Какие методы используют для подсчета форменных элементов крови: 58. Принципы современных методов подсчета форменных элементов крови и определения содержания гемоглобина в современных гематологических анализаторах.

Сравнение лабораторных анализов при использовании различных методик исследования мочи.

Документ без названия

Кулешова С.В. заведующая КДЛ, врач высшей категории
 Москалева С.П.врач высшей категории
 Зорина Л.В. врач высшей категории
 Григорьева Е.В. врач высшей категории
 Минушкина Л.О. д.м.н., профессор кафедры терапии, кардиологии и функциональной диагностики Учебно-научного медицинского центра УДП РФ

Резюме

При переходе на новые методики  сотрудникам лаборатории следует внимательно изучать инструкции и тестировать новинки перед составлением стандартных операционных процедур. В статье рассматриваются проблемы, с которыми может столкнуться любая лаборатория при модернизации. Успешный опыт внедрение пластиковых слайд-планшетов для исследования мочи и сложности, возникшие в процессе внедрения предложены для обсуждения.

Summary the introduction of new techniques requires careful study guide and test innovations prior to the preparation of standard operating procedures. The article discusses the problems that can face any laboratory at modernization. The successful introduction of the plastic slide plates urine and difficulties encountered in the implementation process proposed for discussion.

«С микроскопическим исследованием мочи каждый врач должен быть знаком самым обстоятельным образом, так как в некоторых случаях только путём такого исследования и возможна точная и решительная диагностика данного страдания.»    В.Е. Предтеченский

 

Пациент К. 34 лет обратился к терапевту для получения санаторно-курортной карты. На приеме активно жалоб не предъявляет. При осмотре общее состояние удовлетворительное. Температура тела 36.6°С. Сознание ясное. Кожные покровы обычной окраски. Видимые слизистые розовые. Лимфоузлы не увеличены. Отеков нет. Системы органов дыхания, система органов пищеварения без патологии. Тоны сердца звучные, ритм правильный. ЧСС 68 в мин. Артериальное давление 120/80 мм. рт. ст. Симптом поколачивания — отрицательный. Мочеиспускание безболезненное. Даны направления на анализы в необходимом объеме. По результатам выполненных анализов патология не выявлена. Пациенту выдается медицинская справка формы №072/у. После санаторно-курортного лечения в выписном эпикризе пациенту были даны рекомендации обратиться к нефрологу в связи с изменениями в анализе мочи по методу Нечипоренко. В анализе отмечалось увеличение количества эритроцитов до 2400 клеток в мл. и лейкоцитов до 4800 клеток в мл.

Пациент К. был вызван для обследования, в ходе которого проводилось исследование мочи, крови, консультация уролога, нефролога и терапевта. Результаты анализов были в пределах референтных значений. Консультации специалистов патологии не выявили. Было решено связаться с лечащим врачом пациента К. для уточнения результатов анализов. В ходе детального и подробного опроса выяснилось, что объяснить отклонения в результате анализа мочи выполненного по методу Нечипоренко специалистам санатория тоже не удалось. Клинически данных за почечную патологию у пациента К. в течение всего срока пребывания в санатории не было. Однако, после расспросов о методах и способах исследования выяснилось, что подсчет форменных элементов в моче велся врачами не с использованием камеры Горяева, а в пластиковом планшете. Данный случай привлек наше внимание, и мы стали интересоваться случаями несоответствий клинической картины у пациентов с данными анализа мочи по методу Нечипоренко. Анализируя в течение полугода результаты пациентов, полученные в нашей лаборатории с данными этих же пациентов, полученными в других лечебных учреждениях, мы выяснили, что в ряде случаев имеются  завышенные результаты анализа при использовании слайд-планшетов при отсутствии клинических проявлений болезни, функциональных изменений и  при нормальных значениях анализов в нашей лаборатории.

История приборов для подсчёта клеточных элементов насчитывает уже более 150 лет. Сетки в счетных камерах, предложенных  различными авторами неодинаковы как по рисунку, так и по площади.

В начале прошлого века для подсчёта клеток крови применялся аппарат Тома-Цейсса (рис.1), который в дальнейшем был заменён на камеру Предтеченского (рис.2) и , наконец в середине прошлого века прибор обрёл современный вид – сетку камеры Горяева, состоящую из 225 больших квадратов, 25 из которых разграфлены на 16 маленьких.  Она и используется сегодня как основной инструмент подсчёта клеток в 1 мл.мочи по методу Нечипоренко

Рисунок 1. Сетка аппарата  Thoma-Zeiss

Рисунок 2. Сетка Предтеченского

Принцип сеток в камерах  один и тот же. Они разделены на то или иное число квадратов, различным образом сгруппированных. Зная объём квадрата можно произвести расчёт и  определить  количество клеток в единице объёма.

Перед вводом в работу пластиковых  слайд — планшетов мы решили провести исследование,  целью которого было оценить воспроизводимость результатов подсчёта с помощью  камеры Горяева и нового  пластикового слайд-планшета.

Материал и методы исследования

В качестве материала для исследования были взяты образцы крови 16 больных. Проводился подсчёт  количества лейкоцитов. В качестве контрольного измерения использовались данные автоматического гематологического анализатора Сисмекс KX-21N. Подсчёт также велся 3 независимыми врачами, которые определяли  количество лейкоцитов с помощью камеры Горяева и слайд-планшета.  

Камера Горяева предназначена для подсчёта форменных элементов крови и клеточных элементов спинномозговой жидкости. ТУ9443-007-29508133-2007  ,РУ МЗ № ФСР 2008/02731 от 11.06.2008 г. Технические данные камеры : площадь — 9 мм2, глубина — 0,1 мм, объём — 0,9 мм3.

Камера (слайд-планшет) для микроскопического исследования осадка мочи и других биологических жидкостей, Aptaca. Каждая ячейка снабжена сеткой для подсчёта (3х3 мм) и покрыта тонкой прозрачной пластиковой пластинкой, играющей роль покровного стекла. Каждая сетка поделена на 5 квадратов (1х1 мм), которые в свою очередь разделены на 9 маленьких квадратов (0,333х0,333 мм). Изготовлена камера  из полиметилметакрилата (ПММА). Регистрационное удостоверение № ФСЗ 2011/09223 от 19 марта 2012 г. Подсчёт вёлся согласно инструкции, опубликованной на сайте производителя [5].

Для исследования мы брали образцы венозной крови, определяя количество лейкоцитов с помощью автоматического гематологического анализатора Сисмекс KX-21N ( Sysmex KX-21N ) Производитель: Roche Diagnostics (Швейцария).

Результаты исследования

Проанализировано 16 проб. Подсчет вёлся независимо 3 врачами с высшей категорией. Средние значения количества лейкоцитов по данным анализатора составили 5950±2407*109/л(M±SD), при подсчёте с помощью камеры Горяева  (средние данные у 3 независимых врачей) 4916±1794,4*109/л , с помощью слайд планшета (средние данные у 3 независимых врачей)  — 9477±3624*109/л. Данные подсчёта и с использованием камеры Горяева и с использованием слайд — планшета достоверно отличались  от данных автоматического анализатора Sysmex  KX-21 N. Для двух врачей  из трёх результаты подсчёта с помощью камеры Горяева и автоматического анализатора достоверно не отличались, но существенно отличались от значений, полученных при работе со слайд-планшетом

Рисунок3.  Дисперсия результатов подсчёта форменных элементов крови с помощью камеры Горяева и слайд-планшета.

Обращает на себя внимание, что при подсчёте с помощью слайд -планшета были выше не только собственно средние значения количества форменных элементов крови, но и дисперсия полученных результатов, оказавшаяся достоверно большей, чем дисперсия результатов  автоматического анализатора. Наименьшая дисперсия значений количества форменных элементов наблюдалась при использовании камеры Горяева (Рис 3).

Обсуждение результатов

Проведенное нами исследование показало существенные расхождения в подсчёте количества форменных элементов крови с помощью различного лабораторного оборудования.  Ранее мы, проводя подсчёт в камере клеточных элементов для анализа мочи по Нечипоренко с помощью слайд-планшета, получали результаты, которые не укладывались в  референсные значения. В литературе найти описание нашей проблемы или ее решение нам не удалось.

Следует также отметить, что имелись существенные разночтения, между официальной инструкцией на русском языке,  и инструкцией, полученной нами непосредственно от производителя.

Мы в работе ориентировались на инструкцию, предоставленную производителем оборудования. Для собственного исследования мы выбрали подсчёт форменных элементов крови, а не мочи, в связи с тем, что имели автоматизированный способ контроля их количества.

Следует отметить, что подсчёт клеточных элементов в камере Горяева оказался более точным. У двух врачей из трёх результаты измерений достоверно не отличались от данных автоматического анализатора. Полученные данные при использовании слайд-планшета у всех трёх врачей существенно отличались, как от данных анализатора, так и от данных,  традиционного подсчёта с помощью камеры Горяева. Работа с камерой Горяева позволяет получить меньший разброс результатов, чем работа со слайд — планшетом.

Таким образом, при переходе к иному методу подсчёта (например, при замене камеры Горяева на  слайд-планшет для выполнения анализа по методу Нечипоренко)  использование существующих референтных значений вряд ли допустимо.

При работе с другим материалом, заменяя камеру Горяева на слайд -планшет, необходимо предварительно проверить возможность использования существующих норм. Результаты, полученные при работе со  слайд-планшетами часто оказываются выше, чем при использовании других методов. 

На бланке с результатом следует указывать прибор, использованный в работе – камера Горяева или пластиковый слайд-планшет. Это важно для корректного сравнения результатов.

Также необходимо учесть, что инструкция, прилагаемая к слайд-планшетам не приводит полный объём информации для безопасного использования. В случае подсчёта клеток по методу Нечипоренко нельзя пользоваться предложенной формулой в инструкции без применения коэффициента концентрации. Данные по коэффициенту приводятся в полной версии инструкции производителя, либо высчитываются самостоятельно.

На наш взгляд эта тема представляет практический интерес, т.к .камеры для подсчёта клеток широко применяются и по сей день. Своей скромной публикацией мы открываем площадку для обсуждения. Просим откликнуться, и присоединиться к обсуждению специалистов разных направлений, в работе которых есть опыт внедрения слайд-планшетов.

Использованная литература:

1. «Руководство к клинической микроскопии.» В.Е.Предтеченский. Москва 1901 г.  Типо-литография Т-ва И.Н.Кушнерев и Ко.  256 с 101ил

«Rukovodstvo k klinicheskoi mikroskopii.» V.E.Predtechenskii. Moskva 1901 g. Tipo-litography T-va I.N.Kushnerev I Ko 256 p 101 pic

 

 

Камера Горяева. Практическое применение — OpticalMarket

Лабораторная камера Горяева, названная в честь русского врача, профессора Казанского университета Горяева Н.К., является специальным монолитным предметным стеклом, предназначенным для подсчета количества клеток в заданном объеме жидкости. Кроме того, используя камеру Горяева можно определить увеличение микроскопа. Камеры Горяева широко применяются в области клинических и биомедицинских исследований.

Популярные области применение камеры Горяева:

• Подсчет форменных элементов крови
  • Подсчет эритроцитов
  • Подсчет лейкоцитов
  • Подсчет ретикулоцитов
  • И т.п.
• Подсчет форменных элементов мочи
• Исследование эякулята – оценка количественных и качественных параметров сперматозодиов
• Вычисление концентрации спор в вакцине
• Подсчет ооцист в препарате
• И т.п.

Камеры Горяева выпускаются в двух модификациях: двухсеточные (двухкамерные) и четырехсеточные (четырехкамерные). В определении цены камеры Горяева важную роль играет качество шлифовки стекла, метод нанесения сетки – лазерная гравировка или же вакуумное напыление.

Что собой представляет камера Горяева? Камера Горяева есть не что иное, как прозрачное монолитное предметное стекло поперечными прорезями и нанесенной специальным образом микроскопической сеткой. В случае двухкамерной камеры Горяева мы имеем четыре прорези, образующие три поперечно расположенных площадки, при этом средняя площадка разделена продольной прорезью на две одинаковых камеры, на каждой из поверхности площадки которых нанесена сетка. В случае же четырехкамерной камеры Горяева мы получаем предметное стекло с пятью прорезями, образующих четыре площадки, при этом две внутренние дополнительно разделены продольной прорезью для получения четырех камер с нанесенной микроскопической сеткой на поверхности площадок.

Рассмотрим более подробно особенности сетки. Специальная сетка наносится на внутренние площадки, расположенные ниже соседних боковых площадок на 0.1мм. Боковые площадки предназначены для притирания покровного стекла до появления Ньютоновских колец. Как правило, используют специальное покровное стекло для камеры Горяева с закругленными краями. После притирания покровного стекла создается камера, закрытая с двух боковых сторон, а с двух других остаются щели (так называемые, капиллярные пространства), через которые и заполняют камеру.5

где X — количество ФЭ/мл, M- количество ФЭ над большим квадратом.

При работе с камерой Горяева важно следить, чтобы ее рабочие поверхности оставались сухими и чистыми. Кроме того, при подсчете форменных элементов нельзя допускать наличие воздушных пузырей на сетке камеры, так как они могут мешать точности подсчета.

После работы с камерами Горяева следует выполнить их дезинфекцию одним из допустимых способов:

1. Погружение в 70%-ный раствор этилового спирта на 30 минут
2. Погружение в 4%-ный раствор формалина на 60 минут при комнатной температуре.

Приведем примеры применения камеры Горяева и некоторые формулы.

Практическое применение камеры Горяева

Прежде чем приступить к проведению лабораторных исследований, рекомендуется тщательно протереть камеру Горяева небольшим кусочком чистого бинта, слегка смоченного в спирте. Мы не советуем использовать для этих целей вату, так как она может оставить волокна. Таким же образом следует обработать и покровное стекло для камеры Горяева. Учтите, что при использовании низкокачественного спирта на поверхностях может образоваться осадок, тем или иным образом мешающий проведению исследований. Чтобы избежать появления связанных с этим явлением нежелательных эффектов, рекомендуется дополнительно протереть камеру и покровное стекло чистым марлевым шариком без спирта. Притирание покровного стекла к камере должно быть выполнено очень тщательно до появления на месте контакта радужных колец (так называемых, цветных колец Ньютона) с обоих краев. Для лучшего притирания можно воспользоваться одной хитростью и слегка выдохнуть воздух на камеру и покровное стекло, так чтобы небольшое количество влаги сконденсировалось на поверхностях стекол, что обеспечит лучший контакт.

При отсутствии специальных покровных стекол, прилагающихся к камере Горяева, можно использовать обычные стандартные покровные стекла.

Помимо целевого использования камеры Горяева для подсчета форменных элементов крови и т.п., данное стекло может расцениваться как своеобразный эталон для определения увеличения микроскопа. Для этого следует воспользоваться следующей формулой:

X=(p1-p2)/(a*N)

где X – это увеличение микроскопа; p1 – положение левой границы клетки камеры Горяева; p2 – положение правой границы клетки или группы клеток; N – количество клеток между измеряемыми границами; a — размер клетки камеры Горяева (равен 0,05 мм).

Камера Горяева также используется для подсчёта количества клеток в культуре.

Для подсчета клеточных элементов в жидкостях, содержащих их в меньших концентрациях, используются аналогичные по конструкции камеры Фукса-Розенталя и Нажотта, имеющие большую глубину – 0.2 мм и 0.5 мм соответственно. Эти же камеры используются в альгологии для количественного учета фитопланктона. Часто камера Фукса-Розенталя используется для подсчета форменных элементов спинномозговой жидкости. В отличие от камеры Горяева, большие квадраты сетки Фукс-Розенталя не разграфлены и сгруппированы по 16 квадратов, причем каждая такая группа ограничена тройными линиями.

Подсчет форменных элементов крови

Наиболее часто камеры Горяева используются именно для определения форменных элементов крови при проведении лабораторных исследований. Так для подсчета эритроцитов кровь необходимо развести в 200 раз, лейкоцитов – в 20 раз. Количество форменных элементов (ФЭ) в 1мкл крови определяют по формуле:

N=m*4000*s/q,

где N – искомое количество ФЭ в 1 мкл крови; m – число ФЭ в определенном количестве малых квадратов; q – количество малых квадратов сетки камеры Горяева, в которых подсчитывались ФЭ, s – степень разведения крови.

Формула для подсчета эритроцитов

Для подсчета эритроцитов используются 5 больших или 80 малых квадратов сетки, расположенных по диагонали. Таким образом, получаем следующую формулу:

N=m*4000*200/(5*16)=m*10000

Формула для подсчета лейкоцитов

Для подсчета лейкоцитов можно использовать один из трех методов:

1. Лейкоциты считают в 64 больших (пустых) квадратах

N=m*4000*20/(64*16)=m*78,125≈m*78

2. ​Лейкоциты считают по всей сетке в 169 больших квадратах (рекомендуется для образцов крови с выраженной лейкопенией)

N=m*4000*20/(169*16)≈m*29,6

3. Лейкоциты считают в 100 больших квадратах (64 пустых + 36 разграфленных квадратов по периметру сетки)

N=m*4000*20/(100*16)=m*50

Таблица нормальных значений:

Форменные элементы	Норма
Эритроциты	Мужчины	4 000 000 – 5 100 000 в 1 мкл
	Женщины	3 700 000 – 4 700 000 в 1 мкл
Лейкоциты		4 000 – 9 000 в 1 мкл

Подсчет форменных элементов в мочевом осадке

Для определения ФЭ в мочевом осадке при анализах мочи по Нечипоренко, Аддис-Каковскому, Амбурже осуществляется по всей сетке Горяева и рассчитывается по формуле:

N=m/0.676,

где N – число ФЭ в 1 мкл осадка; m – число ФЭ, подсчитанных по всей сетке; 0.676 – объем камеры Горяева (мкл)

Автор статьи: Галина Цехмистро

Гематология

Гематология

2 Глава

Различия в выполнении анализа традиционным методом и на гематологическом анализаторе

Традиционно при исследовании ОАК часть параметров определяется, а некоторая часть рассчитывается. Рекомендованные для использования в КДЛ методики в 70–80 гг прошлого века были унифицированы для лабораторий республик, входивших в СССР и получили название унифицированных методов исследования.

В последующие десятилетия были ознаменованы широким распространением гематологических анализатором, существенно облегчивших и стандартизировавших работу КДЛ. На сегодняшний день в КДЛ могут использоваться как традиционные методы оценки показателей ОАК так и применение гематологических анализаторов.

Показатель	Традиционный метод	Гематологический анализатор
Концентрация гемоглобина	гемоглобинцианидный метод	гемихромный метод
Подсчет эритроцитов	в камере Горяева световая микроскопия	кондуктометрический метод
Подсчет лейкоцитов	в камере Горяева световая микроскопия	кондуктометрический метод
Подсчет тромбоцитов	в камере Горяева световая микроскопия; в мазке крови по Фонио	кондуктометрический метод
Гематокрит	гематокритная центрифуга	расчёт по формуле с использованием среднего объема клетки (MCV) и числа клеток
Средний объем эритроцита	расчёт по формуле	определение кондуктометрическим методом
Другие эритроцитарные индексы	расчёт по формулам	расчет по формулам

Устройство камеры Горяева

Камера Горяева на 2 препарата (слева) и на 4 препарата (справа)

Камера Горяева — представляет собой устройство, предназначенное для подсчета клеток под микроскопом. Наиболее надежными зарекомендовали камеры выточенные из одного куска стекла, «склеенные» камеры, состоящие из нескольких фрагментов, продемонстрировали меньшую надежность при интенсивной эксплуатации.

Сетка камеры Горяева (А — внешний вид, Б — квадраты для подсчета эритроцитов, B — квадраты для подсчета лейкоцитов, Г — квадраты для подсчета тромбоцитов)

Однако, несмотря на доступность камерных методов подсчета количества форменных элементов крови, в настоящее время они постепенно вытесняются методами подсчета клеток на гематологических анализаторах, преимуществом аппаратного подсчёта являются: большая производительность, возможность одновременного подсчета всех форменных элементов крови (эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов), определения дополнительных показателей, характеризующих форменные элементы (эритроцитарные индексы, группы лейкоцитов, тромбоцитарные индексы и другие).

В современных гематологических анализаторах реализуются различные принципы для определения показателей ОАК. Для получения результатов используется комбинация из нескольких методов измерения:

• Импедансометрический метод (метод Культера) используется для определения количества клеток и распределение объема лейкоцитов (WBC), эритроцитов (RBC) и тромбоцитов (PLT).
• Фотометрическое измерение поглощения света используется для определения концентрации гемоглобина (HGB).
• Оптическое измерение светорассеивания и преломления используется для определения параметров дифференциации пяти популяции лейкоцитов (LYM%, MON%, NEU%, EOS%, BAS%).

Импедансометрический метод

Импедансометрический метод (также известный как метод Культера) определяет концентрацию и распределение объема клеток в зависимости от изменения электрического сопротивления, когда частица в проводящей жидкости проходит через маленькую апертуру. Метод также называется «волюметрическим», так как небольшой известный объем крови разбавляется раствором дилюента и проходит через апертуру по установленной норме.

Метод импеданса

Постоянный ток протекает между двумя электродами с обеих сторон апертуры. Каждая клетка при прохождении через апертуру вызывает изменение импеданса проводящей суспензии клеток крови. Эти изменения регистрируются анализатром как увеличение напряжения между электродами. Количество импульсов определяет количество клеток. Амплитуда импульса пропорциональна объему клетки.

Электронное распознавание позволяет отделить эритроциты (RBC) и тромбоциты (PLT). Литическая реакция лизирует эритроциты для точного измерения лейкоцитов (WBC).

Измерения эритроцитов (RBC) и тромбоцитов (PLT), основанные на методе импеданса, представлены на гистограммах. На данных диаграммах отображено количество клеток (на оси Y) и размер клеток (на оси Х).

Маленькие клетки отображены на левой части гистограммы, большие — на правой. Высота гистограммы заданного размера представляет количество клеток с данным размером. Чем больше высота гистограммы, тем больше клеток.

Экран с результатами гистограммы

Дискриминаторы (предел) отмечены красным цветом. Тромбоциты (RBC) расположены в крайней левой части гистограммы RBC и слева от красного дискриминатора. Гистограмма PLT – это увеличенная область данной области.

Фотометрическое измерение поглощения света

Лизированный раствор пробы можно подвергнуть анализу на гемоглобин (HGB) на основе устойчивого содержания хромогена. Реагент лизирует клетки крови, высвобождающие гемоглобин.

Впоследствии концентрация гемоглобина измеряется фотометрическим путем через камеру WBC. Фактический гемоглобин пробы рассчитывается как разность бланка и измерения крови с/без освещения, чтобы сократить эффект преломления жидкости и светового возмущения.

Фотометрическое измерение поглощения света

Оптическое измерение светорассеивания и преломления

Оптическое измерение светорассеивания и преломления используется для определения параметров дифференциации пяти популяции лейкоцитов (LYM%, MON%, NEU%, EOS%, BAS%). В оптической измерительной головке находится сфокусированный лазер, направляемый на поток лейкоцитов. Изменения интенсивности рассеянного лазерного излучения, проходящего через клетки, определяется объемом и структурой клеток. Изменения фиксируются системой детектора как рост напряжения.

Количество импульсов пропорционально количеству частиц. Интенсивность каждого импульса пропорциональна объему и гранулярности клеток крови. Дифференциация пяти популяций WBC строится на двухмерной диаграмме объема и распределения гранулярности.

Диаграмма оптической измерительной головки Abacus 5

Клетки большего размера, объема или гранулярности обычно рассеивают больше света. Интенсивность рассеянного света улавливается системой обработки оптических сигналов.

Клеточное светорассеяние

Внешняя структура (и размер клетки) вызывают рассеяние на малые углы. Внутренняя структура вызывает рассеяние на большие углы. Разные углы света улавливаются оптическими датчиками. Таким образом, система получает информацию по двум независимым параметрам об одной клетке, передающей луч света.

Система обработки оптических сигналов

Полученные данные заносятся в плоскую систему координат. Схожие клетки несут схожие характеристики, благодаря чему аналитическое программное обеспечение может дифференцировать клетки и представить диаграммы рассеяния 4-диф. и базофилов.

Диаграмма рассеяния базофилов

Во избежание появления артефактов необходимо проводить регулярное техническое обслуживание, а также требуется постоянно выполнять измерение гематологических контролей для гарантирования эффективного функционирования анализатора. Данная процедура более подробно описана в инструкции пользователя на анализатор Abacus 5.

Процесс измерения

Анализатор измеряет количество эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов при помощи различных растворов и методов.

В растворе WBC эритроциты лизируются при помощи специального реагента. Весь процесс проиллюстрирован ниже.

Ограничения

Несмотря на то, что гематалогические анализаторы являются высококачественным прибором в своей категории, а также очень полезным инструментом для проведения автоматического гематологического исследования в лабораториях малого и среднего размера, пользователи должны иметь ввиду, что прибор, тем не менее, имеет некоторые ограничения, которые следует учитывать при эксплуатации. Однако для преодоления данных ограничений в прибор встроен специальный алгоритм флажков, которые указывают на возможные технические ошибки или на наличие незрелых клеток или идиобластов, которые анализатор может неточно распознать. Засчет своей устойчивости к лизирующей процедуре, ядросодержащие эритроциты (NRBC) могут быть приняты за лейкоциты. Это может увеличить общее количество WBC. Схожий размер и структура могут препятствовать подсчету лимфоцитов.

Более того, вследствие их особой реакции на лизирующий эффект, например, нестандартные клетки, бласты, незрелые клетки и активированные лимфоциты могут ошибочно увеличить количество базофилов и/или моноцитов. Активированные лимфоциты (изменчивая форма) и моноциты могут образовать сплошное скопление и в результате количество моноцитов может быть ошибочно завышено, в то время как присутствует активация лимфоцитов (например, в случае вирусных инфекций, таких как мононуклеоз) количество лимфоцитов может быть ошибочно занижено. Пожалуйста, имейте ввиду, что анализатор не выдает интерпретирующих флажков, если параметр измерения вышел за пределы линейности, но рядом с численным значением параметра появляется линейный флажок «*». Если количество определенной популяции клеток ниже или выше верхнего предела диапазона линейности анализатора, прибор может не выдать численный результат. Однако клетки будут отчетливо видны на диаграмме рассеяния и гистограмме, и появится флажок, указывающий на исправление ошибки.

В случае, если количество выше предела диапазона линейности существует высокая вероятность совмещения (т.е. через детектор проходит одновременно несколько клеток). В данном случае для обеспечения точных результатов необходимо выполнить ручное разведение образца физ.раствором и провести повторное измерение. Крайне высокое количество WBC может ошибочно повысить MCV эритроцитов.

Такое высокое количество WBC может повлиять на количество RBC, которое в действительности может быть несколько ниже. Высокое количество клеток или измененные лейкограммы с аномальными клетками характерны для злокачественных гематологических опухолей, и точная интерпретация результатов всегда имеет значение. В общем, необходимо провести визуальный анализ мазка крови аномальных образцов.

Нормальный диапазон значений

Нормальный диапазон значений может варьироваться и зависеть от применяемых технологий. Для установления нормальных значений, которые будут применимы для местного населения, рекомендуется провести ваше собственное исследование.

Системные флажки

Анализатор Abacus 5 имеет несколько видов предупреждающих флажков: диапазона линейности, высокого бланка, общего предупреждения, морфологические и интерпретирующие флажки. В нижеприведенных таблицах описаны данные флажки и сообщения, которые их сопровождают. Также в них содержатся руководство к действиям, к которым должен прибегнуть оператор для исправления ошибки.

Ваша Вест Медика.

Гематологические исследования

Клинический анализ крови (общий анализ крови) — набор тестов, направленных на определение количества различных клеток крови, их параметров (размера и др.) и показателей, отражающих их соотношение и функционирование. Общий анализ крови, как правило, включает в себя от 8 до 30 параметров: подсчет количества эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов в 1 микролитре или литре крови, а также ряд других показателей, описывающих форму, объем и другие характеристики этих клеток, лейкоцитарную формулу (процентное соотношение различных форм лейкоцитов) и подсчет скорости оседания эритроцитов (СОЭ).

ПОКАЗАНИЯ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ОБЩЕГО АНАЛИЗА КРОВИ

• Выявление инфекций, воспалительных процессов, злокачественных новообразований;
• Оценка эффективности назначенного лечения;
• Плановое исследование

В ЛАБОРАТОРИИ ВЫПОЛНЯЮТ:

• Общий анализ крови c дифференцировкой лейкоцитарной формулы (микроскопия мазка крови)
• Общий анализ крови c дифференцировкой лейкоцитарной формулы + ретикулоциты
• Подсчёт ретикулоцитов (автоматический RET анализ)
• Подсчет тромбоцитов мануально
• Флуоресцентный анализ тромбоцитов (автоматический подсчет)
• Общий анализ крови c дифференцировкой лейкоцитарной формулы
• Микроскопическое исследование лейкоцитарной формулы (микроскопия мазка крови)
• Определение СОЭ по методу Вестергрена

Общий анализ крови c дифференцировкой лейкоцитарной формулы, подсчет тромбоцитов и ретикулоцитов выполняются на гематологическом автоматическом анализаторе XN 1000 производства «Sysmex Corporation», Япония.

Расшифровка показателей клинического анализа крови

• количество лейкоцитов (white blood cells, WBC) с лейкоцитарной формулой. Лейкоциты — клетки, помогающие организму бороться с инфекцией. Они способны определять чужеродные агенты (бактерии, вирусы) в организме и уничтожать их. Выделяют 5 различных видов лейкоцитов: эозинофилы, базофилы, нейтрофилы, лимфоциты и моноциты, которые входят в лейкоцитарную формулу (процентное соотношение различных форм лейкоцитов в сыворотке крови и подсчет их числа в единице объема). Все параметры дифференциального подсчёта лейкоцитов, включая незрелые гранулоциты (IG), определяются с использованием флуоресцентной проточной цитометрии и обеспечивают получение расширенного перечня клинически значимых параметров в ходе каждого анализа. Чувствительность анализа особенно важна в обнаружении воспалительных и инфекционных заболеваний. Общее количество лейкоцитов, как правило, повышено при остром инфекционном процессе, вызванном бактериями. Если лейкоцитов слишком мало, то организм становится более подверженным различным инфекциям. Также это помогает в мониторинге терапии – повышенное количество лейкоцитов начнёт снижаться, демонстрируя эффективность лечения.
  Норма: (4-9)x10⁹/L
• количество эритроцитов (red blood cells, RBC). Эритроциты — клетки, в состав которых входит гемоглобин. Общий анализ крови позволяет определить, достаточное ли количество эритроцитов содержится в крови, какова их форма, размеры и содержание в них гемоглобина (MCV, MCH, MCHC). Если количество эритроцитов, выявляемое общим анализом крови, снижено, значит, у пациента анемия, что может проявляться слабостью, быстрой утомляемостью и одышкой. Реже встречается повышение общего количества эритроцитов (эритроцитоз, или полицитемия).
  Норма: женщины — (3.7-4.7)x10¹²/L, мужчины — (3.9-5.1)x10¹²/L
• уровень гемоглобина (hemoglobin content, Hb). Гемоглобин — белок, содержащий железо, который обладает способностью переносить кислород от легких к тканям и органам, а углекислый газ – от тканей и органов к легким, из которых он выдыхается. Гемоглобин определяет основную функцию эритроцитов, от его содержания зависит окраска этих форменных элементов крови.
  Норма: женщины — (120-150)g/L, мужчины — (130-170)g/L
• гематокрит (hematocrit, Hct) определяет объем крови, который занимают в кровяном русле эритроциты. Этот показатель выражается в процентах. Повышение гематокрита происходит, если увеличивается количество эритроцитов либо уменьшается объем жидкой части крови, что бывает при избыточной потере жидкости организмом (например, при диарее). Снижение данного показателя наблюдается, наоборот, при уменьшении количества эритроцитов (допустим, из-за их потери, разрушения или уменьшения их образования) или при гипергидратации – когда человек получает слишком много жидкости (например, при избыточном введении внутривенных растворов). Гематокрит отражает не только количество эритроцитов, но и их размер. Если размер эритроцитов уменьшается (как при железодефицитной анемии), гематокрит тоже будет снижаться.
  Норма: женщины — (33-46)%, мужчины — (38-49)%
• эритроцитарные индексы определяют размер эритроцита и содержание в нем гемоглобина и включают в себя средний объем эритроцита (MCV), среднее содержание гемоглобина в эритроците (MCH), среднюю концентрацию гемоглобина в эритроцитах (MCHC), а также распределение эритроцитов по величине (RDW). Определение вышеуказанных показателей является неотъемлемой частью общего анализа крови и отдельно не производится.
  Норма: MCV — (80-98)fL, MCH — (27-37)pg, MCHC — (300-360)g/L, RDW — (11.5-14.5)%
• тромбоциты (platelet count, PC, PLT) — клетки, играющие значительную роль в свертывании крови. Если у человека снижено количество тромбоцитов, риск кровотечения и образования синяков у него повышен.
  
  Тромбоцитопения – состояние, характеризующееся аномально низким количеством тромбоцитов: ниже нормального количества тромбоцитов у взрослых. При тяжелой форме тромбоцитопении, когда количество тромбоцитов составляет менее 20 x 109 /л, возможно развитие спонтанного кровотечения (нетравматического характера). Игнорирование симптомов тяжелой формы тромбоцитопении может иметь серьезные последствия для пациента, поэтому получение достоверных результатов подсчета тромбоцитов крайне важно при принятии клинически важных решений. В то же время получение точного числа тромбоцитов, особенно из тромбоцитопенических образцов пациентов, является довольно сложной лабораторной задачей. Анализатор XN 1000 производства Sysmex предлагает доступное решение для подсчета тромбоцитов — это флуоресцентный анализ тромбоцитов, который позволяет определять не только традиционно используемые показатели, но и специфические маркеры, например фракцию незрелых тромбоцитов, которая является более точным маркером образования тромбоцитов и отражает процент незрелых тромбоцитов от их общего количества, а также является установленным параметром, с помощью которого врачи определяют причину тромбоцитопении, исходя из этиологии различных врожденных и приобретенных тромбоцитопенических состояний.
  Норма: (150-450)x10⁹/L
• ретикулоциты (Retic count, RET) – это молодые формы эритроцитов, образующиеся в костном мозге и в небольшом количестве находящиеся в крови, позволяющие оценить функциональное состояние красного кроветворения. Увеличенное количество ретикулоцитов – критерий активации кроветворения в костном мозге при гемолитической анемии, после кровопотери, а сниженное характерно для гипопластической анемии.
  
  Автоматический анализ ретикулоцитов дает исключительные возможности для комплексного анализа эритропоэза. При подсчёте ретикулоцитов используется запатентованный метод флуоресцентной проточной цитометрии, точность которого признана во всем мире. Данный анализ отображает широкий набор ретикулоцитарных параметров – как качественных, так и количественных – что помогает в формировании полной картины состояния красного ростка кроветворения, также становится доступным оперативный контроль терапии железом и/или эритропоэтином, что даёт пациенту бóльший шанс на восстановление, в дифференциальной диагностике анемий, в мониторинге эффективности терапии. Наряду с общим подсчётом ретикулоцитов, анализатор обеспечивают их разделение на различные фракции в зависимости от степени зрелости и, как следствие, их эритропоэтической активности. Получить дополнительное представление о качестве незрелых эритроцитов можно благодаря оценке уровня гемоглобинизации ретикулоцитов, что является расширенным клиническим параметром, полезным при лечении пациентов с дефицитом железа и анемией. Кроме того, RET анализ предоставляет информацию о содержании в образце гипо- и гиперхромных эритроцитов, а также фрагментов эритроцитов.
  Норма: (1.03-1.85)%
• скорость оседания эритроцитов (СОЭ). Повышение СОЭ –неспецифический тест, свидетельствующий о наличии воспалительного процесса. При пониженном числе эритроцитов в крови СОЭ возрастает независимо от природы анемии. Снижение СОЭ наблюдается при эритроцитозах различной этиологии. Реакция ускоряется у женщин при беременности, при голодании. В основе увеличения СОЭ лежат изменения в концентрации различных белков плазмы, связанные с изменением их электрического заряда, но могут играть роль и другие факторы: размеры и форма кровяных телец, изменения в липидном составе плазмы и т. д.
  
  Определение СОЭ выполняется на анализаторе автоматическом для определения скорости оседания эритроцитов серии ROLLER — модель 20PN, производства Италия. Анализатор Roller 20 PN определяет скорость оседания эритроцитов в венозной и капиллярной крови, обеспечивает получение результата в течение 20 секунд благодаря измерению скорости агрегации эритроцитов, что позволяет преодолеть ограничения и зависимость от переменных факторов методов определения СОЭ, основанных на явлении оседания. Внутренние и внешние контроли качества гарантируют точность, правильность и воспроизводимость результатов пациентов. Новая запатентованная технология основана на методе микрокапиллярного фотометрического измерения скорости агрегации эритроцитов в патологических условиях.
  Норма: женщины 15-50 лет- (2-20)мм/час; свыше 50 лет – (2–30)мм/ч; мужчины 15-50 лет – (2-15)мм/час; свыше 50 лет – (2-20)мм/час

ПОДГОТОВКА К ОБЩЕМУ АНАЛИЗУ КРОВИ

Правила подготовка пациента к процедуре забора крови из вены на гематологические исследования (общий анализ крови, СОЭ и т.д.)

КАК СДАТЬ АНАЛИЗ КРОВИ

1. В регистратуре заключить договор на оказание платных услуг (если есть направление от врача – показать медрегистратору)
2. Оплатить счет в кассе РКМЦ или через ЕРИП
3. Сдать анализ.

Материал для исследований принимается в плановом режиме (понедельник-пятница) с 8:00 до 10:00, результаты исследований доступны для врача и пациента с 15:00 в тот же день.

Лабораторная служба

На современном этапе развития медицины одними из ключевых критериев в оценке состояния здоровья человека по-прежнему остаются результаты лабораторных исследований. И с развитием аналитических технологий роль лабораторных данных в диагностике заболеваний только возрастает.

Все лабораторные исследования выполняются в лабораторной службе. Основной задачей службы является своевременное и качественное выполнение всех видов исследований. Достоверность выдаваемых результатов позволяет практическим врачам проводить своевременную диагностику заболеваний и контролировать лечение. Лабораторная служба с этими задачами успешно справляется. В составе олабораторной службы работают:

• клинико-гематологический отдел;
• биохимический отдел;
• бактериологический отдел;
• экспресс-лаборатория;
• лабораторный отдел поликлиники

Любое лабораторное исследование — это сложный многоступенчатый процесс, и выполнение каждого из его этапов требует профессионального подхода. В лабораториях нашей больницы работает команда высококвалифицированных специалистов. Все сотрудники сертифицированы по специальности клиническая лабораторная диагностика и регулярно повышают свою квалификацию.

Лабораторный отдел  оснащен самым современным высокотехнологичным оборудованием. Использование в работе передовых технологий, оригинальных реагентов и контрольных материалов, имеющих регистрационные удостоверения МЗ РФ, позволяет достигать максимальной точности и высокой диагностической ценности результатов лабораторных исследований.

С целью исключения ошибок связанных с идентификацией пациента в нашей лабораторной службе передача информации о пациенте и назначениях осуществляется с помощью компьютеризированной лабораторной информационной системы (ЛИС). Для идентификации пациентов и образцов используется технология штрих-кодирования. Биоматериал и лист направления на исследование маркируются этикетками с одинаковым штрих-кодом, что однозначно связывает бумажную форму (направление) и контейнер с материалом. Чтение штрих-кодов специальными сканерами на рабочих местах и в автоматических анализаторах исключает возможность ошибки.

Специалисты отдела дорожат своей профессиональной репутацией, поэтому большое внимание уделяется контролю качества исследований. Проводится ежедневный внутрилабораторный контроль качества. 

---

С перечнем исследований выполняемых нашим отделом лабораторной диагностики вы можете ознакомиться здесь. Там же вы можете получить информацию о правилах сбора материала и подготовки к исследованию.

Общий (клинический) анализ крови.

Кровь — внутренняя среда организма, состоит из жидкой части (плазмы) и взвешенных в ней форменных элементов (лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов). Изменение клеточного состава периферической крови наблюдается как при физиологических состояния организма (беременность, физическая нагрузка, прием пищи и др.), так и при различных патологических состояниях.

Поэтому общеклиническое исследование крови является одним из важнейших диагностических методов, тонко отражающим реакцию кроветворных органов на воздействие различных физиологических и патологических факторов.
В исследование входит:

• Определение концентрации гемоглобина в крови.
• Подсчет количества эритроцитов
• Расчет эритроцитарных индексов (MCV,MCH,MCHC,RDW)
• Подсчет количества лейкоцитов
• Подсчет лейкоцитарной формулы
• Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ)
• Подсчет количества тромбоцитов.

Материалом для проведения общего анализа крови служит капиллярная (из пальца) либо венозная кровь. В нашей лаборатории забор венозной крови осуществляется в одноразовые системы бесконтактного взятия крови, а для взятия крови из пальца используются стерильные скарификаторы-копья одноразового применения. Исследование производится на автоматическом гематологическом анализаторе. Однако, даже самая современная высокотехнологичная аппаратура не может гарантировать достоверный результат при несоблюдении правил подготовки к исследованию:

• Исследование проводится натощак (после примерно 12-часового голодания, воздержания от приема алкоголя и курения)
• При минимальной физической активности непосредственно перед взятием крови (в течение 20-30мин)
• Необходимо отказаться от приема лекарственных средств накануне исследования, если это невозможно , обязательно предупредите лечащего врача.
• Кровь для исследования необходимо сдавать до проведения других диагностических (рентгенологические исследования, УЗИ и др.) и лечебных (внутривенные вливания, переливание компонентов крови) процедур

При соблюдении этих правил результат исследования будет достоверен и полезен вашему лечащему врачу в процессе установления диагноза и выбора тактики лечения, а так же для контроля терапии.

Общий анализ мочи

Исследование мочи позволяет судить не только о характере и выраженности патологического процесса в почках, мочевыделительной системе, но и о состоянии других органов и систем. Общий анализ мочи включает исследование физических свойств (цвет, прозрачность, измерение относительной плотности мочи) и химикомикроскопическое исследование ( определение рН мочи,определение содержания в моче белка, глюкозы, кетоновых тел, лейкоцитов, эритроцитов, бактерий, кристаллов различных солей).
Правила сбора мочи для проведения общего анализа:

• Сбор мочи для исследования необходимо проводить после тщательного туалета промежности и наружных половых органов
• Не следует проводить анализ мочи во время менструации
• Необходимо собрать всю утреннюю (первую) порцию мочи в сухую, чистую посуду. В лабораторию доставить примерно 100 мл мочи в пластиковом контейнере с завинчивающейся крышкой.
• При длительном стоянии мочи происходит изменение ее физических свойств и разрушение клеточных элементов, размножение бактерий. Поэтому собранную мочу необходимо доставить в лабораторию не позднее 1 — 1,5 ч после ее выделения, не допуская замораживания, что особенно актуально в зимнее время. 

Проба Нечипоренко

Используется для количественного определения содержания в моче лейкоцитов, эритроцитов.
Правила сбора мочи для проведения пробы Нечипоренко:

• Необходимо собрать среднюю порцию утренней мочи (в середине мочеиспускания) в сухой, чистый контейнер с завинчивающейся крышкой.
• Собранную мочу необходимо доставить в лабораторию не позднее 1 — 1,5 ч после ее выделения, не допуская замораживания, что особенно актуально в зимнее время. 

Проба Зимницкого

Проба позволяет исследовать концентрационную и выделительную функцию почек.
Правила сбора мочи для исследования:

• Для проведения пробы не требуется изменения режима питания, однако, необходимо учитывать количество выпитой жидкости.
• В 6 часов утра следует опорожнить мочевой пузырь в унитаз.
• Первую пробу собрать с 6 до 9 часов утра, далее каждые 3 часа мочу собирать в отдельную банку (последняя — в 6 часов утра следующего дня).
• Измерить и указать в направлении объем каждой порции.
• Доставить в лабораторию по 100-150 мл каждой порции.
• Все порции необходимо промаркировать. Всего за одни сутки собирают 8 порций.
• В направлении необходимо указать количество выпитой за сутки жидкости.

Спермограмма

Основной целью исследования эякулята является определение способности спермы к оплодотворению и выявление заболеваний репродуктивной системы мужчины.
Преаналитический этап — один из самых ответственных этапов лабораторного анализа. Для получения достоверных результатов спермограммы вам необходимо выполнить следующие условия подготовки:

• Эякулят должен быть получен после полового воздержания в течение 2-7 суток. Несоблюдение временного интервала полового воздержания может способствовать резкому снижению концентрации сперматозоидов и их качественных параметров (подвижность, жизнеспособность). Однако и более длительное воздержание может негативно отразится на результатах спермограммы (появление старых, дегенеративных форм сперматозоидов).
• Не употреблять алкоголь в течение 7 дней перед исследованием. В течение 2,5 мес. постараться исключить токсические факторы, хронические интоксикации (алкоголь, курение, производственные факторы)
• Необходимо отказаться от исследования, если в течении 7-10 дней перед выполнением анализа были простудные или другие острые заболевания, протекавшие с лихорадкой
• Перед исследованием необходимо отказаться от процедур с прогреванием (УВЧ, сауны, бани)
• Эякулят получают путем мастурбации, материал должен быть собран полностью
• Для сбора эякулята лучше использовать пластиковый контейнер с завинчивающейся крышкой и широким горлышком
• Получение эякулята в условиях медицинского учреждения является предпочтительным, так как уменьшается вероятность повреждения сперматозоидов при транспортировке
• Если вы собираете материал в домашних условиях, необходимо доставить его в лабораторию в течении 1 часа после эякуляции, транспортировка осуществляется при температуре тела.
• На контейнере необходимо указать время получения эякулята.

Исследование системы гемостаза (коагулограмма)

Система гемостаза выполняет в организме жизненно важную функцию поддержания крови в жидком состоянии внутри кровеносных сосудов и, вместе с тем, предупреждает и останавливает кровотечение из поврежденных сосудов. Исследование системы гемостаза показано при склонности тромбозам и кровоточивости, в плане подготовки к оперативному вмешательству, во время беременности, а также для контроля проводимой антитромботичекой терапии.
В исследование системы гемостаза входит:

• Определение количества тромбоцитов
• Время капиллярного кровотечения по Дюке
• Время свертывания венозной крови
• Определение АЧТВ (активированное частичное тромбопластиновое время)
• Определение протромбинового времени (ПВ), вычисление протромбинового индекса (ПТИ) и международного нормализованного отношения (МНО)
• Определение тромбинового времени
• Определение концентрации фибриногена
• Обнаружение РФМК
• Определение плазминогена
• Определение D-димеров

Материалом для исследования служит венозная кровь и процедура взятия крови является критическим моментом для тестов на коагулограмму. В нашей лаборатории забор венозной крови осуществляется в одноразовые вакуумные системы бесконтактного взятия крови.
Для получения достоверного результата вам необходимо придерживаться следующих правил подготовки к исследованию:

• Учитывая суточные биоритмы, рекомендуется сдавать кровь на исследование утром от 7 до 9 часов
• После не менее 15-минутного отдыха даже при минимальной физической нагрузке. Поэтому, после того, как вы поднялись по лестнице в лабораторию, не спешите в бежать в процедурный кабинет, присядьте, отдохните перед взятием крови.
• Кровь для исследования лучше сдавать натощак
• Накануне воздержитесь от употребления алкоголя, курения.
• Если вы принимаете антитромботические препараты в направлении необходимо указать название препарата и его дозировку.

Копрологические исследования

Копрограмма представляет собой анализ кала с расширенным набором показателей, позволяет оценить функциональную деятельность желудка, кишечника, печени и поджелудочной железы, выявить наличие воспалительных процессов и дисбактериоза.
Для получения достоверных результатов копрологического анализа обследуемому необходимо провести следующую подготовку:

• Вам необходимо в течение 2-3 дней (3-4 дефекаций) придерживаться диеты с дозированным содержанием белков, жиров и углеводов. Этим требованиям отвечает диета Певзнера или Шмидта
• Диета Певзнера основана на принципе максимальной пищевой нагрузки для здорового человека. Она является обычным пищевым рационом здоровых людей, в который входит 400 г белого и черного хлеба, 250 г мяса, жаренного куском, 100 г масла, 40 г сахара, гречневая и рисовая каши, жареный картофель, салат, квашеная капуста, компот из сухих фруктов и свежие яблоки.
• Диета Шмидта — щадящая, лечебная, включает 1-1,5 л молока, 2-3 яйца всмятку, 125 г прожаренного рубленого мяса, 200-250 г картофельного пюре, слизистый отвар (40 г овсяной крупы), 100 г белого хлеба или сухарей, 50 г масла.
• Кал собирается после самопроизвольной дефекации в специально предназначенную посуду (одноразовые пластиковые контейнеры с герметичной крышкой и ложечкой-шпателем для отбора пробы кала).
• Для исследования соберите утреннюю порцию кала без посторонних примесей (моча, выделения половых органов и т.п.), отберите из 5 разных мест  (из последней порции обязательно) в количестве ~50 грамм, объём примерно до столовой ложки.
• Нельзя направлять материал для исследования после клизмы, приема медикаментов, влияющих на перистальтику (белладонна, пилокарпин и др.), после приема касторового или вазелинового масла, после введения свечей, препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий).
• Емкость с фекалиями необходимо доставить в лабораторию сразу после дефекации или не позднее 10-12 ч после дефекации при условии хранения в холодильнике при температуре +3-5 °С.

Подготовка к сдаче анализа на яйца гельминтов и простейшие:

• в течение 2 – 3 дней до сдачи анализа кала рекомендуется пить отвары желчегонных трав (плодов шиповника, пижмы, зверобоя) или подогретую столовую минеральную воду без газа по 1 — 3  столовые ложки (детям) за 20 – 30 минут до еды 2 – 3 раза в день.
• Для исследования соберите утреннюю порцию кала без посторонних примесей (моча, выделения половых органов и т.п.), отберите из 5 разных мест  (из последней порции обязательно) в количестве ~50 грамм, объём примерно до столовой ложки.
• Кал собирается после самопроизвольной дефекации в специально предназначенную посуду (одноразовые пластиковые контейнеры с герметичной крышкой и ложечкой-шпателем для отбора пробы кала

Исследование на энтеробиоз

Забор материала на энтеробиоз может производиться тремя способами:

• в лаборатории тампоном, смоченным в глицерине;
• в домашних условиях с помощью липкой ленты
• в лаборатории или дома с помощью специального набора для взятия соскоба фирмы HEM.

Если вы производите забор материала в домашних условиях, накануне вам необходимо подойти к лаборанту паразитологической лаборатории для получения предметного стекла, или специального набора для взятия соскоба, а также рекомендаций по сбору материала:

• Подготовьте отрезок прозрачной липкой пленки (скотча) размером 2 х 8 см (в случае, если Вам выдано стекло без предварительно наклеенной ленты).
• Накануне вечером ребенка не подмывать.
• Утром сразу после сна возьмите липкую пленку за концы (либо отклейте от выданного стекла), плотно прижмите всей липкой поверхностью к анусу и перианальным складкам, стараясь не касаться пальцами рук перианальной области.
• Отклейте полоску от кожи и перенесите на предметное стекло липким слоем к стеклу, равномерно приклейте, избегая образования воздушных пузырей.
• Концы ленты, выходящие за края стекла, отрежьте.

Исследование кала на скрытую кровь

Метод используется как скрининговый тест для выявления групп риска наличия колоректального рака, а также для диагностики других видов патологии нижних отделов пищеварительного тракта, протекающих с кровотечением (крупные полипы, язвы, эрозии и др.). Этот анализ позволяет достоверно выявить пациентов группы повышенного риска, нуждающихся в проведении профилактического эндоскопического обследования кишечника — колоноскопии. Исследование кала на скрытую кровь с профилактической целью необходимо проходить ежегодно всем пациентам старше 40 лет, этот тест включен в программу всеобщей диспансеризации взрослого населения. В нашей лаборатории для выявления скрытого кровотечения из нижних отделов желудочно-кишечного тракта используется иммунохимический метод — чувствительный и специфичный в отношении человеческого гемоглобина тест, позволяющий отказаться от соблюдения трехдневной диеты (исключение зеленых овощей, мяса, рыбы и др.) перед проведением исследования.
Однако для исключения ложноположительных результатов необходимо придерживаться следующих правил при подготовке к исследованию:

• Пробы кала нельзя отбирать во время или в течение трех дней после менструального периода, а также, если у пациента имеет место явное кровотечение из прямой кишки или кровь в моче.
• Алкоголь, аспирин или другие препараты, принятые в избытке, могут раздражать желудочно-кишечный тракт вплоть до возникновения эрозивно-язвенных поражений, являющихся причиной скрытого кишечного кровотечения. Поэтому необходимо прекратить прием этих веществ по крайней мере за 48 часов до тестирования.
• Не следует проводить исследование в течение двух недель после проведения инструментального исследования желудочно-кишечного тракта (колоноскопия, ректороманоскопия)
• Кал собирается после самопроизвольной дефекации (недопустимо применение клизм и слабительных средств)в специально предназначенную посуду (одноразовые пластиковые контейнеры с герметичной крышкой и ложечкой-шпателем для отбора пробы кала).

 

Определение количества форменных элементов в моче.

Определение количества форменных элементов в моче  выполняется с целью диагностики и дифференциальной диагностики  заболеваний почек, мочевого пузыря, мочевыводящих путей,а также для наблюдения за динамикой патологического  процесса и оценки эффективности  терапии.

Определение количества форменных элементов (лейкоцитов, эритроцитов, цилиндров) в моче – выполняется с использованием нескольких методик в зависимости от поставленной задачи: определить количество форменных элементов, выделяемых с мочой за сутки, скорость выделения клеток (в мин.)  или их количество в определенном объеме мочи (в мл).

   Лица, отвечающие за получение, доставку и анализ образцов мочи, должны быть осведомлены о биологической опасности, так как  все образцы биологического материала считаются потенциально инфицированными.

   Материальные ресурсы, необходимые для выполнения технологии: приборы,  средства измерения, лабораторное оборудование. 

—Микроскоп бинокулярный с осветителем.

—Центрифуга лабораторная.

   Для приготовления осадка мочу центрифугируют при относительном центробежном ускорении 400 G в течение 5 мин. 

—Счетчик-калькулятор для подсчета лейкоцитарной формулы крови (для подсчета клеток и цилиндров в образце мочи).

   Стеклянные (пластиковые) изделия:

-Мерные центрифужные пробирки (10 мл).

   Для центрифугирования мочи используются мерные центрифужные  пробирки из cтекла  или пластика, которые должны иметь коническую форму для концентрирования осадка, градуировку, закрываться крышками для уменьшения опасности разбрызгивания биологического материала. Пробирки должны быть чистыми и маркированными для правильной идентификации пациента.

-Счетные камеры: камера Горяева,  камера Фукса-Розенталя, слайд-планшеты.

   Клетки в камере для подсчета клеток в моче должны располагаться в один слой.Счетные камеры представляют собой толстое предметное стекло с нанесенными на них поперечными желобками, которые разделяют три поперечно расположенных плоских площадки. Средняя площадка расположена ниже боковых на 0,1 мм в камере Горяева или 0,2 мм в камере Фукса-Розенталя и разделена поперечным желобком на две половины, на поверхности которых нанесены две одинаковых сетки.  Покровное стекло притирается к боковым площадкам до появления «радужных» колец. Каплю исследуемой жидкости наносят на выступающий конец средней площадки, в силу капиллярности капля подтекает под покровное стекло и покрывает соответствующую сетку.

Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 разделенных на 16 малых. Площадь сетки 9 мм ², объем камеры примерно соответствует 0,9 мкл.

Сетка камеры Фукса-Розенталя состоит из 16 больших квадратов, каждый из которых разделен на 16 малых. Площадь сетки – 16 мм ²,  глубина камеры – 0,2 мм, объем камеры – 3,2 мкл.

Подсчет форменных элементов в осадке мочи проводят во всем объеме камеры.

   Использование камер позволяет получить стандартную толщину препарата, а наличие сетки, нанесенной на поверхность камеры, дает возможность рассчитать количество форменных элементов в определенном объеме биологического материала.

Счетная камера Горяева используется преимущественно для подсчета форменных элементов в моче, а камера Фукса-Розенталя – для подсчета клеток в ликворе. Однако при необходимости они могут использоваться для подсчета клеток в другом жидком биологическом материале.

   Количественные характеристики камер представлены в таблице.

Параметры камер	Камера Горяева	Камера Фукса-Розенталя	Слайд-планшет
Глубина, мм	0,1	0,2	0,1
Площадь сетки, мм2	9	16	9
Объем, мкл	0,9	3,2	0,9

   Использование пластиковых слайд-планшетов значительно ускоряет и упрощает процедуру анализа.

Пластиковые слайд-планшеты представляют собой прозрачную пластиковую пластину размером с предметное стекло, покрытую тонкой прозрачной пластиковой пластинкой, играющей роль покровного стекла.  Она закреплена так, что образуется 10 камер (карманов).

   Преимущества исследования биологических жидкостей в слайд-планшетах:

Простота применения

-Сокращение трудозатрат

-Стандартизация исследования

-Комфортность и удобство при работе

-При работе со слайд-планшетами не используются предметные и покровные стекла

-Исследование осадка мочи в слайд-планшете позволяет одновременно определить количество клеточных элементов в 1 мл мочи (число Нечипоренко) и получить представление о количестве форменных элементов в поле зрения или в препарате.

-быстрое и достаточно точное определение увеличенного количества клеток в ликворе (плеоцитоз).

-Подсчет и дифференциальная диагностика клеток в ликворе и в осадке мочи требуют для каждого анализа пришлифовывать покровное стекло к камере, что вызывает затруднение в работе и отнимает время. Подсчет и дифференциальная диагностика клеток в камере слайд-планшета производится под фиксированным покровным стеклом.

   Расстояние между основой слайд-планшета и «покровным стеклом» стабильно и равно 0,1 мкм, что позволяет клеточным элементам располагаться однослойно.

Слайд-планшет рассчитан для микроскопии мочи 10 пациентов. Изделия не подлежат мытью, а только дезинфекции и утилизации.

   В настоящее время предлагается два вида слайд-планшетов – без сетки и с нанесенной на пластинку каждой камеры слайд-планшета сеткой.

   Слайд-планшеты без сетки могут использоваться  для микроскопии осадка при проведении общего анализа мочи (без подсчета количества клеток в определенном объеме). Слайд-планшеты с нанесенной на пластинку сеткой могут использоваться как для микроскопии осадка при проведении общего анализа мочи, так и  для количественного подсчета форменных элементов.

   Заполнение слайд-планшета мочой производится через выемку (паз) в верхней пластинке.

Сетки слайд-планшетов отличаются у разных производителей формой и объемом. Каждая сетка слайд-планшета состоит из малых окружностей или квадратов, которые объединены в секции. Секция – это часть сетки слайд-планшета, содержащая определенное количество окружностей или малых квадратов. Границы секций выделены либо формой сетки, либо дополнительной разделительной линией в пределах сетки слайд-планшета и хорошо различимы при микроскопии.

Квадраты:

   Камера (слайд-планшет) предназначена для микроскопического исследования осадка мочи и других биологических жидкостей. Представляет собой пластиковый планшет на 10 ячеек. Каждая ячейка снабжена сеткой для подсчета (3х3 мм) и покрыта тонкой прозрачной пластиковой пластинкой, играющей роль покровного стекла. Каждая сетка поделена на 5 квадратов (1х1 мм), которые в свою очередь разделены на 9 маленьких квадратов (0,333х0,333 мм). Изготовлена из полиметилметакрилата (ПММА).

Окружности:

    В каждой камере слайд-планшета слева расположены две серии окружностей, по 9 в каждой. Они видны в проходящем свете и на малом увеличении микроскопа. На большом увеличении микроскопа (окуляр х10 и объектив х40) одна окружность занимает все поле зрения.

Каждая окружность имеет диаметр 0,376 мм, объем одной окружности — 0,011 мкл. Объем каждой серии окружностей составляет 0.011х 9 = 0,099 мкл или ? 0,1 мкл. Следовательно, если количество клеточных элементов, подсчитанных в 9 окружностях камеры умножить на 10, то получается содержание клеточных элементов в 1 мкл исследуемой жидкости.

Методики выполнения технологии исследования мочи.

-Определение форменных элементов в 1 мл мочи по методу Нечипоренко.

Подсчет количества форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров) в 1 мл мочи производят с помощью счетной камеры или слайд-планшета.

-Определение количества форменных элементов, выделенных за сутки, по

методу Каковского-Аддиса.

По методу Каковского-Аддиса проводят подсчет количества форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров), выделенных за сутки, с помощью счетной камеры или слайд-планшетов.

-Определение количества форменных элементов, экскретируемых с мочой за 1 мин, по методу Амбурже.

Проводят определение с помощью слайд-планшета количества форменных элементов, выделенных  с мочой за 1 мин.

Способ количественного определения форменных элементов крови

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к клинической лабораторной диагностике. Способ обеспечивает возможность проведения исследования неинвазивным путем с быстрым и частным съемом информации. Измеряют температуру кожных покровов тела левой и правой рук пациента по средней линии на внутренней поверхности локтевого сгиба, внутренней поверхности запястья, в центре ладонной поверхности кисти, в центре ладонной поверхности концевой фаланги среднего пальца кисти руки, с одновременным измерением температуры воздуха в помещении, и по результатам измерений определяют показатели форменных элементов крови на основе формализованной оценки вегетативного гомеостаза организма с учетом возраста пациента по уравнению G= В₀+B₁A+B₂T_v+В₃Т₁+В₄Т₂+В₅Т₃+В₆Т₄+В₇Т₅+B₈T₆+B₉T₇+B₁₀T₈+B₁₁(T₁-T₂)+В₁₂(Т₃-Т₄)+В₁₃(Т₅-Т₆)+B₁₄(T₇-T₈), где G — количественный показатель форменного элемента крови; В₀, B₁, B₂… В₁₄ — коэффициенты уравнения для лейкоцитов, равные соответственно 40,57, 0,03, -0,77, -1,74, 1,79, -0,93, 0,59, -0,2, -0,51, 0,47, 1,41, -0,77, 1,17, -0,29, для лимфоцитов равные соответственно -57,63, -0,16, 0,914, 1,65, -2,85, 2,53, 6,35, 2,12, -7,01, -0,65, -0,289, -1,84, 4,43, 4,53, для гранулоцитов равные соответственно 149,55, 0,18, -1,37, -2,42, 4,70, -4,76, -7,55, -3,75, 10,36, 1,73, 1,14, 9,53, -5,37. 1 ил.

Изобретение относится к исследованию материалов особыми способами, а именно к исследованию крови (гематологических показателей) на основе формализованной оценки вегетативного гомеостаза организма, и может быть использовано в различных областях медицины.

Существуют способы анализа и количественной оценки гематологических показателем крови (кн. Руководство по клинической лабораторной диагностике / Под ред. В.В. Меньшикова. М.: Медицина, 1982, с.576 или Справочник по клиническим и лабораторным методам исследования / Под ред. Е.А. Кост. М.: Медицина, 1976). Подсчет клеток проводят несколькими методами: с помощью счетных камер, в мазках крови, с помощью счетчиков и автоматов. Наиболее «старый» и распространенный микроскопический метод подсчета клеток с помощью счетных камер. Он основан на использовании разведенной крови, помещенной в счетную камеру (в нашей стране пользуются преимущественно камерой Горяева). Для подсчета всех Форменных элементов используется единый принцип. Различия заключаются в степени разведения крови, использовании для разведения крови при подсчете эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов разных жидкостей, подсчете клеток в различном числе квадратов. Лейкоцитарная формула подсчитывается в окрашенных мазках крови. Находят 100 лейкоцитов и выражают соотношение отдельных их видов в процентах. Подсчет форменных элементов крови в счетной камере является трудоемким и недостаточно точным методом, так как на результате подсчета сказываются малейшая неточность при взятии крови в пипетку и неудовлетворительная градуировка пипеток. Кроме того, на конечный результат исследования влияет любое отклонение от правил подготовки счетной камеры и подсчета клеток, недоброкачественность разводящих растворов и красителей, недостаточная квалификация или недобросовестность лаборантов и многие другие факторы. К существенному недостатку метода следует отнести то, что подсчет клеток требует большого напряжения у микроскописта, особенно по подсчету таких малых и многочисленных элементов, как эритроциты и тромбоциты. Подобные гематологические методы трудоемки, требуют достаточно большого времени для их проведения и работы квалифицированных лаборантов. В последние десятилетия в практику лабораторных исследований крови широко вошел подсчет форменных элементов с помощью счетчиков клеток, описанный в упомянутой выше литературе. Большинство счетчиков форменных элементов производят автоматическим подсчет клеток, которым осуществляется с помощью фотоэлектрического и кондуктометрического принципа. Использование счетчиков облегчает труд лабораторных работников, повышает точность и производительность. Вместе с тем, к недостаткам исследования крови с использованием счетчиков можно отнести то, что проводится подсчет не всех, а лишь отдельных форменных элементов крови. Кроме того, некоторые счетчики имеют существенный недостаток — наличие ртути в системах. Исследование крови путем количественной оценки гематологических показателей может проводиться с помощью современных автоматических систем анализа клеток (М. Г. Крейнес, В.Д. Жуковский. Автоматизированная обработка данных исследования клеток. Лабораторное дело, 12, 1980, с.707-715 — ближайший аналог). Клинический анализ клеточного материала сводится к идентификации и классификации клеток, основанных на физико-химических и структурных свойствах их клеток. Гематологические автоматы отличаются полной автоматизацией процесса исследования и высокой производительностью. Недостатками способа являются трудности в эксплуатации и сложность реализующего его устройства, высокая стоимость автоматов и жесткость программ. Гематологические автоматы рентабельны лишь в централизованных гематологических лабораториях, в лабораториях многопрофильных стационаров. Болезненные ощущения у пациента при взятии крови и возможность инфицирования ранки не позволяют часто проводить гематологические исследования. Поэтому динамика изменений гематологических показателей, как правило, прослеживается через относительно длительные промежутки времени. Известны работы по исследованию неспецифических адаптационных реакций организма, поддерживающих гомеостаз (Гаркави Л.Х., Квакина Е.Б., Уколова М. А. Закономерности развития качественно отличающихся общих неспецифических адаптационных реакций организма. Диплом на открытие 159 Комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий. Открытия в СССР. М., 1975, с. 56-61 и книга Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме. М.: Медицина, 1960, 254 с. ). При воздействии факторов внутренней и внешней среды формируются реакции: тренировка, активация, переактивация (открытие Гаркави Л.Х. и др.) и стресс-реакция (Г. Селье). Большую роль в развитии неспецифических реакций играет вегетативная нервная система. При указанных реакциях изменяется соотношение форменных элементов белой крови и их общее количество. Предлагаемый способ основан на формализации вегетативного гомеостаза по данным термометрии зон кожных покровов, отражающих изменение температуры от центральных отделов тела к периферическим. Изменение температуры связано с проявлением гомеостатической peгуляции организма. Задачей заявляемого изобретения является создание способа исследования крови неинвазивным путем с возможностью быстрого и частого съема информации. Упомянутая задача решена благодаря тому, что при способе исследования крови, включающем определение показателей ее форменных элементов, измеряют температуру кожных покровов тела в зонах, расположенных на протяжении от центральных отделов к периферическим и отражающих изменение температуры, связанное с проявлением гомеостатической регуляции организма, например: левой и правой рук пациента по средней линии на внутренней поверхности локтевого сгиба, внутренней поверхности запястья, в центре ладонной поверхности кисти, в центре ладонной поверхности концевой фаланги среднего пальца кисти руки, с одновременным измерением температуры воздуха в помещении, и по результатам измерений определяют показатели форменных элементов крови на основе формализованной оценки вегетативного гомеостаза организма с учетом возраста пациента по уравнению G= B₀+В₁А+В₂T_v+В₃Т₁+В₄Т₂+В₅Т₃+В₆Т₄+В₇Т₅+В₈Т₆+В₉Т₇+В₁₀Т₈+В₁₁(Т₁-Т₂)+В₁₂(Т₃-Т₄)+В₁₃(Т₅-Т₆)+В₁₄(Т₇-Т₈), где G — показатель форменного элемента крови; В₀, В₁, В₂… — коэффициенты уравнения; А — возраст пациента; Т_v — температура воздуха в помещении; Т₁, Т₂ — температура кожи в центре ладонной поверхности фаланги среднего пальца левой и правой рук; Т₃, Т₄ — температура кожи в центре ладонной поверхности кисти левой и правой рук; Т₅, Т₆ — температура кожи внутренней поверхности запястья левой и правой рук; Т₇, Т₈ — температура кожи на внутренней поверхности локтевого сгиба левой и правой рук. Показатели форменных элементов крови: содержание лейкоцитов, лимфоцитов и гранулоцитов определяют по уравнению с соответствующими значениями коэффициентов В₀, В₁, В₂… Содержание лейкоцитов в крови определяют по уравнению
Gleuc(10⁹/л)=40,57+0,03А-0,77Т_V-1,74Т₁+1,79T₂-0,93Т₄+0,59T₅-0,2Т₆-0,51Т₇+0,47Т₈+1,41(Т₁-Т₂)-0,77(Т₃-Т₄)+1,17(Т₅-Т₆)-0,29(Т₇-Т₈), содержание лимфоцитов в крови определяют по уравнению
Glimph%=-57,63-0,16А+0,914Т_v+1,65Т₁-2,85Т₂+2,53Т₃+6,35Т₄+2,12Т₅-7,01Т₆-0,65Т₇-0,289Т₈-1,84(Т₁-Т₂)+4,43(Т₅-Т₆)+4,53(Т₇-Т₈)
и содержание гранулоцитов в крови определяют по уравнению
Ggran%=149,55+0,18А-1,37Т_v-2,42Т₁+4,70Т₂-4,76Т₃-7,55Т₄-3,75Т₅+10,36Т₆+1,73Т₇+1,14(Т₁-Т₂)+9,53(Т₅-Т₆)-5,37(Т₇-Т₈), где А — возраст пациента;
Т_v — температура воздуха в помещении;
Т₁, Т₂ — температура кожи в центре ладонной поверхности фаланги среднего пальца левой и правой рук;
Т₃, Т₄ — температура кожи в центре ладонной поверхности кисти левой и правой рук;
Т₅, Т₆ — температура кожи внутренней поверхности запястья левой и правой рук;
Т₇, Т₈ — температура коки на внутренней поверхности локтевого сгиба левой и правой рук. Кроме указанных показателей форменных элементов можно дополнительно определить содержание моноцитов в крови по формуле
Gmon%=100%-G limph%-G gran%. Предлагаемый способ позволяет косвенно оценить изменения со стороны белой крови по реакции вегетативной нервной системы, проявляющейся в изменении температуры кожных покровов. Установлены уравнения регрессии, описывающие зависимости изменения показателей термометрии от гематологических показателей. Приведенный общий вид уравнения для гематологических показателей предполагает выбор четырех симметричных зон кожных покровов тела для измерения температуры: на левой ноге или руке и аналогичные четыре зоны на правом ноге или руке. В уравнениях используется абсолютное значение разницы температур кожных покровов в симметричных зонах. Уравнение учитывает также возраст пациента и температуру воздуха. Для удобства нахождения зон для измерения температуры от центральных отделов к периферическим были выбраны четыре зоны на руке с анатомически ясными ориентирами: по средней линии на внутренней поверхности локтевого сгиба, внутренней поверхности запястья, в центре ладонной поверхности кисти, в центре ладонной поверхности концевой фаланги среднего пальца кисти руки (см. чертеж). Одновременно измеряют температуру воздуха в помещении непосредственно около рук пациента. Уравнения для определения количественных показателей конкретного форменного элемента крови включают соответственные для определяемого показателя коэффициенты. Поскольку данные зависимости были установлены в результате анализа статистического материала, полученного с использованием автоматического анализатора крови, способ имеет приемлемую погрешность. Точность вероятностной количественной оценки гематологических показателей по предлагаемому способу уступает ближайшему аналогу, но сопоставима с точностью исследований крови, использующих микроскопический метод подсчета форменных элементов. Среднеквадратическое отклонение по предлагаемому способу составляет: для лейкоцитов = 0,7; для гранулоцитов =4; для лимфоцитов =3. Приведенные погрешности не учитывают погрешность, которая имеется при работе автоматического анализатора крови, относительно данных которого были получены зависимости для расчета показателей крови. Погрешность анализатора крови может составить 2-3%. Таким образом, способ позволяет получить количественную оценку гематологических показателей нетравматичным, неинвазивным путем с приемлемой погрешностью и дает возможность быстрого и частого съема информации. Способ исследования крови неинвазивным путем осуществляется следующим образом. При измерении температуры может быть использован серийно выпускаемый медицинский прибор ТПЭМ-1, ТУ 64-1-328-76 или любые другие отечественные и зарубежные аналоги. Для исключения дополнительного термического влияния на показания прибора пациент должен находиться от термонагревательного оборудования на расстоянии не ближе 2,0 м. В помещении не должно происходить движения воздушных масс (скорость ветра менее 0,1 м/с). Поэтому измерение показателей по прибору проводят при закрытых дверях и окнах, во время измерения никто не должен перемещаться по комнате. Рекомендуемая температура воздуха в помещении от +19^oС до +25^oС (213^oС). Время адаптации пациента, прибывшего с улицы, 20-30 мин. При проведении диагностики пациент оголяет руки до локтевого сгиба, но не передавливая ткани и не нарушая локального кровообращения в измеряемой зоне, и помещает обе руки на специальный термоизоляционный коврик, изготовленный из поролона, пенопласта, полиуретана. Измерение проводят касанием термоизмерительным щупом зон кожных покровов левой и правой рук по средней линии на внутренней поверхности локтевого сгиба, внутренней поверхности запястья, в центре ладонной поверхности кисти, в центре ладонной поверхности концевой фаланги среднего пальца кисти руки. Температуру в помещении измеряют непосредственно около рук пациента. После окончания измерений производят расчет по соответствующим приведенным уравнениям регрессии показателей форменных элементов крови: лейкоцитов, лимфоцитов, гранулоцитов. Содержание моноцитов в крови определяют по формуле:
G mon%=100%-G limph%-G gran%. ПРИМЕР. Обследуемый Ш., 45 лет. Т_v — температура воздуха — 22,8^oС;
Т₁, Т₂ — температура кожи в центре ладанной поверхности фаланги среднего пальца левой и правой рук — 33,8^oС и 33,3^oС;
Т₃, Т₄ — температура кожи в центре ладонной поверхности кисти левой и правой рук — 33,7^oС и 33,7^oС;
Т₅, Т₆ — температура кожи внутренней поверхности запястья левой и правой рук — 33,4^oС и 33,0^oС;
Т₇, Т₈ — температура кожи на внутренней поверхности локтевого сгиба левой и правой рук — 33,9^oС и 33,1^oС. В соответствии с приведенными уравнениями получаем показатели форменных элементов крови:
Лейкоциты — 6,1 (10⁹/л). С учетом погрешности способа (=0,7) результат преимущественно находится в диапазоне 5,4-6,8 (10⁹/л). Лимфоциты — 26%. С учетом погрешности способа (=3) результат преимущественно находится в диапазоне 23-29%. Гранулоциты — 62%. С учетом погрешности способа (=4) результат преимущественно находится в диапазоне 58-66%. Моноциты — 12%. Их количество может изменяться в зависимости от числа лимфоцитов и гранулоцитов. Предлагаемым способ исследования крови позволяет давать вероятностную количественную оценку гематологический показателям нетравматичным, неинвазивным путем с приемлемой погрешностью, с возможностью быстрого и частого съема информации. Неинвазивный способ исследования крови не сопровождается болезненными ощущениями и таким образом существенно упрощает диагностику пациентов детского возраста. Способ исключает возможность инфицирования ранки при гематологических обследованиях. Периодический неинвазивный контроль гематологических показателей, осуществляемый с требуемой частотой, позволяет своевременно корректировать диагностику и терапевтическое воздействие.

Формула изобретения

Способ количественного определения форменных элементов крови, отличающийся тем, что измеряют температуру кожных покровов тела левой и правой рук пациента по средней линии на внутренней поверхности локтевого сгиба, внутренней поверхности запястья, в центре ладонной поверхности кисти, в центре ладонной поверхности концевой фаланги среднего пальца кисти руки, с одновременным измерением температуры воздуха в помещении, и по результатам измерений определяют показатели форменных элементов крови на основе формализованной оценки вегетативного гомеостаза организма с учетом возраста пациента по уравнению G= В₀+В₁А+В₂Т_v+B₃T₁+B₄T₂+В₅Т₃+В₆Т₄+В₇Т₅+B₈T₆+B₉T₇+B₁₀T₈+B₁₁(T₁-T₂)+В₁₂(Т₃-Т₄)+В₁₃(Т₅-Т₆)+В₁₄(T₇-T₈),
где G — количественный показатель форменного элемента крови; В₀, B₁, В₂ . . . B₁₄ — коэффициенты уравнения для лейкоцитов, равные соответственно 40,57, 0,03, -0,77, -1,74, 1,79, -0,93, 0,59, -0,2, -0,51, 0,47, 1,41, -0,77, 1,17, -0,29, для лимфоцитов, равные соответственно -57,63, -0,16, 0,914, 1,65, -2,85, 2,53, 6,35, 2,12, -7,01, -0,65, -0,289, -1,84, 4,43, 4,53, для гранулоцитов, равные соответственно 149,55, 0,18, -1,37, -2,42, 4,70, -4,76, -7,55, -3,75, 10,36, 1,73, 1,14, 9,53, -5,37.

РИСУНКИ

Рисунок 1

Подсчет клеток крови — обзор

Отбор проб и физикальное обследование

У змей клинические признаки болезни часто неспецифичны (анорексия, летаргия), поэтому важно иметь возможность использовать различные диагностические методы и методы для прийти к диагнозу.

Физикальное обследование змеи всегда должно начинаться с наблюдения с расстояния без удержания животного. Особое внимание следует уделять использованию языка, дыханию и движению.Медицинский осмотр следует проводить тщательно и последовательно. Очки должны быть прозрачными, без признаков остаточного эпидермиса или подоспектакля. Ноздри должны быть чистыми, без выделений и оставшегося сарая. Полость рта следует обследовать с помощью мягкого гибкого зеркала. Слизистые оболочки должны быть бледно-розовыми, без густой вязкой слизи. Из голосовой щели не должно быть выделений, а язык должен быть проверен на функционирование. Кожные покровы следует внимательно осматривать на предмет наличия эктопаразитов, травматических повреждений и воспалений (дерматитов).Следует пальпировать позвоночник и ребра; позвоночник выделяется у змей с атрофией мышц. Эпаксиальные мышцы должны быть хорошо развиты. Пальпация должна выполняться для оценки целомической полости на наличие аномальных образований, а затем они должны быть дополнительно оценены с помощью соответствующих диагностических тестов. Допплерография может использоваться для определения частоты сердечных сокращений и ритма.

Образцы крови следует брать из сердца, яремных вен или брюшной копчиковой вены. Кардиоцентез — самый надежный метод венепункции у змей весом более 200 граммов (г).Размещение змей в положении лежа на спине облегчает визуализацию бьющегося сердца на расстоянии от одной четверти до одной трети расстояния от морды. Яремные вены расположены краниальнее сердца, где встречаются латеральная и вентральная чешуйки. Для проведения процедуры змею следует поместить в положение лежа на спине. Игла 22-го калибра диаметром от 1 до 1,5 дюймов, прикрепленная к шприцу объемом от 1 до 3 мл, должна быть вставлена ​​примерно в девять вентральных чешуек краниально от сердца на медиальной стороне ребер. Вентральная копчиковая вена расположена вентральнее от тел хвостовых позвонков.Для взятия пробы можно использовать иглу размером от 1 до 1,5 дюйма, от 22 до 25 на шприце объемом от 1 до 3 мл. Использование силы тяжести может быть очень полезным для сбора пробы; наклон змеи с опущенным хвостом на голову часто вызывает скопление крови в хвосте. У самцов змей следует проявлять осторожность, чтобы не допустить попадания гемипенов в основание хвоста.

Промывание желудочно-кишечного тракта и легочного лаважа может быть выполнено для сбора образцов у змей, которые срыгивают или проявляют признаки пневмонии. Для отбора пробы можно использовать красную резиновую трубку.Трубку следует предварительно измерить, чтобы обеспечить правильное введение в желудок или легкие или через клоаку в толстую кишку. Для промывания можно использовать физиологический раствор (от 5 до 10 мл / кг, от 3 до 5% веса тела в миллилитрах). Центрифугирование образцов часто используется для концентрирования организмов перед отправкой.

Компьютерная томография (КТ) продемонстрировала свою полезность в диагностике и мониторинге лечения пневмонии у змей, а в нескольких статьях описана нормальная анатомия КТ. ^3,24 Ультрасонография может использоваться для обзорной визуализации и в качестве руководства для сбора диагностических образцов. Тонкоигольная аспирация выявленных новообразований и участков с жидкостью под ультразвуковым контролем часто оказывается полезной. Ультрасонография хорошо подходит для наблюдения за репродуктивным циклом змей, и это может быть полезно для исчезающих видов. Эндоскопия, которая очень эффективна у змей из-за удлиненной формы и возможности использования, может использоваться для визуальной оценки органов и сбора диагностических образцов для посева, цитологии и гистопатологии.

Гематология

На количество клеток крови и биохимические показатели плазмы у змей влияют условия окружающей среды, репродуктивный статус, время года, местоположение и питание. ^{2,7,8,15,26,34} Стандартные образцы для гематологической биохимии и биохимии плазмы у змей немногочисленны и разнообразны, что затрудняет интерпретацию данного образца. Учитывая это, может быть наиболее эффективным и действенным установление внутренних контрольных диапазонов для групп или отдельных змей. Если это будет сделано в течение нескольких лет в разные сезоны и условия, значимость последующих обнаруженных изменений будет легче интерпретировать.

Объемы крови у рептилий колеблются от 5% до 8% от их общей массы тела. Из этого количества до 10% можно безопасно собрать для анализа без вреда для пациента. Образцы крови можно хранить в микротейнерах с ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) или литиевым гепарином. Общий анализ крови может проводиться на образцах, хранящихся в любом антикоагулянте. Недавно было показано, что смешивание образца крови с 22% альбумином (1 капля альбумина на 5 капель крови) снижает повреждение лейкоцитов (WBC) во время процесса мазка. ³⁰ Референсные диапазоны для избранных видов змей в различных условиях представлены в таблицах с 8-3 по 8-10.

Количество эритроцитов — eClinpath

Подсчет эритроцитов в рутинном клиническом анализе крови — это концентрация эритроцитов, выраженная в миллионах / мкл цельной крови. Хотя подсчет эритроцитов может выполняться вручную, например с помощью гемоцитометра, он требует времени и неточен. Однако мы используем их для подсчета эритроцитов в жидкостях с низким содержанием клеток, таких как спинномозговая жидкость (CSF).Автоматический подсчет чаще всего выполняется с использованием электронного импеданса или рассеяния лазерного света (проточная цитометрия). Последний метод используется гематологическим анализатором Корнельского университета, за исключением особых ситуаций (см. Ниже).

Метод измерения

Ручной счет

Гемоцитометр

Ручной подсчет клеток (эритроцитов, ядерных клеток или тромбоцитов) выполняется с помощью гемоцитометра. Это специально делается для жидкостей полости тела, которые являются слабоклеточными (<1000 клеток / мкл), потому что большинство автоматических анализаторов (импедансных или лазерных) нечувствительны к таким низким значениям.Это особенно характерно для спинномозговой жидкости, где количество эритроцитов должно быть низким (за исключением случаев кровоизлияния в жидкость или сопутствующего загрязнения крови во время сбора). Для спинномозговой жидкости жидкость подается непосредственно в счетную камеру, и обе стороны (все квадраты) подсчитываются (и усредняются) для получения количества эритроцитов в клетках / мкл (по сравнению с миллионами / мкл для крови или тысячами / мкл для других полостей тела. жидкости).

Счетчики импеданса

В этом методе используются изменения электрического сопротивления для подсчета клеток и оценки объема клеток (в зависимости от счетчика).Он используется для измерения эритроцитов в образцах крови, а также в образцах жидкостей из полостей тела (перитонеальных, плевральных). При использовании этого метода образец сначала разбавляется, а затем выполняется подсчет путем протягивания клеток через отверстие прибора. Каждая ячейка вызывает изменение электрического сопротивления при прохождении через апертуру, и этот импульс регистрируется и усиливается прибором. Чувствительность (или пороговые значения) можно отрегулировать так, чтобы тромбоциты (меньшие, чем эритроциты) не учитывались; Лейкоциты подсчитываются так же, как и эритроциты, но количество лейкоцитов (в тысячах / мкл) слишком низкое, чтобы вызвать значительную ошибку в подсчете эритроцитов (в миллионах / мкл).Амплитуда импульса пропорциональна размеру клетки, и в некоторых анализаторах этот метод используется для определения среднего корпускулярного объема (MCV), который затем представляет собой расчетное значение по сравнению с непосредственно измеренным. В качестве резервного анализатора мы используем счетчик импеданса Coulter Z2. Это выполняет подсчет ячеек и дает распечатку (если мы желаем) изменения объема подсчитанных ячеек (в виде кривой частотного распределения или гистограммы). Мы используем этот счетчик клеток, когда наш автоматический анализатор вышел из строя или неточно.Последний сценарий чаще всего встречается у верблюдов с железодефицитной анемией. Это связано с тем, что количество эритроцитов в микроцитах ниже порогового значения, установленного нашим автоматическим гематологическим анализатором, которое нельзя отрегулировать для компенсации меньшего размера эритроцитов. Таким образом, количество эритроцитов ошибочно низкое, что приводит к ложному увеличению MCV (которое все еще рассчитывается для этого вида). Тем не менее, мы можем отрегулировать (понизить) порог на счетчике импеданса, чтобы включить в него более мелкие эритроциты, таким образом получив более точное количество эритроцитов в этой настройке.Счетчик импеданса — это также то, что мы используем для определения количества ядросодержащих клеток и эритроцитов в биологических жидкостях, кроме крови, например суставные жидкости, перитонеальные жидкости, потому что эти жидкости не могут быть проанализированы с помощью нашего автоматического анализатора (эти образцы могут засорить инструмент).

Счетчики проточной цитометрии

Лазерный анализ RBC

С помощью гематологического анализатора, используемого в лаборатории клинической патологии Корнельского университета, эритроциты сферируются в разбавителе и затем проходят через детектор лазерного света.Клетки рассеивают свет (под разными углами), который определяется прибором (см. Изображение справа). Лазер определяет количество клеток (как события, проходящие через лазер), объем клеток (с использованием малоуглового рассеяния) и внутреннее содержимое, то есть концентрацию гемоглобина (с использованием рассеяния под большим углом), по рассеянию света.

Единицы измерения

Количество

эритроцитов выражается в миллионах / мкл крови (единицы СИ: x 10 ⁹ / л). Формула перевода в единицы СИ составляет 1: 1.

Примеры использования

Тип образца

Цельная кровь, жидкости полости тела

Антикоагулянт

EDTA является предпочтительным антикоагулянтом. Хотя цитрат можно использовать, объем цитрата в пробирке (10% от собираемого объема) соответственно разбавит количество эритроцитов (хотя корректирующая формула, учитывающая эффект разведения на 10%, не всегда точна). Также можно использовать гепаринизированную цельную кровь.

Стабильность

Количество эритроцитов оптимально стабильно в течение 24 часов при 4 ° C.При хранении эритроциты начинают лизироваться, что приводит к ложному снижению их количества. Это происходит быстро в образцах с липемией.

Помехи

• Липемия, желтуха: Не влияет на количество эритроцитов.
• Гемолиз: Артефактный ( in vitro) гемолиз ложно снижает количество эритроцитов. У животного с истинным внутрисосудистым гемолизом по сравнению с гемолизом in vitro количество эритроцитов будет низким, но это то, что доступно для переноса кислорода в животном.

Интерпретация теста

Увеличенные значения

• Артефакт: Утечка воды из трубки (например, неполное покрытие).
• Физиологические : У некоторых пород собак может быть более высокое количество эритроцитов, гематокрит и концентрация гемоглобина, например, таксы (Торрес и др., 2014), борзые (Шиф и др., 2007, Кампора и др., 2011) и уиппеты (Ухрикова и др., 2014). .
• Патофизиологический
  • Относительное изменение содержания воды в крови : Обезвоживание, сокращение селезенки, вторичное по отношению к адреналину (лошади).
  • Абсолютное увеличение массы эритроцитов или эритроцитоз : Стимулируется эритропоэтином (вторичный эритроцитоз) или не зависит от эритропоэтина (первичный эритроцитоз, например истинная полицитемия)

Уменьшенные значения

• Артефакт : Гемолиз эритроцитов в результате сбора или хранения образцов ( in vitro, гемолиз). В этом случае измеренный гемоглобин является наиболее точным показателем кислородной переносимости животного.
• Патофизиологические:
  • Относительное изменение воды в крови : Чрезмерное разбавление жидкостями, релаксация селезенки (анестетики, транквилизаторы).
  • Абсолютное уменьшение массы эритроцитов : Указывает на истинную анемию, вызванную кровоизлиянием, гемолизом (внутрисосудистым, внесосудистым) или снижением выработки. Могут работать несколько механизмов.

Идентификация и автоматический подсчет эритроцитов по изображениям мазков крови с использованием компьютерной системы

.Март 2018; 56 (3): 483-489.

DOI: 10.1007 / s11517-017-1708-9.

Epub 2017 17 августа.

Принадлежности

Расширять

Принадлежности

• ¹ Департамент ИКТ, Массачусетский технологический институт, Университет Манипала, Манипал, Индия[email protected].
• ² Департамент ИКТ, Массачусетский технологический институт, Университет Манипала, Манипал, Индия.

Элемент в буфере обмена

Васундхара Ачарья и др.

Med Biol Eng Comput.

Март 2018 г.

Показать детали

Показать варианты

Показать варианты

Формат

АннотацияPubMedPMID

.Март 2018; 56 (3): 483-489.

DOI: 10.1007 / s11517-017-1708-9.

Epub 2017 17 августа.

Принадлежности

• ¹ Департамент ИКТ, Массачусетский технологический институт, Университет Манипала, Манипал, Индия. [email protected].
• ² Департамент ИКТ, Массачусетский технологический институт, Университет Манипала, Манипал, Индия.

Элемент в буфере обмена

Полнотекстовые ссылки
Опции CiteDisplay

Показать варианты

Формат
АннотацияPubMedPMID

Абстрактный

Подсчет эритроцитов играет жизненно важную роль в определении общего состояния здоровья пациента.В больницах для подсчета клеток крови используют гемоцитометр. Обычный метод помещения мазка под микроскоп и ручного подсчета клеток приводит к ошибочным результатам, а медики-лаборанты испытывают стресс. Компьютерная система поможет получить точные результаты за меньшее время. В этой исследовательской работе предлагается метод обработки изображений для подсчета количества эритроцитов. Он предназначен для изучения и обработки изображения мазка крови, чтобы поддерживать подсчет эритроцитов и автоматически определять количество нормальных и аномальных клеток на изображении.Алгоритм K-medoids, устойчивый к внешнему шуму, используется для извлечения лейкоцитов из изображения. Гранулометрический анализ используется для отделения красных кровяных телец от белых кровяных телец. Полученные эритроциты подсчитывают с использованием алгоритма маркировки и кругового преобразования Хафа. Диапазон радиусов для алгоритма рисования круга оценивается путем вычисления расстояния пикселей от границы, что автоматизирует весь алгоритм. Сравнение выполняется между счетчиками, полученными с использованием алгоритма маркировки и кругового преобразования Хафа.Результаты работы показали, что круговое преобразование Хафа было более точным при подсчете эритроцитов, чем алгоритм маркировки, поскольку он успешно идентифицировал даже перекрывающиеся клетки. Работа также направлена ​​на сравнение результатов подсчета клеток, выполненного с использованием предложенной методологии и ручного подхода. Работа призвана устранить все недостатки предыдущей исследовательской работы. Исследовательская работа может быть расширена для извлечения различных характеристик текстуры и формы аномальных клеток, выявленных таким образом, чтобы такие заболевания, как анемия, воспаление и хронические заболевания, могли быть обнаружены как можно раньше.

Ключевые слова:

Мазок крови; Круговое преобразование Хафа; Гранулометрический анализ; Гемоцитометр.

Похожие статьи

• Автоматизация подсчета эритроцитов с использованием технологии микроскопической гиперспектральной визуализации.

  Ли Кью, Чжоу М., Лю Х., Ван И, Го Ф.
  Ли Кью и др.
  Appl Spectrosc. 2015 декабрь; 69 (12): 1372-80. DOI: 10.1366 / 14-07766.
  Appl Spectrosc. 2015 г.

  PMID: 26554882

• Автоматическое обнаружение и количественная оценка лейкоцитов и эритроцитов с использованием алгоритма обнаружения итеративного структурированного круга.

  Аломари Ю.М., Шейх Абдулла С.Н., Захаратул Азма Р., Омар К.Аломари Ю.М. и др.
  Comput Math Methods Med. 2014; 2014: 979302. DOI: 10.1155 / 2014/979302. Epub 2014 3 апреля.
  Comput Math Methods Med. 2014 г.

  PMID: 24803955
  Бесплатная статья PMC.

• Точная автоматическая система для оценки волос в приложениях для диагностики ухода за волосами.

  Ши Х.
  Ши Х.
  Skin Res Technol. 2015 ноя; 21 (4): 500-7. DOI: 10.1111 / srt.12220.Epub 2015 29 июня.
  Skin Res Technol. 2015 г.

  PMID: 26119754

• [Автоматические гематологические анализаторы и ложный подсчет. Часть 3. Гемоглобин, эритроциты, количество и индексы клеток, ретикулоциты].

  Годон А., Женевьева Ф., Марто-Тесье А., Зандеки М.
  Годон А. и др.
  Анн Биол Клин (Париж). 2012 март-апрель; 70 (2): 155-68. DOI: 10.1684 / abc.2012.0685.
  Анн Биол Клин (Париж).2012 г.

  PMID: 22484526

  Рассмотрение.
  Французкий язык.

• Анализ цифровых изображений клеток крови.

  Да Коста Л.
  Да Коста Л.
  Clin Lab Med. 2015 Март; 35 (1): 105-22. DOI: 10.1016 / j.cll.2014.10.005. Epub 2014 30 октября.
  Clin Lab Med. 2015 г.

  PMID: 25676375

  Рассмотрение.

Процитировано

4
артикулов

• Высокопроизводительное обнаружение клеток без меток и подсчет по дифракционным картинам с помощью глубоких полностью сверточных нейронных сетей.

  Йи Ф, Пак С, Луна I.
  Йи Ф и др.
  J Biomed Opt. 2021 Март; 26 (3): 036001. DOI: 10.1117 / 1.JBO.26.3.036001.
  J Biomed Opt. 2021 г.

  PMID: 33686845
  Бесплатная статья PMC.

• Подход машинного обучения автоматической идентификации и подсчета клеток крови.

  Алам ММ, Ислам МТ.
  Алам М.М. и др.
  Healthc Technol Lett. 17 июля 2019; 6 (4): 103-108.DOI: 10.1049 / HTL.2018.5098. eCollection 2019 августа.
  Healthc Technol Lett. 2019.

  PMID: 31531224
  Бесплатная статья PMC.

• Неинвазивный метод оценки эритроцитов в крови.

  Quiñonez Y, Almeraya S, Almeraya S, Reyna J, Mejía J.
  Quiñonez Y, et al.
  J Med Syst. 10 сентября 2019 г .; 43 (10): 316. DOI: 10.1007 / s10916-019-1447-6.
  J Med Syst. 2019.

  PMID: 31506773

• Метод обнаружения микрокапель для измерения концентрации наночастиц, меченных щелочной фосфатазой, в флуоресцентной микроскопии.

  Ли Р, Ван И, Сюй Х, Фэй Б., Цинь Б.
  Ли Р. и др.
  Датчики (Базель). 2017 21 ноября; 17 (11): 2685. DOI: 10,3390 / s17112685.
  Датчики (Базель). 2017 г.

  PMID: 29160812
  Бесплатная статья PMC.

использованная литература

1. 1. Comput Math Methods Med. 2014; 2014: 979302

      —

      PubMed

Условия MeSH

• Подсчет эритроцитов / методы *
• Обработка изображений с помощью компьютера *

LinkOut — дополнительные ресурсы

• Источники полных текстов

• Другие источники литературы

• Медицинские

Подсчет лейкоцитов по мазку крови с помощью фурье-птихографической микроскопии

Abstract

Количество лейкоцитов (лейкоцитов) является ценным показателем для помощи в диагностике или прогнозировании различных заболеваний, таких как ишемическая болезнь сердца, диабет 2 типа или инфекции.Подсчет лейкоцитов можно производить вручную или автоматически. Автоматические методы позволяют подсчитывать большое количество клеток, чтобы дать статистически более точное определение количества лейкоцитов в образце, но специализированное оборудование обычно стоит дорого. Ручные методы недороги, поскольку они включают только обычную установку светового микроскопа. Однако это более трудоемко и подвержено ошибкам, потому что небольшое поле зрения (FOV) микроскопа требует механического сканирования образца для подсчета адекватного количества лейкоцитов.Здесь мы исследуем использование фурье-психологической микроскопии (FPM), чтобы обойти эти проблемы ручных методов. С объективом 2x FPM может обеспечить поле обзора 120 мм ² с улучшенным разрешением, сравнимым с разрешением объектива 20x, что подходит для недифференциального подсчета лейкоцитов только в одном поле зрения. Специалист смог подсчитать лейкоциты на изображениях FPM со 100% точностью по сравнению с подсчетом, определенным на изображениях с обычного микроскопа. Также был разработан алгоритм автоматического подсчета лейкоцитов по полученным изображениям FPM с точностью 95%, что открыло путь для экономичной установки подсчета лейкоцитов с преимуществами как автоматического, так и ручного методов подсчета.

Образец цитирования: Чанг Дж, Оу Х, Кулкарни Р.П., Ян С. (2015) Подсчет лейкоцитов из мазка крови с использованием фурье-птихографической микроскопии. PLoS ONE 10 (7):
e0133489.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0133489

Редактор: Хуан Карлос дель Аламо, Калифорнийский университет в Сан-Диего, США

Поступило: 2 ноября 2014 г .; Одобрена: 28 июня 2015 г .; Опубликован: 17 июля 2015 г.

Авторские права: © 2015 Chung et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в пределах бумага.

Финансирование: Эта работа была поддержана грантом NIH 1DP2OD007307; Программа Caltech Innovation Initiative (CI2) 2014. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Лейкоциты являются эффекторными клетками иммунной системы и циркулируют по кровотоку и лимфатической системе. Инфекция или физическая травма приводят к воспалительной реакции, которая вызывает повышенное производство лейкоцитов для устранения травмы или инфекции. Благодаря этой связи между лейкоцитами и воспалительной реакцией, количество лейкоцитов является ценным показателем для диагностики и прогноза некоторых заболеваний.Несколько исследователей обнаружили, что высокое количество лейкоцитов тесно связано с риском ишемической болезни сердца [1–6], что дополнительно прояснило связь между сердечно-сосудистыми заболеваниями и воспалением [4]. Было обнаружено, что курение вызывает увеличение количества лейкоцитов, но появляется все больше доказательств того, что высокое количество лейкоцитов является предиктором ишемической болезни сердца, независимо от того, курит ли человек [5]. Мало того, что высокое количество лейкоцитов предсказывает развитие макро- и микрососудистых осложнений у пациентов с диабетом 2 типа [7], но и будущее развитие диабета 2 типа также связано с высоким количеством лейкоцитов [8].В педиатрии было обнаружено, что высокое количество лейкоцитов является индикатором бактериемической инфекции у детей [9]. Таким образом, подсчет лейкоцитов может быть ценным инструментом для прогноза заболеваний.

В самом широком смысле существует два способа подсчета лейкоцитов: автоматический и ручной метод. Проточная цитометрия — это распространенный автоматический метод, который работает путем передачи лейкоцитов в один файл через электронные детекторы [10]. Затем детекторы количественно определяют оптические и электрические свойства потока жидкости для дифференциального подсчета пяти типов лейкоцитов.Этот метод удобен для анализа больших объемов образцов крови наиболее эффективным способом по времени и становится более экономичным с развитием микрофлюидической проточной цитометрии [11]. Однако, поскольку он не захватывает никаких изображений анализируемых клеток, дальнейшее исследование морфологии и вариаций клеток практически невозможно. Более того, он не может идентифицировать клетки с аномальной физиологией, потому что его метод идентификации зависит от принятых диапазонов сигнатурных характеристик клеток в крови.Цитометрия изображений позволяет обойти эти проблемы, также получая изображения текущих аналитов в дополнение к проточной цитометрии [12]. Хотя он очень мощный, он не подходит для исследовательских лабораторий или клиник с ограниченными ресурсами из-за своей высокой цены.

Ручной метод подсчета — это альтернативный способ подсчета лейкоцитов, но с гораздо меньшей пропускной способностью. Ручной метод подсчета лейкоцитов может быть выполнен либо на образце мазка крови, либо на гемоцитометре с использованием стандартной системы микроскопа.Образец можно просматривать непосредственно через окуляр микроскопа или записывать в файлы изображений. Для образца мазка крови области монослоя механически сканируются для подсчета общего количества лейкоцитов [13], в то время как для гемоцитометра область с сеткой сканируется для целей подсчета [14]. Хотя ручной метод более трудоемок и требует много времени, он дает ученым возможность использовать широкий спектр объективов, доступных для стандартного микроскопа, для тщательного визуального анализа образцов.Высококачественные, но недорогие устройства для визуализации современных технологий позволяют использовать это приложение в условиях ограниченных ресурсов [15].

Одной из технических проблем, связанных с методом ручного подсчета, является ошибка, связанная с механическим сканированием предметного стекла. Характеристики обычного микроскопа ограничены произведением его ширины полосы пропускания, а это означает, что существует компромисс между разрешением изображения и полем зрения микроскопа. Как правило, для просмотра и недифференциального подсчета лейкоцитов под обычным микроскопом нужен объектив с увеличением не менее 10x (0.25NA) [16]. Для дифференциального подсчета лейкоцитов используется масляно-иммерсионный объектив со 100-кратным увеличением (1,4NA). Однако при таком большом увеличении поле обзора очень мало, что требует механического сканирования предметного стекла во время процесса подсчета. Это неблагоприятно, потому что движение сканирования должно быть точно выровнено и контролироваться, чтобы избежать любого перекрытия областей сканирования. Еще одним недостатком использования стандартной микроскопии для ручного подсчета является физическая нагрузка на врачей, связанная с ручным сканированием предметного стекла и прямым наблюдением через микроскоп.Обычное выполнение анализа образцов под стандартным микроскопом может быть вредным для клиницистов [17].

Здесь мы исследуем использование фурье-психологической микроскопии (FPM) в качестве решения, которое может исправить проблемы, присущие ручному методу подсчета лейкоцитов. FPM — это новый метод визуализации с помощью микроскопа, впервые описанный в [18], который может с помощью вычислений сшить вместе серию изображений с низким разрешением и широким полем обзора в области Фурье для получения изображения с более высоким разрешением и широким полем обзора.С помощью FPM можно получить изображение большой площади монослоя мазка крови без каких-либо механических движений, связанных со сканированием. FPM требует минимальных модификаций стандартной установки микроскопии, включая только светодиодную матрицу и камеру CCD. Мы продемонстрировали его жизнеспособность для использования при подсчете лейкоцитов, попросив специалиста по гемоцитометрии сравнить его характеристики с характеристиками обычного микроскопа с 20-кратным увеличением, что является основной истиной в нашем исследовании. Только недифференциальный подсчет лейкоцитов проводился с помощью настройки, описанной в следующих разделах.Отмечен потенциал FPM для дифференциального подсчета лейкоцитов. Наконец, обсуждается эффективность автоматического алгоритма подсчета лейкоцитов на изображениях FPM.

Принципы FPM

FPM — это вычислительный метод, который может эффективно увеличить числовую апертуру микроскопа для получения изображения образца с высоким разрешением и сложной амплитудой с преимуществом широкого поля зрения, связанного с объективом с низкой числовой апертурой. В технологии используются два ключевых элемента: (1) тот факт, что освещение образца наклонной плоской волной в установке микроскопа приводит к боковому смещению Фурье-спектра образца в задней фокальной плоскости линзы объектива; и (2) способность восстанавливать информацию о фазе образца из его изображения интенсивности с помощью алгоритма восстановления фазы [18].Установка FPM, как показано на рис. 1, включает в себя обычную установку микроскопа, в которой источник света заменен светодиодной матрицей. Мы предполагаем, что наши светодиоды квазимонохроматические, более подробный анализ можно найти в [19]. Световое поле, излучаемое одним светодиодом, можно представить как плоскую волну в небольшой области на плоскости образца, поскольку большое расстояние (~ 8 см) между светодиодом и образцом увеличивает пространственную когерентность светодиода. Плоская волна имеет компоненты вектора (kx, ky), связанные с наклонным освещением светодиода на образце.Загорание одного светодиода приводит к смещению спектра Фурье образца на (kx, ky) в задней фокальной плоскости линзы объектива, а конечная числовая апертура (NA) линзы объектива действует как фильтр нижних частот, который пропускает только небольшая подобласть в центре смещенного спектра Фурье. Низкочастотный компонент Фурье далее распространяется на плоскость изображения и фиксируется камерой. Светодиоды загораются последовательно, так что захваченные изображения содержат частично перекрывающиеся подобласти Фурье, которые вместе охватывают весь спектр Фурье образца.Захваченные изображения разбиваются на более мелкие плитки пространственно когерентных областей, размер которых определяется теоремой Ван Циттерта-Цернике: L = 0,61 λz / a [20], где λ — длина волны светодиода, z — это расстояние от светодиода до образца, а a — радиус активной области светодиода. При размере светодиода 200 мкм x 200 мкм, расстоянии между светодиодной матрицей и образцом 8 см и длине волны 630 нм длина когерентности составляет ~ 307 мкм.Также в пределах этого измерения предполагается, что пространственно изменяющиеся аберрации постоянны. Мы реконструируем каждую плитку отдельно, так что пространственно изменяющиеся аберрации в поле зрения микроскопа могут быть устранены с помощью алгоритма реконструкции, описанного ниже.

Рис. 1. Настройка FPM.

а) Схема установки ФПМ. Он состоит из обычного микроскопа, включающего объектив, линзу трубки, камеру и светодиодную матрицу, заменяющую конденсор для освещения образца. б) Фурье-спектр образца в задней фокальной плоскости объектива.Круглая подобласть соответствует размеру апертуры объектива. Он смещается при изменении угла освещения. c) Изменение угла освещения обеспечивается включением светодиодов в разных местах на матрице.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0133489.g001

Для каждого тайла в поле обзора можно восстановить его расширенный комплексный спектр Фурье из изображений с переменной освещенностью, применив алгоритм восстановления фазы, описанный в [21], названный алгоритмом восстановления функции встроенного зрачка (EPRY).Алгоритм итеративно решает расширенный спектр Фурье, используя изображения интенсивности в качестве ограничения в пространственной области и конечную числовую апертуру объектива в качестве ограничения смещения нижних частот в области Фурье. В этом процессе алгоритм может не только генерировать комплексное амплитудное изображение образца с высоким разрешением, но также отделить функцию зрачка и комплексную амплитудную функцию образца от изображения. Функция зрачка включает аберрации микроскопа, связанные с его системой линз, и расфокусировку, вызванную смещением образца в фокальной плоскости, оба из которых могут зависеть от расположения плитки в поле зрения.Следовательно, комплексная амплитудная функция образца представляет собой комплексное изображение образца с коррекцией аберраций и ограничением дифракции. Сшивая плитки вместе в пространственной области, мы получаем изображение интенсивности образца и информацию о фазе, отделенную от аберраций по всему полю поля зрения.

Материалы и методы

Заявление об этике

Исследование было одобрено Комитетом Калифорнийского технологического института по защите людей (IRB) Калифорнийского технологического института (IRB No.14–0464). Все образцы крови, использованные в этом исследовательском проекте, были получены после получения подписанной формы согласия от добровольцев. Добровольцы не идентифицированы с образцами в этом проекте.

Подготовка мазка крови

Мазок крови, окрашенный по Райту-Гимзе, был подготовлен для тестирования производительности FPM по сравнению с обычной микроскопией. 2,0 мг ЭДТА / мл добавляли к образцу цельной крови и 1 мкл смеси равномерно растирали по покровному стеклу с использованием другого покровного стекла под углом размытия 30 градусов.После того, как образец сушили на воздухе в течение 5 минут, для фиксации и окрашивания образца использовали набор для окрашивания HEMA 3 Wright-Giemsa от Fisher Diagnostics. Набор включал погружение образца на 1 секунду последовательно в три сосуда Коплина, первый из которых содержал фиксирующий раствор HEMA 3 на основе метанола, второй — раствор I HEMA 3, а последний — раствор II HEMA 3. Шаги погружения повторяли 5 раз для каждого образца. Затем образец промывали деионизированной водой и сушили на воздухе еще 5 минут.

Получение изображений с использованием FPM и обычного метода микроскопии

Микроскоп Olympus BX 41 с объективом 20x (UPlanFL N, 0,5 NA, Olympus) использовался для обычного метода подсчета лейкоцитов. С помощью цветной CMOS-камеры (MT9P031, размер пикселя 2,2 мкм) были получены изображения 20 различных областей на образце мазка крови. Для метода FPM использовался тот же микроскоп с объективом 2x (PlanApo N, 0,08 NA, Olympus) с красными светодиодами (SMD 3528, центральная длина волны 632 нм, ширина полосы ~ 10 нм после полосового фильтра) в качестве источника света, и те же 20 области были извлечены из его изображения с широким полем обзора, полученного встроенной камерой CCD (Kodak KAI-29050, 5.Размер пикселя 5 мм). В процессе захвата последовательно загорались 15 x 15 светодиодов, обеспечивая эффективную числовую апертуру ~ 0,5 для системы FPM. Весь процесс съемки занял ~ 3 минуты (ограничен яркостью светодиодов и частотой кадров камеры), а реконструкция ~ 10 минут (ограничена скоростью обработки компьютера). Мы использовали монохроматические изображения для этого исследования, потому что для идентификации лейкоцитов в образце требовалась только информация о контрасте.

Слепой подсчет лейкоцитов

Изображения 20 областей мазка крови, полученные с помощью стандартной системы 20-кратного микроскопа, были проанализированы обученным специалистом.Количество лейкоцитов для каждого изображения было сведено в таблицу, что позволило установить базовое значение для тестирования производительности FPM. Чтобы гарантировать, что исследование было слепым, специалисту было предоставлено 2-недельное временное окно, прежде чем он проанализировал соответствующие 20 областей, полученных с помощью FPM. Более того, порядок изображений FPM был рандомизирован. Количество лейкоцитов для изображений FPM было сведено в таблицу, и 20 пар изображений FPM и обычных микроскопических изображений были сопоставлены для сравнения количества лейкоцитов в соответствующих системах в каждой области.

Результаты и обсуждение

На рис. 2 показано сравнение изображений нескольких регионов, полученных двумя способами.Поле зрения, обеспечиваемое FPM, соответствует примерно 120 мм ² в плоскости образца, с эффективной числовой апертурой 0,5 и разрешением по полному шагу 1560 нм, что дает изображение размером ~ 1 гигапиксель. Поле зрения значительно больше, чем может обеспечить микроскоп с 20-кратным увеличением и составляет около 1,2 мм ² . Сравнивая области с окном из FPM и 20-кратной стандартной микроскопии, мы можем ясно видеть ядра лейкоцитов на обоих изображениях. Фактически, ядра в основном используются для отличия лейкоцитов от мазка крови, потому что лейкоциты — единственные клетки в крови с ядром.

Рис. 2. Полное изображение в поле зрения слайда мазка крови с САД ~ 0,9 гигапикселя, полученным с помощью FPM с использованием объектива с числовой апертурой 2x 0,08 (в центре) и его увеличенных частей (вокруг).

Красные подобласти извлекаются непосредственно из полного изображения FOV, а соответствующие синие подобласти получаются объективом 20x 0,5 NA. Оба они предлагают достаточно деталей, по которым мы можем различить формы и размеры лейкоцитов и их ядер. Синий кружок в середине центрального изображения представляет относительный размер поля обзора, достигаемого объективом с 20-кратным увеличением, по сравнению с размером поля зрения FPM.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0133489.g002

В слепом сравнительном исследовании специалист смог подсчитать одинаковое количество лейкоцитов в каждой области как для обычных микроскопических изображений, так и для изображений FPM. Всего для обоих методов было подсчитано 38 лейкоцитов, и ложноположительных или ложноотрицательных показаний FPM не было. Результат представлен в таблице 1. Это указывает на то, что изображения, полученные с помощью FPM, имеют адекватное, если не превышающее, качество для процедуры подсчета лейкоцитов и могут поставить точный диагноз.Таким образом, мы подтверждаем, что FPM является подходящей заменой стандартной микроскопии, которую гематологи могут использовать для подсчета лейкоцитов.

Ключевым преимуществом FPM, как показано на рис. 2, является его способность разрешать изображение с высоким разрешением и широким полем обзора. В этой установке мы смогли получить изображение мазка крови с полем обзора, обеспечиваемым объективом 2x 0,08 NA, с разрешением, сравнимым с объективом 20x 0,5 NA. Широкий угол обзора очень удобен для подсчета лейкоцитов с использованием микроскопа, поскольку он исключает необходимость в механическом сканировании образца мазка крови, необходимом специалисту для подсчета количества лейкоцитов для анализа.Ручное механическое сканирование может привести к ошибкам в процессе подсчета из-за непреднамеренного перекрытия между областями сканирования вместо изображения идеально смежных областей. Однако с помощью FPM такие ошибки значительно уменьшаются за счет уменьшения количества требуемых сканированных областей или даже устраняются, когда в одном поле зрения может быть подсчитано достаточное количество лейкоцитов. Учитывая, что для достаточной оценки общего количества лейкоцитов в крови обычно требуется около десяти 40-кратных полей зрения микроскопа, общее требуемое поле зрения составляет ~ 5 мм ² [22].FPM полностью удовлетворяет этому требованию с его объективом 2x с полем обзора 120 мм ² . Для сравнения: объектив 20x 0,5 NA имеет поле обзора 1,2 мм ² , что требует бокового сканирования предметного стекла.

Стоит сравнить метод FPM с другими методами визуализации всего слайда (WSI), которые включают точно выровненные механические компоненты для получения изображения с высоким разрешением и широким полем обзора. У FPM есть несколько преимуществ перед этими методами. Во-первых, стабильность FPM из-за отсутствия каких-либо движущихся частей.Отсутствие движущихся частей означает меньший износ, поэтому целостность системы может сохраняться в течение более длительного периода времени. Во-вторых, и, возможно, самое большое преимущество FPM, является его устойчивость к возможным ошибкам, возникающим в результате неправильной настройки. В стандартном методе WSI большинство проблем с качеством изображения связаны с фокусировкой [17]. Расфокусированные изображения влекут за собой повторение нового набора изображений после правильной фокусировки объектива. В случае с FPM в интенсивном повторении нет необходимости из-за его способности к перефокусировке [18].Поскольку изображение, которое восстанавливает FPM, является сложным изображением, содержащим как его амплитуду, так и фазу, его можно распространять цифровым способом по оси z до его правильной фокальной плоскости, обеспечивая эффективную глубину фокуса 300 мкм [18]. В результате FPM может отображать образец с неровным профилем поверхности, так что вся область находится в фокусе через отображаемое поле зрения. Образцы мазков крови с пространственно различающимися уровнями толщины или даже наклоненные образцы из-за несовпадения могут быть успешно визуализированы с помощью FPM. В-третьих, FPM намного дешевле, чем WSI.WSI обычно включает в себя прецизионный механический столик, который может стоить 100 000 ~ 150 000 долларов США за штуку [17], тогда как FPM требует только добавления недорогой светодиодной матрицы (50 долларов США) к существующей традиционной системе микроскопа.

Присутствие ядер в лейкоцитах определяется по изображениям FPM. Кроме того, можно наблюдать морфологию ядер. Большинство лейкоцитов на рис. 3 демонстрируют многодольчатую структуру ядра, которая является индикатором нейтрофилов, эозинофилов или базофилов, а один лейкоцит имеет эксцентрическое ядро, что характерно для лимфоцитов.В этом исследовании дифференциальный подсчет лейкоцитов не проводился. Однако изображения FPM с высоким разрешением предполагают, что использование объектива с более высокой числовой апертурой и более широких углов освещения светодиодами в установке FPM для дальнейшего увеличения эффективной числовой апертуры до ~ 1,4 может позволить дифференциальный подсчет лейкоцитов в нашей системе. Для читателей, заинтересованных в реализации системы FPM с высоким NA, пожалуйста, обратитесь к [23]. Кроме того, получение полноцветного изображения мазка крови может помочь нашей системе в выполнении дифференциального подсчета, поскольку цвет клеток помогает различать разные типы лейкоцитов.

Рис. 3. Несколько лейкоцитов из областей, отображаемых с помощью обычного микроскопа с 20-кратным увеличением (вверху) и FPM (внизу).

Среди этих клеток можно наблюдать различную морфологию. Самая левая клетка имеет эксцентрическое однодолевое ядро, что позволяет предположить, что это лимфоцит, в то время как другие клетки имеют многодольчатую структуру ядра, что позволяет предположить, что они являются эозинофилами, базофилами или нейтрофилами.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0133489.g003

Четкое морфологическое различие между лейкоцитами и эритроцитами на изображениях мазков побудило нас применить алгоритм для автоматизации процесса подсчета лейкоцитов.Поскольку лейкоциты имеют заметно высокий контраст, обусловленный наличием ядра, можно разработать алгоритм для выделения высококонтрастных областей и использования их в качестве маркеров для идентификации лейкоцитов на изображениях мазков крови. Используя MATLAB, мы количественно оценили разницу в контрасте и размере лейкоцитов по сравнению с эритроцитами. Обладая этой информацией, алгоритм смог идентифицировать лейкоциты с точностью 95% по 20 полученным образцам изображений, как показано в таблице 1. Пример идентификации лейкоцитов с помощью алгоритма показан на рисунке 4.Ошибки в подсчете были обнаружены на изображениях, где (1) либо контраст ядер лейкоцитов был невысоким по сравнению с фоновыми эритроцитами, либо (2) эритроциты были скоплены в одной области, создавая контраст, такой же высокий, как у ядер лейкоцитов. в их близости. Тем не менее, с точностью подсчета 95% алгоритм может помочь врачам вручную подсчитывать большое количество образцов крови. Ожидается, что включение в программу большего количества параметров, помимо контраста и размера лейкоцитов, приведет к более высокой точности.

Рис. 4. Определение лейкоцитов с помощью алгоритма автоматического подсчета.

Алгоритм анализирует часть изображения образца, полученного с помощью FPM (слева), и выводит изображение с красными отметками на обнаруженных лейкоцитах.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0133489.g004

Заключение

Мы продемонстрировали, что FPM может быть полезен для подсчета лейкоцитов благодаря большому FOV и высокому разрешению, которые требуют только добавления недорогой светодиодной матрицы к стандартной установке микроскопа.Это значительно сокращает или даже исключает объем сканирования образца крови, необходимый для ручного подсчета лейкоцитов. Низкая стоимость FPM может позволить более широкому сообществу получать широкопольные изображения с высоким разрешением, сопоставимые с изображениями WSI, и выполнять процедуры подсчета лейкоцитов более эргономично. Цифровое получение изображений с помощью FPM также делает его хорошим кандидатом для приложений телемедицины. Дальнейшее улучшение разрешения изображения также позволит проводить дифференциальный подсчет лейкоцитов в системе FPM.Применение большего количества параметров для различения лейкоцитов в образце крови в алгоритме автоматического подсчета приведет к более высокой точности.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: JC XO CY. Проведены эксперименты: JC XO RPK. Проанализированы данные: JC RPK. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: XO. Написал статью: JC.

Ссылки

1. 1.
   Ярнелл Дж. У., Бейкер И. А., Свитнам П. М., Бейнтон Д., О’Брайен Дж. Р., Уайтхед П. Дж. И др.Фибриноген, вязкость и количество лейкоцитов являются основными факторами риска ишемической болезни сердца. Совместные исследования болезней сердца Caerphilly и Speedwell. Тираж. 1991; 83 (3): 836–44. pmid: 1999035
2. 2.
   Каннел В.Б., Андерсон К., Уилсон П.Ф. Количество лейкоцитов и сердечно-сосудистые заболевания: выводы из исследования Фреймингема. ДЖАМА. 1992. 267 (9): 1253–6. pmid: 1538564
3. 3.
   Гримм Р. Х. младший, Нитон Дж. Д., Людвиг В. Прогностическое значение количества лейкоцитов для коронарной, рака и общей смертности.ДЖАМА. 1985. 254 (14): 1932-7. pmid: 4046122
4. 4.
   Бэррон Х.В., Кэннон С.П., Мерфи С.А., Браунвальд Э., Гибсон СМ. Связь между количеством лейкоцитов, эпикардиальным кровотоком, перфузией миокарда и клиническими исходами при остром инфаркте миокарда: тромболизис при инфаркте миокарда 10 Substudy. Тираж. 2000. 102 (19): 2329–34. pmid: 11067784
5. 5.
   Браун Д. В., Джайлс У. С., Крофт Дж. Б.. Количество лейкоцитов: независимый предиктор смертности от ишемической болезни сердца среди национальной когорты.Журнал клинической эпидемиологии. 2001. 54 (3): 316–22. pmid: 11223329
6. 6.
   Twig G, Afek A, Shamiss A, Derazne E, Tzur D, Gordon B и др. Количество лейкоцитов и риск ишемической болезни сердца у молодых взрослых. PLoS ONE. 2012; 7 (10): e47183. pmid: 23077568
7. 7.
   Тонг ПК, Ли К-Ф, Со В-И, Нг М. Х., Чан В-Б, Ло МК и др. Количество лейкоцитов связано с макро- и микрососудистыми осложнениями у китайских пациентов с диабетом 2 типа. Уход за диабетом.2004. 27 (1): 216–22. pmid: 14693992
8. 8.
   Возарова Б., Вейер С., Линдси Р.С., Пратли Р.Э., Богардус К., Татаранни П.А. Высокое количество лейкоцитов связано с ухудшением чувствительности к инсулину и прогнозирует развитие диабета 2 типа. Диабет. 2002. 51 (2): 455–61. pmid: 11812755
9. 9.
   Яффе Д.М., Флейшер Г.Р. Температура и количество лейкоцитов как индикаторы бактериемии. Педиатрия. 1991. 87 (5): 670–4. pmid: 2020512
10. 10.
    Shapiro HM.Практическая проточная цитометрия. Нью-Джерси: Вили-Лисс; 2003.
11. 11.
    Huh D, Gu W, Kamotani Y, Grotberg JB, Takayama S. Microfluidics для проточного цитометрического анализа клеток и частиц. Физиологические измерения. 2005; 26 (3): R73. pmid: 15798290
12. 12.
    Зуба-Сурма EK, Kucia M, Abdel-Latif A, Lillard JW, Ratajczak MZ. Система ImageStream: ключевой шаг к новой эре в области обработки изображений. Folia Histochemica et Cytobiologica. 2007. 45 (4): 279–90. pmid: 18165167
13. 13.Кессель Р.Г. Основы медицинской гистологии: биология клеток, тканей и органов. Нью-Йорк: издательство Оксфордского университета; 1998.
14. 14.
    Turgeon ML. Клиническая гематология: теория и процедуры. Филадельфия: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс; 2005. 551 с.
15. 15.
    Бреслауэр Д. Н., Маамари Р. Н., Свитц Н. А., Лам В. А., Флетчер Д. А.. Клиническая микроскопия с помощью мобильного телефона для приложений глобального здравоохранения. PLoS ONE. 2009; 4 (7): e6320. pmid: 19623251
16. 16.
    Беллвуд Б., Андрасик-Каттон М.Справочник ветеринарного техника по лабораторным процедурам. Эймс: Вили-Блэквелл; 2013.
17. 17.
    Газнави Ф., Эванс А., Мадабхуши А., Фельдман М. Цифровая визуализация в патологии: визуализация всего слайда и не только. Ежегодный обзор патологии: механизмы заболевания. 2013; 8: 331–59.
18. 18.
    Zheng G, Horstmeyer R, Yang C. Широкопольная фурье-психологическая микроскопия с высоким разрешением. Нат Фотон. 2013. 7 (9): 739–45.
19. 19.
    Хорстмейер Р., Ян С. Модель фазового пространства фурье-психологической микроскопии.Opt Express. 2014; 22 (1): 338–58. pmid: 24514995
20. 20.
    Мандель Л., Вольф Э. Оптическая когерентность и квантовая оптика. Нью-Йорк: издательство Кембриджского университета; 1995.
21. 21.
    Ou X, Zheng G, Yang C. Восстановление функции встроенного зрачка для фурье-психологической микроскопии. Opt Express. 2014. 22 (5): 4960–72. pmid: 24663835
22. 22.
    Фрицма Г.А., Дойг К., Родак Б.Ф. Гематология: клинические принципы и применение. Сент-Луис: Elsevier Health Sciences; 2008 г.
23. 23.
    Оу Х, Хорстмейер Р., Чжэн Дж., Ян К. Фурье-подптихография с высокой числовой апертурой: принцип, реализация и характеристика. Opt Express. 2015; 23 (3): 3472–91. pmid: 25836203

Полный анализ крови (CBC) — понимание теста и ваших результатов

Источники, использованные в текущем обзоре

(21 мая 2014 г.) Lee H, et al. Повышенная ширина распределения эритроцитов как простой прогностический фактор у пациентов с симптоматической множественной миеломой. Биомед Исследования Интернэшнл . Доступно на сайте https://www.hindawi.com/journals/bmri/2014/145619/cta/. По состоянию на январь 2020 г.

(23 декабря 2014 г.) Salvagno G, et al. Ширина распределения эритроцитов: простой параметр для множества клинических применений. Критические обзоры в лаборатории Science 52 (2): 86-105. Доступно в Интернете по адресу http://www.tandfonline.com/doi/full/10.3109/10408363.2014.992064. По состоянию на январь 2020 г.

Клиническая гематология Винтроба.14-е изд. Грир Дж., Редактор. Филадельфия, Пенсильвания: Wolters Kluwer: 2019, Раздел 2: Эритроциты, Pp 1512-1516, 1522-1524.

Харменнинг, Д. Клиническая гематология и основы гемостаза, пятое издание, F.A. Davis Company, Филадельфия, 2009 г., глава 3 и стр. 305-328.

Источники, использованные в предыдущих обзорах

Клиническая гематология: принципы, процедуры, взаимосвязи. Второе издание. Э. Энн Стин-Мартин, Шерил А. Лотспайх-Штайнингер, Джон А. Кёпке.Lippincott Co. 1998.

Клиническая гематология и основы гемостаза. Третье издание. Дениз М. Харменнинг. Ф. A. Davis Co., 1915 Arch Street Philadelphia, PA 19103. 1997.

Томас, Клейтон Л., редактор (1997). Циклопедический медицинский словарь Табера. Компания F.A. Davis, Филадельфия, Пенсильвания [18-е издание].

Пагана, Кэтлин Д. и Пагана, Тимоти Дж. (2001). Справочник Мосби по диагностическим и лабораторным тестам, 5-е издание: Mosby, Inc., Сент-Луис, Миссури.

Брозе, М., Обновлено (3 августа 2004 г., обновлено). CBC. Медицинская информация MedlinePlus, Медицинская энциклопедия [он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003642.htm.

Brose, M, обновлено (8 мая 2003 г., обновлено). Дифференциал крови. Медицинская информация MedlinePlus, Медицинская энциклопедия [он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003657.htm.

Пагана, Кэтлин Д. и Пагана, Тимоти Дж. (© 2007). Справочник Мосби по диагностике и лабораторным испытаниям, 8-е издание: Mosby, Inc., Сент-Луис, Миссури. Стр. 290.

Харменнинг Д. Клиническая гематология и основы гемостаза, пятое издание, F.A. Davis Company, Филадельфия, 2009 г., глава 3, стр. 305-328, 578-589.

Генри «Клиническая диагностика и лечение с помощью лабораторных методов». 21-е изд. Макферсон Р., Пинкус М., ред. Филадельфия, Пенсильвания: Saunders Elsevier: 2007, гл. 31, С. 477-478, 545-560, 730, 754-757.

Клиническая гематология Винтроба. 12-е изд. Грир Дж., Ферстер Дж., Роджерс Дж., Параскевас Ф., Глэдер Б., Арбер Д., Средство Р., ред.Филадельфия, Пенсильвания: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс: 2009, стр. 170-402, 1512-1516, 1522-1524, 1528-1533.

Kasper DL, Braunwald E, Fauci AS, Hauser SL, Longo DL, Jameson JL eds, (2005). Принципы внутренней медицины Харрисона, 16-е издание, McGraw Hill, Pp 329-336, 340-341, 673-675.

Пагана К., Пагана Т. Мосби. Руководство по диагностическим и лабораторным исследованиям. 3-е издание, Сент-Луис: Мосби Эльзевьер; 2006, С. 409-412, 447-448.

(обновлено 10 мая 2010 г.) Inoue S, et al.Лейкоцитоз, Справочная статья Medscape. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/956278-overview. По состоянию на май 2012 г.

(1 февраля 2011 г.) Национальный институт крови сердца и легких. Что такое лимфоцитопения? Доступно в Интернете по адресу http://www.nhlbi.nih.gov/health/health-topics/topics/lym/. По состоянию на май 2012 г.

(8 января 2010 г.) Кемперт П. Функция белых кровяных телец, Обзор иммунной системы. Справочная статья Medscape. Доступно на сайте http: //emedicine.medscape.com / article / 960027-overview. По состоянию на май 2012 г.

(6 января 2010 г.) Наушад Х. Подсчет лейкоцитов (WBC). Справочная статья Medscape. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/2054452-overview#aw2aab6b2. По состоянию на май 2012 г.

(Обновлено 5 декабря 2011 г.) Надер Н. Нейтрофилия. Справочная статья Medscape. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/208576-overview. По состоянию на май 2012 г.

(24 мая 2011 г.) Годвин Дж. Нейтропения. Справочная статья Medscape.Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/204821-overview. По состоянию на май 2012 г.

(25 августа 2011 г.) Лисс М. Эозинофилия. Справочная статья Medscape. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/199879-overview. По состоянию на май 2012 г.

(1 марта 2011 г.) Национальный институт сердца, легких и крови. Что такое истинная полицитемия? Доступно в Интернете по адресу http://www.nhlbi.nih.gov/health/health-topics/topics/poly/. По состоянию на май 2012 г.

(18 мая 2012 г.) Национальный институт сердца, легких и крови.Анемия. Доступно в Интернете по адресу http://www.nhlbi.nih.gov/health/health-topics/topics/anemia/. По состоянию на май 2012 г.

(4 ноября 2011 г.) Маакарон Дж. Анемия. Справочная статья Medscape. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/198475-overview. По состоянию на май 2012 г.

(19 апреля 2012 г.) Дагдейл Д. RBC Count. Медицинская энциклопедия MedlinePlus. Доступно в Интернете по адресу http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003644.htm. По состоянию на май 2012 г.

Riley R, et.al. Автоматическая гематологическая оценка.Медицинский колледж Вирджинии, Университет Содружества Вирджинии. Доступно в Интернете по адресу http://www.pathology.vcu.edu/education/PathLab/pages/matopath/pbs.html#Anchor-Automated-47857. По состоянию на май 2012 г.

(1 августа 2010 г.) Национальный институт сердца, легких и крови. Что такое тромбоцитемия и тромбоцитоз? Доступно в Интернете по адресу http://www.nhlbi.nih.gov/health/health-topics/topics/thrm/. По состоянию на май 2012 г.

(1 августа 2010 г.) Национальный институт сердца, легких и крови. Что такое тромбоцитопения? Доступно в Интернете по адресу http: // www.nhlbi.nih.gov/health/health-topics/topics/thcp/. По состоянию на май 2012 г.

(16 июля 2010 г.) Клиника Мэйо. Заболевания и состояния, тромбоцитоз. Доступно в Интернете по адресу http://www.mayoclinic.com/health/thrombocytosis/DS01088. По состоянию на май 2012 г.

Bain B J. Мазок периферической крови. В Goldman L, Schafer AI. (© 2012). 24-е издание Goldman’s Cecil Medicine: Эльсевир Сондерс, Филадельфия, Пенсильвания. PP 1024-1031.

Пагана, Кэтлин Д., Пагана, Тимоти Дж. И Пагана, Тереза ​​Н.(© 2015). Справочник по диагностическим и лабораторным испытаниям Мосби, 12-е издание: Mosby, Inc., Сент-Луис, Миссури. ПП 497-501, 786-789, 991-995.

Национальный институт сердца, легких и крови (обновлено 18 мая 2012 г.). Анемия. Доступно в Интернете по адресу http://www.nhlbi.nih.gov/health/health-topics/topics/anemia. Дата обращения 8.04.2015.

Национальный институт сердца, легких и крови (обновлено 30 декабря 2013 г.). Лимфоцитопения Доступно в Интернете по адресу http://www.nhlbi.nih.gov/health/health-topics/topics/lym. Дата обращения 8.04.2015.

Национальный институт сердца, легких и крови (обновлено 31 июля 2012 г.). Что такое тромбоцитопения? Доступно в Интернете по адресу http://www.nhlbi.nih.gov/health/health-topics/topics/thcp. Дата обращения 20.03.2015.

Национальный институт сердца, легких и крови (обновлено 31 июля 2012 г.). Что такое тромбоцитемия и тромбоцитоз? Доступно в Интернете по адресу http://www.nhlbi.nih.gov/health/health-topics/topics/thrm/. Дата обращения 20.03.2015.

Иноуэ С. (обновлено 7 февраля 2014 г.) Лейкоцитоз. Справочная статья о Medscape.Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/956278-overview. Дата обращения 05.04.2015.

(14 января 2015 г.) Карри К. Дифференциальная оценка белых кровяных телец. Ссылка на Medscape. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/2085133-overview#a2. По состоянию на 10 июля 2015 г.

Юко, С. и др. al. (2013 октябрь). Исследование процента фракции незрелых тромбоцитов у доношенных и недоношенных детей при рождении. Дж. Клин Неонатол . 2013 октябрь-декабрь; 2 (4): 173–178. [Он-лайн информация].Доступно в Интернете по адресу http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3883212/. Дата обращения 18.07.15.

Хоффман, Дж. Дж. (2014). Сетчатые тромбоциты: аналитические аспекты и клиническое применение. Клин Хим Лаб Мед . 2014; 52 (8): 1107-17. Доступно в Интернете по адресу http://www.degruyter.com/view/j/cclm.2014.52.issue-8/cclm-2014-0165/cclm-2014-0165.xml. Дата обращения 25.07.15.

Сигети Р. и Карри К. (5 сентября 2014 г., обновлено). Количество ретикулоцитов и содержание гемоглобина в ретикулоцитах. Медицинские препараты и болезни [Информация в Интернете].Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/2086146-overview. Дата обращения 18.07.15.

Першке Э. (2014). Использование содержания гемоглобина в ретикулоцитах (RET-He) для оценки анемии у больных раком. Новости и перспективы Medscape. Ам Дж. Клин Патол . 2014; 142 (4): 506-512. [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://www.medscape.com/viewarticle/833778. Дата обращения 18.07.15.

Кеохан, Э, Смит, Л. и Валенга, Дж. (© 2016). Клинические принципы и применение гематологии Родака, 5-е издание: Elsevier Saunders, Saint Louis, MO.С. 145, 173.

Общий анализ крови — Клиника Мэйо

Обзор

Общий анализ крови (CBC) — это анализ крови, используемый для оценки вашего общего состояния здоровья и выявления широкого спектра заболеваний, включая анемию, инфекцию и лейкоз.

Полный анализ крови измеряет несколько компонентов и характеристик вашей крови, в том числе:

• Красные кровяные тельца, переносящие кислород
• Лейкоциты, борющиеся с инфекцией
• Гемоглобин, белок, переносящий кислород в красных кровяных тельцах
• Гематокрит, отношение эритроцитов к жидкому компоненту или плазме в крови
• Тромбоциты, способствующие свертыванию крови

Аномальное увеличение или уменьшение количества клеток, обнаруженное в общем анализе крови, может указывать на то, что у вас есть основное заболевание, которое требует дальнейшего обследования.

Продукты и услуги

Показать больше товаров от Mayo Clinic

Зачем это нужно

Общий анализ крови — это распространенный анализ крови, который делают по разным причинам:

• Для обзора вашего общего состояния здоровья. Ваш врач может порекомендовать общий анализ крови в рамках обычного медицинского обследования для наблюдения за вашим общим состоянием здоровья и выявления различных заболеваний, таких как анемия или лейкемия.
• Для диагностики заболеваний. Ваш врач может предложить общий анализ крови, если вы испытываете слабость, усталость, жар, воспаление, синяки или кровотечение. Общий анализ крови может помочь диагностировать причину этих признаков и симптомов. Если ваш врач подозревает, что у вас инфекция, тест также может помочь подтвердить этот диагноз.
• Для наблюдения за состоянием здоровья. Если у вас диагностировано заболевание крови, которое влияет на количество клеток крови, ваш врач может использовать полный анализ крови для контроля вашего состояния.
• Для наблюдения за лечением. Полный анализ крови может использоваться для контроля вашего здоровья, если вы принимаете лекарства, которые могут повлиять на количество клеток крови.

Дополнительная информация

Показать дополнительную информацию

Как вы готовитесь

Если ваш образец крови исследуется только для общего анализа крови, вы можете нормально есть и пить перед анализом. Если ваш образец крови будет использоваться для дополнительных анализов, вам может потребоваться голодание в течение определенного времени перед обследованием.Ваш врач даст вам конкретные инструкции.

Что вас может ожидать

Для общего анализа крови член вашей медицинской бригады берет образец крови, вводя иглу в вену на руке, обычно в месте сгиба локтя. Образец крови отправляется в лабораторию для анализа. Вы можете немедленно вернуться к своим обычным занятиям.

Результаты

Ниже приведены нормальные результаты общего анализа крови для взрослых:

Количество эритроцитов	Мужской: 4.35-5,65 трлн клеток / л * (4,35-5,65 млн клеток / мкл **) Самка: 3,92-5,13 триллиона клеток / л (3,92-5,13 миллиона клеток / мкл)
Гемоглобин	Мужской: 13,2-16,6 г / дл *** (132-166 г / л) Женский: 11,6-15 г / дл (116-150 г / л)
Гематокрит	Мужской: 38.3-48,6 процентов Женщины: 35,5-44,9%
Количество лейкоцитов	3,4–9,6 млрд клеток / л (3400–9600 клеток / мкл)
Количество тромбоцитов	Мужской: 135-317 миллиардов / л (135,000 — 317,000 / мкл) Женский: 157-371 миллиард / л (от 157,000 до 371,000 / мкл)
* L = литр ** мкл = мкл *** dL = децилитр

Не окончательный тест

Общий анализ крови обычно не является окончательным диагностическим тестом.В зависимости от причины, по которой ваш врач рекомендовал этот тест, результаты за пределами нормального диапазона могут потребовать или не потребовать последующего наблюдения. Вашему врачу может потребоваться изучить результаты общего анализа крови вместе с результатами других анализов крови, или могут потребоваться дополнительные тесты.

Например, если в остальном вы здоровы и не имеете признаков или симптомов болезни, результаты общего анализа крови, слегка выходящие за пределы нормы, могут не вызывать беспокойства, и последующее наблюдение может не потребоваться. Если вы проходите курс лечения рака, результаты общего анализа крови за пределами нормы могут указывать на необходимость изменения вашего плана лечения.

В некоторых случаях, если ваши результаты значительно выше или ниже нормальных диапазонов, ваш врач может направить вас к врачу, специализирующемуся на заболеваниях крови (гематологу).

Что могут показывать результаты

Результаты в следующих областях выше или ниже нормальных диапазонов общего анализа крови могут указывать на проблему.

• Количество эритроцитов, гемоглобин и гематокрит. Результаты вашего количества эритроцитов, гемоглобина и гематокрита связаны, потому что каждый из них измеряет аспекты ваших эритроцитов.

  Если показатели в этих трех областях ниже нормы, у вас анемия. Анемия вызывает утомляемость и слабость. Анемия имеет множество причин, в том числе низкий уровень определенных витаминов или железа, кровопотерю или основное заболевание.

  Количество эритроцитов выше нормы (эритроцитоз) или высокий уровень гемоглобина или гематокрита может указывать на основное заболевание, такое как истинная полицитемия или болезнь сердца.

• Количество лейкоцитов. Низкое количество лейкоцитов (лейкопения) может быть вызвано заболеванием, например аутоиммунным заболеванием, которое разрушает лейкоциты, проблемами с костным мозгом или раком. Некоторые лекарства также могут вызвать снижение количества лейкоцитов.

  Если количество белых кровяных телец выше нормы, возможно, у вас инфекция или воспаление. Или это может указывать на то, что у вас нарушение иммунной системы или заболевание костного мозга. Высокое количество лейкоцитов также может быть реакцией на лекарства.

• Количество тромбоцитов. Число тромбоцитов ниже нормы (тромбоцитопения) или выше нормы (тромбоцитоз) часто является признаком основного заболевания или может быть побочным эффектом приема лекарств. Если количество тромбоцитов выходит за пределы нормы, вам, вероятно, потребуются дополнительные тесты для диагностики причины.

Чтобы получить более подробную информацию о том, что означают результаты вашего полного анализа крови, если они выходят за пределы нормы, обратитесь к врачу.

22 декабря 2020 г.

РУЧНОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЛ, МАЛЫЙ ОБЗОР **

1. Приготовьте две тонкие пленки крови при завершении венепункции или из пробирки с ЭДТА. Отметьте слайд карандашом с полным именем пациента и датой. Дайте слайдам достаточно высохнуть на воздухе.
2. Окунуть предметное стекло в пятно на 10 секунд.
3. Окуните предметное стекло в дистиллированную воду на 20 секунд или более для более темного окрашивания.

Выполните анализ мазка или дифференциал лейкоцитов:

Понаблюдайте за предметным стеклом в условиях низкой сушки для получения общего впечатления и общего вида клеток крови. Проверьте равномерное распределение лейкоцитов и правильное окрашивание клеток.

Понаблюдайте за предметным стеклом под высоко сухой линзой после размазывания капли масла по всей длине предметного стекла. Оцените количество лейкоцитов, отмечая количество белых клеток на поле с высоким увеличением X 1000. Это число должно соответствовать автоматическим результатам.Если между двумя числами имеется большое расхождение, подсчет белого следует повторить.

Для анализа мазка просканируйте не менее 10 полей на высокой глубине в поисках следующих аномальных клеток:

Незрелые гранулоциты, диспластические гранулоциты, аномальные гранулоциты (токсическая грануляция, тельца Дохле, гиперсегментация, аномалия Пельгера-Хуэ), атипичные лимфатические узлы, незрелые лимфатические узлы, незрелые моноциты, аномальные тромбоциты, паразиты крови.

Полуколичество аномальных клеток соответственно:

0-2 на высокосухое поле = Немного

3-6 на сильное засушливое поле = Умеренное

> 6 на высокое сухое поле = много

Если установлено, что незрелых гранулоцитов> 5%, то необходимо провести ручную дифференциацию.

Если предполагается, что существует> 10% эозинофилов или> 5% базофилов, то необходимо провести ручную дифференциацию.

Для ручного дифференциального подсчета не менее 100 лейкоцитов под линзой с высокой степенью сухости с помощью клавиатуры LIS. В качестве альтернативы, дифференциал может быть выполнен под масляной иммерсионной линзой.

(Примечание: если количество nRBC больше 5%, количество лейкоцитов на приборе необходимо скорректировать следующим образом: Скорректированные лейкоциты = полученное количество ядерных клеток x (100 ÷ [nRBC + 100]).

См. «Атлас клинической гематологии» (см. Ссылки) для руководства и иллюстраций аномальной морфологии лейкоцитов.

Качество пятен: для просмотра слайдов и ручного сравнения ответьте на вопрос в строке «Качество пятен приемлемо?» используя раскрывающийся список выбора. Ответьте «Да», если окрашенные клетки появляются согласно следующему:

• Эритроциты: двояковогнутые дискоидные формы от розовых до красно-оранжевых (обычно)
• Лимфоциты: темно-фиолетовое ядро ​​со средне-синей цитоплазмой
• Моноциты: ядро ​​лопастное, средне-фиолетовое с голубой цитоплазмой
• нейтрофилов; ядро от темно-синего до фиолетового (3 и более долей), от бледно-розовой до почти бесцветной цитоплазмы, от красных до бледно-лиловых мелких гранул
• Эозинофилы Ярко-красные или красновато-оранжевые гранулы в бледно-розовой цитоплазме, ядро ​​от синего до сине-фиолетового (многодольчатое)
• Базофилы: темно-фиолетовые и фиолетово-черные гранулы в бледно-голубой или нейтральной цитоплазме, ядро ​​от темно-синего до фиолетового (часто двулопастное)
• Тромбоциты: четко разграниченные сине-фиолетовые — фиолетовые гранулы в голубой цитоплазме

Выполните оценку тромбоцитов:

Оценка производится путем подсчета среднего количества тромбоцитов, наблюдаемых на поле 100-кратной масляной иммерсии в монослое хорошо распределенного мазка.Это число, умноженное на 15 000, дает приблизительное количество тромбоцитов / мкл. Затем это значение будет сравниваться с эталонным интервалом для рассматриваемого образца. Для оценки фактическое количество тромбоцитов не приводится, но тромбоциты относятся к определенным категориям:

Увеличено — количество тромбоцитов превышает референсный интервал.
Адекватно — количество тромбоцитов находится в пределах референсного интервала.
Снижено — количество тромбоцитов оценивается ниже референтного интервала.

Оценка морфологии эритроцитов:

По возможности, аномалия эритроцитов должна быть описана как можно более подробно.

Например, при наличии пойкилоцитоза следует указать тип (ы) клеток неправильной формы; Также следует отметить анизоцитоз, количество изменений в размере красных кровяных телец. Общепринятые методы сообщения о нарушениях эритроцитов включают комментарии о степени имеющейся вариабельности (незначительная, умеренная, выраженная).Независимо от выбранного метода, его следует использовать последовательно. Информация о морфологии эритроцитов широко варьируется между технологами. Поэтому для каждой лаборатории полезно иметь единую систему оценок.

Кроме того, значимость различных типов аномальной морфологии будет различаться, и, следовательно, степень классификации может зависеть от присутствующей аномалии. Кроме того, при определении морфологии важно правильно выбрать область мазка. Рекомендуемые области на мазках-клиньях — это те области, в которых некоторые эритроциты начинают перекрываться.

См. «Атлас клинической гематологии» (см. Ссылки) для руководства и иллюстраций аномальной морфологии эритроцитов.

Оценка будет производиться согласно следующему:

Полихроматофилия, клетки шлема, эритроциты слезной капли, акантоциты, шистоциты, сфероциты, пойкилоцитоз, овалоциты, эллиптоциты, клетки Burr, клетки-мишени, стоматоциты, базофильный стипплинг, тельца Паппенгеймера, тельца Хауэлла Веселых

0-2 ячейки на высокое сухое поле = Незначительное

3-6 ячеек на высокосухое поле = Умеренное

> 6 ячеек на высокое сухое поле = маркировано

Rouleaux

Незначительный = совокупность от 3 до 4 RBC

Умеренный = совокупно от 5 до 10 RBC

Отмечено = многочисленные агрегаты

.