Лаврова разочаровала реакция Франции и Германии на предложения по Донбассу
https://ria.ru/20211117/perepiska-1759552285.html
Лаврова разочаровала реакция Франции и Германии на предложения по Донбассу
Лаврова разочаровала реакция Франции и Германии на предложения по Донбассу — РИА Новости, 17.11.2021
Лаврова разочаровала реакция Франции и Германии на предложения по Донбассу
Париж и Берлин выступили против включения в итоговый документ предполагаемой встречи в «нормандском формате» пункта о необходимости налаживать прямой диалог… РИА Новости, 17.11.2021
2021-11-17T22:02
2021-11-17T22:02
2021-11-17T23:45
в мире
киев
оон
франция
мид франции
жан-ив ле дриан
хайко маас
минские соглашения
/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content
/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content
https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e5/05/0f/1732445292_0:0:3298:1855_1920x0_80_0_0_8c82d3e38209db965b27642267ea35ff.jpg
МОСКВА, 17 ноя — РИА Новости. Париж и Берлин выступили против включения в итоговый документ предполагаемой встречи в «нормандском формате» пункта о необходимости налаживать прямой диалог между Киевом и непризнанными республиками Донбасса.Это следует из опубликованной российским МИД переписки министра иностранных дел Сергея Лаврова с его французским и немецким коллегами Жан-Ивом Ле Дрианом и Хайко Маасом.Так, глава российского внешнеполитического ведомства в своем письме подчеркнул необходимость хорошо подготовить министерскую встречу в «нормандском формате», в частности начать разработку обстоятельного совместного итогового заявления с конкретными рекомендациями Украине, Донецку и Луганску.Свое письмо он сопроводил проектом такого документа, предложив коллегам выдвинуть комментарии и поправки.Как указано в ответе Мааса и Ле Дриана, в тексте «содержатся положения, которые, несомненно, не найдут поддержки среди стран «нормандского формата», в том числе «налаживание прямого диалога между Киевом, Донецком и Луганском».В следующем письме Лавров пишет, что не может скрыть своего разочарования.Кроме того, в проекте коммюнике, предложенном Россией, содержалось положение о подготовке встречи лидеров стран — участниц «нормандского формата» для обсуждения «политических условий и условий безопасности, в том числе для организации местных выборов».Ранее во вторник МИД опубликовал переписку Лаврова с Ле Дрианом и Маасом. Как пояснили на Смоленской площади, такое решение там приняли из-за искажения позиции Москвы, ее роли во внутриукраинском урегулировании и подходов к проведению возможной министерской встречи в «нормандском формате».Как следует из представленных документов, МИД заранее предупредил партнеров о публикации писем.
https://ria.ru/20211116/protest-1759268299.html
https://ria.ru/20211117/lavrov-1759546080.html
киев
франция
россия
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
2021
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
Новости
ru-RU
https://ria.ru/docs/about/copyright.html
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e5/05/0f/1732445292_296:0:3027:2048_1920x0_80_0_0_9209b5ba9016c6ce7ecf73290076d7e3.jpg
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
в мире, киев, оон, франция, мид франции, жан-ив ле дриан, хайко маас, минские соглашения, россия
22:02 17.11.2021 (обновлено: 23:45 17.11.2021)
Лаврова разочаровала реакция Франции и Германии на предложения по Донбассу
Бесстрашные люди. Китайцев испугала реакция Шойгу на угрозы в адрес России
https://ria.ru/20211101/kitaytsy-1757239111.html
«Бесстрашные люди». Китайцы пришли в ужас из-за реакции Шойгу на угрозы в адрес России
Бесстрашные люди. Китайцев испугала реакция Шойгу на угрозы в адрес России — РИА Новости, 01.11.2021
«Бесстрашные люди». Китайцы пришли в ужас из-за реакции Шойгу на угрозы в адрес России
Читатели китайской газеты «Хуаньцю шибао» испугались реакции министра обороны России Сергея Шойгу на заявление его немецкой коллеги Аннегрет Крамп-Карренбауэр о РИА Новости, 01.11.2021
2021-11-01T16:22
2021-11-01T16:22
2021-11-01T23:33
европа
китай
германия
сергей шойгу
нато
аннегрет крамп-карренбауэр
россия
/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content
/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content
https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e5/09/0f/1750108671_0:180:3001:1868_1920x0_80_0_0_e669b564bdc2d4082a8eb5851f0fafe9.jpg
МОСКВА, 1 ноя — РИА Новости. Читатели китайской газеты «Хуаньцю шибао» испугались реакции министра обороны России Сергея Шойгу на заявление его немецкой коллеги Аннегрет Крамп-Карренбауэр о необходимости сдерживания России c использованием ядерного оружия.Шойгу в ответ призвал Берлин помнить, чем заканчивается стягивание сил к российским границам, и подчеркнул, что безопасность в Европе может быть только общей.Китайские пользователи раскритиковали Крамп-Карренбауэр и увидели в ее выступлении одобрение американской внешней политики.»В невежестве своем люди бесстрашны. Некоторые европейские политики упали в обморок от восторга от «общих ценностей» Байдена», — написал один из юзеров.Многие восприняли всерьез ответ Шойгу и согласились со словами российского министра.»Побежденные страны во Второй мировой войне осмелились вновь угрожать стране-победительнице», — отметил один из комментаторов.»Этой немецкой женщине — министру обороны явно не хватает советской Красной армии», — поддержали предыдущего оратора.»Немцы должны быть благодарны за то, что Россия не восприняла это всерьез», — подчеркнул пользователь сайта «Хуаньцю шибао».»Господин Шойгу засмеялся от этой новости», — заключил другой китайский комментатор.Крамп-Карренбауэр 21 октября, отвечая на вопрос, размышляет ли НАТО о сценариях сдерживания России для Балтийского и Черноморского регионов, в том числе в воздушном пространстве с ядерным оружием, заявила, что нужно очень ясно дать понять Москве, что западные страны готовы использовать и такие средства.Полный текст статьи читайте на сайте ИноСМИ >>
https://ria.ru/20211030/udar-1756971132.html
https://ria.ru/20211022/udar-1755861210.html
https://ria.ru/20211020/voyna-1755475864.html
европа
китай
германия
россия
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
2021
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
Новости
ru-RU
https://ria.ru/docs/about/copyright.html
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e5/09/0f/1750108671_135:0:2864:2047_1920x0_80_0_0_8190c8ccebfff9772abd51226d318894.jpg
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
европа, китай, германия, сергей шойгу, нато, аннегрет крамп-карренбауэр, россия
16:22 01.11.2021 (обновлено: 23:33 01.11.2021)
Бесстрашные люди. Китайцев испугала реакция Шойгу на угрозы в адрес России
МОСКВА, 1 ноя — РИА Новости. Читатели китайской газеты «Хуаньцю шибао» испугались реакции министра обороны России Сергея Шойгу на заявление его немецкой коллеги Аннегрет Крамп-Карренбауэр о необходимости сдерживания России c использованием ядерного оружия.Шойгу в ответ призвал Берлин помнить, чем заканчивается стягивание сил к российским границам, и подчеркнул, что безопасность в Европе может быть только общей.
30 октября, 07:16
FT: союзники США поддержали принцип упреждающего ядерного удара по России
Китайские пользователи раскритиковали Крамп-Карренбауэр и увидели в ее выступлении одобрение американской внешней политики.
«В невежестве своем люди бесстрашны. Некоторые европейские политики упали в обморок от восторга от «общих ценностей» Байдена», — написал один из юзеров.
Многие восприняли всерьез ответ Шойгу и согласились со словами российского министра.
«Побежденные страны во Второй мировой войне осмелились вновь угрожать стране-победительнице», — отметил один из комментаторов.
«Этой немецкой женщине — министру обороны явно не хватает советской Красной армии», — поддержали предыдущего оратора.
22 октября, 18:38
Forbes оценил шансы США пережить ядерный удар, нанесенный Россией
«Немцы должны быть благодарны за то, что Россия не восприняла это всерьез», — подчеркнул пользователь сайта «Хуаньцю шибао».
«Господин Шойгу засмеялся от этой новости», — заключил другой китайский комментатор.
Крамп-Карренбауэр 21 октября, отвечая на вопрос, размышляет ли НАТО о сценариях сдерживания России для Балтийского и Черноморского регионов, в том числе в воздушном пространстве с ядерным оружием, заявила, что нужно очень ясно дать понять Москве, что западные страны готовы использовать и такие средства.Полный текст статьи читайте на сайте ИноСМИ >>
20 октября, 19:45
Описаны катастрофические последствия ядерной войны
NI: реакция Москвы на провокацию Киева может выйти за рамки резких слов
https://ria.ru/20211101/dron-1757136416.html
До США наконец-то дошло: Россия пойдет на решительные меры из-за случившегося в Донбассе
NI: реакция Москвы на провокацию Киева может выйти за рамки резких слов — РИА Новости, 01.11.2021
До США наконец-то дошло: Россия пойдет на решительные меры из-за случившегося в Донбассе
Россия может не ограничиться резкими словами в адрес Украины после применения дрона Bayraktar в Донбассе, пишет в статье для журнала National Interest… РИА Новости, 01.11.2021
2021-11-01T02:12
2021-11-01T02:12
2021-11-01T11:48
в мире
украина
киев
дмитрий песков
ситуация в днр и лнр
россия
марк эпископос
турция
/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content
/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content
https://cdnn21.img.ria.ru/images/154927/10/1549271073_404:0:2724:1305_1920x0_80_0_0_b580d07af17bff3cb180a94a5a5281f6.jpg
МОСКВА, 1 ноя — РИА Новости. Россия может не ограничиться резкими словами в адрес Украины после применения дрона Bayraktar в Донбассе, пишет в статье для журнала National Interest обозреватель Марк Эпископос.Генштаб ВСУ ранее заявил, что украинские военные впервые применили ударный беспилотник Bayraktar в Донбассе. По утверждению штаба, управляемой бомбой дрон «уничтожил пушку противника».По его мнению, Россия якобы перебрасывает войска к своим западным границам.Автор статьи отметил, что закупка и развертывание Киевом турецких боевых беспилотников вновь разожгли конфликт в Донбассе и это может привести к его дальнейшей эскалации.»Россия считает, что использование турецких беспилотников рядом с линией соприкосновения нарушает Минские соглашения, однако Украина с этим не согласна», — заключил обозреватель.Ранее газета The Washington Post написала со ссылкой на источники, что некоторые американские и европейские чиновники обеспокоены якобы имеющим место «возобновлением наращивания численности российских войск» близ границы с Украиной.Киев и западные государства в последнее время выражают обеспокоенность в связи с приписываемым Москве «усилением агрессивных действий» у границ Украины. В свою очередь, в Кремле заявляли, что Россия перемещает войска в пределах своей территории и на свое усмотрение, но никому не угрожает и никого это не должно волновать.Москва, комментируя тему поставок Турцией дронов Украине, также подчеркивала, что опасения подтверждаются, и это может привести к негативным последствиям и дестабилизации ситуации на юго-востоке страны.
https://ria.ru/20211028/ukraina-1756602873.html
https://ria.ru/20211031/bespilotnik-1757086764.html
украина
киев
россия
турция
донбасс
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
2021
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
Новости
ru-RU
https://ria.ru/docs/about/copyright.html
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
https://cdnn21.img.ria.ru/images/154927/10/1549271073_694:0:2434:1305_1920x0_80_0_0_013e7efda4b10b275dec97c30b2acbe9.jpg
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
в мире, украина, киев, дмитрий песков, ситуация в днр и лнр, россия, марк эпископос, турция, вооруженные силы украины, донбасс
02:12 01.11.2021 (обновлено: 11:48 01.11.2021)
NI: реакция Москвы на провокацию Киева может выйти за рамки резких слов
МОСКВА, 1 ноя — РИА Новости. Россия может не ограничиться резкими словами в адрес Украины после применения дрона Bayraktar в Донбассе, пишет в статье для журнала National Interest обозреватель Марк Эпископос.Генштаб ВСУ ранее заявил, что украинские военные впервые применили ударный беспилотник Bayraktar в Донбассе. По утверждению штаба, управляемой бомбой дрон «уничтожил пушку противника».
«Следует обратить внимание на некоторые ранние сигналы, согласно которым реакция Кремля на эти предполагаемые «провокации» может выйти за рамки резких слов», — считает Эпископос.
По его мнению, Россия якобы перебрасывает войска к своим западным границам.
Автор статьи отметил, что закупка и развертывание Киевом турецких боевых беспилотников вновь разожгли конфликт в Донбассе и это может привести к его дальнейшей эскалации.
«Россия считает, что использование турецких беспилотников рядом с линией соприкосновения нарушает Минские соглашения, однако Украина с этим не согласна», — заключил обозреватель.
28 октября, 01:41
Посол Украины в Германии возмутился реакцией ФРГ на удар дрона Bayraktar
Ранее газета The Washington Post написала со ссылкой на источники, что некоторые американские и европейские чиновники обеспокоены якобы имеющим место «возобновлением наращивания численности российских войск» близ границы с Украиной.
Киев и западные государства в последнее время выражают обеспокоенность в связи с приписываемым Москве «усилением агрессивных действий» у границ Украины. В свою очередь, в Кремле заявляли, что Россия перемещает войска в пределах своей территории и на свое усмотрение, но никому не угрожает и никого это не должно волновать.
Москва, комментируя тему поставок Турцией дронов Украине, также подчеркивала, что опасения подтверждаются, и это может привести к негативным последствиям и дестабилизации ситуации на юго-востоке страны.
31 октября, 14:08
В Турции сделали «замечание» Украине
Захарову возмутила реакция Запада на диверсию в Крыму
https://ria.ru/20210908/diversii-1749243175.html
Захарову возмутила реакция Запада на диверсию в Крыму
Захарову возмутила реакция Запада на диверсию в Крыму — РИА Новости, 08.09.2021
Захарову возмутила реакция Запада на диверсию в Крыму
Западные страны воспринимают украинские диверсии в Крыму как нормальное положение дел, заявила официальный представитель МИД России Мария Захарова. РИА Новости, 08.09.2021
2021-09-08T18:55
2021-09-08T18:55
2021-09-08T20:30
в мире
украина
севастополь
республика крым
мария захарова
россия
/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content
/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content
https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e5/09/03/1748489363_0:0:3120:1755_1920x0_80_0_0_f3ea6289684190dbb132d154b499ff06.jpg
МОСКВА, 8 сен — РИА Новости. Западные страны воспринимают украинские диверсии в Крыму как нормальное положение дел, заявила официальный представитель МИД России Мария Захарова.Как ранее сообщили в пресс-службе крымского МВД, 23 августа в поселке Перевальное Симферопольского района повредили газопровод, используемый для снабжения села и войсковой части. Его работу восстановили на следующий день. Четвертого сентября ФСБ задержала злоумышленников: посредником оказался зампредседателя «Меджлиса»* Нариман Джелялов, а исполнителями — Асан и Азиз Ахтемовы. В июне последние выезжали на Украину, где их обучили взрывному делу, а военная разведка пообещала около двух тысяч долларов за диверсию.Как написала Захарова в Telegram, Запад не замечает того, что Киев пытается внести «разлад и деструктив» в положение дел на полуострове и поддерживает «киевский режим в любой антироссийской активности».»Известны ли детали этих чудовищных происшествий западным столицам? Да. Известны. Вашингтон и Брюссель все знают и молчат, а тем самым как минимум потворствуют, если не соучаствуют», — подчеркнула дипломат.Она напомнила, что после инцидента пресс-секретарь Госдепартамента США Нед Прайс заявил о «репрессиях» против «Меджлиса»*, потребовав освободить диверсантов. В свою очередь, официальный представитель Евросоюза по внешней политике Петер Стано призвал выполнять обязательства по международному праву российскую, а не украинскую сторону, добавила Захарова.Захарова отметила, что Запад обвиняет Москву в «дискриминационной политике по отношению к крымско-татарскому населению на полуострове». По словам представителя МИД, очевидно обратное: «крымско-татарский язык получил государственный статус, растет количество крымско-татарских классов и школ, функционируют национальные СМИ, выделяются деньги на жилье, строятся мечети и так далее».Украинские власти затягивали решение этих вопросов долгие годы, указала она. Более того, уже после возвращения полуострова в состав России Киев организовал водную и энергетическую блокаду региона.В июле Россия подала первую в своей истории межгосударственную жалобу в ЕСПЧ — против Украины. Киев обвинили в нарушении Конвенции Совета Европы о защите прав человека и основных свобод. В целом перечне претензий речь идет в том числе о водной блокаде Крыма.*Экстремистская организация, запрещенная в России.
https://ria.ru/20210908/gazoprovod-1749101534.html
https://radiosputnik.ria.ru/20210908/krym-1749228659.html
украина
севастополь
республика крым
россия
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
2021
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
Новости
ru-RU
https://ria.ru/docs/about/copyright.html
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e5/09/03/1748489363_56:0:2787:2048_1920x0_80_0_0_409afb91aae9e08d5ddb39465fef8fe9.jpg
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
в мире, украина, севастополь, республика крым, мария захарова, россия
18:55 08.09.2021 (обновлено: 20:30 08.09.2021)
Захарову возмутила реакция Запада на диверсию в Крыму
МОСКВА, 8 сен — РИА Новости. Западные страны воспринимают украинские диверсии в Крыму как нормальное положение дел, заявила официальный представитель МИД России Мария Захарова.Как ранее сообщили в пресс-службе крымского МВД, 23 августа в поселке Перевальное Симферопольского района повредили газопровод, используемый для снабжения села и войсковой части. Его работу восстановили на следующий день. Четвертого сентября ФСБ задержала злоумышленников: посредником оказался зампредседателя «Меджлиса»* Нариман Джелялов, а исполнителями — Асан и Азиз Ахтемовы. В июне последние выезжали на Украину, где их обучили взрывному делу, а военная разведка пообещала около двух тысяч долларов за диверсию.
8 сентября, 06:16
В Крыму призвали ООН осудить диверсию Украины на газопроводеКак написала Захарова в Telegram, Запад не замечает того, что Киев пытается внести «разлад и деструктив» в положение дел на полуострове и поддерживает «киевский режим в любой антироссийской активности».
«Известны ли детали этих чудовищных происшествий западным столицам? Да. Известны. Вашингтон и Брюссель все знают и молчат, а тем самым как минимум потворствуют, если не соучаствуют», — подчеркнула дипломат.
Она напомнила, что после инцидента пресс-секретарь Госдепартамента США Нед Прайс заявил о «репрессиях» против «Меджлиса»*, потребовав освободить диверсантов. В свою очередь, официальный представитель Евросоюза по внешней политике Петер Стано призвал выполнять обязательства по международному праву российскую, а не украинскую сторону, добавила Захарова.
«Похожими, написанными по единой методичке заявлениями разразились и некоторые другие чиновники в Польше, Великобритании и Турции. Все это, безусловно, укладывается в логику куриной слепоты Запада по отношению к тому, что происходит в Крыму», — указала она.
Захарова отметила, что Запад обвиняет Москву в «дискриминационной политике по отношению к крымско-татарскому населению на полуострове». По словам представителя МИД, очевидно обратное: «крымско-татарский язык получил государственный статус, растет количество крымско-татарских классов и школ, функционируют национальные СМИ, выделяются деньги на жилье, строятся мечети и так далее».
Украинские власти затягивали решение этих вопросов долгие годы, указала она. Более того, уже после возвращения полуострова в состав России Киев организовал водную и энергетическую блокаду региона.
В июле Россия подала первую в своей истории межгосударственную жалобу в ЕСПЧ — против Украины. Киев обвинили в нарушении Конвенции Совета Европы о защите прав человека и основных свобод. В целом перечне претензий речь идет в том числе о водной блокаде Крыма.
*Экстремистская организация, запрещенная в России.
8 сентября, 17:34В миреКиев хочет ввести санкции против участников строительства моста в Крым
Реакция мужчины, узнавшего на работе о выигранном миллионе, попала на видео
https://ria.ru/20211118/millioner-1759684033.html
Мужчина случайно стал миллионером прямо на работе. Его реакция
Реакция мужчины, узнавшего на работе о выигранном миллионе, попала на видео — РИА Новости, 18.11.2021
Мужчина случайно стал миллионером прямо на работе. Его реакция
Житель Великобритании и бывший футболист Терри Кеннеди узнал, что выиграл в лотерее и получит миллион фунтов стерлингов, прямо на работе. Видео с его реакцией… РИА Новости, 18.11.2021
2021-11-18T17:41
2021-11-18T17:41
2021-11-18T18:46
в мире
спорт
деньги
великобритания
/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content
/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content
https://cdnn21.img.ria.ru/images/93483/40/934834060_0:105:2000:1230_1920x0_80_0_0_4945fad0473372df63c2e446eebb771d.jpg
МОСКВА, 18 ноя — РИА Новости. Житель Великобритании и бывший футболист Терри Кеннеди узнал, что выиграл в лотерее и получит миллион фунтов стерлингов, прямо на работе. Видео с его реакцией стало вирусным в соцсетях.На кадрах, записанных, предположительно, его коллегой, видно, как мужчина разговаривает с оператором и понимает, что у него выигрышный билет. После этого бывший спортсмен закрывает лицо руками, пока остальные ему аплодируют.Британские таблоиды пишут, что Кеннеди пришлось бросить спортивную карьеру из-за травмы. Как отмечает Metro, проблемы с коленом у футболиста начались более трех лет назад.
https://ria.ru/20210126/oshibka-1594713121.html
великобритания
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
2021
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
Новости
ru-RU
https://ria.ru/docs/about/copyright.html
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
https://cdnn21.img.ria.ru/images/93483/40/934834060_112:0:1889:1333_1920x0_80_0_0_0dd62509f18ee8bbccb9533b1fba261b.jpg
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
в мире, спорт, деньги, великобритания
17:41 18.11.2021 (обновлено: 18:46 18.11.2021)
Реакция мужчины, узнавшего на работе о выигранном миллионе, попала на видео
Видео реакции Карлсена на грубую ошибку Непомнящего стало вирусным
https://rsport.ria.ru/20211208/shakhmaty-1762762966.html
Видео реакции Карлсена на грубую ошибку Непомнящего стало вирусным
Видео реакции Карлсена на грубую ошибку Непомнящего стало вирусным — РИА Новости Спорт, 08.12.2021
Видео реакции Карлсена на грубую ошибку Непомнящего стало вирусным
Видеофрагмент реакции норвежского гроссмейстера, чемпиона мира по классическим шахматам Магнуса Карлсена на ошибку российского шахматиста Яна Непомнящего в… РИА Новости Спорт, 08.12.2021
2021-12-08T14:58
2021-12-08T14:58
2021-12-08T15:38
магнус карлсен
ян непомнящий
шахматы
/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content
/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content
https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e5/0c/08/1762762295_0:123:2047:1274_1920x0_80_0_0_a19dbda891a191717520fc4864c5597d.jpg
МОСКВА, 8 дек — РИА Новости. Видеофрагмент реакции норвежского гроссмейстера, чемпиона мира по классическим шахматам Магнуса Карлсена на ошибку российского шахматиста Яна Непомнящего в девятой партии матча за шахматную корону обрел большую популярность в сети.На 27-м ходу россиянин, игравший белыми фигурами, поставил пешку на c5 и упустил возможность для дальнейшего давления на соперника. На 39-м ходу Непомнящий сдался и потерпел третье поражение в матче. Счет после девяти партий — 6-3 в пользу Карлсена. Норвежец, оценивая фатальное решение своего оппонента, долго удивлялся и негодующе качал головой. Видео его реакции в данном эпизоде за 17 часов набрало более 290 тысяч просмотров на канале Chesscom India в YouTube. Большое количество комментаторов, наблюдавших за ходом встречи в прямом эфире, также выразили сильное удивление решением Непомнящего.Десятая партия матча Карлсен — Непомнящий состоится в среду, 8 декабря. Норвежский гроссмейстер удерживает звание чемпиона мира с 2013 года.
https://rsport.ria.ru/20211207/nepomnyaschiy-1762646810.html
РИА Новости Спорт
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
2021
РИА Новости Спорт
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
Новости
ru-RU
https://rsport.ria.ru/docs/about/copyright.html
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/
РИА Новости Спорт
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e5/0c/08/1762762295_106:0:1926:1365_1920x0_80_0_0_2379e83fe65162ce461dd6cc8a64f386.jpg
РИА Новости Спорт
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
РИА Новости Спорт
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
магнус карлсен, ян непомнящий, шахматы
14:58 08.12.2021 (обновлено: 15:38 08.12.2021)
Видео реакции Карлсена на грубую ошибку Непомнящего стало вирусным
МОСКВА, 8 дек — РИА Новости. Видеофрагмент реакции норвежского гроссмейстера, чемпиона мира по классическим шахматам Магнуса Карлсена на ошибку российского шахматиста Яна Непомнящего в девятой партии матча за шахматную корону обрел большую популярность в сети.
На 27-м ходу россиянин, игравший белыми фигурами, поставил пешку на c5 и упустил возможность для дальнейшего давления на соперника. На 39-м ходу Непомнящий сдался и потерпел третье поражение в матче. Счет после девяти партий — 6-3 в пользу Карлсена. Норвежец, оценивая фатальное решение своего оппонента, долго удивлялся и негодующе качал головой. Видео его реакции в данном эпизоде за 17 часов набрало более 290 тысяч просмотров на канале Chesscom India в YouTube. Большое количество комментаторов, наблюдавших за ходом встречи в прямом эфире, также выразили сильное удивление решением Непомнящего.
Десятая партия матча Карлсен — Непомнящий состоится в среду, 8 декабря. Норвежский гроссмейстер удерживает звание чемпиона мира с 2013 года.
7 декабря, 20:31
Непомнящий: два зевка подряд в матче с Карлсеном — это слишком
Песков оценил реакцию рынков на омикрон-штамм
https://ria.ru/20211129/koronavirus-1761260857.html
Песков оценил реакцию рынков на омикрон-штамм
Песков оценил реакцию рынков на омикрон-штамм — РИА Новости, 29.11.2021
Песков оценил реакцию рынков на омикрон-штамм
Реакция рынков на штамм «омикрон» чисто эмоциональная, она не зиждется на научных данных, потому что таких данных просто нет, заявил журналистам пресс-секретарь РИА Новости, 29.11.2021
2021-11-29T13:36
2021-11-29T13:36
2021-11-29T13:36
распространение коронавируса
экономика
дмитрий песков
россия
коронавирус covid-19
коронавирус в россии
омикрон-штамм коронавируса
/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content
/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content
https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e5/09/18/1751615487_0:0:3072:1728_1920x0_80_0_0_e20f94eb77b4d24e4d747feb6d2eaf21.jpg
МОСКВА, 29 ноя — РИА Новости. Реакция рынков на штамм «омикрон» чисто эмоциональная, она не зиждется на научных данных, потому что таких данных просто нет, заявил журналистам пресс-секретарь президента РФ Дмитрий Песков.»Мы видим, что на рынках это реакция исключительно эмоциональная, она не зиждется на каких-то научных данных, потому что их просто пока нет», — сказал Песков, отвечая на вопрос, насколько, с точки зрения Кремля, новый штамм вызывает опасения в плане экономики и энергетики.Отвечая на уточняющий вопрос, считает ли он, что эта реакция рынков кратковременная, Песков сказал: «Безусловно, это чисто эмоциональная реакция».В пятницу цены на нефть обрушились на 11-12% на новостях о появлении нового штамма COVID-19 «омикрон». Обрушились и фондовые биржи, в том числе в России. Рынки опасаются, что «омикрон» опаснее и заразнее «дельты», что потенциально грозит новыми локдаунами.
https://ria.ru/20211129/shtamm-1761260217.html
https://ria.ru/20211129/omikron-1761251908.html
россия
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
2021
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
Новости
ru-RU
https://ria.ru/docs/about/copyright.html
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e5/09/18/1751615487_341:0:3072:2048_1920x0_80_0_0_2c0274eda5c8ea8a88d98184e9acb730.jpg
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
экономика, дмитрий песков, россия, коронавирус covid-19, коронавирус в россии, омикрон-штамм коронавируса
Песков оценил реакцию рынков на омикрон-штамм
Радиоиммуноанализов (РИА) | PerkinElmer
наверх
Обзор
Радиоиммуноанализы (РИА) используют антитела для обнаружения и количественного определения количества антигена (аналита) в образце. Эти анализы обычно очень чувствительны и специфичны. При использовании антител с высоким сродством (Kd = 10 -8 -10 -11 M) в экспериментальной пробирке можно обнаружить всего несколько пикограммов аналита. Основным принципом радиоиммуноанализа является конкурентное связывание, при котором радиоактивный антиген («индикатор») конкурирует с нерадиоактивным антигеном за фиксированное количество сайтов связывания антитела или рецептора.Когда немеченый антиген из стандартов или образцов и фиксированное количество индикатора (меченого антигена) позволяют реагировать с постоянным и ограничивающим количеством антитела, уменьшающиеся количества индикатора связываются с антителом по мере увеличения количества немеченого антигена.
В наших наборах для радиоиммуноанализа 125 I и 3 H отделение комплексов антитело-антиген от свободного антигена достигается осаждением связанного с антителом индикатора с помощью раствора вторичных антител, направленных против иммуноглобулинов рода или видоспецифичных иммуноглобулинов. первичного антитела или с помощью полиэтиленгликоля.Оба осадителя обычно требуют присутствия иммуноглобулина-носителя. После центрифугирования супернатант, содержащий несвязанный антиген, декантируют, и осадок, содержащий комплекс антитело-антиген, подсчитывают на сцинтилляционном счетчике. Результаты, полученные для стандартов, используются для построения стандартной кривой (доза-ответ), по которой неизвестные вычисляются путем интерполяции.
Рисунок 1. Принцип конкурентного связывания радиоиммуноанализа. Радиоактивно меченый антиген («индикатор»), добавленный к антителу, специфичному к антигену, приводит к образованию комплекса антиген-антитело.Немеченый антиген из образца или стандартного раствора также может связывать антитело, что приводит к образованию комплекса немеченый антиген-антитело. В радиоиммуноанализе количество радиоактивно меченного антигена (индикатора) поддерживается постоянным. Увеличение количества немеченого антигена в образце будет конкурировать с индикатором за связывание с антителом, что приведет к образованию большего количества немеченого комплекса антиген-антитело.
На рис. 2 показано, как ограниченное количество сайтов связывания антител, содержащихся в пробирке или лунке микропланшета, может связывать немеченый лиганд (в данном примере поверхностный антиген гепатита B) или радиоактивно меченный лиганд.По мере увеличения количества немеченого лиганда, следовательно, меньше связанного радиоактивно меченного лиганда. Немеченый лиганд может происходить либо из «калибровочного стандарта», либо из образца, который вы пытаетесь измерить.
Рис. 2. а) Образец, содержащий большое количество антигена. Немеченый антиген конкурирует за связывание с антителом в пробирке или лунке. б) Образец, не содержащий антигена или содержащий небольшое количество антигена. Антитело связывается радиоактивно меченным антигеном (трассером).
Top
Что мне нужно для проведения этого анализа?
Буфер для анализа
Типичный буфер может быть 50 мМ фосфата pH 7 с 0.9% NaCl и 0,05% азида натрия. Чтобы свести к минимуму «прилипание» неспецифического антигена к реакционным пробиркам, можно добавить 0,3% бычий сывороточный альбумин. Другие добавки могут включать 10 мМ ЭДТА и / или 0,5% Твин-20.
Радиоактивно меченый 125 I- или 3 H- индикатор. При оптимизации концентрации трассера RIA необходимо понимать два термина:
Удельная активность : Это количество радиоактивности, которое присутствует на меченом антигене (лиганде). Единицы измерения обычно Ки / ммоль или мкКи / мкг.Зная это значение, становится известна масса разбавленного индикатора на единицу объема в анализе. Идеальная массовая концентрация индикатора в анализе устанавливается на уровне немного ниже концентрации насыщения для разведения антисыворотки, используемого в анализе. В идеале 30-60% меченого лиганда (нулевое стандартное связывание) должно быть связано в отсутствие немеченого лиганда при соответствующей массе индикатора и разведении антисыворотки. Это обеспечивает оптимальную чувствительность анализа. Радиолиганды с высокой специфической активностью хорошо подходят для анализов связывания лигандов.Удельная активность показывает, сколько радиоактивности приходится на молекулу лиганда, и обычно выражается в единицах Кюри на миллимоль лиганда. Некоторые из наших 125 I-меченных лигандов предлагаются с максимальной удельной активностью (2200 Ки / ммоль, если доступен один сайт для мечения 125 I, 4400 Ки / ммоль, если доступны два сайта для мечения 125I, и т. Д.). Это указывает на то, что практически каждая молекула лиганда, содержащаяся в исходном флаконе, помечена радиоактивной меткой. Для меченных тритием лигандов (лигандов 3H) в идеале следует выбирать лиганд, который имеет удельную активность выше 20 Ки / ммоль.Максимальная теоретическая удельная активность на тритий составляет 29 Ки / ммоль (Кюри на миллимоль трития ). Удельные активности выше этого значения показывают, что в среднем , каждая молекула лиганда имеет по меньшей мере один тритий.
Концентрация активности : Это концентрация, обычно в мкКи / мл, радиоактивности на единицу объема растворителя или разбавителя. Это не имеет ничего общего с фактической оптимизацией массы индикатора, но служит необходимым измерением правильного количества счетчиков, добавленных в анализ.Это важно для пользователя, потому что от этого зависят расчет неспецифического связывания (NSB), нулевого стандартного связывания и всех других измерений связывания.
* В большинстве наборов для РИА концентрация индикатора уже оптимизирована, и все, что необходимо, — это выполнить рекомендованное разведение в буфере для анализа и использовать соответствующий объем для каждой пробирки.
** Пипетки и / или наконечники для пипеток, используемые для переноса раствора индикатора, должны быть из полипропилена или силиконизированного стекла.Не используйте стекло без кремния, так как они могут плохо прилипать.
Есть несколько дополнительных факторов, которые следует учитывать при выборе индикатора для вашего анализа:
- Неспецифическое связывание: гидрофобные индикаторы обычно демонстрируют более высокое неспецифическое связывание. Включая BSA, определенные соли или детергенты в буфер для анализа, вы можете помочь уменьшить неспецифическое связывание. Если исходный радиохимический препарат упакован в силанизированный флакон (см. Технический паспорт), это может указывать на то, что лиганд в некоторой степени гидрофобен.
- Высокая чистота: в идеале индикатор должен иметь радиохимическую чистоту выше 90%.Радиохимическая чистота со временем снижается, и фактическая скорость этого разложения со временем увеличивается. Радиохимическую чистоту и скорость разложения наших радиохимических продуктов можно найти в технических паспортах каждой партии.
- Высокая селективность: чем более селективен индикатор для вашего антитела или связующего, тем точнее будут ваши данные. Высокая селективность указывает на то, что индикатор в основном распознается соответствующими сайтами связывания антител.
- Стабильность: Если вам нужно будет использовать радиоактивно меченый индикатор в течение длительного периода времени, стабильность может быть для вас решающим фактором. 125 I-меченые лиганды обычно следует использовать в течение одного-двух месяцев с даты производства . Меченные тритием лиганды обычно следует использовать в течение 3-6 месяцев с даты производства; однако из этого есть исключения. Степень разрушения и даты изготовления можно найти в наших технических паспортах для каждой партии. Вы также можете обратиться в службу технической поддержки, чтобы обсудить рекомендуемое время использования каждого радиохимического вещества PerkinElmer — наша контактная информация находится в верхнем правом углу этой страницы.
- Энергия: 3 H выделяет бета-энергию, которую можно измерить на сцинтилляционном счетчике после добавления сцинтиллятора в виде сцинтилляционной смеси. Бета-энергия взаимодействует со сцинтилляцией и производит фотоны, которые измеряются детектором.
- 125 I выделяет как бета-подобную энергию, так и гамма-энергию. Если у вас есть доступ только к гамма-счетчику, вам следует использовать радиолиганд с маркировкой 125 I.
Антисыворотка
Для оптимизированных наборов для РИА антисыворотка (связующее) предоставляется в концентрации, выбранной для обеспечения оптимальной чувствительности калибровочной кривой анализа.Он должен быть в соответствующем разбавлении, чтобы обеспечить связывание от 30 до 60% от общего количества индикатора при добавлении в отсутствие какого-либо немеченого лиганда. Если связывание нулевого стандарта (без стандарта аналита) выходит за пределы этого диапазона, результаты анализа могут быть недействительными (см. Раздел «Советы и часто задаваемые вопросы» ниже).
Свойства константы авидности и аффинности антисыворотки являются основными определяющими факторами соответствующего диапазона концентраций для калибровочной кривой и концентраций аналита, которые могут быть измерены в анализе.Это свойства необработанной антисыворотки и важные факторы при отборе подходящей антисыворотки при разработке набора для анализа.
При оптимизации вашего собственного РИА чувствительность анализа оптимизируется за счет использования правильно титрованного разведения антисыворотки. Обычно это дает 30-60% связывания нулевого стандарта (без аналита) и дает оптимальную среднюю точку калибровочной кривой EC50. Это всегда предопределено в серийно выпускаемом комплекте.
Стандартный концентрат
В большинстве наборов для RIA, раствор немеченого калибровочного стандартного концентрата предоставляется вместе с протоколом разбавления для подготовки серии концентраций для калибровочной кривой.Гипотетический набор для РИА может содержать стандартный концентрат 100 нг / мл, который разбавляется следующим образом для построения калибровочной кривой, подходящей для анализа:
Таблица 1. Серийное разбавление калибровочного стандарта.
Предлагаемая схема разбавления для исходного раствора 100 нг / мл Калибровочный стандарт aПробирка Концентрация (пг / 0,1 мл) * 9011 мл (100 мкл) стандарта + 1,9 мл буфера для анализа
500 b 0,4 мл разведения a + 0,6 мл буфера для анализа 200 c 0,4 мл разведения b + 0,4 мл буфер для анализа 100 d 0,4 мл раствора c + 0,4 мл буфера для анализа 50 e 0,4 мл раствора d + 0,4 мл буфера для анализа 25 f 0.4 мл разбавления e + 0,6 мл буфера для анализа 10 г 0,4 мл разбавления f + 0,4 мл аналитического буфера 5 h 0,4 мл разбавления g + 0,6 мл аналитического буфера 2 * Эта концентрация представляет собой фактическую массу, добавленную в пробирку. Для стандартной кривой следует использовать разведения от b до h.
** Пипетки и / или наконечники для дозаторов, используемые для переноса разбавленного стандарта, должны быть изготовлены из полипропилена или силиконизированного стекла.
*** Калибровочные стандарты должны быть разбавлены свежими в день проведения анализа.
Осаждающий реагент
Осаждающий реагент позволяет отделить связанные комплексы лиганд-антитело от свободного лиганда и антитела, остающегося несвязанным. Можно использовать раствор, содержащий 16% полиэтиленгликоля (PEG 6000) и 0,05% азида натрия в 50 мМ фосфатном буфере, pH 6,8. В качестве альтернативы можно использовать вторичные антитела, специфичные к изотипу (такие как овечья против кроличьей сыворотки, для осаждения кроличьего антилиганда).Обычно требуется сыворотка кролика-носителя.
Другие осаждающие реагенты включают покрытые вторичным антителом шарики сцинтилляционного проксимити-анализа (SPA) или покрытые магнитными частицами.
Рис. 3. Схема радиоиммуноанализа. Радиоактивный антиген («индикатор») добавляется к антителу с последующим добавлением немеченого антигена (из образца или из стандарта). Образованные комплексы антиген-антитело осаждают с использованием осаждающего реагента (в показанном примере — вторичного антитела) для разделения связанного и свободного индикатора.
Необходимое оборудование
- Пипетки и / или пипетки, которые точно и точно доставляют требуемые объемы
- Полипропиленовые пробирки
- Штатив для пробирок
- Стаканы или колбы
- Вихревой смеситель
- Центрифуга (охлаждаемая, с вращающимся ротором)
- Сцинтилляция жидкости счетчик (например, жидкостный сцинтилляционный счетчик Tri-Carb® или MicroBeta ™) или гамма-счетчик (например, гамма-счетчик Wizard 2 ), в зависимости от ситуации
Top
Определения
Affinity (эффективность ): плотность, с которой лиганд связывается с рецептором или сайтом связывания антитела.Обычно это выражается как константа равновесия Kd. Чем ниже значение Kd, тем выше сродство. Это также относится к концентрациям немеченого лиганда, которые можно измерить в конкурентном анализе.
Специфичность или перекрестная реактивность : описывает, насколько селективным является сайт связывания антитела для конкретного лиганда и какие структурно подобные лиганды могут мешать анализу
Kd : Концентрация, при которой 50% рецепторов или антитела сайты связывания заняты радиолигандом / индикатором.
IC50 : Концентрация конкурирующего лиганда, которая вытесняет половину радиоактивного лиганда. Это средняя точка калибровочной кривой.
Top
Типы анализов
Анализ насыщения
При создании или оптимизации вашего собственного радиоиммуноанализа обычно проводится эксперимент с насыщением. В этом эксперименте измеряется равновесие связывания путем титрования радиолиганда (индикатора), поддерживая постоянным количество рецептора или разведения антисыворотки. Вы можете использовать кривые насыщения для определения Bmax (уровень экспрессии сайта связывания) и Kd (аффинность связывания взаимодействия лиганд-антитело).Выбор концентрации радиоактивно меченного лиганда (индикатора) на уровне примерно 50-60% от уровня насыщения обычно дает правильную массу индикатора для использования в анализе.
В. Какие концентрации радиолиганда мне следует использовать для моей кривой насыщения?
A. Обычно мы рекомендуем выбирать на 3-5 концентраций ниже расчетного Kd и на 3-5 концентраций выше расчетного Kd. Самая высокая исследуемая концентрация должна быть в десять раз больше Kd (10 x Kd).
На фиг. 4 показано графическое изображение анализа связывания с насыщением с использованием возрастающих концентраций меченного тритием радиолиганда циклопентил-1,3-дипропилксантина с постоянным количеством (концентрацией) связующего.В этом случае связующим веществом является рецепторная мембрана из расчета 10 мкг на мл. В радиоиммуноанализе связующим веществом может быть определенное разведение антисыворотки.
Рис. 4. Кривая насыщения, показывающая связывание 3H-циклопентил-1,3-дипропилксантина с его рецептором. Возрастающие количества радиолиганда добавляются к фиксированной концентрации рецептора. Полное связывание: увеличение концентрации радиолиганда в отсутствие холодного лиганда. Измеряет как специфическое связывание с рецептором, так и неспецифическое связывание. Неспецифическое связывание: повышение концентрации радиолиганда в присутствии избытка немеченого лиганда.Измеряет связывание радиолиганда с компонентами, не являющимися рецепторами или антителами. Специфическое связывание: полное минус неспецифическое связывание. В частности, измеряет связывание с рецептором или антителом.
Конкурентный анализ
Конкурентный анализ измеряет равновесное связывание одной концентрации радиолиганда (индикатор) в присутствии различных концентраций конкурирующего немеченого калибровочного лиганда (стандарта) или образца с неизвестной концентрацией.
Протокол для гипотетического RIA
- Уравновесить все реагенты до комнатной температуры и перемешать перед использованием.
- Пометьте дублированные пробирки для общего количества, NSB (холостой пробы), каждого стандарта и каждого образца (см. Таблицу 2 ниже).
- Поместите пробирки в подходящую штатив для пробирок.
- Инкубируйте в течение ночи (16–24 часа) при 2–8 ° C.
- Добавьте 1 мл холодного осаждающего реагента во все пробирки, кроме общего количества, и перемешайте.
- Инкубируйте 20–30 минут при 2–8 ° C и центрифугируйте при 2–8 ° C. в течение 30 минут при 1000-2000 x г .
- Слейте супернатанты из всех пробирок (, кроме пробирок для общего подсчета ) в соответствующий лоток для радиоактивных жидких отходов.
- Промокните жидкость с краев пробирок на впитывающем бумажном коврике в течение ~ 1 минуты.
- Подсчитайте радиоактивность, оставшуюся в пробирках (включая пробирки для общего подсчета).
Таблица 2. Пробирки для протокола радиоиммуноанализа. Все объемы указаны в микролитрах (мкл).
Пробирка № | Буфер | Стандартный | Образцы | Tracer | Подсчет антител | — | — | 100 | — |
---|---|---|---|---|---|---|
Пустой | 3-4 | 200 | — | — | 100 | — |
«0» Стандартный | 5-6 | 100 | — | — | 100 | 100 |
Стандарты | 7-20 | — | 100 | — | 100 | 100 |
Образцы | 21,22 и т. Д. | — | — | 100 | 100 | 100 |
В. Какую концентрацию радиолиганда (трассера) следует выбрать для конкурентного связывания?
A. Радиоактивный лиганд (индикатор) используется в низкой концентрации, обычно равной или ниже его значения Kd. Если удельная активность низкая, можно использовать концентрации, превышающие значение Kd, хотя концентрация никогда не должна быть равной или выше концентрации насыщения.
Top
Расчеты
После завершения подсчета концентрация аналита в образцах определяется путем интерполяции по стандартной кривой. Предлагается следующий метод (примеры расчетов см. В Таблице 3).
A. Среднее количество повторов для каждого набора пробирок.
B. Рассчитайте средние значения NET для всех стандартов (включая нулевой стандарт) и образцов, вычитая из каждого из них среднее количество неспецифического связывания.
C. Определите нормализованный процент привязки (% B / B 0 ) для каждого стандарта и образца следующим образом:
D. Постройте график% B / B 0 для каждого стандарта в сравнении с соответствующими количествами добавленного немеченого калибратора лиганда. в пикограммах. См. Рисунок 5 для типичной стандартной кривой с использованием стандартного протокола.
E. Определите количество аналита в каждом образце путем интерполяции по стандартной кривой. Поскольку стандартная кривая выражается как «добавленные пикограммы», значения пробы должны быть скорректированы с учетом любых разведений, чтобы определить исходную концентрацию в пробе.
ПРИМЕЧАНИЕ : Любые образцы с концентрациями, превышающими диапазон стандартной кривой, должны быть разбавлены аналитическим буфером и проанализированы повторно. Полученные значения затем умножаются на соответствующий коэффициент разбавления. Полученные значения ниже, чем у первого калибровочного стандарта, являются подозрительными.
Таблица 3. Необработанные и обработанные данные.
Трубка | No. | CPM | Avg CPM | Net Avg CPM | % B / B0 | ||||||||||||||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
2 | 15563 | 15263 | |||||||||||||||||||||||||||
Пустой | 3 | 415 | 9013 903 901 9013 901 9013 901 9013 901 9013 901 901 391 | ||||||||||||||||||||||||||
«0» Стандартный | 5 | 8879 | |||||||||||||||||||||||||||
6 | 8673 | 8776 | 8378 | 100132 8378 | 1002 | ||||||||||||||||||||||||
8 | 7939 | 7422 | 88.6 | ||||||||||||||||||||||||||
5 пг. | 9 | 6873 | |||||||||||||||||||||||||||
10 | 6886 | 6880 | 6482 | 903 9013 9013 901 324 9013 9013 9013 | |||||||||||||||||||||||||
12 | 5900 | 5766 | 5368 | 64,1 | |||||||||||||||||||||||||
25 страниц | 13 | 4216 | 9013 | 9013 | 9013 | 9013 | 9013 | 9013 | 3838 | 45.8 | |||||||||||||||||||
50 пг. | 15 | 3082 | |||||||||||||||||||||||||||
16 | 2995 | 3039 | 2641 | 3039 | |||||||||||||||||||||||||
18 | 2003 | 2130 | 1732 | 20,7 | |||||||||||||||||||||||||
200 пг | 19 | 1491 | 9013 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 | 1178 | 14.1 | ||||||||||||||||||||||||
Образец | 21 | 5829 | |||||||||||||||||||||||||||
22 | 5919 | 5874 | 5476 | 6520,4 | 6520 9019 Стандарт | PGF1. Концентрация неизвестного образца интерполируется из кривой. Top Советы и ответы на часто задаваемые вопросыОсобенно при использовании автоматизированной системы обработки данных очень важно просматривать необработанные данные.Убедитесь, что ваши пробирки для общего подсчета, неспецифическое связывание, нулевое стандартное связывание и форма калибровочной кривой имеют смысл. Если какой-либо из компонентов вашего анализа ухудшается, вы заметите это, проверив свои данные.
Top Ссылки
Top Услуги индивидуальной маркировкиPerkinElmer предлагает услуги индивидуальной маркировки 125 I и 3 H. Если вас интересуют индивидуальные услуги, свяжитесь с нашими специалистами: ON> POINT® Custom Labeling Services Top Радиоиммуноанализ — обзор | Темы ScienceDirectРадиоиммуноанализыПервым методом иммуноанализа был радиоиммуноанализ изотопных разведений, разработанный Розалин Ялоу и Соломон Берсон для обнаружения инсулина в крови человека.Эта работа принесла Ялоу долю Нобелевской премии по физиологии и медицине 1977 года, но Берсон не был удостоен чести из-за Нобелевских правил, согласно которым премия не может быть присуждена посмертно. Следующий отрывок, переведенный из презентации, объясняет эту технику простым языком: «В результате смешивания в пробирке известного количества радиоактивного инсулина с известным количеством антител против инсулина прикрепляется определенное количество инсулина. к этим антителам. Впоследствии, если добавить к этой смеси небольшое количество крови, содержащей инсулин, инсулин из крови аналогично присоединяется к антителам, и определенная часть радиоактивного инсулина отделяется от антител.Чем выше концентрация инсулина в образце крови, тем большее количество радиоактивного инсулина будет отделяться от антител. Количество удаленного таким образом радиоактивного инсулина можно легко определить, что позволяет точно измерить количество инсулина, присутствующего в образце крови ». Радиоиммуноанализ изотопного разведения основан на принципе анализа насыщения, который показан на рис. 1. Тестируемое соединение (в данном случае инсулин, обозначенный X) количественно оценивается по его способности постепенно насыщать подходящий реагент (в данном случае случай антитела, специфичного к инсулину, обозначенного буквой Y).На первом этапе к образцу добавляется известное количество радиоактивно меченного индикаторного инсулина (X *), что увеличивает общее количество инсулина до (X + X *). Затем к образцу добавляется антитело Y. Количество добавляемого Y должно быть ниже в молярных единицах, чем (X + X *), чтобы аналит и индикатор не были насыщенными и могли конкурировать за ограниченное количество сайтов Y. Кроме того, должна быть возможность отделить (X + X *) от (XY и X * Y), чтобы степень образования комплекса могла быть определена пропорциональным изменением в распределении радиоактивности между (X + X *) и (XY + X * Y) в начале и в конце анализа.Таким образом, первые радиоиммуноанализы часто классифицировались в соответствии с тем, как было достигнуто это разделение (например, с использованием полиэтиленгликоля или второго антитела), и обычно назывались гетерогенными анализами, поскольку было необходимо разделение на две фазы. В общих чертах, чем больше аналита X присутствует в образце, тем больше X * будет вытеснено из Y и тем больше радиоактивной метки останется в несвязанной фракции (X + X *). Требуется калибровочный график, показывающий распределение радиоактивности относительно известных количеств X в стандартах, позволяющий оценить неизвестные количества X в экспериментальных образцах с точки зрения распределения радиоактивности. Рис. 1. Принципы анализа насыщенности. Y обычно представляет собой антитело, или другой белок, или уголь; он изменяет свойства X. Пропорциональное распределение указывает степень реакции между X и Y, которая связана с X в стандартах и образцах. В приведенном выше формате иммуноанализа аналит представляет собой меченую сущность, и анализ проводят в растворе. Принцип аналогичен принципу конкурентного анализа связывания белков, который используется в течение многих лет для характеристики взаимодействий рецептор-лиганд и фермент-субстрат.Неотъемлемыми преимуществами радиоиммуноанализа перед другими формами конкурентного анализа являются специфичность взаимодействия антитело-аналит и общая применимость антител по сравнению с другими взаимодействующими реагентами. Антитела могут вырабатываться против любой иммуногенной молекулы, и даже небольшие молекулы, которые не индуцируют иммунный ответ, могут быть присоединены к молекулам-носителям в качестве гаптенов, чтобы сделать их иммуногенными. Однако необходимость маркировать аналит в каждом типе экспериментов и необходимость использования бесконечно малых концентраций реагентов часто вызывает технические проблемы, и невозможно измерить более одного аналита одновременно. Следующим важным достижением стал иммунорадиометрический анализ (IRMA), в котором изотопная метка прикрепляется к антителу, а не к аналиту, что решает проблемы, связанные с маркировкой различных аналитов. Это был первый пример сэндвич-иммуноанализа, в котором два антитела используются сначала для захвата аналита, а затем для его обнаружения и количественного определения. Это также был первый пример твердофазного гетерогенного иммуноанализа, то есть первое (захватывающее) антитело иммобилизовано на твердой подложке, такой как поверхность чашки для микротитрования или мембраны.Затем поверхность заливается образцом, что приводит к улавливанию аналита и образованию комплексов антитело-аналит. После промывки для удаления несвязанных компонентов образца поверхность заливается зондовым антителом, помеченным, например, как 125 I. На следующей стадии промывки удаляются несвязанные зонды-антитела, и поверхность сушится и подвергается воздействию пленки или помещен в гамма-счетчик. Контрольные образцы с добавлением различных количеств аналита можно использовать для построения калибровочного графика, позволяющего определить концентрацию аналита в экспериментальном образце. Большим преимуществом этого метода является то, что количественные данные генерируются путем измерения стехиометрического взаимодействия между меченым антителом (присутствующим в избытке) и захваченным аналитом. Таким образом, сигнал, производимый антителом, прямо пропорционален концентрации анализируемого вещества, а не связан с ней сложным образом, как в случае конкурентного анализа. Ограничение этого метода состоит в том, что необходимы два антитела, распознающие разные эпитопы на целевом аналите.Следовательно, хотя он подходит для обнаружения больших молекул, таких как белки, его нельзя использовать для обнаружения небольших органических молекул, которые часто полностью помещаются в антигенсвязывающий карман антитела. Кинетические аспекты реакции антиген-антитело в различных радиоиммуноанализах: влияние отложенного добавления меченых или немеченых антигенов на чувствительность анализаКинетику реакции антиген-антитело систематически исследовали с помощью четырех видов радиоиммуноанализа (РИА) на двойные антитела.Во всех РИА кривые доза-ответ, полученные при отложенном добавлении меченых антигенов на 24-48 ч (кривые B), были смещены вниз и влево от кривых, полученных при одновременном добавлении реагентов (кривые A), в результате улучшенная чувствительность анализа. Напротив, кривые доза-ответ, полученные при отложенном добавлении немеченых антигенов (кривые C), были смещены вверх и вправо от кривых A, что привело к снижению чувствительности. В РИА тиреотропина человека (hTSH) кривые B и C очень мало приближались к кривым A, даже после 168 ч инкубации.Аналогичное явление наблюдали с антисыворотками против hTSH из пяти разных источников при двух температурах инкубации, и кривые разведения hTSH, меченного 125I, и немеченого hTSH оказались параллельными. Следовательно, явление, наблюдаемое при РИА hTSH, нельзя отнести к условиям анализа или особым свойствам используемых реагентов. В РИА инсулина обратимость сдвигов кривых B и C была незначительной, но сравнима с таковой, наблюдаемой в РИА hTSH. В РИА 1-3,5,3′-трийодтиронина кривые B и C постепенно приближались к кривым A при длительной инкубации, а кривые B становились почти идентичными кривым A после 98 ч инкубации.С другой стороны, в РИА с альфа-фетопротеином (AFP) кривые B и C не приближались к кривым A даже при длительной инкубации до 288 часов. «Константы равновесного сродства» антител были одного порядка величины, поэтому маловероятно, что различия в константах могут объяснить различия в обратимости этих RIA. В APF RIA значительное количество комплекса антиген-антитело осаждали без второго антитела после центрифугирования при 3000 × g. Эти данные предполагают, что степень диссоциации иммунных комплексов зависит от их размера, который, в свою очередь, связан с молекулярной массой антигена. Метод иммуноанализа, основанный на реакции антиген-антитело — иммуноанализ РИАБиофармацевтический анализ позволяет обнаруживать и изучать качество различных биологических препаратов. Радиоиммуноанализ (RIA) — это метод биофармацевтического анализа. Этот метод основан на основном принципе, согласно которому меченый радионуклидом антиген конкурирует с немеченым антигеном в реакционной системе за связывание со специфическими антителами для определения количества антигена в исследуемом образце.Он часто используется для различных гормонов, следовых белков, онкомаркеров, лекарств и других следовых веществ. Определение особенно подходит для ультрамикроанализа гормонов, пептидов и других мелких веществ. ELISA — это метод биофармацевтического анализа. Это более общий метод анализа в области иммуноанализа. Этот метод использует меченый ферментом антиген или антитело, меченное ферментом, в качестве основного реагента, а цвет катализируемого ферментом субстрата в комплексе равен. Технология качественной или количественной маркировки и иммуноанализа для веществ имеет преимущества простой работы, быстроты, чувствительности , экономичен и подходит для пакетной обработки.В отличие от ELISA , технология радиоиммуноанализа использует радиоизотопы для маркировки антигенов или антител и анализирует образцы путем разделения реагентов и обнаружения радиоактивных сигналов. Однако технология иммуноанализа RIA имеет проблему ослабления изотопных сигналов и может нанести вред человеческому организму в процессе обнаружения, поэтому сейчас эта технология используется редко. Давайте посмотрим на основные этапы RIA. (1) Реакция антиген-антитело В соответствии с принципом РИА немеченые антигены (стандарты и образцы для тестирования), меченые антигены и специфические антитела добавляются в реакционную пробирку, и реакция конкурентного ингибирования проводится при определенных условиях (температура, время и pH среды). средний). (2) Отдельные маркеры ограниченного и свободного доступа После уравновешивания реакции RIA меченый антиген и реагентное антитело образуют иммунный комплекс (B). Поскольку его содержание очень мало, он не может осаждаться сам по себе, поэтому для его полного осаждения необходимо добавить подходящий осадитель, а затем центрифугировать, чтобы отделить его от свободного меченого антигена (F). Некоторые низкомолекулярные антигены также можно отделить от B и F адсорбцией. (3) Измерение радиоактивности и обработка данных После разделения B и F можно измерить радиоактивность комплекса меченых антиген-антитело (B), а также определить свободный меченый антиген (F) в соответствии с методом и назначением RIA.Нарисуйте стандартную кривую (кривая доза-ответ). В пробирке с образцом используются измеренные или рассчитанные параметры реакции для определения соответствующей концентрации антигена, подлежащей тестированию, с помощью стандартной кривой. В настоящее время компьютеры обычно используются для обработки данных, автоматического построения и печати стандартных кривых. Концентрация антигена в образце. Хотя метод радиоиммуноанализа прост в эксплуатации и дешев, он достиг своего пика в конце 1970-х годов, но из-за его радиоактивности, его трудно хранить, трудно автоматически обнаруживать и другие дефекты, его использование было ограничено и началось. упасть и заменить в конце 1970-х.Однако в настоящее время ни один метод иммуноанализа не является совершенным, и необходимо постоянно развивать и совершенствовать различные методы, чтобы разработать новые и более совершенные методы иммуноанализа. Отдел биоанализа Medicilon имеет полный спектр многофункциональных технологических платформ, таких как SpectraMaxM4 / M5 / i3x, MSD, Luminex, Biacore 8K, Envision, Gyrolab, ABI7500 qPCR и т. Д. Он использует систему LIMS для реализации комплексного управления лабораторной информацией, обеспечивая биотехнологии услуги по анализу наркотиков, которые полностью соответствуют спецификациям GLP FDA / CFDA / OECD . Статьи по теме:Анализ связывания лиганда Биотехнологический метод анализа лекарственных средств : Тест на связывание лиганда Разработка методов ЖХ-МС / МС
Аббревиатура / Подробная информация.— Allie: аббревиатура / полная информация. ■ Поиск аббревиатуры и полной формыЧто такое Элли? Allie — это служба поиска сокращений и полных форм, используемых в науках о жизни. Что могут делать пользователи с помощью Allie?
ВидеоурокВы можете изучить Allie здесь (видеоурок). Связанная публикация Пожалуйста, обратитесь к следующей публикации: Элли использует ALICE для извлечения пар сокращений и длинных форм вместе с идентификатором PubMed из данных PubMed. ОбновлениеПоследнее обновление индекса: декабрь.8, 2021 (Ежемесячное обновление) Скачать Вы можете загрузить и использовать базу данных, используемую для Allie (Еженедельное обновление), в соответствии с условиями использования.
Свяжитесь с нами, если у вас есть вопросы или предложения. Моделирование ядерных реакций для проектирования мишеней РИА СИОЛ ВОЗ |