Neisseria sp: Endocarditis Due to a New Rod-Shaped Neisseria sp.

Содержание

Neisseria sp. C6I2

Neisseria sp. C6I2

К сожалению, GBIF не работает без разрешения на запуск JavaScript.

Наш сайт сайт обнаружил, что Вы используете устаревший и небезопасный браузер. Это не позволит Вам использовать данный сайт. Пожалуйста, установите современный браузер.

Dataset
NCBI Taxonomy
Rank
SPECIES

Classification

phylum
Proteobacteria
class
Betaproteobacteria
order
Neisseriales
family
Neisseriaceae
genus
Neisseria
species
Neisseria sp.C6I2

Name

Homonyms
Neisseria sp. C6I2

Что нужно знать о бактериальном вагинозе

Многие женщины сталкиваются с симптомами влагалищного дисбиоза. Обильные выделения, молочно-серого цвета и с неприятным запахом часто путают с «молочницей» и проводят «соответствующее» самолечение.

В большинстве случаев, такая стратегия быстрее навредит, чем поможет, поскольку причиной может быть бактериальный вагиноз (БВ).

Что такое баквагиноз

Согласно официальному определению, это невоспалительное заболевание влагалища, характеризующееся резким снижением или полным отсутствием лактофлоры и её заменой на анаэробные бактерии, среди которых наиболее распространены Gardnerella vaginalis (гарднерелла) и Atopobium vaginae (атопобиум).

У здоровых женщин репродуктивного возраста влагалищный микробиом на 95% представлен лактобактериями. Их способность к кислотообразованию (молочная кислота) и продукции перекиси водорода способствует поддержанию кислого pH и подавлению роста остальных микроорганизмов.

Оставшиеся 5% микрофлоры занимают более 300 видов аэробных и анаэробных микроорганизмов, среди которых:

  • грамположительные палочки — Corynebacterium spp., Eubacterium spp., Bifidobacterium spp., Propionibacterium spp., Clostridium spp.;
  • грамотрицательные палочки (14-55%) — Bacteroides spp., Fusobacterium spp., Prevotella spp., Porphyromonas spp., Leptotrichia spp.;
  • грамположительные кокки (30-80%) — Peptostreptococcus spp., Peptococcus spp., Staphylococcus spp., Micrococcus varians, Enterococcus spp., Streptococcus viridans и др.
  • грамотрицательные кокки — Veilonella spp., Acidominococcus fermentans, непатогенные Neisseria spp.,
  • энтеробактерии — Echerihia coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp., Citrobacter spp. и др.

Все это многообразие бактерий является частью нормального «женского» биоценоза, не вызывая симптомов и не требуя лечения. Однако это правомерно до тех пор, пока их численность лактобацилл не начинает снижаться, а остальных —  расти.

Факторы риска и симптомы

Почему происходит такой «сдвиг» — достоверно пока не известно. Однако к факторам риска относят:

  • ранее перенесенные воспалительные заболевания половых путей,
  • длительный и бесконтрольный прием антибиотиков,
  • гормональные нарушения (расстройства менструального цикла),
  • длительное применение ВМС,
  • прием оральных контрацептивов.

Колонизация влагалища микрофлорой, связанной с баквагинозом, особенно Gardnerella vaginalis и Atopobium vaginae, сопровождается:

  • сдвигом pH в щелочную сторону (>4,5),
  • появлением обильных (иногда пенистых) выделений молочно-серого цвета
  • появлением характерного «рыбного» запаха, усиливающегося при защелачивании среды (половой контакт, менструация).

Отека и покраснения обычно  не наблюдается, что является отличительным признаком от банального вагинита и кандидоза влагалища («молочницы»).

Диагностика

Самым простым, но косвенным, признаком нарушения влагалищной микрофлоры служит повышение pH >4,5. Для проведения такого «анализа» требуются всего лишь тест-полоски для измерения рН, доступные к покупке в любой аптеке. Однако, чтобы выявить возбудителя и начать адекватную терапию такой диагностики, конечно, недостаточно.

Современным и высокоточным методом диагностики влагалищных дисбиозов служит комплексное исследование «Флороценоз».

Этот тест разработан научными специалистами совместно с практикующими клиницистами. И предназначен для определения состава и соотношения нормальной и условно-патогенной флоры влагалища методом ПЦР.

Исследование представлено в 3-х вариантах для различных клинических ситуаций:

1. Флороценоз – бактериальный вагиноз

Название теста «говорит само за себя», а в результате будет отражено количество:

  • всех обнаруженных бактерий,
  • ДНК Lactobacillus spp.,
  • ДНК Atopobium vaginae,
  • ДНК Gardnerella vaginalis. 

2. В случае, когда есть подозрения на нарушения более «широкого спектра», к применению рекомендован «Флороценоз», включающий подсчет:

  • ДНК всех бактерий,
  • ДНК Lactobacillus spp.,
  • ДНК возбудителей бактериального вагиноза
    • Gardnerella vaginalis
    • и Atopobium vaginae,
  • ДНКвозбудителейаэробноговагинита
    • Enterobacteriaceae,
    • Staphylococcus spp.,
    • Streptococcus spp.,
  • ДНК условно-патогенных микоплазм
    • Ureaplasma urealyticum,
    • Ureaplasma parvum,
    • Mycoplasma hominis,
  • ДНК возбудителей кандидоза («молочницы»)
    • Candida albicans,
    • Candida glabrata,
    • Candida krusei
    • Candida paraps./ tropicalis.

3. При необходимости в дополнительной диагностике ИППП – подходит «Флороценоз – комплексное исследование», включающий в себя подсчет «классического состава» бактерий + выявление ДНК «виновников» ИППП:

  • Neisseria gonorrhoeae (гонокок)
  • Chlamydia trachomatis (хламидия)
  • Mycoplasma genitalium (микоплазма гениталиум)
  • Trichomonas vaginalis (трихомонада)

Готовность анализов составляет 4-5 дней, а результат можно получить по электронной почте, в личном кабинете на сайте или в любом удобном отделении KDL.

Поделиться статьей:

Остались вопросы?

Посев из зева — Staphylococcus aureus и Neisseria spp — Вопрос лору

Если вы не нашли нужной информации среди ответов на этот вопрос, или же ваша проблема немного отличается от представленной, попробуйте задать дополнительный вопрос врачу на этой же странице, если он будет по теме основного вопроса. Вы также можете задать новый вопрос, и через некоторое время наши врачи на него ответят. Это бесплатно. Также можете поискать нужную информацию в похожих вопросах на этой странице или через страницу поиска по сайту. Мы будем очень благодарны, если Вы порекомендуете нас своим друзьям в социальных сетях.

Медпортал 03online.com осуществляет медконсультации в режиме переписки с врачами на сайте. Здесь вы получаете ответы от реальных практикующих специалистов в своей области. В настоящий момент на сайте можно получить консультацию по 70 направлениям: специалиста COVID-19, аллерголога, анестезиолога-реаниматолога, венеролога, гастроэнтеролога, гематолога, генетика, гепатолога, гериатра, гинеколога, гомеопата, дерматолога, детского гастроэнтеролога, детского гинеколога, детского дерматолога, детского инфекциониста, детского кардиолога, детского лора, детского невролога, детского нефролога, детского офтальмолога, детского психолога, детского пульмонолога, детского ревматолога, детского уролога, детского хирурга, детского эндокринолога, дефектолога, диетолога, иммунолога, инфекциониста, кардиолога, клинического психолога, косметолога, логопеда, лора, маммолога, медицинского юриста, нарколога, невропатолога, нейрохирурга, неонатолога, нефролога, нутрициолога, онколога, онкоуролога, ортопеда-травматолога, офтальмолога, паразитолога, педиатра, пластического хирурга, проктолога, психиатра, психолога, пульмонолога, ревматолога, рентгенолога, репродуктолога, сексолога-андролога, стоматолога, трихолога, уролога, фармацевта, физиотерапевта, фитотерапевта, флеболога, фтизиатра, хирурга, эндокринолога.

Мы отвечаем на 97.23% вопросов.

Оставайтесь с нами и будьте здоровы!

Neisseria — обзор | Темы ScienceDirect

Neisseria обычно рассматриваются как аэробные организмы, но с тех пор было показано, что как в N. meningitidis , так и в N. gonorrhoeae можно использовать в качестве респираторных акцепторов электронов молекулы, отличные от кислорода, как видно, например, в исследованиях Лиссендена с коллегами (2000) и Анджума с соавторами (2002). N. meningitidis имеет строгую потребность в кислороде, и в условиях с низким содержанием кислорода (микроаэробные) может дополнять рост, используя усеченный путь денитрификации, используя соединения азота в качестве акцепторов электронов (Rock et al ., 2005) (рис. 27.1). Neisseria sp. обладают способностью восстанавливать нитрит (через оксид азота) до закиси азота. Фермент, который катализирует восстановление нитрита до оксида азота, представляет собой двухдоменную медьсодержащую нитритредуктазу AniA, которая, как предполагается, находится в периплазме и ковалентно прикрепляется к внешней мембране пальмитиловым остатком через липопротеиновый якорь. Затем продукт этой реакции восстанавливается до закиси азота с помощью мембраносвязанного фермента оксид-редуктазы NorB.Гены aniA и norB дивергентно транскрибируются из общей промоторной области, и их регуляция далеко не полностью выяснена. Известно, что aniA положительно контролируется глобальным анаэробным активатором транскрипции FNR [первоначально называвшимся регулятором восстановления фумарата и нитрата (Lambden and Guest, 1976)] (Householder et al. ., 1999) и отрицательно реагирующим на оксид азота репрессор NsrR [первоначально названный регулятором ответа, чувствительным к нитриту (Beaumont et al ., 2004)] (Overton et al ., 2006; Rock et al ., 2007). Сайты связывания для дополнительных регуляторов NarP / Q (реагирующие на нитриты) и Fur (реагирующие на железо) также присутствуют в промоторной области aniA (Householder et al ., 1999). Регуляция norB менее сложна, поскольку, по-видимому, он репрессируется только NsrR, который быстро удаляется в присутствии NO (Rock et al ., 2007). Возможные причины такой разницы в уровнях контроля могут быть связаны с токсической природой NO.Экспрессия продукта гена, который продуцирует NO в качестве побочного продукта (AniA), должна строго регулироваться, чтобы предотвратить «самоубийство», тогда как продукт гена, который выводит токсины на NO до безвредного вещества (NorB), контролируется минимально, чтобы он мог быстро реагировать на либо эндогенная, либо экзогенная (хозяин) продукция NO. Эти ферменты денитрификации обнаружены во всех пяти завершенных геномах Neisseria , которые в настоящее время секвенированы. Первоначально предполагалось, что эта система присутствует только как система детоксикации для защиты бактерий от нитрозативных всплесков с помощью индуцибельной синтазы оксида азота (iNOS) от иммунных клеток хозяина, таких как макрофаги.Действительно, было показано, что такие системы детоксикации увеличивают выживаемость N. meningitidis в макрофагах человека и на модели органной культуры слизистой оболочки носоглотки (Stevanin et al ., 2005). Однако, поскольку микроокружение внутри хозяина имеет различные уровни кислорода, для бактерий может быть выгодно использовать нитрит в тканях хозяина. Нитрит образуется в результате оксигенации NO — обычной сигнальной молекулы в организме человека-хозяина, а также токсина, продуцируемого врожденной иммунной системой хозяина.Нитрит также вырабатывается в носоглотке комменсальными факультативными восстановителями нитратов из принимаемых нитратов с пищей — уровни 0,01–5 м M считаются нормальными в слюне (Lundberg et al ., 2004). Уровни оксида азота в носоглотке относительно высоки (250 частей на миллиард ≈ 12,5 n M ) и вырабатываются клетками синуса, которые конститутивно экспрессируют синтазу оксида азота (NOS) (Lundberg and Weitzberg, 1999). Было показано, что денитрификация в лабораторных культурах способствует росту в условиях ограниченного количества кислорода (Rock and Moir, 2005), что позволяет предположить, что такая гибкость дыхательного образа жизни может способствовать успеху патогена в организме человека-хозяина.Доказательства, подтверждающие роль денитрифицирующих ферментов в патогенезе Neisseria sp. заключается в том, что белок AniA может быть обнаружен в сыворотках пациентов, страдающих гонококковой инфекцией (Clark et al ., 1988), и придает устойчивость к уничтожению сыворотки системой комплемента человека (Cardinale and Clark, 2000).

Рисунок 27.1. Основные дыхательные пути у N. meningitidis . Электроны переходят от НАДН к кислороду через НАДН-дегидрогеназу, комплекс цитохрома bc 1 и оксидазу цитохрома cbb 3 в аэробных условиях.Белым цветом показаны аэробно экспрессируемые белки. Серые прямоугольники показывают анаэробно индуцируемые белки AniA (нитритредуктаза) и NorB (редуктаза оксида азота). I.M., внутренняя мембрана; О.М., наружная мембрана. Не в масштабе.

У бактерий были идентифицированы два основных типа ферментов редуктазы оксида азота. Тип cNOR, обнаруженный у протеобактерий, таких как Pseudomonas stutzeri (Heiss et al ., 1989) и Paracoccus denitrificans (Carr and Ferguson, 1990), состоит из двухкомпонентного комплекса, состоящего из заякоренных в мембране c Цитохром типа (NorC), который отдает электроны трансмембранной субъединице NorB, которая содержит два гема типа b .Другой тип, впервые идентифицированный в Ralstonia eutropha , представляет собой одиночную субъединицу qNOR, которая, как считается, принимает электроны от хинолов, используя хинол-окисляющий домен, расположенный на расширенном N-конце белка, а не от c -типа. цитохромы. N. meningitidis NorB тесно связан с qNOR из Ralstonia sp. (Хендрикс и др. , 2000)

Neisseria meningitidis: использование геномики для понимания разнообразия, эволюции и патогенеза

  • 1.

    Кристенсен, Х., Мэй, М., Боуэн, Л., Хикман, М. и Троттер, К. Л. Менингококковое носительство по возрасту: систематический обзор и метаанализ. Lancet Infect. Дис. 10 , 853–861 (2010).

    PubMed

    Google Scholar

  • 2.

    Чимолаи, Н. и Кугант Д. А. в лаборатории Диагностика бактериальных инфекций (ред. Чимолаи Н.) 499–525 (Марсель Деккер, 2001).

  • 3.

    Gotschlich, E.C., Goldschneider, I. & Artenstein, M.S. Иммунитет человека к менингококкам. IV. Иммуногенность менингококковых полисахаридов группы A и группы C у людей-добровольцев. J. Exp. Med. 129 , 1367–1384 (1969).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 4.

    Artenstein, M. S. et al. Профилактика менингококковой инфекции с помощью полисахаридных вакцин группы C. Н.Англ. J. Med. 282 , 417–420 (1970).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 5.

    Jafri, R.Z. et al. Глобальная эпидемиология инвазивной менингококковой инфекции. Население. Health Metr. 11 , 17 (2013).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 6.

    Ван, Б., Санторенеос, Р., Джайлз, Л., Хаджи Али, Афзали, Х. и Маршалл, Х.Показатели летальности от инвазивной менингококковой инфекции по серогруппам и возрасту: систематический обзор и метаанализ. Вакцина 37 , 2768–2782 (2019).

    PubMed

    Google Scholar

  • 7.

    Stephens, D. S., Greenwood, B. & Brandtzaeg, P. Эпидемический менингит, менингококкемия и Neisseria meningitidis . Ланцет 369 , 2196–2210 (2007).

    PubMed

    Google Scholar

  • 8.

    Вайсе, А., Анонычук, А., Якель, А., Виффер, Х. и Надель, С. Бремя и последствия тяжелых и долгосрочных последствий менингококковой инфекции. Expert Rev. Anti Infect. Ther. 11 , 597–604 (2013).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 9.

    Jyssum, K. & Jyssum, S. Изменение плотности и потенциала трансформации в дезоксирибонуклеиновой кислоте из Neisseria meningitidis . Дж.Бактериол. 90 , 1513–1519 (1965).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 10.

    Feil, E.J., Maiden, M.C., Achtman, M. & Spratt, B.G. Относительный вклад рекомбинации и мутации в расхождение клонов Neisseria meningitidis . Мол. Биол. Evol. 16 , 1496–1502 (1999).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 11.

    Фогель У. и Фрош М. Род Neisseria : популяционная структура, пластичность генома и эволюция патогенности. Curr. Вершина. Microbiol. Иммунол. 264 , 23–45 (2002).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 12.

    Лю, Г., Тан, К. М. и Эксли, Р. М. Непатогенные Neisseria : представители многочисленного, разнообразного по среде обитания, разнообразного рода. Микробиология 161 , 1297–1312 (2015).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 13.

    Линц, Б., Шенкер, М., Чжу, П. и Ахтман, М. Частый межвидовой генетический обмен между комменсалом Neisseriae и Neisseria meningitidis . Мол. Microbiol. 36 , 1049–1058 (2000).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 14.

    Lu, Q. F.и другие. Сравнительный геномный анализ всего рода Neisseria для выявления новых генов, связанных с патогенностью и адаптацией к нише патогенов Neisseria . Внутр. Дж. Геномикс 2019 , 6015730 (2019).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 15.

    Беннетт, Дж. С., Уоткинс, Э. Р., Джолли, К. А., Харрисон, О. Б. и Мейден, М. С. Идентификация видов Neisseria с использованием гена 50S рибосомного белка L6 (rplF). J. Clin. Microbiol. 52 , 1375–1381 (2014).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 16.

    Maiden, M. C. & Harrison, O. B. Популяционная и функциональная геномика Neisseria , выявленная с помощью подходов «ген за геном». J. Clin. Microbiol. 54 , 1949–1955 (2016).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 17.

    Weyrich, L. S. et al. Поведение, диета и болезни неандертальцев на основании древней ДНК в зубном камне. Природа 544 , 357–361 (2017).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 18.

    Eerkens, J. W. et al. Вероятный доисторический случай менингококковой инфекции из залива Сан-Франциско: секвенирование следующего поколения Neisseria meningitidis на основе зубного камня и остеологических данных. Внутр. J. Paleopathol. 22 , 173–180 (2018).

    PubMed

    Google Scholar

  • 19.

    Schoen, C. et al. Полногеномное сравнение болезнетворных и носительских штаммов дает представление об эволюции вирулентности у Neisseria meningitidis . Proc. Natl Acad. Sci. США 105 , 3473–3478 (2008).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 20.

    Schielke, S., Frosch, M. & Kurzai, O. Детерминанты вирулентности, участвующие в дифференциальной адаптации ниши хозяина Neisseria meningitidis и Neisseria gonorrhoeae . Med. Microbiol. Иммунол. 199 , 185–196 (2010).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 21.

    Клеменс, М. Е. А., Мэйден, М. К. Дж. И Харрисон, О. Б. Характеристика генов капсул у непатогенных видов Neisseria . Microb. Геном. 4 , e0.000208 (2018).

    Google Scholar

  • 22.

    Lapeysonnie, L. La méningite cérébrospinale en Afrique. Бык. Всемирный орган здравоохранения. 28 , 1–114 (1963).

    Google Scholar

  • 23.

    Гринвуд, Лекция Б. Мэнсона. Менингококковый менингит в Африке. Пер. R. Soc. Троп. Med. Hyg. 93 , 341–353 (1999).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 24.

    Стивенс Д. С. Победить менингококк. FEMS Microbiol. Ред. 31 , 3–14 (2007).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 25.

    Harrison, O. B. et al. Описание и номенклатура локуса капсулы Neisseria meningitidis . Emerg. Заразить. Дис. 19 , 566–573 (2013).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 26.

    Tzeng, Y. L. & Stephens, D. S. Эпидемиология и патогенез Neisseria meningitidis . Microbes Infect. 2 , 687–700 (2000).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 27.

    Diomandé, F. V. Влияние на общественное здоровье после введения PsA-TT: первые 4 года. Clin. Заразить. Дис. 61 , S467 – S472 (2015).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 28.

    Borrow, R. et al. Глобальная менингококковая инициатива: глобальная эпидемиология, влияние вакцин на менингококковые заболевания и важность защиты стада. Expert Rev. Vaccines 16 , 313–328 (2017).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 29.

    Krauland, M. G. et al. Секвенирование всего генома для исследования возникновения клонального комплекса 23 Neisseria meningitidis болезни серогруппы Y в США. PLOS ONE 7 , e35699 (2012).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 30.

    Bröker, M. et al. Менингококковая инфекция серогруппы Y в Европе: сохранение высокой значимости в некоторых европейских регионах в 2013 г. Хум. Вакцин. Immunother. 11 , 2281–2286 (2015).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 31.

    Mayer, L. W. et al. Вспышка менингококковой инфекции W135 в 2000 году: не появление нового штамма W135, а клональная экспансия в электрофоретическом комплексе типа 37. J. Infect. Дис. 185 , 1596–1605 (2002).

    PubMed

    Google Scholar

  • 32.

    Koumaré, B. et al. Первая крупная эпидемия менингококковой инфекции, вызванной серогруппой W135, Буркина-Фасо, 2002. Вакцина 25 , A37 – A41 (2007).

    PubMed

    Google Scholar

  • 33.

    Абад, Р., Лопес, Э. Л., Деббаг, Р. и Васкес, Дж. А. Менингококковая болезнь серогруппы W: глобальное распространение и текущее воздействие на Южный конус в Латинской Америке. Epidemiol. Заразить. 142 , 2461–2470 (2014).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 34.

    Krone, M. et al. Рост инвазивного менингококкового заболевания серогруппы W в Европе, 2013–2017 гг. евро Surveill. 24 , e2807 (2019).

    Google Scholar

  • 35.

    Caugant, D. A. et al. Межконтинентальное распространение генетически отличительного комплекса клонов Neisseria meningitidis , вызывающих эпидемическое заболевание. Proc. Natl Acad. Sci. USA 83 , 4927–4931 (1986).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 36.

    Olyhoek, T., Crowe, B. A. & Achtman, M. Клональная популяционная структура Neisseria meningitidis серогруппы A, выделенная в результате эпидемий и пандемий в период с 1915 по 1983 год. Rev. Infect. Дис. 9 , 665–692 (1987).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 37.

    Maiden, M.C. et al. Мультилокусное типирование последовательностей: портативный подход к идентификации клонов в популяциях патогенных микроорганизмов. Proc. Natl Acad. Sci. USA 95 , 3140–3145 (1998).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 38.

    Yazdankhah, S.P. et al. Распределение серогрупп и генотипов среди ассоциированных с заболеванием и переносимых изолятов Neisseria meningitidis из Чешской Республики, Греции и Норвегии. J. Clin. Microbiol. 42 , 5146–5153 (2004).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 39.

    Голпариан Д. и Унемо М. Выявит ли анализ генома эволюцию, глобальную передачу и вирулентность линий Neisseria meningitidis ? EBioMedicine 2 , 186–187 (2015).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 40.

    Lucidarme, J. et al. Геномное разрешение агрессивных, широко распространенных, разнообразных и растущих менингококковых линий серогрупп B, C и W. J. Infect. 71 , 544–552 (2015). Это исследование демонстрирует возможности секвенирования всего генома для выяснения глобальной эпидемиологии линии 11 .

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 41.

    Братчер, Х. Б., Кортон, К., Джолли, К. А., Паркхилл, Дж.& Мэйден, М. С. Платформа популяционной геномики «ген за геном»: сборка de novo, аннотация и генеалогический анализ 108 репрезентативных геномов Neisseria meningitidis . BMC Genom. 15 , 1138 (2014).

    Google Scholar

  • 42.

    Topaz, N. et al. Филогенетические взаимоотношения и региональное распространение штаммов менингококков в менингитном поясе, 2011–2016 гг. EBioMedicine 41 , 488–496 (2019).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 43.

    Jelfs, J., Munro, R., Ashton, F. E. и Caugant, D. A. Генетическая характеристика нового варианта в составе комплекса ET-37 Neisseria meningitidis , связанного со вспышками в различных частях мира. Epidemiol. Заразить. 125 , 285–298 (2000).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 44.

    Рамзи М. Э., Эндрюс Н., Качмарски Э. Б. и Миллер Э. Эффективность конъюгированной вакцины против менингококковой серогруппы С у подростков и детей ясельного возраста в Англии. Ланцет 357 , 195–196 (2001).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 45.

    Retchless, A.C. et al. Выделение и диверсификация менингококка серогруппы W, ассоциированного с эпидемией, в африканском поясе менингита, 1994–2012 гг. мSphere 1 , e00201 – e00216 (2016).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 46.

    Mustapha, M. M. et al. Геномная эпидемиология гипервирулентной серогруппы W, ST-11 Neisseria meningitidis . EBioMedicine 2 , 1447–1455 (2015).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 47.

    Mowlaboccus, S. et al. Клональная экспансия новой устойчивой к пенициллину клады Neisseria meningitidis клональный комплекс 11 серогруппы W, Австралия. Emerg. Заразить. Дис. 23 , 1364–1367 (2017).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 48.

    Lucidarme, J. Международная вспышка инвазивной менингококковой инфекции, вызванная новым и быстро распространяющимся штаммом серогруппы W, Шотландия и Швеция, июль-август 2015 г. Euro Surveill. 21 , 30395 (2016).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 49.

    Eriksson, L. et al. Полногеномное секвенирование появляющейся инвазивной Neisseria meningitidis серогруппы W в Швеции. J. Clin. Microbiol. 56 , e01409 – e01417 (2018).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 50.

    Taha, M.-K., Deghmane, A. E., Knol, M. & van der Ende, A. Секвенирование всего генома выявляет трансъевропейское распространение эпидемии Neisseria meningitidis клона серогруппы W. Clin. Microbiol. Заразить. 25 , 765–767 (2019).

    PubMed

    Google Scholar

  • 51.

    Campbell, H., et al. Презентация с желудочно-кишечными симптомами и высокой летальностью, связанной с менингококковой болезнью группы W (MenW), у подростков, Англия, июль 2015 г. — январь 2016 г. евро Surveill. 21 , 30175 (2016).

    Google Scholar

  • 52.

    Tzeng, Y. L. et al. Появление нового клонального комплекса 11 линии 11.2 клады Neisseria meningitidis как эффективного урогенитального патогена. Proc. Natl Acad. Sci. США 114 , 4237–4242 (2017). Новый штамм N. meningitidis , вызывающий уретрит в США, адаптировался к урогенитальной среде за счет потери капсулы и приобретения кассеты N. gonorrheae norB-aniA , способствующей анаэробному росту .

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 53.

    Kahler, C.M. Возникновение урогенитального патотипа Neisseria meningitidis . Trends Microbiol. 25 , 510–512 (2017).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 54.

    Retchless, A.C. et al. Распространение связанной с уретритом клады Neisseria meningitidis в США с одновременным приобретением N.gonorrhoeae аллелей. BMC Genom. 19 , 176 (2018).

    Google Scholar

  • 55.

    Мур, П. С., Ривз, М. В., Шварц, Б., Геллин, Б. Г. и Брум, К. В. Межконтинентальное распространение эпидемической группы штамма A Neisseria meningitidis . Lancet 2 , 260–263 (1989).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 56.

    Morelli, G. et al. Клональное происхождение и микроэволюция Neisseria meningitidis в течение 30 лет распространения эпидемии. Мол. Microbiol. 25 , 1047–1064 (1997).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 57.

    Caugant, D. A. et al. Молекулярная характеристика изолятов инвазивного менингококка из стран Африканского пояса менингита перед введением конъюгированной вакцины серогруппы А. PLOS ONE 7 , e46019 (2012).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 58.

    Lamelas, A. et al. Возникновение новой эпидемии Neisseria meningitidis клон серогруппы A в африканском поясе менингита: картина геномных изменений, опосредующих уклонение от иммунитета, с высоким разрешением. мБио 5 , e01974-14 (2014). Геномное исследование, показывающее эволюционные изменения, происходящие во время клонального замещения в пределах линии передачи серогруппы А в африканском поясе менингита, и подчеркивающее роль гликозилирования белков для уклонения от иммунитета.

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 59.

    Уоткинс, Э. Р. и Мэйден, М. С. Метаболический сдвиг в возникновении гиперинвазивных пандемических менингококковых линий. Sci. Отчет 7 , 41126 (2017).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 60.

    Diermayer, M. et al. Эпидемия менингококковой инфекции серогруппы B в Орегоне: развивающаяся эпидемиология штамма ЕТ-5. JAMA 281 , 1493–1497 (1999).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 61.

    Rouaud, P. et al. Длительная вспышка менингококковой инфекции B в департаменте Приморская Сена, Франция, с января 2003 г. по июнь 2005 г. евро Surveill. 11 , 178–181 (2006).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 62.

    Harrison, O.Б., Брей, Дж. Э., Мэйден, М. К. и Кугант, Д. А. Геномный анализ эволюции и глобального распространения гиперинвазивной менингококковой линии 5. EBioMedicine 2 , 234–243 (2015).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 63.

    Hill, D. M. et al. Геномная эпидемиология возрастных менингококковых линий в национальном эпиднадзоре: наблюдательное когортное исследование. Lancet Infect. Дис. 15 , 1420–1428 (2015).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 64.

    Bratcher, H. B. et al. Создание Европейской библиотеки геномов коллекции штаммов менингококков (EMSC-GL) на эпидемиологический период с 2011 по 2012 год. Евро Surveill . 23 (2018).

  • 65.

    Brehony, C. et al. Распределение типов последовательностей антигенов Bexsero® (BAST) в изолятах инвазивного менингококка: значение для иммунизации. Вакцина 34 , 4690–4697 (2016).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 66.

    Yazdankhah, S. P. & Caugant, D. A. Neisseria meningitidis : обзор состояния носителя. J. Med. Microbiol. 53 , 821–832 (2004).

    PubMed

    Google Scholar

  • 67.

    Caugant, D. A., Tzanakaki, G.& Kriz, P. Уроки исследований менингококкового носительства. FEMS Microbiol. Ред. 31 , 52–63 (2007).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 68.

    Jones, C.H. et al. Сравнение фенотипических и генотипических подходов к типированию капсул Neisseria meningitidis с использованием коллекций инвазивных и носящих изолятов. J. Clin. Microbiol. 54 , 25–34 (2016).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 69.

    Tzeng, Y. L., Thomas, J. & Stephens, D. S. Регулирование капсулы в Neisseria meningitidis . Крит. Rev. Microbiol. 42 , 759–772 (2016).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 70.

    Ispasanie, E. et al. Спонтанные точечные мутации в локусе синтеза капсулы, приводящие к структурным и функциональным изменениям капсулы в популяциях менингококков серогруппы А. Вирулентность 9 , 1138–1149 (2018).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 71.

    Claus, H., Maiden, M.C., Maag, R., Frosch, M. & Vogel, U. Многие переносимые менингококки не имеют генов, необходимых для синтеза и транспортировки капсул. Микробиология 148 , 1813–1819 (2002).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 72.

    Ganesh, K. et al. Молекулярная характеристика инвазивной капсулы null Neisseria meningitidis в Южной Африке. BMC Microbiol. 17 , 40 (2017).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 73.

    Neri, A. et al. Изоляты носительства менингококка с нулевым локусом капсулы преобладают среди старшеклассников в неэндемичный период, Италия, 2012–2013 гг. Внутр. J. Med. Microbiol. 309 , 182–188 (2019).

    PubMed

    Google Scholar

  • 74.

    Xu, Z., Zhu, B., Xu, L., Gao, Y. & Shao, Z. Первый случай инфекции нулевого локуса капсулы Neisseria meningitidis в Китае. Заражение. Дис. 47 , 591–592 (2015).

    Google Scholar

  • 75.

    Diallo, K. et al. Иерархический геномный анализ переносимой и инвазивной серогруппы A Neisseria meningitidis во время эпидемии 2011 года в Чаде. BMC Genom. 18 , 398 (2017).

    Google Scholar

  • 76.

    Ren, X. et al. Геномный, транскриптомный и фенотипический анализ изолятов Neisseria meningitidis от больных и их семейных контактов. mSystems 2 , e00127-17 (2017). Сравнение близкородственных менингококков, связанных с заболеванием и носительством, с использованием комбинации генетических и фенотипических инструментов для понимания механизмов, связанных с вирулентностью.

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 77.

    Sevestre, J. et al. Дифференциальная экспрессия рецептора гемоглобина, HmbR, между носителями и инвазивными изолятами Neisseria meningitidis способствует вирулентности: уроки клональной вспышки. Вирулентность 9 , 923–929 (2018).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 78.

    Дэвидсен Т. и Тонджум Т. Динамика генома менингококков. Nat. Rev. Microbiol. 4 , 11–22 (2006).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 79.

    Alfsnes, K. et al. Геномный взгляд на экспериментальную внутривидовую и межвидовую трансформацию аллеля устойчивости к рифампицину в Neisseria meningitidis . Microb. Геном . 4 , e000222 (2018).

    PubMed Central

    Google Scholar

  • 80.

    Амбур, О. Х., Фрай, С. А. и Тонджум, Т. Новая функциональная идентичность последовательности захвата ДНК при трансформации и ее присутствие в терминаторах транскрипции. J. Bacteriol. 189 , 2077–2085 (2007).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 81.

    Фрай, С. А., Нильсен, М., Тёнджум, Т. и Амбур, О. Х. Диалекты последовательности захвата ДНК у Neisseriaceae. PLOS Genet. 9 , e1003458 (2013).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 82.

    Lamelas, A. et al. Утрата геномного разнообразия в клоне Neisseria meningitidis из-за узкого места колонизации. Genome Biol. Evol. 10 , 2102–2109 (2018).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 83.

    Мэйнард Смит, Дж., Смит, Н. Х., О’Рурк, М. и Спратт, Б. Г. Насколько клональны бактерии ? Proc. Natl Acad. Sci. USA 90 , 4384–4388 (1993).

    Google Scholar

  • 84.

    Tibayrenc, M. & Ayala, F. J. Насколько клонированы виды Neisseria ? Возвращение к модели эпидемической клональности. Proc. Natl Acad. Sci. США 112 , 8909–8913 (2015).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 85.

    Ахтман М. и Вагнер М. Разнообразие микробов и генетическая природа видов микробов. Nat. Rev. Microbiol. 6 , 431–440 (2008).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 86.

    Zhu, P. et al. Подходящие генотипы и варианты ускользания подгруппы III Neisseria meningitidis во время трех пандемий эпидемического менингита. Proc. Natl Acad. Sci. USA 98 , 5234–5239 (2001).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 87.

    Siena, E. et al. Прогнозирование in-silico и проверка глубокого секвенирования ДНК указывают на фазовые вариации в 115 генах Neisseria meningitidis . BMC Genom. 17 , 843 (2016).

    Google Scholar

  • 88.

    Saunders, N.J. et al. Связанные с повторами гены вариабельной фазы в полной последовательности генома Neisseria meningitidis штамм MC58. Мол. Microbiol. 37 , 207–215 (2000).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 89.

    Ванфорд, Дж. Дж., Грин, Л. Р., Эйдли, Дж. И Бейлисс, К. Д. Фазомный анализ патогенных и комменсальных видов Neisseria расширяет известный репертуар генов фазовых переменных и выделяет общие стратегии адаптации. PLOS ONE 13 , e0196675 (2018).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 90.

    Шриханта, Ю. Н., Магуайр, Т. Л., Стейси, К. Дж., Гриммонд, С. М. и Дженнингс, М. П. Фазарион: генетическая система, контролирующая скоординированное случайное переключение экспрессии нескольких генов. Proc. Natl Acad. Sci. США 102 , 5547–5551 (2005).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 91.

    Bayliss, C. D. et al. Neisseria meningitidis Ускользание от бактерицидной активности моноклонального антитела опосредовано изменением фазы lgtG и усилено мутаторным фенотипом. Заражение. Иммун. 76 , 5038–5048 (2008).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 92.

    Green, L. R. et al. Фазовое изменение NadA в инвазивных изолятах Neisseria meningitidis влияет на оценки охвата вакциной 4C-MenB, вакциной MenB. J. Clin. Microbiol. 56 , e00204 (2018).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 93.

    Tauseef, I. et al. Влияние комбинации и фазовой изменчивости рецепторов гемоглобина HmbR и HpuAB на вирулентность менингококков. Микробиология 157 , 1446–1456 (2011).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 94.

    Lucidarme, J. et al. Распределение и фазовая изменчивость «in vivo» рецепторов гемоглобина при инвазивном менингококковом заболевании серогруппы B: генотипический и фенотипический анализ. PLOS ONE 8 , e76932 (2013).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 95.

    Lewis, L.A. et al. Фазовое изменение HpuAB и HmbR, двух разных рецепторов гемоглобина Neisseria meningitidis DNM2. Мол. Microbiol. 32 , 977–989 (1999).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 96.

    Richardson, A. R. & Stojiljkovic, I. Исправление рассогласования и регулирование фазовых изменений в Neisseria meningitidis . Мол. Microbiol. 40 , 645–655 (2001).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 97.

    Мартин П., Сан Л., Худ Д. В. и Моксон Э. Р. Участие генов поддержания генома в регуляции частот фазовых вариаций у Neisseria meningitidis . Микробиология 150 , 3001–3012 (2004).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 98.

    Green, L.R. et al. Потенцирование фазовых изменений во множестве белков внешней мембраны во время распространения гиперинвазивной линии передачи Neisseria meningitidis серогруппы W ST-11. J. Infect. Дис. 220 , 1109–1117 (2019).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 99.

    Бикл Т. А. и Крюгер Д. Х. Биология рестрикции ДНК. Microbiol. Ред. 57 , 434–450 (1993).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 100.

    Атак, Дж. М., Янг, Ю., Сейб, К. Л., Чжоу, Ю. и Дженнингс, М. П. Обзор систем рестрикции-модификации типа III обнаруживает многочисленные новые эпигенетические регуляторы, контролирующие регуляторы фазовой переменной; фазоварионы. Nucleic Acids Res. 46 , 3532–3542 (2018).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 101.

    Сейб К. Л., Джен Ф. Э., Скотт А. Л., Тан А. и Дженнингс М. П. Фазовые вариации ДНК-метилтрансфераз и регуляция вирулентности и уклонения от иммунитета у патогенных Neisseria . Pathog. Дис. 75 , ftx080 (2017). Обзор, описывающий важность эпигенетических изменений, опосредованных метлитрансферазами ДНК с переменной фазой, у патогенных видов Neisseria .

    Google Scholar

  • 102.

    Сриханта, Ю. Н., Фокс, К. Л. и Дженнингс, М. П. Фазовый вариант: изменение фазы ДНК-метилтрансфераз типа III контролирует скоординированное переключение во множестве генов. Nat. Rev. Microbiol. 8 , 196–206 (2010).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 103.

    Филлипс, З. Н., Хусна, А. У., Дженнингс, М.П., Сейб, К. Л. и Атак, Дж. М. Фазварионы бактериальных патогенов — фазовые эпигенетические регуляторы, возникающие из систем рестрикции-модификации. Микробиология 165 , 917–928 (2019).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 104.

    Tan, A. et al. Распределение ДНК-метилтрансфераз типа III modA, modB и modD среди генотипов Neisseria meningitidis : значение для регуляции генов и вирулентности. Sci. Отчет 6 , 21015 (2016).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 105.

    Srikhanta, Y. N. et al. Фазварионы опосредуют случайное переключение экспрессии генов у патогенной Neisseria . PLOS Pathog. 5 , e1000400 (2009).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 106.

    Jen, F.Э., Сейб, К. Л. и Дженнингс, М. П. Фазварионы опосредуют эпигенетическую регуляцию чувствительности к антимикробным препаратам у Neisseria meningitidis . Антимикробный. Агенты Chemother. 58 , 4219–4221 (2014).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 107.

    Seib, K. L. et al. Специфичность эпигенетического регулятора ModA11, ModA12 и ModD1 N 6 -аденин-ДНК-метилтрансфераз Neisseria meningitidis.Nucleic Acids Res. 43 , 4150–4162 (2015).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 108.

    Бхат, А. Х., Мэйти, С., Гири, К. и Амбатипуди, К. Гликозилирование белков: сладкое или горькое для бактериальных патогенов? Крит. Rev. Microbiol. 45 , 82–102 (2019).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 109.

    Børud, B. et al. Расширенное разнообразие гликанов в системе гликозилирования бактериальных белков связано с аллельными полиморфизмами и минимальными генетическими изменениями в гене гликозилтрансферазы. Мол. Microbiol. 94 , 688–699 (2014).

    PubMed

    Google Scholar

  • 110.

    Gault, J. et al. Neisseria meningitidis пили типа IV, состоящие из пилинов с неизменной последовательностью, замаскированы многосайтовым гликозилированием. PLOS Pathog. 11 , e1005162 (2015).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 111.

    Mubaiwa, T. D., et al. Сладкая сторона патогенного Neisseria : роль взаимодействий гликанов в колонизации и болезни. Pathog. Дис . 75 , ftx063 (2017).

    PubMed Central

    Google Scholar

  • 112.

    Børud, B. et al. Генетический и молекулярный анализы показывают эволюционную траекторию синтеза гликанов в системе гликозилирования бактериальных белков. Proc. Natl Acad. Sci. США 108 , 9643–9648 (2011).

    PubMed

    Google Scholar

  • 113.

    Børud, B., Bårnes, G. K., Brynildsrud, O. B., Fritzsønn, E. & Caugant, D. A. Генотипическая и фенотипическая характеристика О-связанной системы гликозилирования белков выявляет высокое разнообразие гликанов в парных изолятах менингококкового носительства. J. Bacteriol. 200 , e00794–17 (2018).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 114.

    Didelot, X., Walker, A. S., Peto, T. E., Crook, D. W. & Wilson, D. J. Эволюция бактериальных патогенов внутри хозяина. Nat. Rev. Microbiol. 14 , 150–162 (2016).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 115.

    Клугаммер, Дж. И др. Сравнительное секвенирование генома выявляет генетические изменения внутри хозяина у Neisseria meningitidis во время инвазивного заболевания. PLOS ONE 12 , e0169892 (2017). Ультра-глубокий анализ секвенирования пар штаммов глотки и крови, выделенных у четырех пациентов, выявил мутации, затрагивающие преимущественно гены непредвиденных обстоятельств, участвующие в биогенезе пилуса IV типа.

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 116.

    Lees, J. A. et al. Крупномасштабный геномный анализ не показывает никаких доказательств адаптации патогенов между кровью и нишами спинномозговой жидкости при бактериальном менингите. Microb. Геном. 3 , e000103 (2017).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 117.

    Omer, H. et al. Генотипические и фенотипические модификации Neisseria meningitidis после случайного пассажа человека. PLOS ONE 6 , e17145 (2011).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 118.

    Alamro, M. et al. Фазовое изменение опосредует снижение экспрессии поверхностных белков во время стойкого менингококкового носительства. Заражение. Иммун. 82 , 2472–2484 (2014).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 119.

    Bårnes, G. K. et al. Полное секвенирование генома выявляет генетические изменения внутри хозяина у парных изолятов носительства менингококка из Эфиопии. BMC Genom. 18 , 407 (2017).

    Google Scholar

  • 120.

    Bille, E. et al. Хромосомно интегрированный бактериофаг в инвазивных менингококках. J. Exp. Med. 201 , 1905–1913 (2005).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 121.

    Bille, E. et al. Связь бактериофага с менингококковой инфекцией у молодых людей. PLOS ONE 3 , e3885 (2008).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 122.

    Сиена, Э., Бодини, М. и Медини, Д. Взаимодействие между факторами вирулентности и изменчивости как потенциальный фактор инвазивного менингококкового заболевания. Comput. Struct. Biotechnol. J. 16 , 61–69 (2018). Эта статья поддерживает гипотезу о том, что инвазивное менингококковое заболевание возникает из-за способности бактерии развивать фенотипические варианты посредством стохастического набора репертуара факторов вирулентности.

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 123.

    Schoen, C., Kischkies, L., Elias, J. & Ampattu, B.J. Метаболизм и вирулентность у Neisseria meningitidis . Фронт. Клетка. Заразить. Microbiol. 4 , 114 (2014).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 124.

    Müller, M. G., Ing, J. Y., Cheng, M.К. В., Флиттер, Б. А. и Мо, Г. Р. Идентификация кодируемого фагом Ig-связывающего белка из инвазивного Neisseria meningitidis . J. Immunol. 191 , 3287–3296 (2013).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 125.

    Brynildsrud, O. B. et al. Приобретение генов вирулентности штаммом-носителем привело к продолжающейся эпидемии менингококковой инфекции в Западной Африке. Proc.Natl Acad. Sci. США 115 , 5510–5515 (2018). Исследование, показывающее, как приобретение нескольких генов вирулентности доброкачественным штаммом-носителем менингококка может иметь серьезные последствия для общественного здравоохранения.

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 126.

    Dull, P. M. & McIntosh, E. D. Разработка менингококковой вакцины — от гликоконъюгатов против MenACWY до белков против MenB — потенциал для широкой защиты от менингококковой инфекции. Вакцина 30 , B18 – B25 (2012).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 127.

    Велла, М. и Пейс, Д. Гликоконъюгированные вакцины: обновленная информация. Мнение эксперта. Биол. Ther. 15 , 529–546 (2015).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 128.

    Chen, W. H. et al. Безопасность и иммуногенность пятивалентной менингококковой конъюгированной вакцины, содержащей серогруппы A, C, Y, W и X, у здоровых взрослых: одноцентровое двойное слепое рандомизированное контролируемое исследование фазы 1. Lancet Infect. Дис. 18 , 1088–1096 (2018).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 129.

    Christodoulides, M. & Heckels, J. Новые подходы к разработке вакцины Neisseria meningitidis . Pathog. Дис . 75 , ftx033 (2017).

    Google Scholar

  • 130.

    Сетте А. и Раппуоли Р. Обратная вакцинология: разработка вакцин в эпоху геномики. Иммунитет 33 , 530–541 (2010).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 131.

    Раппуоли, Р., Пицца, М., Масиньяни, В. и Вадивелу, К. Менингококковая вакцина B (4CMenB): путь от исследований к реальному опыту. Expert Rev. Vaccines 17 , 1111–1121 (2018).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 132.

    Murphy, E. et al. Разнообразие последовательностей вакцинного кандидата на белок, связывающий фактор H, в эпидемиологически значимых штаммах серогруппы B Neisseria meningitidis . J. Infect. Дис. 200 , 379–389 (2009).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 133.

    Perez, J. L. et al. От исследований до лицензирования и не только: клиническая разработка MenB-FHbp, менингококковой вакцины B с широкой защитой. Expert Rev. Vaccines 17 , 461–477 (2018).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 134.

    Hoiseth, S. K. et al. Проведенная в нескольких странах оценка Neisseria meningitidis H-связывающих белков серогруппы B и их значение для охвата вакцинацией в различных возрастных группах. Pediatr. Заразить. Дис. J. 32 , 1096–1101 (2013).

    PubMed

    Google Scholar

  • 135.

    Rodrigues, C. M. C. et al. Геномный надзор за антигенными вариантами вакцины 4CMenB среди вызывающих болезнь изолятов Neisseria meningitidis , Соединенное Королевство, 2010–2016 гг. Emerg. Заразить. Дис. 24 , 673–682 (2018).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 136.

    Murray, E. G. D. Менингококковая инфекция мужских мочеполовых путей и склонность к спутанности сознания с гонококковой инфекцией. Урол. Кутан. Ред. 43 , 739–741 (1939).

    Google Scholar

  • 137.

    Гиван, К. Ф., Томас, Б. В. и Джонстон, А. Г. Изоляция Neisseria meningitidis из уретры, шейки матки и анального канала: дальнейшие наблюдения. руб. Дж. Венер. Дис. 53 , 109–112 (1977).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 138.

    Urra, E. et al. Орогенитальная передача Neisseria meningitidis серогруппы C подтверждена методами генотипирования. Eur. J. Clin. Microbiol. Заразить. Дис. 24 , 51–53 (2005).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 139.

    Ito, S. et al. Мужской негонококковый уретрит: от микробиологической этиологии до демографических и клинических особенностей. Внутр. J. Urol. 23 , 325–331 (2016).

    PubMed

    Google Scholar

  • 140.

    Bazan, J. A. et al. Большой кластер Neisseria meningitidis уретрита в Колумбусе, Огайо, 2015. Clin. Заразить. Дис. 65 , 92–99 (2017).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 141.

    Toh, E. et al. Neisseria meningitidis Комплексные изоляты ST11, ассоциированные с негонококковым уретритом, Индиана, США, 2015–2016 гг. Emerg. Заразить. Дис. 23 , 336–339 ​​(2017).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 142.

    млн лет назад, K. C. et al. Геномная характеристика уретрита Neisseria meningitidis показывает, что широкий спектр штаммов N. meningitidis может вызывать уретрит. J. Clin. Microbiol. 55 , 3374–3383 (2017).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 143.

    Taha, M. K. et al. Эволюционные события, связанные со вспышкой менингококковой инфекции у мужчин, практикующих секс с мужчинами. PLOS ONE 11 , e0154047 (2016).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 144.

    Genders, R. E., Spitaels, D., Jansen, C. L., van den Akker, T. W. & Quint, K. D. Вводящий в заблуждение мазок из уретры с полиморфноядерными лейкоцитами и внутриклеточными диплококками; Отчет о случае уретрита, вызванного Neisseria meningitidis . J. Med. Microbiol. 62 , 1905–1906 (2013).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 145.

    Tzeng, Y. L. et al. Гетерорезистентность к модельному антимикробному пептиду полимиксину B в развивающейся ветви Neisseria meningitidis клады уретрита 11.2: мутации в опероне pilMNOPQ. Мол. Microbiol. 111 , 254–268 (2019).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 146.

    Хилл, Д. Дж., Гриффитс, Н. Дж., Бородина, Э. и Вирджи, М. Клеточная и молекулярная биология колонизации и инвазивного заболевания Neisseria meningitidis . Clin. Sci. 118 , 547–564 (2010).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 147.

    Massari, P. et al. Передний край: иммунная стимуляция нейссериальных поринов зависит от Toll-подобного рецептора 2 и MyD88. J. Immunol. 168 , 1533–1537 (2002).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 148.

    Woodhams, K. L., Chan, J. M., Lenz, J. D., Hackett, K. T. & Dillard, J. P. Высвобождение пептидогликанового фрагмента из Neisseria meningitidis . Заражение. Иммун. 81 , 3490–3498 (2013).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 149.

    Bennett, J. S. et al. Геномный подход к бактериальной таксономии: исследование и предлагаемая реклассификация видов в пределах рода Neisseria . Микробиология 158 , 1570–1580 (2012).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 150.

    Katoh, K. & Standley, M. Программа множественного выравнивания последовательностей MAFFT, версия 7: улучшения производительности и удобства использования. Мол.Биол. Evol. 30 , 772–780 (2013).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 151.

    Брайант Д. и Моултон В. Сеть соседей: агломеративный метод построения филогенетических сетей. Мол. Биол. Evol. 21 , 255–265 (2004).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 152.

    Huson, D. H.И Брайант Д. Руководство пользователя SplitsTree4 V4. 13.1. (2010).

  • 153.

    Budroni, S. et al. Neisseria meningitidis имеет структуру, связанную с системами рестрикционной модификации, которые модулируют гомологичную рекомбинацию. Proc. Natl Acad. Sci. США 108 , 4494–4499 (2011).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 154.

    Claus, H. et al. Генетический анализ менингококков, переносимых детьми и молодыми людьми. J. Infect. Дис. 191 , 1263–1271 (2005).

    PubMed

    Google Scholar

  • 155.

    Bentley, S. D. et al. Рассмотрение механизмов генетической изменчивости менингококков посредством сравнительного анализа штамма FAM18 серогруппы С. PLOS Genet. 3 , e23 (2007).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 156.

    Parkhill, J.и другие. Полная последовательность ДНК штамма серогруппы A Neisseria meningitidis Z2491. Nature 404 , 502–506 (2000).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 157.

    Tettelin, H. et al. Полная последовательность генома Neisseria meningitidis , штамм MC58 серогруппы B. Наука 287 , 1809–1815 (2000).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • Различия между Neisseria gonorrhoeae и Neisseria meningitidis

    S.№

    Характеристики

    Neisseria gonorrhoeae

    Neisseria meningitidis

    9192 9192 9192 9192 9192

    Называется менингококком.
    2 Агенты N. gonorrhoeae является возбудителем гонореи. Н.meningitidis — основная причина цереброспинального менингита.
    3 Разработка вакцины Менингококковые инфекции серогрупп A, B, C, Y и W-135 можно предотвратить с помощью вакцин.
    4 Морфология колоний N. gonorrhoeae образует гладкие, круглые, влажные, однородные

    серо-коричневые колонии с зеленоватым цветом под ними на первичной среде для выделения.

    Н.meningitides образует гладкие, круглые, влажные, однородные

    большие серо-коричневые колонии с блестящей поверхностью и целыми краями.

    5 Морфология N. gonorrhea имеет форму почки с вогнутыми концами. N. meningitidis — диплококк полукруглой формы с плоскими сходящимися концами.
    6 Autolyse May autolyse Autolyse
    7 Мальтозная ферментация Нет Ред.gonorrhoeae не восстанавливает нитриты. N. meningitidis может восстанавливать нитриты в низких концентрациях.
    9 Рост на кровяном агаре N. gonorrhoeae растет меньше на

    лунках на кровяном агаре, чем на N. meningitidis.

    N. meningitidis лучше растет на кровяном агаре, чем N. gonorrhoeae.
    10 Капсула Нет Да.Капсула обладает антифагоцитарным действием и является важным фактором вирулентности.
    11 Место заражения В первую очередь вызывает инфекцию аногенитального тракта. Колонизирует верхние дыхательные пути как комменсал и иногда поражает

    , вызывая системные заболевания.

    12 Патогены Всегда считается патогеном. Не всегда считается патогеном.
    13 Производство ферментов Не производит гамма-глутамиламинотрансферазу. Он продуцирует гамма-глутамиламинотрансферазу.
    14 Сбор образцов Транспортный мазок эндоцервикса, уретры, прямой кишки, глотки, конъюнктивы, крови, суставной жидкости, аспиратов из кожных поражений. Забрать спинномозговую жидкость (CSF) и кровь, мазки с поражений кожи и носоглотки.
    15 Производство Β-лактамаз Обычное Редкое
    16 Движение Движение N.gonorrhoeae происходит с меньшей скоростью. Перемещение N. meningitidis происходило с большей скоростью и с большим количеством втягивающихся пилей.
    17 Пили N. gonorrhoeae чаще всего перемещается с использованием одной втягивающейся пилуса. N. meningitidis Чаще всего используются четыре пили.
    18 Распространенность и смертность Инфекции N. gonorrhoeae имеют высокую распространенность и низкую смертность N.meningitidis имеют низкую распространенность и высокую смертность.
    19 Супербактерия Считается «супербактериями» Не считается супербактериями
    20 Патогенез конгорита, конгорита инфекционного воспаления или уретрит, простатит и орхит. Вызывает менингит и другие формы менингококковой инфекции, такие как менингококкемия, опасный для жизни сепсис.

    Neisseria sp. 83E34

    Выберите раздел слева для просмотра содержимого.

    Обзор

    — Neisseria sp. 83E34
    Белки i

    Количество записей белков, связанных с этим протеомом: записи UniProtKB для обычных протеомов или записи UniParc для избыточных протеомов ( подробнее … )

    2158
    Количество генов i

    Это общее количество уникальных генов, обнаруженных в наборе протеомов, вычисленное алгоритмически.Для каждого гена из протеома выбирается одна репрезентативная последовательность белка. По возможности, в качестве представителей выбираются проверенные (Swiss-Prot) белковые последовательности.

    — Загрузить одну последовательность белка на ген (FASTA)
    Идентификатор протеома i

    Идентификатор протеома (UPID) — это уникальный идентификатор, присвоенный набору белков, составляющих proteome . Он состоит из символов «ВВЕРХ», за которыми следуют 9 цифр, стабилен во всех выпусках и поэтому может использоваться для цитирования протеома UniProt.

    Подробнее …

    UP000050477
    Таксономия 16

    Штамм 83E34
    Последнее изменение 21 июля 2020 г.
    Сборка и аннотация генома i

    Идентификатор сборки генома (подробнее … )

    GCA_001308015.1
    из ENA / EMBL
    полный
    Пан протеом i

    Пан протеом — это полный набор белков, которые, как считается, экспрессируются группой тесно связанных организмов (например, несколькими штаммами одного и того же вида бактерий).

    Еще…

    Этот протеом является частью
    Neisseria wadsworthii 9715
    пан протеом (фаста)
    Busco i

    Инструмент Benchmarking Universal Single-Copy Ortholog (BUSCO) используется для протеомов эукариот и бактерий для количественной оценки полноты данных протеома UniProt с точки зрения ожидаемого содержания генов. Показатели BUSCO включают процентное соотношение полных (C) однокопийных (S) генов, полных (C) дублированных (D) генов, фрагментированных (F) и отсутствующих (F) генов, а также общее количество ортологичных кластеров (n) используется в оценке BUSCO.

    C: 99,4% [S: 99,4%, D: 0%], F: 0%, M: 0,6%, n: 804 neisseriales_odb10
    Полнота i

    Детектор полного протеома (CPD) — это алгоритм, который использует статистическую оценку полноты и качества протеомов в UniProt, глядя на размеры таксономически близких протеомов. Возможные значения: Standard, Close to Standard и Outlier.

    Стандарт

    Компоненты

    i

    Геномные компоненты, кодирующие протеом

    СкачатьПросмотреть все белки

    Какова роль Neisseria meningitidis (N meningitides) в развитии менингококкового менингита?

    Автор

    Родриго Хасбун, доктор медицины, магистр здравоохранения Адъюнкт-профессор медицины, отделение инфекционных заболеваний, Медицинская школа Техасского университета в Хьюстоне

    Раскрытие: Получен исследовательский грант от: Biofire
    Спикер Biofire.

    Главный редактор

    Майкл Стюарт Бронз, доктор медицины Дэвид Росс Бойд Профессор и председатель медицинского факультета, кафедра внутренней медицины, кафедра медицины, Научный центр здравоохранения Университета Оклахомы; Магистр Американского колледжа врачей; Научный сотрудник Американского общества инфекционных болезней; Член Королевского колледжа врачей, Лондон

    Майкл Стюарт Бронз, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, Американский колледж врачей, Американская медицинская ассоциация, Ассоциация профессоров медицины, Общество инфекционных болезней Америки, Медицинская ассоциация штата Оклахома, Южное общество клинических исследований

    Раскрытие: Ничего не говорится.

    Благодарности

    Suur Biliciler, MD Нейромышечный научный сотрудник, отделение неврологии, Медицинский колледж Бейлора

    Раскрытие: Ничего не раскрывать.

    Тимоти С. Браннан, доктор медицины Директор отделения неврологии, Медицинский центр Джерси-Сити; Профессор кафедры неврологии Школы последипломного медицинского образования Сетон Холл

    Раскрытие: Ничего не раскрывать.

    Роберт Кавальер, доктор медицины Доцент кафедры неврологии, нейрохирургии и медицины, Медицинский колледж Университета штата Огайо

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Сидней Э. Кроул, доктор медицины Директор отделения невропатологии, профессор кафедры патологии и лабораторной медицины Медицинского колледжа Пенсильванского университета Ганемана

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Франсиско де Ассис Акино Гондим, доктор медицинских наук, магистр наук, доктор философии Адъюнкт-профессор неврологии, кафедра неврологии и психиатрии, медицинский факультет Университета Сент-Луиса

    Франсиско де Ассис Акино Гондим, доктор медицинских наук, магистр наук, доктор философии является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неврологии, Американской ассоциации нервно-мышечной и электродиагностической медицины и Общества двигательных расстройств

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Алан Гринберг, доктор медицины Директор, доцент кафедры внутренней медицины, Медицинский центр Джерси-Сити, Университет Сетон-Холл

    Алан Гринберг, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha и Американского колледжа врачей

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Рональд Гринфилд, доктор медицины Профессор, кафедра внутренней медицины, Медицинский колледж Университета Оклахомы

    Рональд А. Гринфилд, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа врачей, Американской федерации медицинских исследований, Американского общества микробиологии, Центрального общества клинических исследований, Американского общества инфекционных болезней, Американского общества медицинской микологии, Фи Бета Каппа, Южное общество клинических исследований и Юго-западная ассоциация клинической микробиологии

    Раскрытие информации: Pfizer Honoraria Выступление и обучение; Gilead Honoraria Выступление и обучение; Орто Макнил Гонорария Выступление и преподавание; Abbott Honoraria Выступление и преподавание; Астеллас Хонорария Выступление и обучение; Кубистская Гонорария Выступление и преподавание; Лесная фармацевтика Говорит и преподает

    Дж. Стивен Хафф, доктор медицины Доцент кафедры неотложной медицины и неврологии, факультет неотложной медицины, Медицинский факультет Университета Вирджинии

    Дж. Стивен Хафф, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неотложной медицины, Американской академии неврологии, Американского колледжа врачей неотложной помощи и Общества академической неотложной медицины

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Лютфи Инчесу, доктор медицины Профессор отделения радиологии медицинского факультета Университета Ондокуз Майис; Заведующий отделением нейрорадиологии и МРТ отделения радиологии, Университетская больница Ондокуз Майис, Турция

    Лютфи Инчесу, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американское общество нейрорадиологии и Радиологическое общество Северной Америки

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Ума Айер, доктор медицины Врач-резидент, отделение неврологии, Медицинский центр на севере штата Нью-Йорка

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Pieter R Kark, MD, MA, FAAN, FACP Инструктор по паллиативной помощи, The Lifetime Healthcare Companies

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Майкл Р. Китинг, доктор медицины Доцент кафедры инфекционных болезней, кафедра медицины, Медицинский колледж клиники Мэйо

    Майкл Р. Китинг, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа врачей, Американской медицинской ассоциации, Американского общества микробиологов, Американского общества трансплантологии, Американского общества инфекционных болезней и Международного общества хозяев с ослабленным иммунитетом

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Анил Хосла, MBBS, MD Доцент кафедры радиологии Медицинской школы Университета Сент-Луиса, Медицинский центр по делам ветеранов Сент-Луиса

    Анил Хосла, MBBS, MD является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа радиологии, Американского общества рентгеновских лучей, Американского общества нейрорадиологии, Североамериканского общества позвоночника и Радиологического общества Северной Америки

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Джон Кинг, доктор медицины Профессор медицины, начальник отдела инфекционных болезней, директор клиники вирусной терапии гепатита, Центр медицинских наук Университета штата Луизиана; Консультант по инфекционным заболеваниям, Медицинский центр по делам ветеранов Овертон-Брукс

    Джон Кинг, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской ассоциации развития науки, Американского колледжа врачей, Американской федерации медицинских исследований, Американского общества микробиологии, Ассоциации профессоров узких специальностей, Американского общества инфекционных болезней, и Sigma Xi

    Раскрытие информации: MERCK Нет Другое

    Марджори Лазофф, MD , главный редактор, Medical Computing Review

    Марджори Лазофф, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, Американского колледжа врачей скорой помощи, Американской ассоциации медицинской информатики и Общества академической неотложной медицины

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Glenn Lopate, MD Доцент кафедры неврологии отделения нервно-мышечных заболеваний Медицинской школы Вашингтонского университета; Директор неврологической клиники St Louis ConnectCare; Консультант, отделение неврологии, Барнс-Еврейская больница

    Гленн Лопейт, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неврологии, Американской ассоциации нервно-мышечной и электродиагностической медицины и Phi Beta Kappa

    .

    Раскрытие информации: Грант Бакстера / исследовательские фонды Прочее; Грант Amgen / исследовательские фонды Нет

    Джозеф Ричард Маски, доктор медицины Профессор медицины, профессор профилактической медицины, Медицинская школа Маунт-Синай; Директор по медицине, больничный центр Элмхерст

    Джозеф Ричард Маски, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, Американский колледж врачей, Ассоциация профессоров медицины и Королевское медицинское общество

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    C Дуглас Филлипс, доктор медицины Директор отделения визуализации головы и шеи, отделение нейрорадиологии, Нью-Йоркская пресвитерианская больница, Медицинский колледж Вейл Корнелл,

    C Дуглас Филлипс, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа радиологии, Американской медицинской ассоциации, Американского общества радиологии головы и шеи, Американского общества нейрорадиологов, Ассоциации университетских радиологов и Радиологического общества Северной Америки

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Таракад С. Рамачандран, MBBS, FRCP (C), FACP Профессор неврологии, клинический профессор медицины, клинический профессор семейной медицины, клинический профессор нейрохирургии, Государственный университет Нью-Йоркского государственного медицинского университета; Заведующий отделением неврологии, Мемориальная больница Крауса Ирвинга

    Таракад С. Рамачандран, MBBS, FRCP (C), FACP является членом следующих медицинских обществ: Американская академия неврологии, Американская академия медицины боли, Американский колледж судебно-медицинских экспертов, Американский колледж международных врачей, Американский колледж управляемой помощи. Медицина, Американский колледж врачей, Американская кардиологическая ассоциация, Американская ассоциация инсультов, Королевский колледж врачей, Королевский колледж врачей и хирургов Канады, Королевский колледж хирургов Англии и Королевское медицинское общество

    Раскрытие информации: Abbott Labs Нет Нет; Тева Марион Нет Нет; Boeringer-Ingelheim Honoraria Выступление и обучение

    Раймунд Р. Разонабл, доктор медицины Консультант, Отделение инфекционных болезней, клиника Мэйо в Рочестере; Адъюнкт-профессор медицины, Медицинский колледж клиники Мэйо,

    Раймунд Р. Разонабл, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американской медицинской ассоциации, Американского общества микробиологов, Американского общества инфекционных болезней и Международного общества хозяев с ослабленным иммунитетом

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Норман С. Рейнольдс-младший, доктор медицины Невролог, Медицинский центр по делам ветеранов Милуоки; Клинический профессор Медицинского колледжа Висконсина

    Норман С. Рейнольдс-младший, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неврологии, Ассоциации военных хирургов США, Общества двигательных расстройств, Sigma Xi и Общества неврологии

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Роберт Стэнли Раст-младший, доктор медицины, магистр медицины Томас Уоррелл-младший, профессор эпилептологии и неврологии, содиректор клиники детской неврологии и эпилепсии FE Dreifuss, директор детской неврологии медицинского факультета Университета Вирджинии; Избранный председатель секции детской неврологии Американской академии неврологии

    Роберт Стэнли Раст младший, доктор медицины, магистр медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неврологии, Американского общества эпилепсии, Американского общества головной боли, Американской неврологической ассоциации, Общества детской неврологии, Международной ассоциации детской неврологии и Общества педиатрических исследований

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Прем С. Шукла, доктор медицины Заместитель председателя, доцент кафедры неотложной медицины Медицинского университета Арканзаса

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Маниш К Сингх, доктор медицины Ассистент-профессор, кафедра неврологии, преподавательский факультет, программа ординатуры по лечению боли и неврологии, Университетская больница Ганемана, Медицинский колледж Дрекселя; Медицинский директор, неврология и лечение боли, Институт нейробиологии Джерси

    Маниш К Сингх, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неврологии, Американской академии медицины боли, Американской ассоциации врачей индийского происхождения, Американского общества головной боли, Американской медицинской ассоциации и Американского общества региональной анестезии и боли. Медицина

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Ниранджан Н Сингх, доктор медицины, DNB Доцент неврологии, Медицинский факультет Университета Миссури-Колумбия

    Niranjan N Singh, MD, DNB является членом следующих медицинских обществ: Американская академия неврологии

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Mark S. Slabinski, MD, FACEP, FAAEM Вице-президент, EMP Medical Group

    Марк С. Слабински, доктор медицины, FACEP, FAAEM является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, Американской академии экстренной медицины, Американского колледжа врачей скорой помощи, Американской медицинской ассоциации и Медицинской ассоциации штата Огайо

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Джеймс Дж. Смирниотопулос, доктор медицины Профессор радиологии, неврологии и биомедицинской информатики, директор программы программы диагностической визуализации, Центр неврологии и регенеративной медицины (CNRM), Университет медицинских наук унифицированных служб

    Джеймс Дж. Смирниотопулос, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа радиологии, Американского общества рентгеновских лучей, Американского общества радиологии головы и шеи, Американского общества нейрорадиологов, Американского общества детской нейрорадиологии, Ассоциации университетских радиологов и Радиологическое общество Северной Америки

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Франсиско Талавера, фармацевт, доктор философии Адъюнкт-профессор, Фармацевтический колледж Медицинского центра Университета Небраски; Главный редактор Medscape Drug Reference

    Раскрытие информации: Medscape Salary Employment

    Флориан П. Томас, доктор медицины, магистр медицины, доктор медицинских наук, доктор медицинских наук. Директор отделения травм спинного мозга, Медицинский центр по делам ветеранов Сент-Луиса; Директор Центра рассеянного склероза Национального общества рассеянного склероза; Директор Центра передового опыта Ассоциации невропатологов, профессор кафедры неврологии и психиатрии, доцент Института молекулярной вирусологии и кафедры молекулярной микробиологии и иммунологии Медицинской школы Университета Сент-Луиса

    Флориан П. Томас, доктор медицины, магистр медицины, доктор философии, Drmed является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неврологии, Американской неврологической ассоциации, Американского общества параплегии, Консорциума центров рассеянного склероза и Национального общества рассеянного склероза

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Фредерик М. Винсент старший, доктор медицины Клинический профессор, кафедра неврологии и офтальмологии, Колледж медицины и остеопатии Мичиганского государственного университета

    Фредерик М. Винсент старший, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, Американская академия неврологии, Американская ассоциация нервно-мышечной и электродиагностической медицины, Американский колледж судебно-медицинских экспертов, Американский колледж судебной медицины, Американский колледж врачей, и Медицинское общество штата Мичиган

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Amir Vokshoor, MD Штатный нейрохирург, отделение нейрохирургии, хирург позвоночника, диагностическая и интервенционная помощь позвоночника, Центр здоровья Св. Иоанна

    Амир Вокшур, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, Американской ассоциации неврологических хирургов, Американской медицинской ассоциации и Североамериканского общества позвоночника

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Cordia Wan, MD Взрослый невролог, Kaiser Permanente Hawaii, Kaiser Permanente Southern California

    Кордиа Ван, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американская академия неврологии

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Эрик Л. Вайс, MD, DTM & H Медицинский директор, Управление непрерывности обслуживания и планирования действий в случае бедствий, директор по стипендии, Стипендия по медицине катастроф Медицинского центра Стэнфордского университета, председатель SUMC и LPCH Целевая группа по биотерроризму и готовности к чрезвычайным ситуациям, младший клинический сотрудник отдела развития, Департамент Хирургия (неотложная медицина), Медицинский центр Стэнфордского университета

    Эрик Л. Вайс, доктор медицины, DTM & H является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа врачей скорой помощи, Американского колледжа медицины труда и окружающей среды, Американской медицинской ассоциации, Американского общества тропической медицины и гигиены, Врачи за социальную ответственность, Юго-восточный хирургический Конгресс, Южная ассоциация онкологии, Южное клиническое неврологическое общество и Общество дикой медицины

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Лоуренс Зумо, доктор медицины Невролог, частная практика

    Лоуренс Зумо, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неврологии, Американского колледжа врачей, Американской медицинской ассоциации и Южной медицинской ассоциации

    Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

    Патогенные Neisseriae: гонорея и менингит


    В поисках самых последних новостей, обновлений и статей, касающихся микробиологии, посетите образовательный веб-сайт Американского общества микробиологов Microbe World .


    Интернет-обзор Интернет-учебника по бактериологии Тодара. «Хорошее, плохое и смертоносное» .

    Ключевые слова: Neisseria, гонококк, менингококк, менингококковый менингит, гонорея, вненатальная офтальмия, уретрит

    Neisseria gonorrhoeae

    Царство: бактерии

    Тип: Proteobacteria
    .

    Класс: Beta Proteobacteria

    Заказ: Neisseriales

    Семья: Neisseriaceae

    Род: Neisseria

    Виды: N.gonohorrhoeae

    Neisseria meningitidis

    Царство: бактерии

    Тип: Proteobacteria
    .

    Класс: Beta Proteobacteria

    Заказ: Neisseriales

    Семья: Neisseriaceae

    Род: Neisseria

    Виды: N.meningitidis

    Общие ссылки: Neisseria, Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhoeae, N gonorrhoeae, N meningitidis, диплококк, гонококк, менингококк, менингококковый менингит, менингококкемия, менингит, гонорал53



    Распечатать эту страницу

    Для поиска по всей книге введите термин или фразу в форму под

    Пользовательский поиск

    Патогенные Neisseriae: гонорея, неонатальная офтальмия и менингококковый менингит (стр. 1)

    (В этой главе 7 страниц)

    © Кеннет Тодар, доктор философии

    Neisseria gonorrhoeae

    Медицинская иллюстрация CDC

    Введение

    Neisseriaceae представляют собой семейство бета-протеобактерий.
    состоящий из грамотрицательных
    аэробный
    бактерии из четырнадцати родов ( Bergey’s 2005), в том числе Neisseria,
    Chromobacterium, Kingella,
    и Aquaspirillum.
    род
    Neisseria
    содержит два важных патогена человека, N. gonorrhoeae, и N.
    менингитидис. N. gonorrhoeae
    вызывает гонорею, а — N.
    менингитидис

    является причиной менингококкового менингита. N. gonorrhoeae
    инфекции
    имеют высокую распространенность и низкую смертность, тогда как N. meningitidis
    инфекции имеют низкую распространенность и высокую смертность.

    Neisseria
    gonorrhoeae
    инфекции передаются половым путем
    контакт
    и обычно поражают слизистые оболочки уретры у мужчин и
    эндоцервикс и уретра у женщин, хотя инфекция может
    распространять
    к различным тканям.Патогенный механизм включает
    вложение
    бактерии в эпителиальные клетки без ресничек через пили
    и
    производство липополисахаридного эндотоксина. Аналогичным образом
    липополисахарид
    из Neisseria meningitidis очень токсичен и имеет
    дополнительный
    фактор вирулентности в виде его антифагоцитарной капсулы. Оба
    патогены
    продуцируют протеазы IgA, которые способствуют вирулентности. Многие нормальные люди
    может содержать Neisseria meningitidis в верхних дыхательных путях
    тракт
    но Neisseria gonorrhoeae никогда не является частью нормальной флоры
    и
    обнаруживается только после полового контакта с инфицированным человеком (или прямого
    контакт,
    в случае инфекций у новорожденного).

    В словаре
    общественное здравоохранение и медицина
    микробиолог,
    N. gonorrhoeae часто называют
    как «гонококк», а N.
    meningitidis
    известен как «менингококк», и одна из форм
    болезнь
    это вызывает менингококцемию.

    Рис. 1. Слева: Neisseria
    gonorrhoeae
    Окраска по Граму чистой культуры; Справа: Neisseria
    гонореи

    Окраска по Граму пустулезного экссудата.

    Neisseria gonorrhoeae

    Neisseria gonorrhoeae является
    Грамотрицательный кокк, от 0,6 до 1,0
    мкм
    в диаметре, обычно видны парами со смежными плоскими сторонами
    (Фигура
    1 слева и рис. 2 ниже). Организм часто встречается
    внутриклеточно
    в полиморфно-ядерных лейкоцитах (нейтрофилах) гонореи пустулезной
    экссудат (рис. 1 справа). Фимбрии или пили, которые играют важную роль в
    приверженность,
    простираться на несколько микрометров от поверхности клетки (рис. 2 ниже).

    Рис. 2. Neisseria
    гонореи

    Neisseria
    gonorrhoeae
    имеет типичный грамотрицательный внешний
    мембрана, состоящая из белков, фосфолипидов и липополисахаридов
    (ЛПС).
    Однако нейссериальный ЛПС отличается от кишечного ЛПС своим
    разветвленный
    базальная структура олигосахарида и отсутствие повторяющегося О-антигена
    субъединицы. По этим причинам ЛПС нейссерии обозначают как липоолигосахарид .
    ( LOS ).Бактерия обычно освобождает внешнюю мембрану.
    во время роста фрагменты называются «пузырьками». Эти пузырьки содержат LOS
    и
    вероятно, играют роль в патогенезе, если они распространяются во время
    в
    течение инфекции.

    N. gonorrhoeae
    относительно хрупкий организм, восприимчивый
    к изменениям температуры, сушке, ультрафиолетовому излучению и другим условиям окружающей среды
    стрессы.
    Штаммы N. gonorrhoeae привередливы и разнообразны по своим характеристикам.
    культурный
    требования,
    чтобы среды, содержащие гемоглобин, НАД, дрожжевой экстракт и другие
    добавки
    необходимы для изоляции и роста организма.Культуры выращиваются
    при 35-36 градусах в атмосфере добавляется 3-10% CO 2 .


    глава продолжение

    Следующая страница

    © Кеннет Тодар, доктор философии.D. Все права защищены. — www.textbookofbacteriology.net

    Индуцированная Neisseria meningitidis активация каспазы-1 в врожденных иммунных клетках человека является LOS-зависимой

    Менингококковая инфекция, такая как сепсис и менингитид, характеризуется чрезмерной воспалительной реакцией.Возбудитель, Neisseria meningitidis , экспрессирует липоолигосахарид эндотоксина (LOS), который отвечает за активацию иммунных клеток и высвобождение провоспалительных цитокинов. Один из наиболее мощных провоспалительных цитокинов, интерлейкин-1 β (IL-1 β ), активируется вслед за активностью каспазы-1 во внутриклеточном мультибелковом комплексе, называемом инфламмасомой. Инфламмасомы активируются рядом микробных факторов, а также опасными молекулами с помощью двухэтапного механизма — прайминга и лицензирования активации инфламмасом — но нет доступных данных о роли активации инфламмасом при менингококковой инфекции.Целью этого исследования было выяснить, активирует ли N. meningitidis инфламмасомы и, если да, то роль LOS бактерий в этой активации. Клетки подвергали воздействию N. meningitidis , как дикого типа (FAM20), так и его LOS-дефицитного мутанта ( lpxA ), и исследовали праймирование, а также лицензирование активации инфламмасом. Родительский штамм FAM20 серогруппы C (FAM20), экспрессирующий LOS дикого типа, значительно усиливал активность каспазы-1 в нейтрофилах и моноцитах человека, тогда как lpxA не мог индуцировать активность каспазы-1, а также индуцировать ИЛ-1 β выпуска.В то время как мутант lpxA индуцировал реакцию праймирования, измеряемую как повышенная экспрессия NLRP3 и IL1B , экспрессирующий LOS FAM20 дополнительно усиливал это праймирование. Мы пришли к выводу, что, хотя компоненты N. meningitidis , не относящиеся к LOS, способствуют примированию активности инфламмасом, LOS per se следует рассматривать как центральный компонент вирулентности N. meningitidis , ответственный как за примирование, так и за лицензирование. активации инфламмасом.

    1. Введение

    Менингококки считаются комменсалами слизистой оболочки носоглотки, и, по оценкам, 10-40% населения в целом являются бессимптомными носителями, обеспечивая резервуар для этого облигатного патогена человека [1, 2]. Однако взаимосвязь между бессимптомным носительством и развитием болезни неизвестна. Neisseria meningitidis является основным возбудителем сепсиса и бактериального менингита во всем мире [3] с самой высокой заболеваемостью менингококковой инфекцией в поясе менингита в Африке к югу от Сахары, который простирается от Сенегала на западе до Эфиопии на востоке. [3, 4].Летальность колеблется от 4 до 6% при менингите до 40% при тяжелом сепсисе и септическом шоке [5]. Тяжесть менингококковой инфекции у разных людей различается: одни страдают только менингитом, а у других может развиться менингококкемия с легким или тяжелым сепсисом [6, 7]. Обычно считается, что факторы вирулентности бактерий в сочетании с уникальной иммунной системой человека определяют тяжесть заболевания.

    Вирулентность N. meningitidis зависит от нескольких факторов, включая капсульные полисахариды, экспрессию пилей IV типа (Tfp), белков внешней мембраны (Opa и Opc), поринов (PorA и PorB) и липоолигосахаридов (LOS).Сообщается, что драматическое начало менингококкового заболевания зависит от экстенсивного высвобождения LOS из внешней мембраны N. meningitidis , вызывая активацию иммунных клеток и высвобождение провоспалительных цитокинов [8]. Кроме того, эндотоксический шок, характеризующийся усиленной или вредной реакцией иммунной системы хозяина, опосредуется LOS во время менингококковой инфекции, а тяжесть менингококкового заболевания коррелирует с уровнем LOS, циркулирующим в кровотоке, поскольку это влияет на интенсивность иммунного ответа. [9, 10].Клиническим признаком инфекции патогенным возбудителем N. meningitidis является врожденный воспалительный ответ, вызванный иммунитетом хозяина, характеризующийся мощным притоком нейтрофилов. Участие нейтрофилов в развитии менингококковой инфекции обсуждается [11], но обнаружена нейтропения, связанная с плохим прогнозом [12].

    Клетки врожденной иммунной системы экспрессируют рецепторы распознавания паттернов (PRR), которые специфически воспринимают микробные структуры (PAMPS, патоген-ассоциированные молекулярные паттерны), такие как пептидогликан, липополисахарид (LPS) и микробные нуклеиновые кислоты [13, 14].PRR включают Toll-подобные рецепторы (TLR), которые обнаруживаются на поверхности клетки, и рецепторы, содержащие лейцин-богатые повторы внутриклеточного нуклеотид-связывающего домена (NLR), которые обнаруживают патогены в цитозоле. После активации некоторые NLR инициируют образование цитоплазматических мультибелковых комплексов, называемых инфламмасомами, которые способствуют активации каспазы-1, что приводит к созреванию проформ интерлейкина-1 β (IL-1 β ) и IL. -18 на биологически активные цитокины [14, 15].Менингококковая инфекция характеризуется повышенными концентрациями провоспалительных цитокинов и хемокинов, включая IL-1 β , фактор некроза опухоли (TNF), IL-6 и CXCL8 (ранее известный как IL-8) [16–18].

    Пириновый домен, содержащий 3 семейства NLR (NLRP3) может быть активирован широким спектром микробных стимулов [19, 20] с образованием инфламмасомы NLRP3, которая опосредует секрецию IL-1 β в первичных иммунных клетках, включая нейтрофилы и моноциты [21, 22]. Несмотря на то, что они относительно хорошо охарактеризованы, в настоящее время нет данных о потенциальной роли активации инфламмасом при менингококковой инфекции.Целью настоящего исследования было выяснить, опосредует ли N. meningitidis активацию воспаления, и если да, то какую роль в этом процессе играет фактор вирулентности менингококка LOS.

    2. Материалы и методы
    2.1. Клетки и бактерии Препарат

    Периферическая кровь здоровых доноров была собрана в пробирки с ЭДТА в университетской больнице Эребру. Нейтрофилы выделяли из цельной крови центрифугированием в градиенте плотности на реагентах PolymorphPrep и LymphoPrep (AXIS-SHIELD poC AS, Осло, Норвегия), как описано ранее [23, 24].Из-за отсутствия инструментов для манипуляции генами в первичных нейтрофилах человека, клетки THP1 использовались в качестве экспериментальной модели, подтверждающей концепцию. Клетки THP1 как дикого типа, так и клетки, дефицитные по MyD88 (THP1-defMYD88), NLRP3 (THP1-defNLRP3) или каспазе-1 (THP1-defCASP1) (Invivogen, Сан-Диего, Калифорния), поддерживались при плотности клеток клеток / мл в RPMI 1640 с добавлением 10% FBS, 2 мМ L-глутамина, 1 мМ пирувата натрия, 50 Ед / мл пенициллина, 50 мкг г / мл стрептомицина (Thermo Fisher Scientific, Рокфорд, Иллинойс), 100 мкл мкг / мл нормоцина и для целей отбора 200 мкл мкг / мл зеоцина и 100 мкг мкг / мл гигромицина (Invivogen, Сан-Диего, Калифорния) были добавлены в соответствии с рекомендациями производителя.Эксперименты проводились в условиях отсутствия антибиотиков путем трехкратной промывки клеток RPMI 1640.

    Родительский FAM20 серогруппы C дикого типа N. meningitidis и его LOS-дефицитный мутант lpxA (любезно предоставлен профессором Анн-Бет Джонссон. , Стокгольмский университет, Швеция) [8] выращивали на агаре GC (3,6% агар Difco GC Medium Base с добавлением 1% гемоглобина, 10% лошадиной сыворотки и 1% IsoVitaleX) (BD Diagnostics, Sparks, MD) в течение 16-20 дней. ч при 37 ° C в атмосфере 5% CO 2 , и колонии собирали стерильным тампоном и суспендировали в PBS.Плотность бактерий определяли путем измерения OD 600 и использовали для заражения цельной крови, изолированных нейтрофилов или клеток THP1 при MOI 10 бактерий на клетку.

    2.2. Обнаружение каспазы-1 в цельной крови

    Чтобы отразить события, происходящие во время инфекций, передаваемых через кровь, у здоровых доноров брали цельную кровь и обрабатывали N. meningitidis . Концентрацию нейтрофилов и моноцитов определяли с помощью гематологического анализатора (Sysmex Corporation, Кобе, Япония) и использовали для расчета MOI.Периферическую кровь (300 мкл л) стимулировали в пробирках объемом 5 мл с FAM20 или lpxA (при MOI 10: 1 на основе общего количества нейтрофилов и моноцитов) [25, 26] и одновременно окрашивали на активность каспазы-1. с FAM-YVAD-FMK (FLICA; Immunochemistry Technologies, Блумингтон, Миннесота) в течение 2 ч при 37 ° C, как описано ранее [25, 27]. ЛПС из Escherichia coli (50 нг / мл) (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури) в комбинации с 1 мМ АТФ (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури; АТФ добавляли в течение последних получаса инкубации. ) использовали в качестве положительного контроля для активации инфламмасом.Эритроциты лизировали с использованием реагента EasyLyse (DakoCytomation, Glostrup, Дания) при комнатной температуре в течение 15 минут, а клетки крови метили мышиным антителом против CD45 человека, конъюгированным с RPE-CY5 (DakoCytomation, Glostrup, Дания), и конъюгированным с ECD мышиным антителом против CD45 человека. CD14 человека (Beckman Coulter; Immunotec, Марсель, Франция) для дифференциации популяций лейкоцитов. Нейтрофилы и моноциты разделяли на основе бокового рассеяния и гейтирования CD45 и CD14 [25]. Неспецифическое связывание анализировали с использованием изотипического контроля IgG1 FITC / RPE / RPE-CY5 (DakoCytomation, Glostrup, Дания) и использовали в стратегии стробирования (данные не показаны).Активность каспазы-1 определяли проточной цитометрией (FC500 Beckman Coulter, Фуллертон, Калифорния), обнаруживая флуоресценцию FLICA, и значение MFI для каждого образца нормализовали к соответствующему нестимулированному контролю для расчета кратного изменения.

    2.3. Обнаружение активной каспазы-1 с помощью флуорометрического анализа в изолированных нейтрофилах человека

    Выделенные нейтрофилы высевали (клетки) в 96-луночный планшет и предварительно инкубировали с 50 мкМ M Ac-YVAD-AMC (Enzo Life Sciences, New York, NY ) в RPMI-1640, содержащем 10% FBS в течение 1 ч при 37 ° C и 5% CO 2 .Затем клетки стимулировали FAM20 или lpxA при MOI 10 в течение 6 часов. Расщепление субстрата каспазой-1 измеряли на флуоресцентном планшет-ридере при возбуждении / испускании 340/440 нм (FLUOstar Optima, Ортенберг, Германия).

    2.4. Обнаружение активной каспазы-1 с помощью проточной цитометрии в изолированных нейтрофилах человека

    Выделенные нейтрофилы высевали (клетки) в 96-луночный планшет и стимулировали FAM20, lpxA , очищенным LOS 1 μ г / мл (экстрагировано из менингококковой инфекции). штамм 44/76, серотип B, любезно предоставленный Dr.Lisbeth Meyer Naess, Норвежский институт общественного здравоохранения, Норвегия) [28], lpxA + LOS или FAM20 + TRL4 сигнальные блокаторы (анти hCD14-IgA 500 нг / мл, LPS-RS сверхчистый 1 μ г / мл, и полимиксин B 10 мк ( мкг / мл, Invivogen, Сан-Диего, Калифорния) и одновременно окрашивали на активность каспазы-1 с помощью FLICA в RPMI-1640, содержащем 10% FBS, в течение 2 ч при 37 ° C и 5% CO 2 . Нейтрофилы метили анти-CD66b-PE (Nordic BioSite, Täby, Sweden), и активность каспазы-1 определяли с помощью проточной цитометрии (Gallios Beckman Coulter, Fullerton, CA).В экспериментах, предназначенных для праймирования клеток, изолированные нейтрофилы предварительно инкубировали с агонистом TLR1 / 2 Pam3CSK4 (2 мкл мкг / мл) (Invivogen, Сан-Диего, Калифорния) в RPMI-1640, содержащем 10% FBS, в течение 1 ч при 37 ° C. и 5% CO 2 . Затем клетки стимулировали FAM20 или lpxA при MOI 10 и одновременно окрашивали на активность каспазы-1 с помощью FLICA в течение 2 часов. Активность каспазы-1 определяли методом проточной цитометрии.

    2.5. Вестерн-блот-анализ

    Первичные нейтрофилы (клетки) человека высевали в 96-луночный планшет и заражали FAM20, lpxA (MOI 10) или LPS (50 нг / мл) в комбинации с нигерицином (10 мк ). M, использованный в качестве положительного контроля) в течение 6 часов.Клеточные супернатанты осаждали 10% трихлоруксусной кислотой в течение 1 ч на льду и ресуспендировали в 4-кратном буфере Лэммли (Bio-Rad Laboratories, Геркулес, Калифорния) с последующим кипячением в течение 30 минут при 95 ° C. Клеточные фракции собирали в буфере RIPA с добавлением смеси ингибиторов протеаз и фосфатаз (Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL). Лизат клеток гомогенизировали с помощью заостренного кончика пипетки. Концентрации белка в клеточных фракциях измеряли с помощью анализа белка DC (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA).Равные количества клеточного белка смешивали с буфером Лэммли (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури) и кипятили в течение 5 минут при 95 ° C. Клеточную фракцию (20 мкл г) и осажденные супернатанты подвергали электрофорезу в геле 4–20% TGX Stain-Free ™ SDS и переносили на поливинилидендифторидную (PVDF) мембрану иммуноблоттинга (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). . Мембрану PVDF блокировали 3% бычьим сывороточным альбумином в PBS в течение 1 часа. Каспазу-1 детектировали с использованием мышиных моноклональных антител (Adipogen AG, Liestal, Швейцария) против человеческой каспазы-1 р45, разведенных 1: 1000.В качестве контроля загрузки GAPDH детектировали с помощью кроличьих поликлональных антител (Santa Cruz Biotechnology Inc., Даллас, Техас), разведенных 1: 10 000. Все первичные антитела инкубировали в течение ночи. В качестве вторичного антитела, конъюгированного с пероксидазой хрена (HRP), использовали козий поликлональный антикроличий или антимышиный IgG (Abcam, Cambridge, UK). Блоты проявляли с использованием реагента для обнаружения хемилюминесцентного вестерн-блоттинга Luminata Forte Western HRP (Merck Millipore, Billerica, MA).

    2.6. Экстракция тотальной РНК и синтез кДНК

    Общую РНК экстрагировали из выделенных нейтрофилов и клеток THP1 с использованием набора для очистки РНК Thermo Scientific GeneJET (Thermo Fisher Scientific, Рокфорд, Иллинойс) в соответствии с инструкциями производителя. Концентрацию и чистоту РНК определяли на спектрофотометре NanoDrop ND-1000 (NanoDrop Technology Inc., Wilmington, DE). КДНК

    синтезировали с использованием набора для обратной транскриптазы (High Capacity Reverse Transcription Kit, Applied Biosystems, Foster City, CA) из 1 мкл г общей РНК в соответствии с инструкциями производителя.

    2.7. Анализ обратной транскриптазы qPCR

    Анализ экспрессии гена

    выполняли с использованием анализа экспрессии гена TaqMan®, состоящего из немеченых праймеров и меченых красителем зондов FAM ™, специфичных для NLRP3 (HS 002_m1), CASP1 ( pro- caspase-1 ; HS00354836_m1), IL1B ( pro-IL-1β ; HS01555410_m1) и GAPDH (HS02758991_g1), обнаруженные в системе 7900HT Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA).Образцы обрабатывали как одиночный комплекс, и экспрессию генов-мишеней определяли в дубликатах и ​​нормализовали до GAPDH .

    2.8. Иммуноферментный анализ (ELISA)

    Выделенные нейтрофилы высевали в 96-луночный планшет и заражали FAM20 или lpxA (MOI 10) в течение 6 часов с предварительной инкубацией или без нее в течение 1 часа с ингибитором NLRP3 MCC950. в титрованной дозе (2 мкл М), уравновешивающей блокирующую способность и токсические эффекты (Avistron Chemistry Services, Корнуолл, Великобритания).Выделенные нейтрофилы стимулировали FAM20, lpxA , очищенным LOS 1 μ мкг / мл, lpxA + LOS или блокаторами передачи сигналов FAM20 + TLR4 (анти-hCD14-IgA 500 нг / мл, LPS-RS сверхчистый 1 мкл). г / мл и полимиксин B 10 мк ( г / мл) в RPMI-1640, содержащем 10% FBS в течение 6 часов при 37 ° C и 5% CO 2 с или без предварительной инкубации в течение 1 часа с TLR1 / 2 агонист Pam3CSK4 (2 мкл г / мл). Кроме того, клетки THP1 дикого типа, клетки THP1-defNLRP3 и THP1-defCASP1 заражали FAM20 в течение 6 часов.Секрецию TNF, IL-6 и IL-1 β в супернатанты культур анализировали методом ELISA с использованием набора ELISA MAX ™ Deluxe (BioLegend, Сан-Диего, Калифорния) в соответствии с инструкциями производителя.

    2.9. Этические соображения

    Исследование было проведено в соответствии с этическими принципами Хельсинкской декларации и этической политикой в ​​Университетской больнице Эребру, Швеция. Отделение трансфузионной медицины университетской больницы Эребру анонимно анонимизировало образцы крови, что предотвратило прослеживание данных до определенного человека.Поскольку кровь была взята во время сдачи крови, доноры не подвергались дополнительному ущербу или риску; исследование не требовало этического одобрения в соответствии с параграфом 4 шведского закона (2003: 460) об этическом поведении в исследованиях на людях.

    2.10. Статистический анализ

    Межгрупповые сравнения были выполнены с помощью двустороннего парного -теста (для нормально распределенных данных) или двустороннего критерия знакового ранга согласованной пары Уилкоксона (для данных, не имеющих нормального распределения). Тест Краскела-Уоллиса использовался для сравнения несогласованных (непарных) и не нормально распределенных данных.Различия считались значимыми при (), () или (), ns = не значимо (Prisma 6; GraphPad Software 6.0, Сан-Диего, Калифорния).

    3. Результаты
    3.1. Мутантный штамм

    lpxA из N. meningitidis не может стимулировать активность каспазы-1 в нейтрофилах и моноцитах человека

    Поскольку активированная инфламмасома рекрутирует прокаспазу-1 и запускает ее активацию, был проанализирован уровень расщепленной каспазы-1. как маркер активации инфламмасом [25, 29] как в нейтрофилах, так и в моноцитах цельной крови, а также в изолированных нейтрофилах.Результаты показали, что активность каспазы-1 была значительно увеличена в нейтрофилах (рис. 1 (а)) и моноцитах (см. Рис. 1 (b)), стимулированных штаммом FAM20, по сравнению с нестимулированными клетками в цельной крови. Нейтрофилы и моноциты, стимулированные мутантным штаммом lpxA , продемонстрировали аналогичную низкую активность каспазы-1, обнаруженную в нестимулированных клетках (Фигуры 1 (a) и 1 (b)). Такие же результаты были получены с использованием изолированных нейтрофилов человека (рис. 1 (c)). Активация каспазы-1 была подтверждена с помощью вестерн-блоттинга, показавшего, что количество прокаспазы-1 (p45) было снижено в клетках нейтрофилов, стимулированных FAM20, тогда как в клетках, стимулированных lpxA , снижение p45 не было обнаружено (рис. (г)).

    3.2. Стимуляция врожденных иммунных клеток

    мутантным штаммом N. meningitidis lpxA приводит к более низкому высвобождению IL-1 β по сравнению со штаммом FAM20 дикого типа

    В соответствии с ранее обнаруженной активностью каспазы-1 (рис. иммунные клетки с FAM20 привели к значительно большему количеству IL-1 β в супернатанте, чем LOS-дефицитный мутант lpxA () (рис. 2 (c)). С другой стороны, FAM20, а также lpxA давали аналогичные повышенные уровни секретируемого TNF (фиг. 2 (a)) и IL-6 (фиг. 2 (b)) из клеток врожденного иммунитета по сравнению с нестимулированными клетками.

    3.3. Инфламмасома NLRP3 играет ключевую роль в секреции IL-1

    β в врожденных иммунных клетках, стимулированных N. meningitidis

    . Чтобы исследовать, зависит ли LOS-зависимая секреция IL-1 β от активации NLRP3, изолированные нейтрофилы предварительно инкубировали с ингибитором NLRP3 MCC950 перед стимуляцией FAM20 дикого типа. Значительно сниженный уровень IL-1 β был обнаружен в клетках, обработанных MCC950 перед стимуляцией FAM20 (рис. 2 (d)).Более того, модели клеток THP1-defNLRP3 и THP1-defCASP1 были использованы для исследования участия оси NLRP3 инфламмасома / каспаза-1 / IL-1 β в облегчении секреции IL-1 β , опосредованной N. meningitidis . Клетки THP1-defCASP1 были неспособны активировать IL-1 β (рисунок 2 (e)), и в соответствии с нашими данными с использованием ингибитора NLRP3 секреция IL-1 β была значительно снижена в клетках THP1-defNLRP3 ( 2 (e)) по сравнению с клетками THP1 дикого типа после заражения FAM20 — данные, указывающие на участие инфламмасомы NLRP3 в N.meningitidis -индуцированное воспаление.

    3.4. Как

    N. meningitidis штамм FAM20 дикого типа, так и lpxA мутантный штамм индуцируют экспрессию гена NLRP3 и IL1B , но не CASP1 в врожденных иммунных клетках

    Для исследования роли LOS в опосредовании воспаления экспрессию мРНК NLRP3 , CASP1 (прокаспаза-1) и IL1B (про-IL-1 β ) анализировали после бактериального заражения изолированных нейтрофилов.Стимуляция FAM20, а также lpxA увеличивала экспрессию NLRP3 и IL1B в нейтрофилах, в которых FAM20 вызывал более выраженную экспрессию по сравнению с lpxA (Рисунки 3 (a) и 3 (b)). Напротив, не наблюдалось увеличения экспрессии мРНК CASP1 в нейтрофилах, стимулированных ни FAM20, ни lpxA по сравнению с нестимулированными клетками (рис. 3 (c)).

    3.5.

    N. meningitidis индуцированная экспрессия мРНК NLRP3 и IL1B является MyD88-зависимой

    LOS является мощным активатором комплекса TLR4 / MD2-рецептор, включая передачу сигналов через NF- κ B [30 ].Наши результаты предполагают роль LOS как на этапе прайминга инфламмасомы (рис. 3), так и критическую роль в лицензировании активации инфламмасом (рис. 1 и 4). Чтобы определить участие TLR-опосредованной передачи сигналов для прайминга, мы использовали клетки THP1, дефицитные по MYD88, и обнаружили, что они неспособны отвечать на бактериальную нагрузку в отношении экспрессии мРНК NLRP3 , IL1B и CASP1 (Рисунок 5). . Прайминг-ответ в клетках THP1 дикого типа согласуется с результатами для изолированных нейтрофилов человека (фиг. 3), показывая повышенную экспрессию мРНК NLRP3 и IL1B в клетках, стимулированных FAM20 или lpxA (фиг. 5 (а)) и 5 (b)), тогда как ни FAM20, ни lpxA не смогли увеличить экспрессию CASP1 (Рисунок 5 (c)).

    3.6. LOS

    N. meningitidis действует как лицензирующие стимулы для активации инфламмасомы NLRP3 в врожденных иммунных клетках

    Наши данные предполагают, что LOS играет центральную роль в секреции IL-1 β (рис. 2 (c)) и что это опосредуется через ось NLRP3 инфламмасома / каспаза-1 / IL-1 β (Фигуры 1, 2 (d) и 2 (e)). Затем роль LOS как шага лицензирования для активации инфламмасом была дополнительно исследована путем стимуляции изолированных нейтрофилов FAM20, lpxA per se , LOS per se или lpxA + LOS.В соответствии с нашими предыдущими данными (рисунок 1), lpxA не смог индуцировать активность каспазы-1, но при добавлении очищенного LOS была установлена ​​активность каспазы-1 (рисунок 4 (а)). Кроме того, FAM20 был способен увеличивать активность каспазы-1 в присутствии блокаторов передачи сигналов TLR4, но несколько снижался по сравнению с одним только FAM20 (рис. 4 (а)). Взятые вместе, эти данные дополнительно подтверждают наши выводы о том, что LOS является триггером, а не только праймером активации каспазы-1. В подтверждение LOS-зависимой активации каспазы-1, lpxA + LOS также приводили к более выраженной секреции IL-1 β по сравнению с lpxA per se или только с LOS (рис. 4 (b)). .Роль LOS в лицензировании активации инфламмасом была дополнительно исследована на изолированных нейтрофилах, предварительно инкубированных с агонистом TLR1 / 2 Pam3CSK4 перед контрольным заражением FAM20 или lpxA . Эти эксперименты показали значительно повышенную активность каспазы-1 в нейтрофилах, стимулированных Pam3CSK4 + FAM20, в то время как активность каспазы-1 не была обнаружена в предварительно примированных клетках, стимулированных lpxA (рис. 4 (c)). Точно так же мы обнаружили высокие уровни IL-1 β в супернатантах нейтрофилов, стимулированных Pam3CSK4 + FAM20, но не в клетках, стимулированных Pam3CSK4 + lpxA (рис. 4 (d)).

    4. Обсуждение

    У пациентов с сепсисом даже низкие уровни менингококкового LOS в плазме (<1 нг / мл) связаны с менингококковым септическим шоком и смертью [9, 31], а LOS является мощным индуктором провоспалительных цитокинов, включая IL -1 β , TNF, IL-6 и CXCL8 в макрофагах человека и мыши [8, 10, 31], а также IL-1 β в крови человека ex vivo [30]. Для созревания IL-1 β в биоактивную молекулу и ее секреции требуется состав инфламмасомы, который включает активированный фермент каспазу-1.На сегодняшний день роль инфламмасом в ответе на N. meningitidis неизвестна, и настоящее исследование исследует роль LOS в N. meningitidis -опосредованной стимуляции активности инфламмасом в клетках врожденного иммунитета человека и предполагает роль инфламмасом. сигнализация при менингококковых инфекциях. Наши данные также показывают, что LOS-индуцированный ответ не является общим воспалительным ответом, а скорее направлен на ось NLRP3 / каспаза-1 / IL-1 β .

    Решающим для интерпретации наших данных является осознание того, что активация инфламмасом представляет собой двухэтапный процесс [32], при этом стадия праймирования представляет собой TIR / MyD88 / NF- κ B-зависимое производство про-IL-1 β и компоненты инфламмасомы (e.g., NLRP3 и прокаспаза-1) посредством стимуляции, главным образом, PAMP, такими как LPS, или некоторыми эндогенными стимулами (например, IL-1 β и TNF) [20]. Чтобы определить роль LOS в регуляции активности инфламмасом, мы изучили этап праймирования, проанализировав экспрессию мРНК NLRP3 , CASP1 и IL1B в нейтрофилах человека после стимуляции родительской FAM20 серогруппой C N. meningitidis . и его LOS-дефицитный мутантный штамм IpxA .Было обнаружено, что мышиные нейтрофилы экспрессируют NLRP3 , IL1B и CASP1 в условиях покоя, и уровни мРНК, а также уровни белка NLRP3 активируются посредством передачи сигнала, опосредованного NF- κ B [21, 22, 33], в то время как такая информация отсутствует в отношении IL1B и CASP1 в нейтрофилах человека [33]. Хотя стимуляция как FAM20, так и lpxA приводила к усилению уровней мРНК NLRP3 , а также IL1B в изолированных нейтрофилах человека, FAM20 вызывал более выраженное повышение.Эти данные не только показывают, что LOS N. meningitidis играет роль в праймировании, но также демонстрируют, что другие бактериальные факторы вносят вклад в стадию прайминга. Поскольку факторы вирулентности, не относящиеся к LOS N. meningitidis , такие как PorB, пили и капсульные полисахариды запускают путь NF- κ B [31, 34, 35]; они представляют собой вероятных кандидатов для праймирования активности инфламмасом, обнаруженных в клетках, стимулированных с помощью lpxA . Отсутствие повышенной регуляции CASP1 после стимуляции согласуется с данными для макрофагов, происходящих из костного мозга мышей, где на экспрессию прокаспазы-1 не влияет стимуляция LPS [22].Наши данные подтверждают модель прайминга инфламмасом, но, в частности, добавляют информацию об этом процессе в клетках врожденного иммунитета человека, предполагая, что NLRP3 и IL1B индуцируются N. meningitidis , а экспрессия CASP1 — нет.

    Прайминговые свойства LOS были дополнительно исследованы путем ингибирования его взаимодействия с клетками путем связывания LOS с полимиксином B, путем блокирования CD14 и путем конкурентного связывания с TLR4 с помощью LPS-RS во время провокации FAM20 нейтрофилов человека.Даже если клетки были способны продуцировать IL-1 β примерно до 50% неингибированных клеток в таких условиях, результаты указывают на дополнительные сигнальные пути, отличные от TLR4, при праймировании инфламмасом. Эти наблюдения подтверждаются сообщениями, в которых описывается, что N. meningitidis дикого типа опосредует активацию NF- κ B через путь TLR4 / MD2 / MyD88, в то время как штаммы с дефицитом LOS способствуют воспалению не-LOS молекулами через активацию TLR2 / MyD88 [30, 36], что указывает на участие путей TLR2 и TLR4 в индукции прайминга инфламмасом.Поэтому участие пути MyD88 / NF- κ B в процессе прайминга инфламмасомы было исследовано с использованием MyD88-дефицитных клеток THP1, и мы обнаружили полную зависимость MyD88 для индуцированного N. meningitidis прайминга инфламмасомы. Взятые вместе, эти данные означают, что факторы вирулентности, отличные от LOS, у N. meningitidis действуют через TLR2, вызывая прайминг в экспериментах по блокированию TLR4, описанных выше — данные поддержаны Guarda и соавторами, которые демонстрируют прайминг инфламмасом через оба TLR2, — 3 и -4 [22].

    Наши результаты также указывают на то, что LOS имеет решающее значение для лицензирования активации инфламмасом, поскольку мы обнаружили, что lpxA неспособен индуцировать существенное высвобождение IL-1 β даже в предварительно примированных клетках. Предварительно подготовленный эксперимент показывает, что отсутствие способности активировать инфламмасому, достаточную для индукции продукции и высвобождения IL-1 β , не связано с более низкими уровнями экспрессии NLRP3 , наблюдаемыми в исследованиях примирования, а скорее с тем, что способность лицензировать Сама активация инфламмасом является дефектной у бактерий lpxA .Отсутствие высвобождения IL-1 β LOS-дефицитными бактериями можно объяснить их неспособностью запускать активность каспазы-1 в клетках врожденного иммунитета человека. Наши данные подтверждаются Brandtzaeg и соавторами, показавшими, что LOS-дефицитный штамм N. meningitidis (h54 / 76) не способен индуцировать IL-1 β из иммунных клеток [30]. Мы далее расширяем эти данные и показываем, что дефицит lpxA для индукции высвобождения IL-1 β может быть устранен добавлением LOS — данных, указывающих на критическую роль LOS в лицензировании активации инфламмасомы NLRP3.Несмотря на то, что мы обнаружили, что очищенный LOS per se индуцирует активность каспазы-1, он не смог увеличить продукцию и высвобождение IL-1 β , что можно рассматривать как меру функциональности. Следовательно, чтобы инициировать ответ оси NLRP3 / каспаза-1 / IL-1 β в нейтрофилах, для LOS per se требуются другие факторы вирулентности менингококковой бактерии, что доказано экспериментом, в котором очищено lpxA +. LOS генерирует секрецию IL-1 β путем индукции прайминга и лицензирования активности инфламмасом, соответственно.Эти наблюдения согласуются с общим мнением о том, что активация и высвобождение IL-1 β требует как прайминга (TLR-включение LOS), так и триггера лицензирования (другие факторы Neisseria ) для активации, а также высвобождения IL- 1 β . Этот результат дополнительно подтверждается нашим экспериментом, в котором способность индуцировать активность каспазы-1 и опосредовать продукцию и высвобождение IL-1 β FAM20 снижается до уровней lpxA в присутствии блокаторов передачи сигналов TLR4, которые подавляют эффекты LOS.

    Даже если нельзя исключить участие других NLR и инфламмасом и они могут быть соучастниками, наши данные с использованием ингибитора NLRP3 и NLRP3-дефицитных клеток показывают четкую роль NLRP3 в N. meningitidis -индуцированный IL-1 β производство. Соответственно, NLRP3 является первичным NLR, необходимым для секреции моноцитов IL-1 β в ответ на другую бактерию вида Neisseria , то есть N. gonorrhoeae [37]. Не следует упускать из виду в этом отношении, что продукция провоспалительных цитокинов была недавно описана посредством TLR-независимого способа с участием каспазы-4/5, приводящего к олигомеризации каспазы-1 и активации инфламмасом в моноцитах человека [38].Включает ли LOS-индуцированный путь активацию каспазы-1, опосредованную только через NLRP3 и / или также через каспазу-4/5, будет предметом будущих исследований, для которых требуются необходимые инструменты. Интерес к текущему исследованию заключается в том, что, в то время как мышиные моноцитарные клетки получают прайминг только после провокации ЛПС, в человеческих моноцитах сообщается как о праймировании, так и о лицензировании активации инфламмасом [39], что подтверждает наши текущие данные о том, что LOS действует как на прайминг, так и на лицензирование активации инфламмасом.Кроме того, наши результаты показывают, что LOS различных серогрупп действительно вызывает аналогичную активацию оси NLRP3 / caspase-1 / IL-1 β .

    В заключение, наши результаты объясняют механизм, лежащий в основе LOS-опосредованной продукции цитокинов в нейтрофилах человека, показывая, что N. meningitidis запускают ось инфламмасомы / каспазы-1 / IL-1 β в нейтрофилах человека и моноциты. LOS выполняет двойную функцию в этом процессе, стимулируя прайминг клетки в сочетании с дополнительными факторами вирулентности, но, по-видимому, является центральной молекулой для лицензирования активации инфламмасомы, ведущей к полностью функциональной инфламмасоме.Нейтрофилы составляют 40-60% лейкоцитов в крови и, следовательно, являются мощным источником IL-1 β , провоспалительного цитокина, так тесно связанного с тяжелым менингококковым септическим заболеванием [40].

    Сокращения

    9192

    D

    D

    ELISA: Иммуноферментный анализ
    FLICA: Флуорохромный ингибитор каспаз
    GC-agar GC-agar GC-agar
    LOS: Липоолигосахарид
    LPS: Липополисахарид
    LRR: Повторить богатый лейцином
    MYD-дифференциация B: Ядерный фактор-каппа B
    NLR: Нуклеотид-связывающий домен, содержащий лейцин-богатый повторяющийся рецептор
    PAMP: Патоген-ассоциированные молекулярные структуры PR рецепторы распознавания
    ROS: R активные формы кислорода
    THP1: Клеточная линия моноцитарного лейкоза
    THP1-defCASP1: Человеческие моноциты с пониженной активностью каспазы-1
    THP1 MY-9-monocytes29 с пониженной активностью THP1 MY-29
    THP1-defNLRP3: Человеческие моноциты с пониженной активностью NLRP3
    TIR: Гомология рецепторов Toll / интерлейкина-1
    TLRs:-подобных

    рецепторов TLR-

    Toll Пили IV типа
    TNF: Фактор некроза опухоли.
    Доступность данных

    Все данные, использованные для подтверждения выводов этого исследования, можно получить у соответствующего автора по запросу.

    Раскрытие информации

    Часть результатов рукописи была представлена ​​в 2016 году в виде плаката на праздновании Дня Нобелевской премии, которое является местом, где аспиранты могут общаться и внутренне обсуждать свои проекты с исследователями медицинского факультета. Университет Эребру.

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

    Благодарности

    Авторы хотели бы поблагодарить профессора Анн-Бет Йонссон из Стокгольмского университета, Швеция, за предоставление LOS-дефицитного мутанта Neisseria meningitidis серогруппы C; Доктору Лисбет Мейер Нэсс из Норвежского института общественного здравоохранения, Норвегия, за предоставление очищенного LOS, экстрагированного из штамма менингококка 44/76; и доктора Даниэля Эклунда из Университета Эребру за внимательное и критическое прочтение рукописи.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *