Посев на флору с определением чувствительности к антибиотикам норма: Посев на флору — когда назначают и как проводят исследования, показатели нормы и патогенных бактерий

Посев на флору с определением чувствительности к антибиотикам

Нередко в медицинской практике пациентам назначается посев на флору с определением чувствительности к антибиотикам. При этом пациенты сами испытывают трудности с тем, чтобы подготовиться к сдаче анализа, и не всем понятно, для какой цели он служит. Подробнее об этом виде лабораторного исследования мы расскажем далее в статье.

Что такое посев на микрофлору?

Посев на микрофлору, он же бак посев, он же посев на антибиотики – это лабораторное исследование, при помощи которого можно определить тип возбудителя инфекции, его концентрацию в организме, а также устойчивость к лекарственным веществам. Эти сведения позволяют врачам точно диагностировать заболевание и максимально эффективно спланировать стратегию лечения.

Бактериологический посев может проводиться при использовании различного вида субстрата. В зависимости от предполагаемого заболевания или органа поражения, в качестве материала для исследования может использоваться практически любая биологическая жидкость: кровь, эякулят, выделения различных слизистых, спинномозговая и суставная жидкости, содержимое патологических образований (гнойников, кист), моча, как и т.д.

Бакпосев заключается в высевании бактерий из образца (диагностического материала) в питательную среду с последующим наблюдением за количественными изменениями бактериальных колоний. Счисление результатов определяют в КОЕ – колониеобразующих единицах, т.е. количестве жизнеспособных бактериальных клеток, способных к образованию новых колоний.

Где используют метод посева на микрофлору?

В соответствии с различным материалом для исследования, в результатах могут быть обнаружены различные типы возбудителей. Например, посев кала может показать такие группы бактерий, как сальмонеллы, шигеллы, тифопаратифозные бактерии, анаэробные бактерии. Часто посев кала на дисбактериоз с определением чувствительности к антибиотикам проводится пациентам, которые испытывают кишечные расстройства после длительного приема пероральных антибиотиков. Расшифровка этого анализа позволяет разграничить инфекционные кишечные расстройства от дисбактериоза.

В венерологической, гинекологической, урологической практиках используют анализ урогенитальной слизи на бактериальный посев. В этом виде анализируемого материала можно обнаружить, помимо бактерий, грибки. Среди бактериальных групп наиболее вероятны к обнаружению гоококки, листерии, уреаплазмы, и при подозрении на конкретную половую инфекцию врач может назначить посев на микоплазму или иную бактериологическую культуру.

Часто в общетерапевтической и пульмонологической практиках производится посев мокроты на микрофлору и чувствительность к антибиотикам. Этот анализ позволяет установить истинную причину бронхитов, и разделять инфекционные формы от аллергических и иных. В качестве анализируемого материала используется отделяемая при отхаркивании мокрота.

Такие жидкости организма, как грудное молоко, кровь, моча, желчь, суставная жидкость по своей природе являются стерильными, поэтому для них проводится посев на обсемененность, т.е. на выявление любых форм бактерий, т.к. они в любом случае будут являться патологичными.

Отдельно следует упомянуть посев эякулята, или, иначе говоря, спермы на флору. Посев спермы используется в урологической практике и позволяет эффективно выявлять половые инфекции. Может использоваться как посев на обсемененность эякулята на флору, так и анализ на наличие конкретного возбудителя – например, посев на хламидии с определением бактериологической чувствительности к антибиотикам.

Как происходит процесс диагностики?

После забора диагностического материала на флору и чувствительность к антибиотикам, его «сеют» в различные питательные среды. Выбор среды определяется возможностями конкретной диагностической лаборатории, а также целями диагностики. К примеру, для определения наличия конкретного возбудителя используется наиболее подходящая для него среда, а для разграничения различных возбудителей – дифференциально-диагностические среды. Для идентификации различных бактериальных колоний используется твердая питательная среда.

После произведения посева флоры на чувствительность к антибиотикам, субстрат помещают в термостат, который функционирует с заданными значениями температуры, влажности и времени. После этого полученные колонии антибиотиков извлекают, окрашивают, производят контрольный подсчет и осмотр. При необходимости количественного подсчета бактерий, субстрат несколько раз подряд разбавляют, после чего дается оценка определяемой культуре (или культурам) бактерий в целом.

Нередко пациенты задаются вопросом, почему выполнение посева на флору с определением чувствительности к расширенному спектру антибиотиков занимает у лаборатории длительное время (до 10 дней, например, при определении крови на стерильность). Это связано со спецификой роста бактерий: сам процесс их созревания в термостате не может быть ускорен без риска гибели колонии. Кроме того, если требуется провести количественный анализ нескольких видов бактерий, это занимает много времени в связи с количественной обработкой результатов.

Как правильно собрать материал для анализа?

Требования к пациентам, сдающим материал для анализа, столь же высоки, как и к лаборантам в медицинском учреждении. Посев на выявление бактерий требует большой тщательности по отношению к исследуемому материалу, т.к. в случае несоблюдения стерильности произойдет обсеменение бактериями, которые не имеют клинического значения, и результат анализа будет испорчен. Поэтому, первое требование – это использование специализированной стерильной посуды.

Второе – это то, что диагностируемый материал, если он по каким-то причинам собирается вне лаборатории, необходимо доставить туда как можно скорее. Чем более свежей будет исследуемая среда, тем выше будет шанс получить клинически верный результат исследования. Такое правило предусматривает приоритетность забора материала непосредственно в условиях лаборатории, или в непосредственной близости от нее.

Третье – это то, что персонал, собирающий материал для анализа, должен обладать определенными навыками. Это касается двух предшествующих пунктов: сохранение стерильности собранного материала и скорость его отправки на исследовании. Кроме того, сам посев и подсчет КОЕ может производиться только высококвалифицированным персоналом.

Требования к сбору диагностического материала

Сбор мочи для анализа следует производить утром, после гигиенических процедур половых органов, в стерильную посуду. Сбору подлежит первая утренняя порция мочи, объем которой должен составить от 10 до 15 мл. Сдавать материал нужно не позже, чем через 2 часа после его получения.

Забор кала производят в утренние часы, без применения клизм и слабительных, стерильной лопаткой в стерильную посуду. Объем собранного материала должен составлять 15-30 г. Сдавать кал можно в течение 5 часов после сбора, при этом не допускается его охлаждение или замораживание, т.к. это может привести к гибели бактерий.

В случае назначения анализа на мазок из носа и зева не допускается промывание этих слизистых антибактериальными растворами, питье, прием пищи, нельзя чистить зубы до забора анализа. Диагностируемый материал сразу после забора в условиях лаборатории отправляется на исследование. Напротив, если пациенту показан анализ мокроты, то ему необходимо чистить зубы и регулярно ополаскивать рот антибактериальным раствором до сдачи материала.

При проверке крови на стерильность не допускается предварительный прием антибиотиков. Материал собирается в условиях лаборатории, с соблюдением правил стерильности. Грудное молоко же можно собрать в домашних условиях или в палате. Для этого сначала проводятся водные гигиенические процедуры, затем кожа вокруг соска обрабатывается дезинфицирующим раствором, и молоко сцеживается в стерильный контейнер. Доставить его в лабораторию необходимо за 2 часа.

Мазок половых органов для женщин проводится в середине менструального цикла (не раньше 14 дней после завершения менструаций). При этом до пробы женщинам нельзя мочиться 2 часа, мужчинам – 5-6 часов. Забор пробы производится врачом. Аналогично, сбор эякулята должен проводиться в стерильных условиях.

Результаты посева на флору

При выявлении какой-либо конкретной бактериальной культуры нормальной реакцией будет являться результат, который может быть обозначен словами «нет роста» или «результаты пробы отрицательны». Если же определялась микрофлора какой-либо субстанции в целом, то хорошим знаком является обозначение «норма». Чувствительность к антибиотикам обозначается перечислением тестируемых препаратов и словами «да» и «нет», обозначающими наличие или отсутствие эффективности к конкретному препарату.

При выражении значений бактерий в КОЕ, следует различать показатели патогенной и условно-патогенной флоры. Последняя может довольно широко варьировать в своих показателях, не нанося человеческому организму никакого вреда. При нормальных показателях рядом с количественным значением указывается слово «норма». В случае же с патогенной флорой, «норма» теряет свое значение, т.к. патогенные организмы в принципе не должны обнаруживаться в здоровом организме, и значение КОЕ тут становится не важно.

Так или иначе, доверить расшифровку полученных результатов лучше своему лечащему врачу, так как ему в точности известно, какую цель преследовала диагностика и как в дальнейшем распорядиться этими результатами. В целом следует отметить, что посев на флору является одним из самых точных, хоть и трудоемких, лабораторных исследований, которое позволяет диагностировать и прогнозировать болезнь, а также разрабатывать эффективную тактику ее лечения.

расшифровка результатов, нормы — «Online Диагноз»

Общее описание

Это микробиологическое исследование, позволяющее определить качественный и количественный состав микрофлоры исследуемого биоматериала, в том числе выявить условно-патогенные микроорганизмы в высоком титре и патогенные микроорганизмы, определить их чувствительность к антибиотикам.

Возможности метода

• точное определение возбудителя инфекционных болезней;
• разработка рациональной антимикробной терапии в каждом конкретном случае;
• оценка степени эффективности проводимой терапии.

Показания к исследованию

• воспалительные заболевания любой локализации, кроме кишечника.

Материал для исследования

• разовая порция мочи,
• урогенитальный мазок (с секретом предстательной железы),
• мокрота,
• мазок из ротоглотки,
• мазок из носоглотки,
• грудное молоко,
• эякулят,
• отделяемое из уха,
• мазок с конъюнктивы,
• синовиальная жидкость,
• спинномозговая жидкость,
• мазок из цервикального канала,
• мазок из уретры,
• плевральная жидкость,
• смыв с бронхов,
• желчь,
• экссудат,
• биоптаты.

Подготовка к исследованию

• употребление пациентом большого количества воды не менее чем за 8-12 часов до сбора мокроты;
• посев мочи на флору должен проводиться при условии исключения мочегонных препаратов в течении 48 часов до сбора мочи;
• женщинами сдача мочи или урогенитатального мазка выполняется до начала менструации или спустя 2 дня после ее окончания;
• для мужчин рекомендуется не мочиться в течение не менее 3 часов до сдачи мочи или мазка;
• в день взятия биоматериала на анализ пациентам запрещается чистить зубы.

Трактовка результатов исследования

Нормальная микрофлора человека представляет собой совокупность микроорганизмов, населяющих кожу и слизистые оболочки. Наибольшее их количество обитает в желудочно-кишечном тракте, остальная часть — на кожных покровах, зеве, глотке, в мочеполовой системе. Нормальная микрофлора подразделяется на постоянную, факультативную и случайную. Референсные значения для различных видов микроорганизмов зависят от их локализации (точки взятия биологического материала). Так, биологический материал, полученный из зева, носа, используется для определения характера неспецифического инфекционного процесса, протекающего в организме. Также соскоб из носа актуален при анализе на чувствительность к антибиотикам.

По способности вызывать инфекционные заболевания микроорганизмы классифицируют на непатогенные (не вызывающие заболевания), условно-патогенные (в норме могут выделяться в небольших количествах и при определенных условиях активно размножаются, приводя к воспалению) и патогенные (являются возбудителями инфекционных заболеваний и в составе нормальной микрофлоры не обнаруживаются).

При обнаружении условно-патогенных микроорганизмов в высоком титре или патогенных микроорганизмов определяется их чувствительность к антибиотикам и бактериофагам.

Как у мужчин, так и у женщин на результаты исследования может оказывать влияние проведенная ранее противогрибковая или антибактериальная терапия.

Нормы

Нормой является наличие в микрофлоре непатогенных микроорганизмов, условно-патогенных в небольшом количестве и отсутствие патогенных.

1. 1. Орхит
2. 2. Эпидидимит

Посев на флору с определением чувствительности к антибиотикам: исследования в лаборатории KDLmed

Это микробиологическое исследование, позволяющее определить качественный и количественный состав микрофлоры исследуемого биоматериала, в том числе выявить условно-патогенные микроорганизмы в высоком титре и патогенные микроорганизмы, определить их чувствительность к антибиотикам.

При обнаружении микробиологическим методом микроорганизмов, составляющих нормальную микрофлору, или условно-патогенных микроорганизмов в титре менее диагностического не определяется чувствительность к антибиотикам и бактериофагам, так как это количество не является значимым и не требует лечения противомикробными препаратами.

Исследуется аэробная микрофлора.

Синонимы русские

Бактериологический посев на флору с определением чувствительности к антибиотикам.

Синонимы английские

Culture, routine. Bacteria identification and antibiotic susceptibility testing.

Метод исследования

Микробиологический метод.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Разовую порцию мочи, урогенитальный мазок (с секретом предстательной железы), мокроту, мазок из ротоглотки, грудное молоко, мазок из носоглотки, эякулят, отделяемое уха, мазок с конъюнктивы, мазок из носа, синовиальную жидкость, мазок из цервикального канала, мазок из уретры, отделяемое абсцесса полости рта, плевральную жидкость, ликвор, смыв из бронхов, желчь, экссудат, биоптат, содержимое желчного пузыря.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Рекомендуется употребить большой объём воды за 8-12 часов до сбора мокроты.
• Исключить приём мочегонных препаратов в течение 48 часов до сбора мочи (по согласованию с врачом).
• Женщинам рекомендуется сдавать урогенитальный мазок или мочу до менструации или через 2 дня после её окончания.
• Мужчинам не следует мочиться в течение 3 часов до сдачи урогенитального мазка или мочи.
• Не чистить зубы в день взятия биоматериала на исследование.

Общая информация об исследовании

Нормальная микрофлора человека представляет собой совокупность микроорганизмов, населяющих кожу и слизистые оболочки. Наибольшее их количество (около 40 %) обитает в желудочно-кишечном тракте, остальная часть – на кожных покровах, зеве, глотке, в мочеполовой системе и др. Нормальная микрофлора подразделяется на постоянную (составляет до 90 % присутствующих в организме микробов), факультативную (менее 10 %) и случайную (не более 0,5 %).

По способности вызывать инфекционные заболевания микроорганизмы классифицируют на непатогенные (не вызывающие заболевания), условно-патогенные (в норме могут выделяться в небольших количествах и при определённых условиях активно размножаются, приводя к воспалению) и патогенные (являются возбудителями инфекционных заболеваний и в составе нормальной микрофлоры не обнаруживаются).

Бактериологическое исследование (посев на флору) позволяет определить качественный и количественный состав микрофлоры исследуемого клинического материала, в том числе выявить патогенные микроорганизмы. При обнаружении условно-патогенных микроорганизмов в высоком титре или патогенных микроорганизмов определяется их чувствительность к антибиотикам и бактериофагам.

Для чего используется исследование?

• Чтобы установить возбудителя инфекционного заболевания.
• Для подбора рациональной антимикробной терапии.
• Чтобы оценить эффективность проводимой терапии.

Когда назначается исследование?

При воспалительных заболеваниях различных локализаций (за исключением воспалительных заболеваний кишечника).

Что означают результаты?

Референсные значения для различных видов микроорганизмов зависят от их локализации (точки взятия биологического материала).

Что может влиять на результат?

Предшествующая противогрибковая или антибактериальная терапия.

Также рекомендуется

Кто назначает исследование?

Терапевт, врач общей практики, педиатр, хирург, ЛОР, пульмонолог, уролог, гинеколог, дерматовенеролог, офтальмолог.

Литература

• Chernecky С.С. Laboratory tests and diagnostic procedures /  С.С. Chernecky, B.J. Berger ; 5th ed. – St Louis : Saunders Elsevier, 2008. – 1232 p.
• Gill V.J., Fedorko D.P., Witebsky F.G. The clinician and the microbiology laboratory. In: Principles and practice of infectious disease / G.L. Mandell, Bennett J.E., R. Dolin (Eds) ; 6th ed. – Churchill Livingstone, Philadelphia, PA 2005. – 2701 p.
• Levinson W. Medical microbiology and immunology: examination and board review (Lange medical books series) / W. Levinson ; 8th ed. – NY : McGraw-Hill, 2004. – 654 p.

Посев на флору без определения чувствительности к антибиотикам: исследования в лаборатории KDLmed

Это микробиологическое исследование, позволяющее определить качественный и количественный состав микрофлоры исследуемого биоматериала, в том числе выявить условно-патогенные микроорганизмы в высоком титре и патогенные микроорганизмы.

Синонимы русские

Бактериологический посев на флору.

Синонимы английские

Culture, routine.

Метод исследования

Микробиологический метод.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Разовую порцию мочи, урогенитальный мазок (с секретом предстательной железы), мокроту, мазок из ротоглотки, грудное молоко, мазок из носоглотки, эякулят, отделяемое уха, мазок из десневого кармана, мазок с конъюнктивы, мазок из носа, отделяемое раны.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Употребить большой объём воды за 8-12 часов до сбора мокроты.
• Исключить приём мочегонных препаратов в течение 48 часов до сбора мочи (по согласованию с врачом).
• Женщинам рекомендуется сдавать урогенитальный мазок или мочу до менструации или через 2 дня после её окончания.
• Мужчинам не следует мочиться в течение 3 часов до сдачи урогенитального мазка или мочи.

Общая информация об исследовании

Нормальная микрофлора человека представляет собой совокупность микроорганизмов, населяющих кожу и слизистые оболочки человека. Наибольшее их количество (около 40 %) обитает в желудочно-кишечном тракте, остальная часть – на кожных покровах, зеве, глотке, в мочеполовой системе и др. Нормальная микрофлора подразделяется на постоянную (составляет до 90 % присутствующих в организме микробов), факультативную (менее 10 %) и случайную (не более 0,5 %).

По способности вызывать инфекционные заболевания микроорганизмы классифицируют на непатогенные (не вызывающие заболевания), условно-патогенные (в норме могут выделяться в небольших количествах и при определённых условиях активно размножаются, приводя к воспалению) и патогенные (являются возбудителями инфекционных заболеваний и в составе нормальной микрофлоры не обнаруживаются).

Бактериологическое исследование (посев на флору) позволяет определить качественный и количественный состав микрофлоры исследуемого клинического материала, в том числе выявить патогенные микроорганизмы.

Для чего используется исследование?

• Чтобы установить возбудителя инфекционного заболевания.
• Чтобы оценить эффективность проводимой терапии.

Когда назначается исследование?

При воспалительных заболеваниях различных локализаций (за исключением воспалительных заболеваний кишечника).

Что означают результаты?

Референсные значения для различных видов микроорганизмов зависят от их локализации (точки взятия биологического материала).

Что может влиять на результат?

Противогрибковая или антибактериальная терапия.

Также рекомендуется

Кто назначает исследование?

Терапевт, врач общей практики, педиатр, хирург, лор, пульмонолог, уролог, гинеколог, дерматовенеролог, офтальмолог.

Литература

• Chernecky С.С. Laboratory tests and diagnostic procedures / С.С. Chernecky, B.J. Berger ; 5th ed. – St Louis : Saunders Elsevier, 2008. – 1232 p.
• Gill V.J., Fedorko D.P., Witebsky F.G. The clinician and the microbiology laboratory. In: Principles and practice of infectious disease / G.L. Mandell, Bennett J.E., R. Dolin (Eds) ; 6th ed. – Churchill Livingstone, Philadelphia, PA 2005. – 2701 p.
• Levinson W. Medical microbiology and immunology: examination and board review (Lange medical books series) / W. Levinson ; 8th ed. – NY : McGraw-Hill, 2004. – 654 p.

посев на микрофлору и чувствительность к антибиотикам — 25 рекомендаций на Babyblog.ru

Я решила написать отдельный пост. Очень надеюсь, что кому-то в похожей ситуации это поможет. Потому что сама, когда лежала в перинатальном центре, искала везде информацию , и вот теперь могу собрать ее в один пост. Все то, что я прочитала и испытала на себе.

Вот моя история : https://www.babyblog.ru/community/post/poteri/3165551

1) Девушки, самое главное, не делайте прокол и забор пуповинной крови! Есть альтернативный способ проверки на хромосомные аномалии, и пусть он стоит почти 40 тыс- но это плата за жизнь ребенка. Да, пишут и говорят, что риск выкидыша 1-3% в течение недели. Но на деле — этот рубец на матке и на околоплодном пузыре приводит к подтеканию вод на отдаленном сроке. Я сделала прокол на 22 неделе, и когда через неделю сказала об этом своему врачу в районной поликлинике- она не стала согласно кивать головой, а четко и уверенно сказала, что от таких проколов на 26 неделях начинаются выкидыши. Я тогда отмела эту информацию, да и что бы я уже могла исправить. Мне нужен был анализ крови ребенка, чтобы знать, не убила ли моя онкология его иммунитет. Оказалось, что ничего не убила и все нормально. Наш материнский организм защищает ребенка изо всех сил.

2) Читала много информации о том, почему начинает лопаться пузырь. Разные причины. В моем случае , это было из-за того, что как раз на 26 /27 неделях стал интенсивно расти живот. И как раз в тот день, 31 августа, я много бегала- сначала в онкологию, потом на работу, потом снова в онкологию, потом вернулась на работу. И съела-выпила кучу еды. Было жарко, и выпила в течение часа 2 литра жидкости. И было ощущение, что живот лопнет просто- изнутри на него давил желудок и кишечник, а снаружи — мышцы. В Общем- не переедать и не бегать так много .

3) У 1 из 10 женщин начинается преждевременное подтекание вод. Это статистика. Если вы это обнаружили- не паникуйте, а срочно езжайте в перинатальный центр. Как только образовалась дырочка в пузыре, то в течение 12 часов 100% воды будут инфицированы. Тоже статистика.При неповрежденном пузыре вода стерильная. У нас во влагалище есть своя микрофлора. Есть условно-патогенные микробы, которые живут всегда у всех в маленьких концентрациях. Но эти микробы, поднимаясь вверх к отверстию в пузыре , попадают в воду- инфицируют ее, и, самое плохое, расплавляют дырочку в пузыре. Не дают пузырю склеиться обратно. Т.е., если началось подтекание — это будет инфекция, и со временем изливание вод будет только усиливаться из-за неумолимо растущего отверстия в пузыре ( инфекция «ест» пузырь). Опять же, эта инфекция не взялась вовсе ниоткуда или там от мужа. Это наши собственная микрофлора, которая потеряла свой баланс, и условно-патогенные микроорганизмы дали себе волю. И это будет обязательно. Поэтому нам нужна помощь в стационаре.

4) В стационаре вам обязательно должны взять анализ околоплодных вод, чтобы определить какие именно микроорганизмы стали превышать допустимую норму. В моем случае это был энтерококк фекалис (лат.Enterococcus faecalis). Пока готовится этот анализ ( 2-5 дней), вам будут колоть антибиотик общего действия. Мне кололи цефотаксим. Могут цефазолин. Через 3 дня выяснилось, что энтерококк фекалис не чувствителен к цефотаксиму. Назначили амоксиклав в/в 3 раза в день. Так как посев выявил чувствительность к нему . Т.е., должны сделать посев на чувствительность к антибиотикам. Это очень важно, так как вам надо подавить рост бактерий, и никакого толку не будет , если наобум капать любые антибиотики. Итак, мне капали амоксиклав.

5) Должны брать ежедневно анализы крови! Если содержание лейкоцитов стало повышаться- это идет рост инфекции и антибиотик не помогает. Норма до 9.Есть еще один маркер инфекции , называется с-реактивный белок. В норме его должно быть 0-5. С- реактивный белок повышается от всего, он как индикатор, что в организме воспаление. Пусть даже будет простой стоматит. И, конечно, он повысится, если при подтекании вод не помогает антибиотик. Поэтому — каждый день отслеживать, что у вас с кровью. В моем случае мы избежали инфекции, и у сына этот белок тоже был близок к 0. Т.е., если у недоношенных лейкоциты могли еще скакать, из-за незрелости кроветворной системы, то С- реактивный белок уж точно не обманет. Инфекции не было ни у меня, ни у сына.

6) Капали мне амоксиклав, и в итоге все равно в анализах крови при нормальном кол-ве лейкоцитов, С- реактивный белок стал повышаться. Мы связались с Москвой, с НИИ Кулакова на Опарина, и там порекомендовали антибиотик Амписид. Это был третий уже антибиотик, и он мне сразу помог! Капают его 2 раза в день, в/в. Лейкоциты , как и были- в норме, но С- реактивный белок упал , практически, к 0, и это было отлично. Как только начали капать амписид, у меня уменьшилось кол-во вытекаемых вод. Т.е, отверстие , разрыв по рубцу, стал уменьшаться. Но я еще помогала тем, что , понимая, что разрыв находится справа и вверху матки, в месте прокола, старалась никуда не вставать с кровати, находится полусидя даже и ночью. Мне подняли ножной конец кровати на скамеечку, а головной сам поднимался. Т.е., получилось , что я все время сижу. так и спала. Это помогает. Т.е., надо соблюдать покой и найдите положение, при котором будет меньше вытекать воды. К сожалению, если надрыв пузыря произошел снизу, то надо придумывать другое положение, возможно, подкладывать под таз валик. Но необходимое положение надо искать!

7) Не доверяйте УЗИ! Вода в пузыре в норме обновляется в небольшом объеме каждые 4 часа, а в течение 3-х суток она меняется полностью! Если у вас идет подтекание вод, то это не означает, что ребенок там останется без воды. Самое плохое- это именно инфекция. Без воды ребенок практически не останется, так как она постоянно к нему набирается. Если вам удастся 3-4 дня провести, не допуская вытекания воды, то вы уже победили! Симптомы того, что вода набирается- усиленное кровообращение в матке ( оно хорошо чувствуется), матка как бы тихо гудит. Ребенок начинает свободней себя чувствовать — у меня он переворачивался даже горизонтально. Его движения не такие сильные, верней. не такие болезненные. Хотя что там может быть больного от шевелений родного сына, но все же, когда в тот момент, когда у меня было совсем мало воды, то движения ребенка ощущались гораздо сильней, чем когда в матка достаточно воды. Ориентируйтесь на свои ощущения! Живот в обхвате должен расти. У меня за то время, пока вода набиралась, вырос на 7 см. Это за выходные .Грудь стала тяжелеть. Видимо, она реагирует на растяжение матки от прибывающей воды.

8) Не паникуйте! Если врач сказала, что воды совсем нет, абсолютное маловодие, то при отсутствие инфекции, ребенок спокойно может просидеть в матке 3 дня без воды.Он ею не дышит, и не пьет. Вода нужна ему как комфортная среда и для облегчения движения. Ну и для растяжения матки, чтобы она не облипла вокруг ребенка. Поэтому- Боритесь за воду и за время , проведенное ребенком в животе. Помните, что как только его вытащат — то у него будет боль. Ему будут всовывать трубочки в легкие и в желудок- это Больно! Ему будут ставить внутривенные или подключичные катетеры-это тоже больно. Знаю по себе.Таким маленьким детям не дают обезболивающее, практически. Кроме нурофена сиропа. Берегите своего ребенка внутри себя…

9) Если хотите помочь ребенку- идите на кесарево! Я в то время не знала, как лучше, хотела сама родить, так как наивно думала, что это будет как и первые роды в прошлом году. Но врачи сами настояли на кесарево, и уже после операции узнала все тонкости. Во время искусственных родов в 29 недель организм к ним не готов совершенно. Родовые пути «жесткие», а ребенок такой хрупкий и слабенький. Не мучайте его,- малышу крайне сложно пройти весь путь, и остаться неповрежденным. Кровоизлияния в мозг, в легкие… Да,и при кесарево будет кровоизлияние в мозг. Только из-за разности давления в водной среде матки и в воздухе! Вдумайтесь… Как я прочитала — «взрослый человек» бы такое не выдержал. Нельзя сравнивать силы и крепость доношенного ребенка и малыша на 29 неделях. В первые часы после кесарево я очень переживала, что лучше бы роды вызвали, мне в то время показалось, что роды легче прошли. Но по факту- я увидела недоношенных детей после искусственных родов- неровные головки, кровоизлияния в мозг 3-4 степени! /И сейчас меня хоть немного утешает, после смерти моего сына, что я не прогнала его еще и через эту дополнительную боль…Не надо..

10) Пока я лежала в дородовом отделении, то много девушек с изливаниями вод прошло рядом. И , может именно из-за моей ситуации в онкологией, или из-за того, что мы связывались с Москвой и искали все возможные пути сохранения беременности- то мною и занимались , действительно. Рядом пролежала девушка, правда 33/34 недели беременности- ей просто кололи стандартный цефотаксим, который , например, совсем на мою микрофлору не повлиял. И у ней было лейкоцитоз, т.е., пошла в рост инфекция. Никто ей не подбирал антибиотик. А воды каждый день текли и текли. Набирались и снова текли. И вот после недели лежания ей в один день на осмотре прорвали специально пузырь, и вызвали роды. Но одно хорошо, что 33/34 недели — это уже хороший срок, да и девушка была морально готова к родам. Вывод такой- если хотите сохранить беременность, то вам нужен действенный антибиотик и покой. Не надо бояться «лишних» лекарств. Сейчас вам антибиотик, а недоношенному ребенку все равно будут колоть антибиотик именно из-за незрелости имунной системы. Колют обязательно всем детям. Для этого ставится диагноз Пневмония . У моего сыночка , когда я специально узнавала, по анализам не было никакой инфекции. И с-реактивный белок, который на все реагирует, был около 0. Т.е, все чисто. И ему все равно кололи ампициллин, чтобы ничего не подхватил. Рядом лежал ребенок весом 780,0, и ему капали меронем — сильнейший и очень дорогой антибиотик, применяемый при тяжелых инфекциях. Вот у него, как я понимаю, была истинная пневмония… Не знаю, как сейчас у малыша дела… Поэтому- пусть лучше вас самих лечат, пусть долго, сложно и больно, но плацентарный барьер у нас очень сильный, и надо еще добиться, чтобы туда проник антибиотик и хоть как-то работал. У нас очень сильная защита для малыша. Верьте в себя и в своего ребенка.

Посев мочи на флору с определением чувствительности к основному спектру антибиотиков и бактериофагам, в т.ч.кандида

Посев мочи традиционно используется для подтверждения мочевой инфекции. Технологии микробиологического исследования позволяют вырастить жизнеспособные микроорганизмы, присутствующие в моче на специальных питательных средах. Автоматическая идентификация выделенных микроорганизмов проводится методом масс-спектрометрии. Антибиотикограмма ставится диско-диффузионным методом с учетом рекомендаций по антибиотикорезистентности возбудителей к антибактериальным препаратам. Исследование на определение чувствительности к бактериофагам может быть выполнено в случае, если к обнаруженному возбудителю существует бактериофаг.

В каких случаях обычно назначают посев мочи?

• при наличии симптомов инфекций мочевыводящих путей
• для контроля лечения не ранее, чем через 14 день после окончания приема препаратов
• при обследовании беременных

Что именно определяется в процессе анализа?

У здорового человека моча обычно стерильна. Проходя через уретру, при мочеиспускании моча может контаминироваться (загрязниться) находящейся в ней микрофлорой. В уретре может обитать: эпидермальный стафилококк, энтерококк, непатогенные коринебактерии. У женщин возможно попадание в мочу вагинального отделяемого, в этом случае в посеве могут вырасти лактобактерии в небольшом количестве. В случае контаминации определение чувствительности к антибиотикам не производится, так как нет необходимости «лечить» нормальную флору.
При острой форме инфекций наблюдается рост уринокультуры в более высокой степени: обнаруживаются кишечные палочки, протей, синегнойная палочка, клебсиеллы. При хронических воспалительных процессах возможно выделение ассоциации микроорганизмов (может быть выявлен один или два возбудителя) в уринокультуре в более низкой концентрации. При получении роста в посеве грибов рода Candida, обязательно определяется их чувствительность к антимикотическим препаратам.

Что означают результаты теста?

Для постановки точного диагноза результат бактериологического исследования должен быть оценен врачом с учетом клинических проявлений и других методов исследования. Получив результат посева мочи, врач выявит причину инфекции и подберет действенное лечение исходя из списка предложенных антибактериальных препаратов: R-возбудитель не чувствителен к препарату, S-возбудитель чувствителен.

С учетом чувствительности выделенной культуры микроорганизма к препаратам бактериофагов, расширяется возможности как для моно, так и для комбинированного лечения мочевых инфекций с помощью бактериофага и антибиотика.

Обычный срок выполнения теста:

до 8 дней

Нужна ли специальная подготовка к анализу?

Специальной подготовки не требуется. Важно сдать анализ мочи на посев до начала приема антибактериальных препаратов.

Подробнее про условия сдачи можно прочитать в разделе «Подготовка».

Посев мочи на флору с определением чувствительности к основному спектру антибиотиков, в т.ч. Кандида

Посев мочи c определение чувствительности к антибиотикам является основным методом диагностики мочевой инфекции. Микробиологическое исследование позволяет вырастить бактерии на специальных питательных средах. После получения роста микроорганизмов выполняется их идентификация методом масс-спектрометрии. Антибиотикограмма ставится диско-диффузионным методом с учетом рекомендаций по антибиотикорезистентности возбудителей к антибактериальным препаратам с автоматическим считыванием результата. При получении роста нормальной микрофлоры, попавшей в мочу из уретры, определение антибиотикочувствительности не производится.

В каких случаях обычно назначают посев мочи?

• при наличии симптомов мочевой инфекции
• для контроля лечения через 14 день после окончания приема препаратов
• при обследовании беременных (скрининг бактериурии)
• Что именно определяется в процессе анализа?

Моча здорового человека в норме стерильна. При сборе материала для анализа, в порцию мочи может попасть микрофлора из уретры или вагинальное отделяемое у женщин. В уретре в норме обитают в небольшом количестве: эпидермальный стафилококк, энтерококк, непатогенные коринебактерии. При острой мочевой инфекции обычно наблюдается высокая концентрация микроорганизмов в моче, при хроническом процессе в посеве мочи выявляется более низкая степень бактериальной обсемененности. При выявлении в посеве роста грибов рода Candida, обязательно определяется их чувствительность к антимикотическим препаратам.

Что означают результаты теста?

При получении роста микроорганизмов в результате указывается выявленный микроорганизм и данные по его чувствительности к антибиотикам. Врач назначает лечение, руководствуясь данными антибиотикочувствительности: R-возбудитель не чувствителен к препарату, S-возбудитель чувствителен.

Обычный срок выполнения теста:

до 8 дней

Нужна ли специальная подготовка к анализу?

Специальная подготовка не требуется. Важно сдать анализ до начала приема антибактериальных препаратов.

Подробнее про условия сдачи можно прочитать в разделе «Подготовка».

Лучшая оценка чувствительности бактерий к антибиотикам может изменить способ назначения лекарств

Платформа для тестирования антибиотиков с помощью микрочипа, которая сокращает время, необходимое для выбора нужного лекарства, разработана исследователями Корейского передового института науки и технологий. Предоставлено: Jeon / KAIST.

Мы полагаемся на антибиотики для лечения бактериальных инфекций, но рост числа устойчивых к антибиотикам бактерий вынуждает врачей и пациентов бороться с изменением планов лечения.Кроме того, текущие лабораторные тесты для определения того, какие бактерии вызывают конкретную инфекцию, занимают несколько дней, а в случае серьезной инфекции результаты часто оказываются слишком запоздалыми для пациента.

Инженеры-механики из Корейского передового института науки и технологий недавно разработали микрочиповую платформу для тестирования антибиотиков, которая позволяет определить подходящее лекарство всего за шесть-семь часов.

«Попытка определить, какое лекарство использовать в какой дозировке в кратчайшие сроки — это ключ к успешному лечению бактериальных инфекций», — сказала Джесси Чон, автор статьи.

Клиницисты часто лечат опасные для жизни инфекции коктейлем из антибиотиков, надеясь, что один из антибиотиков остановит бактериальную инфекцию. Тем не менее, общее назначение антибиотиков способствует повышению устойчивости бактерий.

«Простое определение эффекта различных комбинаций лекарств может иметь большое влияние на здоровье», — сказал Чон.Она объяснила, что быстрая микрофлюидная система ее команды была первой, для которой были протестированы комбинаторные методы лечения.

Скорость и успех новой системы тестирования чувствительности к антибиотикам корейской команды обусловлены двумя ключевыми новаторскими конструктивными особенностями.

Первой особенностью была разработка диапазона дозировки антибиотика, имеющего решающее значение для расчета минимальной ингибирующей дозы, предотвращающей рост бактерий. Постоянно прокачивая антибиотики через каналы шириной полмиллиметра в микрочипе, команда устанавливает диапазон дозировки через микрочип в течение 30 минут.Критическая экономия времени, диапазон дозировки позволил команде определить минимальную ингибирующую дозу в рамках одного теста.

Вторая особенность заключалась в использовании удобного метода для количественной оценки роста бактерий внутри микрочипа. Были сделаны изображения заключенных в агар бактерий и количественно определена разница в цвете между участками агара с более высокой концентрацией антибиотика, где бактерии не росли (которые были темными), и более отражающими белыми областями, где бактериальные колонии росли легче. на зависящей от позиции градации серого.

Согласование пяти антибиотиков, протестированных в этой новой системе, с клиническими измерениями золотого стандарта предполагает, что система микрочипов достаточно чувствительна для клинического применения, добавил Чон.

«Мы видим, что наша сборка довольно надежно работает с одним лекарством, а также показала, что она может работать с двумя лекарствами; теперь мы хотим еще больше оптимизировать приложение для комбинаторных лекарств», — сказал Чон.

Статья появится в журнале Biomicrofluidics от февраля.5, 2019.

Выявление мутаций, вызывающих устойчивость бактерий к антибиотикам

Дополнительная информация:
Сеунгю Ким и др., Микрожидкостное наблюдение локальной плотности бактерий в градиенте концентрации антимикробных препаратов для экспресс-тестирования чувствительности к антибиотикам, Biomicrofluidics (2019).DOI: 10.1063 / 1.5066558

Предоставлено
Американский институт физики

Ссылка :
Лучшая оценка чувствительности бактерий к антибиотикам может изменить порядок назначения лекарств (5 февраля 2019 г.)
получено 29 сентября 2020
с https: // физ.org / новости / 2019-02-бактериальная-чувствительность-антибиотики-препараты.html

Этот документ защищен авторским правом. За исключением честных сделок с целью частного изучения или исследования, нет
часть может быть воспроизведена без письменного разрешения. Контент предоставляется только в информационных целях.

.

От нормативных требований к аналитическим методам, бактериальной устойчивости и последствиям для окружающей среды и здоровья

Антибиотики широко используются в качестве стимуляторов роста в животноводстве; Среди них тетрациклины представляют собой химическую группу, имеющую важное значение из-за их широкого использования в сельском хозяйстве, превосходя по количеству применяемые почти все другие семейства антибиотиков. Поскольку во всем мире используются значительные количества тетрациклинов, мониторинг этих антибиотиков имеет первостепенное значение. Необходимо добиться прогресса в анализе антибиотиков для оценки правильного использования и дозировки тетрациклинов в пищевых продуктах и ​​кормах и возможных остатков в соответствующих образцах окружающей среды.Тетрациклины по-прежнему считаются клинически значимой группой антибиотиков, хотя распространение детерминант толерантности и устойчивости ограничило их использование. В этом обзоре основное внимание уделяется четырем различным аспектам: (i) тетрациклины, использование, дозировки и нормативные вопросы, регулирующие их применение в пищевых продуктах, с особым вниманием к запретам и ограничениям, введенным в последние годы в нескольких странах агентствами из США. Государства и Европейский Союз, (ii) аналитические методы для тетрациклинов, определения и их остатков в кормах и родственных матрицах с акцентом на наиболее актуальные и новые методы, включая как скрининг, так и подтверждающие методы, (iii) устойчивость к тетрациклинам и тетрациклиновые; устойчивые бактерии в кормах и (iv) риски для окружающей среды и здоровья, связанные с использованием тетрациклинов в кормах для животных.В последних двух случаях мы обсуждаем более важные нежелательные эффекты, которые тетрациклины оказывают на бактериальные сообщества и нецелевые виды, включая нежелательные эффекты на фермеров.

1. Введение

Некоторые соединения, имеющие ветеринарное значение, заслуживают особого внимания с экономической точки зрения и с точки зрения здравоохранения, особенно из-за их широкого применения. К этим соединениям относятся фторхинолоны, β -лактамы, сульфонамиды и тетрациклины [1].

Остатки антибиотиков в кормах и окружающей среде являются определяющим фактором, который обычно не учитывается и не понимается полностью при обсуждении здоровья населения или безопасности пищевых продуктов и кормов.Представлена ​​эпидемиологическая, токсикологическая и химическая информация о тетрациклинах для оценки острых и хронических последствий для здоровья человека и животных в результате их использования [2]. Таким образом, многогранную и сложную проблему лучше решать с помощью подхода «единственное здоровье» [3].

Антибиотики широко используются у продуктивных животных с терапевтическими, профилактическими, метафилактическими целями, способствующими росту и повышению эффективности питания [4]. Использование антибиотиков для стимуляции роста является основным направлением применения у животных и является предметом регуляторных усилий по снижению потребления антибиотиков в животноводстве, птицеводстве и аквакультуре [4].Считается, что стимулирование роста и эффективность питательных веществ достигаются с помощью относительно небольших доз антибиотиков, смешанных с кормом производителем или фермером [4]. Стимулирование роста не имеет аналогов в медицине, и для этой конкретной практики противомикробные препараты не требуют рецепта ветеринара [4]. Однако важно продолжать осмотрительное использование противомикробных препаратов для минимизации устойчивости и обеспечения их постоянной эффективности и доступности этих продуктов, а также уменьшения воздействия на здоровье человека [5].Осуществление мер безопасности на фермах, надлежащий мониторинг и регистрация, идентификация животных, подробнее fi

.

Определение следов тетрациклиновых и фторхинолоновых антибиотиков в иле и почве

В этой работе описывается разработка чувствительного аналитического метода для одновременного определения следов тетрациклиновых и фторхинолоновых антибиотиков в иле и почве на основе экстракции PLE с последующей очисткой SPE и наконец, анализ LC-MS / MS. Выход составил более 87% в случае фторхинолонов и от 25,4 до 41,7% для тетрациклинов. Низкие относительные стандартные отклонения (<15%) были получены в обеих матрицах.Пределы количественного определения составляли от 1,1 до 4,6 нг / г и от 5 до 20 нг / г в почве и иле соответственно. Затем этот метод был успешно применен к анализу целевых антибиотиков в иле, а также в почве, получившей распространение. Наиболее часто встречающимися веществами с наивысшими уровнями были фторхинолоны с концентрациями, превышающими 1000 нг / г в некоторых образцах ила и до 16 нг / г в почве.

1. Введение

Присутствие многих органических веществ во всех частях окружающей среды, как в быту, так и в результате сельскохозяйственной и промышленной деятельности, в настоящее время является доказанным фактом [1–4].Среди соединений, вызывающих озабоченность у научного сообщества, есть ветеринарные и человеческие антибиотики. Многие рецепты выписываются для лечения бактериальных инфекций у людей или животных, а антибиотики также используются для стимуляции роста [5–7]. После приема антибиотики частично метаболизируются в организме [5, 8], а затем выводятся из организма и проходят через очистные сооружения, где они могут казаться невосприимчивыми к лечению [9–11]. Эти соединения затем присутствуют в сточных водах или осадке сточных вод, а также в навозе, вносимом в сельскохозяйственные угодья.Распространение антибиотиков в окружающую среду со временем может иметь неблагоприятные последствия. Действительно, они могут вызывать устойчивость к патогенам [12–14] и наносить вред экосистемам и здоровью человека.

Согласно отчету ANMV (Французское национальное агентство ветеринарной медицины), общий объем продаж во Франции в 2012 году составил 782 тонны ветеринарных антибиотиков [15]. Это самый низкий тоннаж с момента начала отслеживания. Однако, учитывая различия в активности антибиотиков и их различные дозы, объем проданных товаров не совсем точно отражает использование антибиотиков.Действительно, недавние антибиотики обычно более активны и требуют введения меньшего количества. По данным ANSM (Французское национальное агентство по безопасности лекарственных средств и товаров для здоровья), в медицине для человека количественный уровень потребления постоянно растет с 2010 года. Таким образом, он достигает 32,3 числа установленных суточных доз на 1000 жителей в сутки.

Особого внимания заслуживают два семейства антибиотиков: тетрациклины и фторхинолоны. Тетрациклины составляют почти половину продаж антибиотиков для ветеринарных целей во Франции [15].Эти молекулы обладают четырьмя линейно аннелированными шестичленными кольцами с характерным расположением двойных связей (таблица 1). Они замещены более или менее гидрофильными группами (гидроксил, амид или кетон), которые образуют хелаты с катионами (Ca ²⁺ , Mg ²⁺ ), естественно присутствующими в окружающей среде [16, 17]. Следовательно, тетрациклины будут иметь тенденцию образовывать комплекс с двух- или трехвалентными катионами, присутствующими в почве, и, таким образом, сильно адсорбироваться на этой матрице и, следовательно, не выщелачиваться.Кроме того, эти молекулы имеют амфотерный характер. В самом деле, они имеют три ионизируемых центра и могут существовать в катионной, анионной или цвиттерионной формах. Адсорбция тетрациклинов почвой сильно зависит от pH; также известно, что катионообменное взаимодействие является очень важным процессом адсорбции [18]. Эти вещества имеют низкие значения (коэффициент разделения октанол-вода), как показано в таблице 1. В настоящее время используется для характеристики или оценки присутствия органических микрозагрязнителей в различных фазах окружающей среды.Это мера равновесной концентрации соединения между октанолом и водой, которая указывает на возможность разделения на органическое вещество почвы.

.

Распространение антибиотиков и устойчивых к антибиотикам бактерий на свалках в Кумаси, Гана

Распространенность устойчивости к противомикробным препаратам среди микробных сообществ представляет собой серьезную угрозу для глобального здравоохранения и безопасности. Свалки, которые являются резервуаром для многих фармацевтических препаратов, обеспечивают благоприятную среду обитания для устойчивых к противомикробным препаратам микробов и устойчивого переноса генов и, следовательно, являются основным фактором явления устойчивости к противомикробным препаратам. Таким образом, это исследование определило уровни трех широко используемых антибиотиков, метронидазола, пенициллина и амоксициллина, а также возникновение устойчивости к противомикробным препаратам среди микробов в образцах почвы и фильтрата с активных и заброшенных свалок в Кумаси, Гана.Образцы почвы были собраны с одного действующего и четырех заброшенных свалок, а пробы фильтрата были собраны только с действующего полигона. Обработка ультразвуком и твердофазная экстракция (ТФЭ) использовались для подготовки образцов с последующим анализом методом HPLC-PDA. Выделение и характеристика бактерий проводились с использованием стандартных бактериологических методов. Тест на чувствительность к антибиотикам проводился в соответствии с руководящими принципами Европейского комитета по тестированию чувствительности к противомикробным препаратам (EUCAST).Антибиотики были обнаружены в очень высоких концентрациях в образцах, взятых как с действующих, так и с заброшенных свалок. Для образцов фильтрата, полученных из Dompoase, пенициллин присутствовал в наивысшей концентрации (67,42 ± 5,35 мк г / мл), затем следовали метронидазол (18,25 ± 7,92 мк г / мл) и амоксициллин (10,96 ± 6,93 мк г). / мл). В целом уровни антибиотиков в образцах почвы были одинаковыми как на действующих, так и на заброшенных свалках. Тем не менее, как и в случае сточных вод, уровни пенициллина были намного выше (), чем уровни амоксициллина и метронидазола в любом конкретном месте.При скрининге против некоторых антибиотиков Enterobacteriaceae и некоторые виды Bacillus и Listeria , выделенные из образцов почвы и фильтрата, оказались устойчивыми. Высокий уровень антибиотиков в сочетании с наличием устойчивых микробов на этих свалках требует немедленных мер по прекращению утилизации фармацевтических препаратов в окружающей среде, чтобы предотвратить любые возможные проблемы со здоровьем населения.

1. Введение

Рост числа случаев резистентности к противомикробным препаратам (УПП) представляет собой существенную угрозу для здоровья населения, поскольку приводит к значительному снижению эффективности различных схем лечения противомикробными препаратами, что приводит к увеличению заболеваемости и смертности, а также к общей увеличение расходов на здравоохранение [1].Таким образом, экономическое бремя AMR огромно и потенциально может нанести вред экономике развивающихся стран, таких как Гана. В различных отчетах описывается присутствие штаммов многих патогенных бактерий во всем мире с множественной лекарственной устойчивостью [2, 3]. В Гане устойчивые штаммы различных патогенных бактерий были выделены из разных источников [4–8]. Выделение устойчивых к противомикробным препаратам бактерий из почв и сточных вод со свалок остается неизученным в Гане, даже несмотря на то, что существует ряд сообщений из других источников [9–11].

Два фактора, которые в огромной степени способствуют возникновению УПП, — это сами противомикробные агенты и наличие мобильных резистентных генов в окружающей среде. Противомикробные агенты действуют как селективные агенты против рассматриваемого микроорганизма, тогда как микроорганизмы используют гены устойчивости, чтобы избежать угроз, исходящих от противомикробных агентов [12, 13]. Некоторые гены устойчивости развиваются в результате мутаций в микроорганизмах и давления отбора из-за использования противомикробных агентов.Это давление отбора, обеспечиваемое антимикробными агентами, дает штаммам с этими генами устойчивости конкурентное преимущество. Кроме того, использование неоптимальных доз противомикробных препаратов облегчает поэтапный выбор устойчивости. Гены устойчивости могут передаваться от одного микроба к другому с помощью внехромосомных элементов, таких как плазмиды, бактериофаги, или путем высвобождения голой ДНК из мертвых бактерий в окружающую среду (трансформация) [14]. Этот перенос генов может быть внутри- или межвидовым [15].Неизбирательное удаление неиспользованных и просроченных лекарств в окружающую среду может способствовать развитию устойчивых генов у выживших микроорганизмов. Подвижность этих устойчивых генов потенциально усугубляет существование УПП.

Доступность противомикробных препаратов без рецепта с минимальным профессиональным контролем или без него и, следовательно, потенциальная возможность их выдачи лицами, мало или совсем не знакомыми с режимом дозирования, использованием слабодействующих препаратов (либо из-за некачественного производства или подделки), а также наличия фармацевтических препаратов в окружающей среде из-за использования в сельском хозяйстве и / или неправильных маршрутов утилизации способствует увеличению случаев УПП [16–19].

Недавний отчет о судьбе неиспользованных и / или просроченных лекарств в Гане показал, что они утилизируются как твердые бытовые отходы (ТБО) [20]. Когда эти ТБО сбрасываются на свалку, микроорганизмы на свалке подвергаются воздействию множества лекарств, включая противомикробные препараты, в неизмененном виде или в виде метаболитов. Воздействие на эти микробы сублетальных концентраций антимикробных агентов может вызвать события, которые приведут к приобретению генов устойчивости [21, 22]. Многие исследования в различных частях мира документально подтвердили присутствие генов устойчивости к противомикробным препаратам и / или устойчивых к противомикробным препаратам бактерий из сточных вод и почв свалок, при этом некоторые из них были идентифицированы как патогенные штаммы [23-25].

β -лактамные антибиотики — одни из наиболее потребляемых антибиотиков во всем мире [26]. Амоксициллин, пенициллин и метронидазол составляют почти 75% всех антибиотиков, используемых в медицине для людей в районе Большой Аккры в Гане [27]. Амоксициллин и пенициллин, которые являются β -лактамными антибиотиками, действуют путем ингибирования синтеза пептидогликана. В результате клеточная стенка ослабляется, что приводит к подавлению роста клеток и, в конечном итоге, к их гибели. Метронидазол, принадлежащий к классу антибиотиков, называемых нитроимидазолами, вызывает гибель клеток, препятствуя синтезу ДНК [26]. β -лактамы и метронидазол являются одними из лучших классов антибиотиков, обнаруживаемых в высоких концентрациях в окружающей среде [28, 29].

О присутствии противомикробных агентов и устойчивых к противомикробным препаратам бактерий в почве и в сточных водах свалок в Гане сообщается редко [30]. Присутствие патогенных и условно-патогенных штаммов может представлять санитарный риск для рабочих на свалках, жителей территорий и ветеринарных животных, которые пасутся и пьют поблизости от свалок.Кроме того, дикие птицы, которые процветают на этих свалках, потенциально могут распространять эти микроорганизмы. Поскольку присутствие противомикробных агентов может влиять на присутствие резистентных микроорганизмов, были оценены уровни остаточных количеств антибиотиков (амоксициллин, пенициллин и метронидазол) и характер устойчивости к противомикробным препаратам в фильтратах и ​​почвах на 5 полигонах в Кумаси, Гана.

2. Материалы и методы

2.1. Реагенты

На протяжении всего исследования использовались химические вещества аналитической чистоты.Стандарты антибиотиков, амоксициллин, пенициллин и метронидазол, были получены от Sigma-Aldrich (Сент-Луис, США). Вода Milli-Q использовалась для приготовления всех реагентов и калибровочных стандартов. Все растворы, приготовленные для ВЭЖХ, пропускали через полипропиленовые фильтры 0,2–0,6 мкм мкм перед анализом ВЭЖХ.

2.2. Сбор и обращение с пробами

Пробы почвы были отобраны с 5 участков: 4 заброшенных полигона и 1 действующий полигон. Образцы фильтрата были также собраны с действующей свалки.Все пять населенных пунктов находились в районе Ашанти в Гане. Заброшенными объектами были Кронум (6 ° 45′37.926 ″ с.ш., 1 ° 37′56.958 ″ з.д.), Охвим (6 ° 45′12,0 ″ северной широты, 1 ° 40′20,6 ″ з.д.), WAEC (6 ° 41′688,0 ″ N, 1 ° 36′7,704 ″ з.д.) и Бохайен Кропо (6 ° 41′03,5 ″ северной широты, 1 ° 37′14,2 ″ з.д.). Домпоаза (6 ° 37′39,51 ″ с.ш., 1 ° 35′35,286 ″ з.д.) была активным сайтом. Карта мест отбора проб показана на рисунке 1. Были собраны пробы почвы весом 50 грамм и пробы фильтрата объемом 500 мл. Образцы были немедленно доставлены в охлажденных условиях в лабораторию и хранились в холодильнике при 4 ° C до анализа.

2.3. Извлечение и очистка антибиотиков из сточных вод и образцов почвы

2.3.1. Leachates

Порция образца фильтрата объемом 50 мл была тщательно перемешана путем интенсивного перемешивания 5 раз и центрифугировалась при 3000 об / мин в течение 10 минут. Затем супернатант фильтровали с использованием фильтровальной бумаги Whatman, Grade 1. Десять миллилитров фильтрата доводили до 50 мл дистиллированной водой и использовали для твердофазной экстракции (SPE).

2.3.2. Грунт

По десять миллилитров 0.2 М лимонный буфер (pH 4,0) и ацетонитрил добавляли к 2 г образца почвы в центрифужной пробирке, обрабатывали ультразвуком в ультразвуковой ванне (VWR USC 600T, 45 кГц, 120 Вт) в течение 15 минут и центрифугировали при 25 ° C. Затем супернатант переносили в колбу. Протокол экстракции был выполнен 3 раза на каждом образце почвы, и полученные супернатанты были объединены и выпарены при 55 ° C для удаления растворителя перед очисткой SPE.

2.4. Процедура очистки SPE

Колонки SPE (Oasis® HLB 6 см, ³ 200 мг, 30 картриджей мкм мкм) кондиционировали с использованием 5 мл метанола (MeOH), а затем 5 мл дистиллированной воды.Образцы (10 мл для почвы и 50 мл для фильтрата) загружали в картриджи с помощью вакуумного коллектора и насоса. Скорость падения доводили до 1,0 мл / мин. Антибиотики элюировали из картриджей 5 мл МеОН после промывания 5 мл воды. Элюент упаривали досуха над азотом. Образцы были восстановлены в 200 мкл л MeOH и 1500 мкл л воды (что соответствует факторам концентрации 29,4 и 5,9 для образцов фильтрата и почвы, соответственно). Затем образцы переносили во флаконы для ВЭЖХ объемом 2 мл для анализа.

2,5. Условия хроматографии

Хроматографическое разделение антибиотиков проводили на колонке для ВЭЖХ Waters μ Bondapak ™ C-18 (300 мм × 3,9 мм, 5 μ м). Анализы проводили при скорости потока 2,0 мл / мин при температуре окружающей среды. Использовали программирование градиентного потока с бинарными насосами, содержащими растворитель A (0,1% водный раствор муравьиной кислоты) и растворитель B (MeOH). Подробности программы потока приведены в таблице 1. Объем впрыска был зафиксирован на уровне 100 мкл л с помощью стандартного контура объема.Все соединения элюировались в течение 13 минут; таким образом, хроматографический цикл был запрограммирован на 15 минут.

Детектор КПК использовали для обнаружения, и хроматограммы были извлечены при 204 нм для амоксициллина и пенициллина и 320 нм для метронидазола. Хроматографические и интегрированные данные были записаны и обработаны с помощью программного обеспечения Chromera. Количественный анализ проводился с использованием внешней калибровки и измерения площади пика.

2.6. Проверка метода HPLC-PDA

Линейность для всех исследуемых образцов была проверена в диапазоне концентраций 6,25–200 мкг г / мл (6,25, 12,50, 25, 50, 100 и 200 мкг г / мл). Пределы обнаружения (LOD) и пределы количественного определения (LOQ) для каждого тестового образца были рассчитаны относительно отношения сигнал / шум (S: N).

2.6.1. Стандартная калибровка

Каждый антибиотик был идентифицирован путем сравнения времени удерживания образца со стандартным лекарственным средством.Были приготовлены и введены пять концентраций (6,25–200 мкг г / мл) смешанного стандартного раствора. После анализа ВЭЖХ строили стандартную кривую зависимости площади пика от концентрации. Количественное определение аналитов в образцах проводилось с использованием калибровочной кривой.

2.6.2. Извлечение и обеспечение качества

Для оценки извлечения SPE в образцы и холостые образцы (водные и почвенные матрицы, не содержащие ни одного аналита) добавляли известные концентрации антибиотиков. После экстракции и очистки SPE (как описано ранее) уровни антибиотиков в образцах определяли по площадям пиков аналитов на хроматограмме.Чтобы гарантировать, что система ВЭЖХ функционирует должным образом, стандарты вводили до анализа и после каждых 5 прогонов образцов. Анализы холостых образцов также проводились после каждых 5 запусков для отслеживания интерференции образцов. Ввод образцов производили в трех экземплярах. Каждая партия анализов была подготовлена ​​с включением холостого опыта для проверки фонового загрязнения. Данные восстановления представлены в таблице 2.

2.7. Выделение микроорганизмов из почвы и пробы сточных вод

Выделение бактерий проводили методами серийных разведений. В этой методике 1 г образца почвы взвешивали и серийно разбавляли до 10 ⁻¹⁰ стерильной дистиллированной водой. Эти разведения переносили в стерильные чашки Петри с разными этикетками. Расплавленный агар добавляли в чашки Петри и равномерно перемешивали, чтобы обеспечить однородность смеси. Планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 24 часов.Для образца фильтрата 1 мл фильтрата вводили в 9 мл стерильной дистиллированной воды и серийно разбавляли, как и образцы почвы.

Отчетливые колонии различной морфологии (форма, край, возвышение и непрозрачность) были изолированы и инокулированы в 10 мл питательного бульона при 37 ° C в течение 24 часов. Культуры бульона наносили штрихами на чашки с питательным агаром для подтверждения морфологии, описанной ранее, а затем выделяли в новый питательный бульон в виде чистых культур.

2,8. Идентификация изолятов

2.8.1. Окрашивание по Граму и биохимические тесты

Окрашивание по Граму проводили для определения клеточных характеристик изолятов, т. Е. Реакции по Граму (грамположительный или отрицательный) и формы изолята (кокки или бациллы). Выделенные микроорганизмы фиксировали нагреванием на предметном стекле, осторожно пропуская предметное стекло с небольшим посевным материалом изолята через горелку Бунзена три раза. Первичный краситель (кристаллический фиолетовый) добавляли на предметное стекло и оставляли на 1 минуту. Предметные стекла ополаскивали слабой струей воды для удаления несвязанного кристаллического фиолетового.Затем добавляли йод по Граму на 1 минуту, промывали сначала спиртом, а затем легкой струей воды. На предметное стекло добавляли вторичный краситель, сафранин, оставляли на несколько минут и затем осторожно промывали струей воды. Микроскопическое исследование слайдов проводилось под микроскопом с масляной иммерсией (× 100) линзой. Биохимические тесты, такие как индол, сероводород, каталаза, цитрат, метиловый красный и тесты ферментации сахара, также были выполнены в соответствии с установленными процедурами [31, 32].

2.9. Тестирование на чувствительность к антибиотикам

Приготовили агар Мюллера – Хинтона и вылили его в чашку Петри. Пластины сушили при 35 ° C. Используя метод прямой суспензии колоний, суспензию организмов готовили в физиологическом растворе до плотности 0,5 стандарта мутности Макфарланда. Суспензии использовали в течение 15 минут после приготовления. В суспензию погружали стерильный ватный тампон (излишки жидкости удаляли нажатием и поворотом тампона к внутренней части пробирки) и использовали для равномерного распределения стандартизованного посевного материала по всей поверхности агара, гарантируя отсутствие зазоров между штрихами.С помощью стерильных пинцетов были помещены коммерчески приготовленные диски с антибиотиками (гентамицин, ципрофлоксацин, амикацин, ампициллин, амоксициллин, цефуроксим, эритромицин, тетрациклин и пенициллин от Thermo Scientific, Oxoid Antimicrobial Susceptibility Discs) с определенными концентрациями мкг (5–304 мкг). на засеянной поверхности агара. Это было сделано в течение 15 минут после инокуляции.

Пинцет, стерилизованный пламенем, был использован для осторожного прижатия дисков к поверхности агара. В течение 15 минут после нанесения диска планшеты инкубировали в течение 18 часов при 37 ° C до определения результатов.Зоны ингибирования вокруг каждого из дисков с антибиотиком измеряли с точностью до миллиметра. Диаметр зоны каждого лекарственного средства интерпретировался с использованием критериев, опубликованных Европейским комитетом по тестированию чувствительности к противомикробным препаратам (EUCAST) [33].

3. Результаты

Линейность была проверена в диапазоне концентраций 6,25–200 мкг г / мл (6,25, 12,50, 25, 50, 100 и 200 мкг г / мл). Все соединения показали хорошую корреляцию с коэффициентами R ² между 0.96 и 0,99. Пределы обнаружения (LOD) и пределы количественной оценки (LOQ), рассчитанные по отношению сигнал / шум (S: N), находились в пределах 0,003–1,565 и 0,010–4,740 мк г / мл, соответственно, для всех антибиотики. Извлечение метронидазола и пенициллина в образцах фильтрата было высоким (> 90%), а извлечение амоксициллина ниже (~ 38%). При количественном анализе поправочный коэффициент не применялся. Все пики элюировались в течение 13 минут, при этом сначала элюировался метронидазол (6.460 минут), затем амоксициллин (7,815 минут) и пенициллин (12,094 минуты). Результаты разработки аналитического метода показаны в Таблице 2.

Пробы фильтрата были получены только из Dompoase, поскольку это была единственная действующая свалка среди тех, где были взяты пробы. Из проанализированных антибиотиков наиболее распространенным был пенициллин со средним уровнем 67,42 ± 5,35 μ мкг / мл. Никакой существенной разницы между уровнями амоксициллина и метронидазола в образце фильтрата не наблюдалось.Уровни пенициллина были одинаковыми во всех образцах фильтрата (выше, ниже или в середине), но уровни амоксициллина и метронидазола варьировали. Уровни амоксициллина снижались по мере продвижения от участков потока вверх по течению к участкам ниже по течению (таблица 3).

В пробах почвы все три антибиотика были обнаружены в пробах из всех пяти мест, где были взяты пробы. В целом уровни пенициллина были намного выше, чем уровни амоксициллина и метронидазола.У Kronum были самые высокие уровни пенициллина (120,52 ± 22,33, μ, г / г) и амоксициллина (76,62 ± 15,3, μ г / г), в то время как у WAEC были самые низкие уровни среди всех проанализированных антибиотиков (8,88 ± 1,19, 3,44 ± 2,78 и 70,36 ± 9,02 μ г / г для амоксициллина, метронидазола и пенициллина соответственно). Уровни различных антибиотиков в образцах почвы из Dompoase, Kronum, Bohyen Kropo и Ohwin были одинаковыми. Однако образцы почвы из WAEC содержали заметно отличающиеся концентрации антибиотиков по сравнению с другими четырьмя местами (Таблица 4).

.