имеет ли значение уровень квалификации специалиста? Trop Med Int Health. 2006. 11 (1): 49–55. pmid: 16398755
15.
Бхуиян Н.А., Кадри Ф., Фаруке А.С., Малек М.А., Салам М.А., Нато Ф. и др. Использование тест-полосок для быстрой диагностики холеры, вызванной Vibrio cholerae, O1 и O139, на основе ректальных мазков. J Clin Microbiol. 2003. 41 (8): 3939–41. pmid: 12
4
16.
Ван X-Y, Ансаруззаман М., Ваз Р., Мондлейн С., Лукас М.Э., фон Зайдляйн Л. и др.Полевая оценка экспресс-иммунохроматографической тест-полоски для диагностики холеры в популяции высокого риска. BMC Infect Dis. 2006; 6 (1): 17.
17.
Ганесан Д., Гупта С.С., Легрос Д. Эпиднадзор за холерой и оценка бремени холеры. Вакцина. 2019; pii: S0264-410X (19) 30927-2. pmid: 31326254
18.
Мартинес-Пино И., Лукеро Ф.Дж., Сакоба К., Силла С., Хайле М., Грейс РФ и др. Использование экспресс-теста для диагностики холеры во время кампании массовой вакцинации в ответ на эпидемию в Гвинее, 2012 г.PLoS Negl Trop Dis. 2013; 7 (8): e2366. pmid: 23967359
19.
Нельсон Э.Дж., Гремби Дж.А., Чао Д.Л., Эндрюс Дж.Р., Александрова Л., Родригес PH и др. Золотой стандарт диагностики холеры запятнан литическими бактериофагами и антибиотиками. J Clin Microbiol. 2020; 58 (9): e00412–20. pmid: 32611794
20.
Алам М., Хасан Н.А., Султана М., Наир Г.Б., Садик А., Фарук А.С. и др. Диагностические ограничения для точной диагностики холеры. J Clin Microbiol. 2010; 48: 3918–22. pmid: 20739485
21.Дик М.Х., Гилерм М., Мусси Ф., Чаинья К.Л. Обзор диагностики холеры за два десятилетия — как далеко мы на самом деле продвинулись? PLoS Negl Trop Dis. 2012; 6 (10): e1845. pmid: 23071851
22.
Пейдж А.Л., Альберти К.П., Мондонж В., Раузье Дж., Квиличи М.Л., Герен П.Дж. Оценка экспресс-теста для диагностики холеры при отсутствии золотого стандарта. PLoS One. 2012; 7 (5): e37360. pmid: 22666350
23.
Наир Г.Б., Рамамурти Т., Бхаттачарья М.К., Кришнан Т., Гангули С., Саха Д.Р. и др.Новые тенденции в этиологии кишечных патогенов, о чем свидетельствует активное наблюдение за госпитализированными пациентами с диареей в Калькутте, Индия. Gut Pathog. 2010; 2 (1): 4. pmid: 20525383
24.
Хуэй С.Л., Вальтер С.Д. Оценка частоты ошибок диагностических тестов. Биометрия 1980; 36: 167–71. pmid: 7370371
25.
Бронсворт Б.М., Котервас Б., Лэнд Ф., Гендель И.Г., Такер Дж., Морган К.Л. и др. Сравнение проточного анализа на антитела к бруцеллезу с эталонным тестом cELISA в западноафриканских Bos indicus.Публичная научная библиотека PLoS One. 2009; 4, е5221. pmid: 19381332
26.
Бранскум А.Дж., Гарднер И.А., Джонсон В.О. Оценка чувствительности и специфичности диагностических тестов с помощью байесовского моделирования. Ранее Vet Med. 2005. 68: 145–63. pmid: 15820113
27.
Всемирная организация здравоохранения. Глобальная целевая группа по борьбе с холерой. Промежуточная техническая записка. Использование экспресс-тестов на холеру. 2016. с. 1–5. (https://www.who.int/cholera/task_force/Interim-guidance-cholera-RDT.pdf).
28.
Рамамурти Т., Дас Б., Чакраборти С., Мухопадхьяй А.К., Мешок Д.А. Диагностические методы для быстрого обнаружения Vibrio cholerae O1 / O139. Вакцина. 2019; 38: A73 – A82. pmid: 31427135
29.
Matias WR, Julceus FE, Abelard C, Mayo-Smith LM, Franke MF, Harris JB и др. Лабораторная оценка иммунохроматографических экспресс-тестов для диагностики холеры в Гаити. PLoS One. 2017; 12 (11): e0186710. pmid: 245
30.
Гарретт ES, Eaton WW, Zeger S.Методы оценки эффективности диагностических тестов при отсутствии золотого стандарта: подход на основе модели скрытых классов. Stat Med. 2002; 21: 1289–307. pmid: 12111879
31.
Лимматуротсакул Д., Джамсен К., Араявичанонт А., Симпсон Дж. А., Уайт Л. Дж., Ли С. Дж. И др. Определение истинной чувствительности культуры для диагностики мелиоидоза с использованием байесовских моделей латентного класса. PLoS One. 2010; 5 (8): e12485. pmid: 20830194
32.
Дендукури Н., Белисль П., Джозеф Л.Размер байесовской выборки для диагностических тестовых исследований в отсутствие золотого стандарта: сравнение идентифицируемых моделей с неидентифицируемыми. Stat Med. 2010. 29 (26): 2688–97. pmid: 20803558
33.
Бвир Дж., Орах К. Г., Абдалла Д., Дебес А. К., Кагирита А., Рам М. и др. Обогащение щелочной пептонной водой с помощью тест-полоски для быстрого обнаружения и мониторинга вспышек холеры. BMC Infect Dis. 2017; 17: 726. pmid: 2
11
34.
Харрис Дж. Р., Кавалларо Э. К., де Нобрега А. А., Дос С. Баррадо Дж. К., Бопп С., Парсонс М. Б. и др.Полевая оценка экспресс-теста Crystal VC на холеру во время вспышки холеры в Гвинее-Бисау. Trop Med Int Health. 2009. 14: 1117–1121. pmid: 19624473
35.
Мукерджи П., Гош С., Рамамурти Т., Бхаттачарья М.К., Нанди Р.К., Такеда Й. и др. Оценка набора экспресс-иммунохроматографических тест-полосок для диагностики холеры подчеркивает его полезность для вспышек. Jpn J Infect Dis. 2010; 63: 234–38. pmid: 20657061
36.
Мваба Дж., Феррерас Э., Чисема-Кавеса Э., Мвимбе Д., Тафиреника Ф., Раузье Дж. И др.Оценка экспресс-теста SD bioline для диагностики холеры во время вспышки холеры в 2016 г. в Лусаке, Замбия. Trop Med Int Health. 2018; 23: 834–40. pmid: 29851181
37.
Сайид М.А., Ислам К., Хоссейн М., Актер Н.Дж., Алам М.Н., Султана Н. и др. Разработка нового индикатора (Cholkit) для быстрого обнаружения Vibrio cholerae O1 в остром водянистом диарейном стуле. PLoS Negl Trop Dis. 2018; 12 (3): e0006286. pmid: 29538377
38.
Дебес А.К., Мурт К.Н., Васва Э., Гитинджи Г., Умуро М., Мбогори С. и др.Лабораторные и полевые испытания экспресс-теста Crystal VC-O1 для диагностики холеры. Am J Trop Med Hyg. 2021 год: tpmd201280. pmid: 33819171
39.
Митчелл AJ. Чувствительность × PPV — это признанный тест, называемый индексом клинической полезности (CUI +). Eur J Epidemiol. 2011; 26: 251–52. pmid: 21442261
40.
Дизон Дж.Дж., Фукуми Х., Баруа Д., Валера Дж., Джейме Ф., Гомес Ф. и др. Исследования переносчиков холеры. Bull World Health Organ. 1967. 37 (5): 737–43. pmid: 5300876
41.